Translate Mikroteknik Jurnal 1

5/25/2018 Translate Mikroteknik Jurnal 1

1/4

Metode Novel untuk Mempersiapkan Slides Histologi Tanpa

Sebuah Mikrotom

Ringkasan

Sebuah penelitian dilakukan untuk menentukan apakah itu mungkin untuk

mempersiapkan bagian jaringan pada slide tanpa menggunakan penanaman paraffin, penyayatan

dengan mikrotom, atau penyayatan jaringan beku yang melibatkan peralatan dan pelatihan yang

tidak selalu tersedia untuk para sarjana atau profesional yang ingin memeriksa jaringan

mikroskopis.

Setelah mengevaluasi berbagai reagen yang berbeda, peralatan untuk memotong dan

dukungan yang solid, kami mengembangkan metode yang melibatkan penerapan lem super ke

slide, diikuti sebuah sayatan jaringan itu, pemotongan jaringan dengan sekali pakai pisau

mikrotom, pewarnaan jaringan dan menghapus super-lem dengan produk yang tersedia secara

komersial. Bagian ini mirip dengan yang dipotong pada mikrotom, tapi waktu dan kualitasnya

tidak sama. Namun, struktur preparat yang diawetkan dan morfologi sel individu biasanya baik.

Kami menyimpulkan bahwa ini adalah metode yang layak untuk mempersiapkan jaringan

histology tanpa menggunakan menggunakan mikrotom atau jaringan beku, sesuatu yang dulu

dianggap mustahil. Kami telah dijuluki metode 'RAMP' (cepat Prosedur Adhesive-Mediated).

Pengantar

Penanaman parafin dan penyayatan jaringan dengan mikrotom adalah proses panjang

yang melibatkan peralatan mahal dan membutuhkan pelatihan khusus (Lillie dan Fullmer, 1976;

Sheehan dan Hrapchak, 1980). Penukar jaringan otomatis secara rutin digunakan untuk

melakukan dehidrasi, penjernihan dan penanaman parafin, dan waktu yang dibutuhkan biasanya

lebih dari 12 jam. Mikrotom kemudian digunakan untuk membuat sayatan jaringan dengan tebal4-10 m, yang diikuti dengan slide kaca. Pendekatan lainpenyayatan jaringan beku - jauh lebih

cepat tetapi juga membutuhkan peralatan yang mahal dan personil terlatih.

Ada saatnya ketika itu akan berguna untuk mempersiapkan histologi slide, tetapi biaya

dan waktu yang terlibat dengan metode tradisional tersebut tidak dapat dibenarkan. Laporan ini


2/4

rincian pembangunan dari metode baru, sederhana, cepat dan murah untuk persiapan slide

histologi tanpa penanaman paraffin dan penyayatan dengan mikrotom.

Bahan dan Metode

Setelah mencoba prosedur menggunakan berbagai perekat yang berbeda, pisau dan

mendukung padat, metode yang sangat sederhana muncul. Sebuah kelompok dari perekat super

yang transparan (misalnya Quicktite Super Glue, Locktite Corp, Rocky Hill, CT, USA) disikat

pada kaca obyek yang bersih, yang dengan cepat terbalik dan lembut jaringan diletakkan pada

blok tipis (tebal 1-2 cm) (Gambar 1a, b). Setelah memegang slide yang kokoh di ujung jaringan

selama 10 detik ditempatkan tegak dan dibiarkan kering selama 2-3 menit (Gambar 1c). Sebuah

alat pemotong, yang terdiri daripisau mikrotom yang dipakai melesat ke bilah pisau dempul

(Gambar 1d) dilewatkan sepanjang permukaan perekat sekitar 20 (Gambar 1e), mengakibatkan

jaringan tipis (10-20 m) yang tersisa pada slide. Langkah ini membutuhkan beberapa latihan.

Slide ditempatkan pada blok ditinggikan sehingga kepala baut melampirkan pisau sekali pakai

tidak mengganggu memotong. Proses pemotongan dapat diulang jika bagian tampak terlalu tebal

(ketebalan yang tepat menghasilkan pucat, spesimen dipotong tipis sehingga sulit untuk

membedakan dari perekat)

Slide kemudian biasanya diwarnai dengan dimodifikasi (disingkat) (H & E) metode

hematoksilin dan eosin (Gambar 1f) yang memanfaatkan dimodifikasi Mayer hematoksilin

(Hematoksilin QS; Vector, Burlingame, CA, USA) yang memperpendek waktu pewarnaan untuk

langkah hematoksilin sampai 40 detik atau kurang dan tidak memerlukan langkah bluing

berikutnya. Setelah bilas dengan air, slide ditempatkan dalam etanol 80% selama 1 menit, dalam

asam eosin Y (Fisher, Pittsburgh, USA) selama 1 menit diikuti oleh dua immersions 1-min

masing-masing dalam 90% dan etanol 100%. Untuk mencegah hilangnya sayatan selama

langkah berikutnya, klip pengikat kecil diikat di atas akhir slide sehingga ujung atasnya dijepit di

tepi jaringan untuk menahannya di tempat aman (Gambar 1g). Atau, coverslip plastik sekalipakai dapat ditempatkan di atas bagian tersebut dan diadakan di tempat oleh klip kertas. Hal ini

kemudian direndam dalam wadah dari superglue remover (Perintis Teknologi, Rancho

Cucamonga, CA) selama 5-10 menit. Slide ini kemudian dibersihkan sebentar di Propar (A

zylene pengganti non-toksik yang tersedia dari Anatech, Ltd, Battle Creek, Michigan, USA), klip

pengikat yang lembut dilepas (saat ini bagian jaringan tidak berpegang pada slide), setetes media


3/4

pemasangan seperti Permount (Fisher) adalah ditempatkan pada jaringan diikuti oleh coverslip.

Pewarnaan sayatan, sekarang diawetkan secara permanen, dapat dilihat langsung. Pemasangan di

Permount atau pemasangan organik lain agen sangat penting untuk mendapatkan resolusi yang

baik di bawah mikroskop. Lamanya waktu yang dibutuhkan untuk seluruh prosedur untuk satu

slide dari jaringan tetap ke pewarnaan, adalah 30-35 menit.

Pewarna lain juga dapat digunakan, kami telah menggunakan metilen biru, metilen hijau,

toluidin biru dan tersedia secara komersial Teknik Schiff asam periodik (Sigma, St Louis,

Missouri, USA). Namun, H & E tampaknya unggul daripada ini.

Jaringan kami telah berhasil dipotong termasuk jantung normal, paru-paru, trakea,

kelenjar adrenal, usus kecil, esofagus, kelenjar ludah rahang bawah, kelenjar ludah parotis, hati,

pankreas, kulit, ginjal, testis, kelenjar getah bening, limpa, timus dan sumsum tulang belakang.

Sebagian besar bagian dibuat dari jaringan diawetkan dalam 10% buffer netral formalin (BNF)

untuk dari D.L Troyer 12 jam sampai beberapa hari, dan beberapa diambil dari spesimen

dibalsem dengan 10% BNF tanpa fiksasi lanjut. Namun, kami juga telah menyiapkan slide segar,

jaringan tidak tetap dan telah menemukan mereka untuk menjadi sebanding jika jaringan pertama

kali dibilas phosphate-buffered saline beberapa kali dan dihapuskan dengan jaringan kertas

sebelum mengikuti slide. Bagian tersebut kemudian postfixed dalam 10% BNF selama 30 menit.

Sebuah pendekatan alternatif yang diteliti terlibat membuat bagian pada strip dipotong

dari lembaran asetat atau lainnya permukaan transparan serupa. Namun, kualitas jaringan tidak

sebagus dengan metode yang dijelaskan di atas, terutama karena langkah perekat-removal warna

atau sebagian terlarut lembar asetat.

Hasil dan Pembahasan

Angka 2, 3 dan 4 menggambarkan pelestarian histoarchitecture jaringan dan morfologi

sel dalam slide jaringan normal disiapkan menggunakan prosedur perekat-dimediasi cepat(RAMP) dijelaskan di sini. Gambar 2 adalah fotomikrograf dari babi yang normal paru-paru.

Alveoli dan alveolar septae dapat dilihat serta saluran alveolar. Gambar 3 adalah dari hati yang

normal menunjukkan hati lobulus klasik dengan vena sentral dan lamina hepatosit dipisahkan

oleh sinusoid. Sel Kuppfer dapat dilihat melapisi sinusoid dan hepatosit menunjukkan familiar

bentuk poligonal dengan inti vesikuler. Gambar 4 diambil dari pars convoluta dari ginjal anjing


4/4

korteks diwarnai dengan metilen biru. Bagian silang dan longitudinal proksimal tubulus berbelit-

belit menunjukkan sel-sel kuboid lapisan. Menariknya, beberapa tubulus proksimal (panah)

menunjukkan convolutions yang jarang terlihat di pars convoluta disiapkan pada mikrotom. Hal

ini mungkin karena kompresi sedikit selama langkah pertama ketika jaringan dipotong pada

slide.

Teknik ini dapat digunakan dalam beberapa pengaturan. Dalam gross laboratorium

anatomi, misalnya, organ belajar makroskopik bisa segera dipotong dan divisualisasikan

mikroskopis untuk integrasi cepat kotor dan mikroskopis anatomi. Dalam skenario yang sama,

jika ada keraguan tentang identitas struktur bruto tertentu metode akan menawarkan cara cepat

untuk mengatasi masalah tersebut. Prosedur bisa dibayangkan juga dapat digunakan di tingkat

sekolah menengah untuk menumbuhkan kecintaan untuk belajar dengan membuka jendela ke

dunia mikroskopis di dalam organ dibedah selama pelajaran biologi. Ini bisa digunakan untuk

mempersiapkan slide histologi didunia di mana mikrotom dan peralatan embedding

tidak tersedia. Meskipun fokus penelitian saat ini adalah jaringan normal, prosedur bisa

menawarkan mekanisme untuk dokter hewan dan kesehatan lainnya profesi- juga untuk

mengevaluasi jaringan abnormal, seperti tumor. Digital kamera di mikroskop dapat digunakan

untuk menangkap gambar dan mereka bisa dikirim secara elektronik ke laboratorium diagnostik

untuk evaluasi cepat.

Meskipun kami belum diuji prosedur untuk kegunaannya dalam prosedur seperti

imunohistokimia (Troyer et al., 1986), hibridisasi in situ (Bucana et al., 1993), atau in situ

polymerase chain reaction (Zhang et al., 1997) ini mungkin aplikasi masa depan. Ini juga bisa

menjadi cara cepat untuk mengevaluasi jaringan dari hewan transgenik yang membawa gen

reporter tersebut sebagai galaktosidase atau protein fluorescent hijau.

Seperti halnya untuk teknik apapun, metode ini bekerja lebih baik dalam tangan beberapa

orang dari yang lain dan memerlukan beberapa praktek. Kekuatan dari metode ini adalah biayarendah, kesederhanaan dan kecepatan, dan fakta bahwa ia menyediakan, untuk pertama kalinya,

mekanisme penyusunan bagian jaringan yang melestarikan histoarchitecture tanpa menggunakan

mikrotom.

Documents

Translate Mikroteknik Jurnal 1