Fabíola Menegotto, Sandra Gonzáles-Cabrero, Belén Lorenzo, África Cubero,

Williams Cuervo, María Purificación Gutiérrez, María Simarro, Antonio Orduña,

Miguel Ángel Bratos

MOLECULAR EPIDEMIOLOGY OF METHICILLIN-RESISTANT

STAPHYLOCOCCUS AUREUS IN SPANISH HOSPITAL OVER A 4-YEAR PERIOD: CLONAL REPLACEMENT, DECREASED ANTIMICROBIAL RESISTANCE, AND IDENTIFICATION OF COMMUNITY-

ACQUIRED AND LIVESTOCK-ASSOCIATED CLONES

POR: Nataly Giraldo Camila Jaramillo

INTRODUCTION

Genus: StaphylococcusGram-positive cocciCatalase-positive  It catalyzes the decomposition of hydrogen peroxide to water and oxygen

facultative anaerobe

ImmobileThey grows fast

without oxygen

with oxygen

INTRODUCTION Staphylococcus don´t release spores They are resistant to adverse environmental

conditions They are part of the normal microbial flora skin

and mucous in humans

INTRODUCTION

Species: aureusCoagulase-positive is a protein that enables the conversion of fibrinogen to fibrinThey are heat resistant microorganisms Most strains coated by

protein A

INTRODUCTION Some strains may have mucoide capsule,

called slime To increase its adherence ability and antiphagocytic effect

The peptidoglycan is about 50% by weight of cell wall

Colonies are smooth and bright

INTRODUCTION

METHICILLIN:

Is a β-lactam antibiotic  used in the treatment of bacterial infections caused by organisms of the genus Staphylococcus. It acts by inhibiting penicillin-binding proteins (PBPs) that are involved in the synthesis of peptidoglycan, an essential mesh-like polymer that surrounds the cell.

INTRODUCTION

Methicillin required administration via intramuscular or intravenous injection because it was inactivated by gastric acid in the stomach when taken orally

INTRODUCTION

RESISTANTIs a form of drug resistance whereby some microorganism are able to survive exposure to one or more antibiotics.  There are 3 types of bacterial resistance:

NATURAL RESISTANCE Generated by different strain mechanism, independent of antibiotic exposure

ENVIRONMENTAL RESISTANCE

Generated by exposure to physical and chemical factors

ACQUIRED RESISTANCE

Generated by changes in bacterial genome over time

Is resistant to the action of methicillin

INTRODUCTIONBACTERIAL RESISTANC

E

Depends on its ability to mutate and transfer of genetic

information

Staphylococcus aureus

can become resistant to methicillin and other β-lactam antibiotics

through

the expression of a foreign PBP: PBP2a

that

making the treatment more difficult and limited

OVERALL OBJECTIVE

“Identify the changes in molecular epidemiology

of methicillin-resistant Staphylococcus aureus

(MRSA) isolates from Spanish third-level hospital

between 2005 and 2008, and to correlate the

changes in antibiotic resistance profiles (RPs)

with the clonal nature of MRSA in our institution”

MATERIALES Y MÉTODOS

MUESTRAS CLÍNICAS:189 MRSA sin repetir fueron obtenidas de muestras clínicas recolectadas en 2005, 2007 y 2008 en el Hospital Clínico Universitario Valladolid, España

105 de pacientes con infecciones en tejidos blandos y piel

2 por bacteriemia

37 por infección de puntos quirúrgicos

1 por infección del aparato auditivo

39 por infección del tracto respiratorio

1 de infección del tracto urinario

4 de huesos y articulaciones infectadas

MATERIALES Y MÉTODOS

EXAMEN DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANAUTILIDA

D

Para determinar si un microorganismo, como el Staphylococcus aureus es sensible, intermedio o resistente a un agente antimicrobiano.

Elegir el tratamiento mas efectivo

contra la bacteria

MATERIALES Y MÉTODOS

EXAMEN DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA

MIC (concentración mínima inhibitoria):Tubo con la menor concentración de antibiótico que ha inhibido la bacteria.

Método de dilución de caldo: Muller HintonMedio preferido para pruebas de susceptibilidad de organismos comúnmente aislados, aeróbicos o facultativos de rápido crecimiento.

MATERIALES Y MÉTODOS

EXAMEN DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA

15 agentes antimicrobianos diferentes fueron diluidos en serie en caldo Muller-Hinton con suplementación de Ca+2 y Mg.

Ciorofloxacina ,eritromicina ,tobramicina, gentamicina, mupirocina, ácido fusídico, cloranfenicol, tetraciclina, rifampicina, trimetoprima/sulfametoxazol, teicoplanina, linezolida, daptomicina y vancomicina

MATERIALES Y MÉTODOS El MIC fue determinado al observar la

menor concentración antimicrobial mostrando inhibición o crecimiento.

La resistencia a la clindamicina también se detectó usando test de aproximación de disco.

MATERIALES Y MÉTODOS

TIPIFICACIÓN DE SCCmec Y ccrABC:

PCR MÚLTIPLE: «Reacciones que consiguen

amplificar simultáneamente y, en un único

tubo, diferentes secuencias diana,

permitiendo la detección e identificación

simultánea de distintos genes de interés…»

MATERIALES Y MÉTODOS

TIPIFICACIÓN DE SCCmec Y ccrABC:

La detección de genes de recombinación

(ccrA, ccrB, ccrC) en el elemento de SCCmec

fueron realizadas por hibridación a un

conjunto de sondas en una matriz de DNA.

MATERIALES Y MÉTODOS

TIPIFICACIÓN DE SECUENCIAS MULTILOCUS (MLST) Y spa:

MLST: Es una técnica para la

caracterización taxonómica de bacterias y

microorganismos. Compara las secuencias

de nucleótidos directamente entre las cepas.

MATERIALES Y MÉTODOS

El software Ridom SraphType, versión 1.4,

fue usado para el análisis de los tipos de spa,

y los tipos de secuencia (STs) donde fueron

asignados por medio de la base de datos

MLST. Por aplicación del algoritmo

goelBURST, los ST’s se agruparon en

complejos clonales diferentes.

RESULTADOS Aislados 189

STs identificados

91% agrupados en: t067 (49.7%)t109 (18.5%)t002 (13.2%)t008 (6.3%)t1391 (2.6%)

ST2422ST125ST5ST146ST228ST45ST8ST239ST97

NUEVO

Complejos clonales:CC5, CC8, C45, CC97 y CC121

RESULTADOS

I (19%)II

III (1%)

IV (80%) IVa (61%)

TIPOS DE SCCmec

RESULTADOS

Complejo mec=BcrrAcrrB2

Complejo mec=BcrrA/B2crrA4 y/o crrB4

RESULTADOS

ST125-MRSA-IV

ST125-MRSA-IV/VI

RESULTADOS

SEPA 2005 2007 2008

ST228 54% 14% 14%

ST125ST146

32%11%

54%11%

55%21%

ST125-IV/VI Resistentes a eritromicina y ciproflaxina+tobramicinaST125IV Susceptibles a eritromicina

DISCUSSIONAUTHOR OPNION AGREE OR

DESAGREE

M. Perez-Vazquez, A. Vindel, C. Marcos, J. Oteo, O. Cuevas, P. Trincado

“In these studies, it was revealed that the ST125-MRSA-IV clone is currently the most prevalent in Spain.”

M.L. Amorim, N.A. Faria, D.C. Oliveira, C. Vasconcelos, J.C. Cabeda and A.C. Mendes

“Increase of infections caused by nonmultiresistant MRSA carrying SCCmec IV in healthcare institutions was observed”

DISCUSSIONAUTHOR OPINION AGREE OR

DESAGREE

E.B. Nannini, E. Murray and C.A. Arias

“Worldwide, there are increasing numbers of reports regarding heterogeneous vancomycin-intermediate S. aureus”

Cuny, F. Layer, B. Strommenger, and W. Witte

“Similar ST130 strains have been isolated from human infection in the UK, Denmark, and Germany at low frequency”

PERSONAL CONCLUSION

It is very important this type of study, because they show the dynamics of

transformation over time MRSA strains that are causing infections of varying

severity

PERSONAL CONCLUSION

Studies like this should be done more

frequently to study the possible risks of

infection in hospital environments

Tracking most frequent bacterial strains in

each region allows determine its ability to

spread from one region to another

PERSONAL CONCLUSION

Bacterial resistance to antibiotics should

be considered a global emergency,

because there are less effective

antibiotics to infections treatment.

Mapa Nataly

Mapa Camila

GRACIAS THANKS