UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE OCEANOGRAFIA, PESQUERIA, CIENCIAS

ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA

TITULO :

BIOQUIMICA BACTERIANA

N° DE PRÁCTICA: 7

PARTICIPANTE:

GAMARRA RAMOS, CARLOS ALBERTO

DOCENTE

DOC. MARIA TERESA FLORES CORDOVA

SECCION

FECHA

MIRAFLORES, 24 de junio, 2013

OBJETIVO GENERAL

Reconocer las reacciones de los microorganismos o bacterias ante pruebas

bioquímicas con carbohidratos, y el porqué de esa reacción.

OBJETIVO ESPECIFICO

Conocer como los microorganismos reaccionan frente a diversos tipos de

cultivo, en su propia reacción metabólica, el cual podremos apreciarlo por el

cambio de coloración o viraje así como la presencia de gas y presencia de

SH2, esto nos ayuda a reconocer las capacidades que posee y diferenciarlos.

FUNDAMENTO

Se fundamenta en la degradación de los carbohidratos a ácidos

Los microorganismos poseen la capacidad de fermentar diversos sustratos, los

productos finales dependen del tipo de microorganismo, del tipo de sustrato y del tipo

de enzimas que se encuentren presentes. El análisis químico de estos productos

finales ayuda a identificar los microorganismos.

MARCO TEORICO

Metabolismo microbiano como el conjunto de procesos por los cuales un

microorganismo obtiene la energía y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que

necesita para vivir y reproducirse. Los microorganismos utilizan numerosos tipos de

estrategias metabólicas distintas y las especies pueden a menudo distinguirse en base

a estas estrategias. Las características metabólicas específicas de un microorganismo

constituyen el principal criterio para determinar su papel ecológico, su responsabilidad

en los ciclos biogeoquímicos y su utilidad en los procesos industriales.

Metabolismo de los carbohidratos

Determinar la capacidad de un microorganismo para producir  y mantener estables los

productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad

amortiguadora del sistema. La prueba Rojo de metilo es cuantitativa para la

producción de acido y requiere que los microorganismos produzcan ácidos fuertes a

partir de la glucosa, de forma que el medio del pH descienda a menos de 4.4. Esta

distinción puede hacerse a través del indicador Rojo de metilo que presenta color

amarillo por encima de un pH de 5.1 y solo presenta color rojo cuando el pH desciende

a 4.4.

Reacción en el agar triple azúcar hierro

Es una prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la

producción de H2S por parte de la bacteria sumándole producción de gas. El cambio

de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica fermentación. Si se

fermenta únicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el

fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la

lactosa, además los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio.

 Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el

fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio  y a veces tienden a expulsarlo

indica presencia de gas como producto final de la fermentación.

 La producción de H2S se manifiesta por la aparición de un precipitado color negro

debido a la reducción de la sal de hierro presente en el medio.

PROCESO EXPERIMENTAL (practica de laboratorio)

1. METABOLISMOS DE LOS CARBOHIDRATOS:

La desintegración de los hidratos de carbono que realizan los microorganismos se ve

acompañada de ala aparición de una reacción acida. Los fermentos que desintegran

los hidratos de carbono efectúan la hidrolisis de este hasta convertirlo en glucosa o en

otro monosacáridos , de esta manera bajo la acción de la maltosa , la sacarosa y la

lactosa de los disacáridos que penetran en el interior del cuerpo bacteriano sufren

hidrolisis y desintegración de los poli y disacáridos en monosacáridos .

a) Pasos a seguir :

Identificar cada tubo

Replicar la cepa en estudio en tubos que contenga glucosa, lactosa, sacarosa y

manitol.

Considerar positivo al cambio de pH del medio acido que da un color amarillo,

considerándose fermentativa, si hay ruptura del medio se considera

fermentativa con gas.

Medios de cultivo:

Sacarosa Lactosa ManitolGlucosa

PROCESO DE LABORATORIO

Regeneración de los medios

Cuando nuestro medio de cultivo ha sido preparado días antes de la

inoculación (medio gelificado)

Tiene por finalidad eliminar las burbujas de aire que se presentar nuestro

medio de cultivo y así no dar resultados erróneos en el momento de la

lectura. El medio es sometido a un baño maría con agua hirviendo por un

tiempo no prolongado (generalmente hasta que esté en forma inicial en medio

líquido).

Cuando nuestro medio de cultivo ha sido preparado en mismo día en la

que se va hacer la inoculación (medio liquido)

No es necesario el proceso de regeneración de medio, se puede utilizar

directamente.

Trabajamos con medio de cultivo pre-preparados días antes:

Proceso de regeneración:

Por un tiempo no muy prolongado.

a) metabolismo de los carbohidratos :

Identificación de los tubos debidamente rotulados; sacarosa(s), lactosa (L),

glucosa (G) y manitol (M).

inoculación con el microorganismo (Staphylococcus aureus ) en los tubos con

medio de cultivo predeterminado con anterioridad, el proceso es una simple

estocada vertical y central hacia el fondo de cada tubo.

Ejemplo

GGGGL GS M

GGGGL GS M

acondicionar nuestras muestras para la incubación

Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por

un promedio de 12 a 48 horas.

RESULTADO: etapa oxidativa

Sacarosa Lactosa ManitolGlucosa

2. REACCIÓN EN EL AGAR TRIPLE AZÚCAR HIERRO:

Sembrar la cepa en agar TSI (triple sugar iron agar) por puntura profunda y estría en la

superficie inclinada. Incubar a 37°C por 24 horas .observar la base y la parte inclinada

acida (amarilla) considerando la prueba positiva, con o son ennegrecimiento

considerando presencia de SH2 positivo, y si hay producción de gas como

fermentativo.

b) Pasos a seguir :

Identificar el tubo TSI

Replicar la cepa en estudio en el tubo que contenga los 3 carbohidratos en las

siguientes proporciones glucosa (1 g), lactosa (10 g) y sacarosa (10 g).

Considerar los parámetros que se pueda presentar.

Nota: como la finalidad es ver la reacción en el agar, este proceso no necesita pasar

por la regeneración de medios.

Medio de cultivo: TSI (triple sugar iron agar)

PROCESO DE LABORATORIO

b) Reacción en el agar triple azúcar hierro :

Identificación del tubo TSI (triple sugar iron agar) el cual debe estar

debidamente rotulado

inoculación con el microorganismo (Staphylococcus aureus ) en el tubo con

medio de cultivo predeterminado con anterioridad, el proceso es una simple

estocada vertical y central hacia el fondo de cada tubo, seguido de una estría

sobre la superficie inclinada del medio.

Ejemplo

Acondicionar e Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura

optima de 37°c por un promedio de 12 a 48 horas.

RESULTADO:

Vista de Pinchazo profundo Vista de la superficie

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

CUADRO N°1

METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS

Lectura

Incubación a 37°C / por 24 a 48 horasInoculación : Staphylococcus aureus

sacarosa lactosa glucosa manitol

Oxidativa SH2

oxidativa SH2

oxidativa SH2

oxidativa SH2

Conclusión:

En conclusión el Staphylococcus aureus , solo llego a la etapa oxidativa ,

etapa en la cual usa el oxigeno del tubo para hacer la degradación ,el cual ha

producido cambio de viraje en la coloración tornándose amarillo solo en la parte

superficial

El microorganismo utiliza la fuente de carbono más asequible en el medio,

la glucosa, esta por estar en menor proporción (1g). Pero como se encuentra

en el medio y en muy baja concentración se agota rápidamente. Los productos

de su degradación acidifican el medio que cambia de rojo a amarillo.

SacarosaLactosa ManitolGlucosa

CUADRO N°2

REACCIÓN EN EL AGAR TRIPLE AZÚCAR HIERRO

Lectura

Incubación a 37°C / por 24 a 48 horasInoculación : Staphylococcus aureus

glucosa ⊕ SH2 Θ (fermentativo)

Conclusión:

En conclusión el Staphylococcus aureus , nos dio los resultados de

glucosa(positivo) , SH2 (negativo) y fermentativo , el medio sembrado no

cambio de coloración a rojo en la superficie , se mantuvo en la etapa

fermentativa

Hubo proceso de utilización de la sacarosa o lactosa por lo que se mantuvo de

color amarrillo y no viro de coloración.

DISCUSIÓN:

Si fermenta glucosa cambia a amarillo en todo el tubo, lo que pasa que

en el pico de flauta los productos ácidos de la fermentación de la

glucosa se oxidaron y también se oxidaron las peptonas a aminas

alcalinas, quedando el pico de color rojo. Ahora si además fermenta

lactosa y o sacarosa esto hace que en el pico de flauta se neutralicen

las aminas y el exceso de ácido hace virar el indicador al color

amarillo.--Gómez Del Mónaco, Natalia 14 may 2009 (UTC)

BIBLIOGRAFIA

M.; ARIAS MICROBIOLOGÍA EN LOS ALIMENTOS, metabolismo bacteriano.

Microbiología 5a Ed. Prescott, Harley & Klein | 2004 | McGraw-Hill-

Página de internet:

http://www.saberdeciencias.com.ar/index.php/apuntes-de-microbiologia/167-

microbiologia-metabolismo-bacteriano