Microbiologia - practica

7/18/2019 Microbiologia - practica

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UNIVERSIDAD DE COLIMA

DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN MEDIASUPERIOR

MANUAL DE PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA

Elaborado por: Q..B. M!"#$a Al$ara% M&"'&(a

Aprobado por la A$ad)*#a E+,a,al d) M#$rob#olo'(a:M.V.-. Ed&ardo A'&#lar Torr)+

M.V.-. G&+,ao Valp&)+,a V)'aQB. Mar(a M)r$)d)+ S&/r)% Brao

QB. Pa,r#$#a Ed0#'#+ Valladar)+ C)l#+

S&p)r#+ado por: L#$da. La&ra Ara$)l# 1#*2")% Cob#/"



AGOSTO DEL 3445

1USTIICACIÓN

El presente trabajo se elaboró con la fnalidad deproporcionar un material ordenado y de ácil acceso al trabajoacadémico el cual se complementa con la actividad científca en ellaboratorio.

Actualmente no se encuentra un manual de prácticas demicrobiología en el nivel medio superior dentro de la página de laUniversidad de Colima ni en bacilleratos !ue tengan el área

"uímico #iólogo o un área en com$n en donde se contemple laasignatura de microbiología general en el nivel medio superior.

%a intención de este manual es satisacer las necesidades deldocente en los aspectos teóricos llevados en el aula con laactividad científca desarrollada en el laboratorio de tal orma !uese nos acilite el trabajo ordenado y uniorme en todos losbacilleratos.

El manual consta de !uince prácticas y ue elaborado tomandoen cuenta las reerencias bibliográfcas !ue marca el programa deeducación media superior de la Universidad de colima para laasignatura de &icrobiología.

%a elaboración del manual se reali'ó en varias etapasmediante la recopilación de prácticas. Cada práctica inicia con eltítulo en la parte central el cual se seleccionó de acuerdo a ladosifcación del programa por semana. El objetivo ace reerencia al

aspecto signifcativo !ue se pretende !ue los alumnos logren alfnal del e(perimento. %a introducción es la parte teórica de cadauna de las prácticas) ue tomada de diversas reerenciasbibliográfcas. En la parte e(perimental el procedimiento se tomóde diversos manuales de otras Universidades y de la mismaUniversidad de Colima.

El cuestionario en el !ue el alumno demuestra su aprovecamientologrado al fnal de la secuencia de aprendi'aje se elaboró basado

2

2



en el aspecto introductorio y resultados e(perimentales !ue seesperan de cada práctica. Así mismo se complementa conobservaciones !ue el alumno reali'ará mediante dibujos oes!uemas y fnali'ará con conclusiones personales del mismo.

INDICE DE PRÁCTICAS

*ágina

Pr/$,#$a No 6 Empacado del material y esterili'ación

por calor

seco.............................................................................. +

Pr/$,#$a "o 3 Esterili'ación por calor $medo

Pr/$,#$a No 7 *reparación de medios de cultivo

,ólidos........................................................................................

-

Pr/$,#$a No 8 *reparación de medios de cultivo

%í!uidos....................................................................................... -

Pr/$,#$a No 9 ,embrado en placa de microorganismos

del medio

ambiente..................................................................... -/

Pr/$,#$a No Aislamiento de 0ongos mediante el

método e(tensión en

placa.......................................................... 1-Pr/$,#$a No ; Aislamiento de bacterias mediante el

método sembrado en placa por

estrías........................................ 12

Pr/$,#$a No < &anejo y uso del microscopio

óptico Compuesto33333333333333333333

3

3



Pr/$,#$a No 5 4inción de la cápsula

bacteriana.................................................. 56

Pr/$,#$a No 64 4inciones

selectivas..................................................................... 5-

Pr/$,#$a No 66 4inción de

7ram........................................................................ 58

Pr/$,#$a No 63 4inción ácido9Alcool

resistente................................................. 5:

Pr/$,#$a No 67 Eecto de la presión osmótica sobre la viabilidad

y el crecimiento de los

microorganismos.................................. 2

Pr/$,#$a No 68 ;eterminación del tiempo y punto térmico

mortal en

microorganismos....................................................... 25

Pr/$,#$a No 69 <nibidores

bacterianos.............................................................. 2/

RECOMENDACIONES GENERALES

.9%a ora de entrada tendrá 6 minutos de tolerancia) después de

este tiempo) no se permitirá al acceso al laboratorio

-.9Al entrar al laboratorio) el alumno deberá ponerse la bata y

abotonarla completamente) sólo podrá !uitársela al salir de

éste.

1.9 %as mesas deberán estar siempre limpias y desocupadas) las

mocilas deberán ser colocadas en los cajones de las mesas

de trabajo.

5.9 =o comer ni umar en el laboratorio) no introducirse ning$n

objeto a la boca.

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4



2.9 >ecogerse el pelo para eectuar el trabajo de laboratorio.

8.9 %impiar y desinectar el área de trabajo antes y después de

usarla.

+.9 =o pasear entre las mesas del laboratorio) el trabajo deberáeectuarse sentado y en su e!uipo de trabajo.

/.90ablar sólo lo necesario con los compa?eros.

:.9 ;ías antes de iniciar la práctica lea cuidadosamente !ue es lo

!ue se va a reali'ar) si no entiende pregunte al proesor.

6.9 ,i ay necesidad de llevar material biológico para la reali'ación

de la práctica) es necesario conseguirlo de lo contrario la prácticase suspenderá para todo el e!uipo.

.9 El asa utili'ada para el cultivo de microorganismos deberá

esterili'arse en la @ama del mecero) antes y después de su uso.

-.9<norme al proesor de cual!uier accidente !ue ocurra.

1.9En caso de derramar material !ue contenga microorganismos)

c$bralo con enol o ben'al y deje actuar die' minutos y de aviso alproesor.

5.9 4odo el material !ue se va a incubar o desecar) debe

colocarse en el sitio

indicado por el proesor.

2.9Eti!uete todo el material !ue va a incubar con los siguientes

datos e!uipo) grupo) eca) nombre del material e iniciales delnombre del alumno.

8.9 ;espués de la incubación es necesario la esterili'ación del

material para eliminar microorganismos !ue pudieran acernos

da?o a nuestra salud.

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5



+.9 %ávese las manos con agua y jabón antes de salir del

laboratorio.

/.9 Es obligación de cada e!uipo entregar todo el material limpio.

ÓRMULA = PREPARACIÓN DE REACTIVOS USADOS EN LAS

DIERENTES PRÁCTICAS DE ESTE CURSO

6.> SOLUCIÓN DE AGUA O?IGENADA AL 64@ *>E*A>AC<B= *reparar antes de usarse. Colocar ml de agua o(igenada en : ml deagua destilada

3.> COLORANTE DE A-UL DE METILENO AL 9@ *>E*A>AC<B=

6

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A'ul de metileno2.6 gr Agua destilada66 ml

7.> REACTIVOS DE LA TCNICA DE GRAMA CD%D>A=4E C><,4A% <D%E4A FB>&U%A Cristal violeta-.6 gr Etanol al :2G -6ml D(alato de amonio6./ gr Agua destilada/6 ml *>E*A>AC<B= .9 ;isolver el cristal violeta en el etanol -.9 ;isolver el o(alato en el agua 1.9 &e'clar las dos soluciones

# ,D%UC<D= ;E %U7D%FD>&U%A

Hoduro de potasio 6.6gr Agua destilada

-6.6 ml Hodo metálico 2.6gr Etanol) aorar a66.6ml

*>E*A>AC<B= .9 ;isolver el yoduro de potasio en el agua -.9 Agregar el yodo metálico y disolver 1. Aorar a 66 ml con etanol

C ,D%UC<B= ;E A%CD0D% ACE4D=A

FD>&U%A Acetona volumen Etanol al :2G -vol$menes

; CD%D>A=4E ,AF>A=<=AFD>&U%A

,aranina6.2 gr

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7



Agua destilada66.6 ml *>E*A>AC<B= ;isolver la saranina en apro(imadamente -6 ml de agua) despuésaorara a 66 ml con más

agua.8.> REACTIVOS DE LA TCNICA DE -IEL> NEELSENA CD%D>A=4E FUC,<=A FE=<CA;A FD>&U%A Fucsina básica 2.6 gr Fenol -2.6 grs

Etanol al :2G 26 mlAgua destilada aorar a 266 ml*>E*A>AC<B=

.9 Colocar el enol en 66 ml de agua destilada y calentar en ba?o aebullición -.9 A?adir la ucsina básica y disolver 1.9 A?adir el etanol y me'clar 5.9 Aorar la solución a 266 ml con agua destilada

# ,D%UC<B= ;E A%CD0D% IC<;D FD>&U%A Icido clorídrico 1.6 ml Etanol al :2 66.6 ml *>E*A>AC<B= Adicionar el ácido clorídrico al etanol) lentamente y agitando

C CD%D>A=4E AJU% ;E &E4<%E=D FD>&U%A A'ul de metileno 2.6 gr

Agua destilada 66.6 ml 9.> ME-CLA CRÓMICA

;icromato de potasio-6.6 grIcido sul$rico concentrado

-6.6 ml.Agua destilada-26.6 ml.

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EMPACADO DEL MATERIAL = ESTERILI-ACIÓN POR CALORSECO

Pr/$,#$a No 6=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK7rupoKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKK

OB1ETIVO

El alumno aprenderá el procedimiento para empacar diversos

materiales de uso en microbiología así como el procedimiento de laesterili'ación por calor seco de estos.

SUSTANCIAS QUIMICASMATERIAL

;etergente E(tran&atracesAgua destilada 4ubosde ensaye

0orno a +6LC *ipetas 4ermómetro Cajas depetri *apelestra'a Algodón Escobillones INTRODUCCION.

E&*ACA;D ;E% &A4E><A%Antes de iniciar un empa!ue del material !ue se desea esterili'ar) es

necesario !ue todas las prácticas !ue se realicen estén en condiciones deesterilidad y se debe) en primer lugar) limpiar el área de trabajo con algunasustancia desinectante y encender el mecero. ,e emplearán distintosagentes germicidas y desinectantes Msoluciones de ipoclorito de sodio)cloro(ilenol) ormaldeído) etc. para desinectar superfcies.

El material a esterili'ar se deberá de empacar correctamente con papelestra'a Una de las ra'ones de la importancia del papel en nuestra vidacotidiana es la enorme cantidad de usos !ue se le pueden dar a este producto.

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;e la misma manera) el papel puede adaptarse a las dierentes utilidades !uese vayan a reali'ar llegando a contabili'arse asta 52+ variedades dierentesde papel. %as variedades dependen de una serie de características ísicas !ueacen !ue el papel se pueda adaptar a dierentes usos como <mpedir elingreso de microorganismos al interior) ,ellar en orma completa para evitar

contaminación) ,oportar la tracción y manipulación abitual sin surir deterioroy acer permeable al método de esterili'ación seleccionado. 4odo esto se lograEmpacando en primer lugar en campo de algodón) y posteriormente enempa!ue mi(to o en polipropileno de acuerdo con el tama?o del material.

ESTERILI-ACIÓN POR CALOR SECO %a muerte microbiana se produce por una esterili'ación) ya sea comoconsecuencia de mecanismos de transerencia de energía) además de lao(idación. En la )+,)r#l#%a$#!" por Calor +)$o e(iste una destrucción de losmicroorganismos o(idando sus constituyentes !uímicos) desnaturali'ando lasproteínas y los ácidos nucleicos de las células así como ragmentando lasmembranas celulares. *ara materiales !ue deben permanecer secos comociertos instrumentos de vidrio de laboratorio tales como cajas de petri)pipetas) así como aceites) polvos M por ser impermeables al vapor) losmateriales !ue no se pueden esterili'ar por calor seco son &aterial te(tilMalgodón) sedas) lino) etc.) 7omas y &ateriales sintéticos

4odo material !ue se altere a la temperatura de trabajo se dispone de ornoseléctricos por los !ue circula aire caliente) en vista Nde !ue el calor es menosefca' en materiales secos) se acostumbra a aplicar una temperatura de 86LC

a +6LC durante una ora o más. *ara materiales de vidrio de laboratorio essufciente una e(posición de dos oras de duración a 86LC M 1-6 LF para !ue!uede esterili'ado. Dtras ormas $tiles de calor seco incluyen incineración paraobjetos !ue deben ser destruidos y @ameados por pasaje de agujas o pe!ue?osinstrumentos a través de la llama de un mecero bunsen

PROCEDIMIENTO

I EMPACADO DEL MATERIALl.9 %ava el material de laboratorio) principalmente la cristalería con detergenteE(tran o AlOo( MFácilmente se contamina con esporas diíciles de eliminarenjuaga con abundante agua de la llave y en seguida con agua destilada.-.9 ,ecar el material utili'ando papel absorbente para acelerar el secado

1.9Empaca el material correctamente

A CAPA, ;E *E4><

Corta el papel estra'a) en orma de rectángulos adecuados para la cantidadde - a 1 cajas. Colócalas en la parte central y Envuélvelas seg$n te indi!uetu proesor.,e toman los e(tremos de *apel y se unen ) ,e ace un nuevo

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doble' recargando ligeramente en la caja para marcarlo) %os e(tremos sedoblan en orma triangular .Ha en orma triangular se doblan acia atrás!uedando listas para esterili'ar.

# *<*E4A,

<ntroduce una pe!ue?a porción de algodón en el cuello de la pipeta)procurando !ue !uede lo sufcientemente apretada. Con tiras de papel de 1 cmde anco envuélvelas) comen'ando por la punta y en orma de espiral giraacia arriba asta el fnal de la pipeta.

C 4U#D, ;E E=,AHE. ,e toma el tubo con la mano i'!uierda y con la dereca el tapón de algodón.Coloca algodón en la boca del tubo a Q2 parte de la longitud del mismoprocurando !ue !uede bien apretado) deposítalos en recipientes adecuados)tápalos con papel estra'a y átalos.

; &A4>ACE,.

4apa el cuello del matra' con algodón) lo sufcientemente apretado paraevitar !ue se destape M se tapa en la misma orma !ue el tubo. Comoprotección coloca un gorrito de papel estra'a y átalo con cinta.

E &A4E><A% &E4I%<CD El asa de platino) tijeras) bisturí) material !uir$rgico no es necesarioempacarlo para su esterili'ación.

II ESTERILI-ACIÓN POR CALOR SECO.9%as normas de *rocedimiento de la <nstitución establecerán las condicionesde trabajo seg$n la carga) volumen) peso) resistencia térmica del material. Esimprescindible respetar los parámetros obtenidos en la validación delprocedimiento. %a temperatura de esterili'ación por Calor ,eco deberá estarentre 86LC a +6 RC. y el tiempo de aplicación será de una ora o más.

-.9 El material a esterili'ar se deberá cargar con el esterili'ador río) teniendoen cuenta las siguientes recomendaciones Cada unidad deberá !uedarseparada de las vecinas%os materiales no deberán estar en contacto con las paredes) piso y teco del

esterili'ador%a carga del esterili'ador será omogénea y no deberá superar el /6G de lacapacidad total de la cámara

1.9Colocar el material dentro del Esterili'ador. Encender el Esterili'ador)erifcar !ue los instrumentos de control de ciclo) tiempo M l ora ytemperaturaM +6LC se encuentren en la posición correcta. Esperar asta !uelos instrumentos de medición alcancen la temperatura seleccionada para elciclo

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5.9 Cuando se alcance la temperatura seleccionada) se comen'ará a descontarel tiempo de esterili'ación. Cumplido el tiempo de e(posición se apagará elEsterili'ador%a descarga del Esterili'ador se eectuará una ve' !ue el material se ayaenriado.

2.9;urante el ciclo de Esterili'ación no deberá abrirse la puerta del Esterili'adorpor!ue ello implicaría abortar el ciclo) debiendo en este caso recomen'arlo)además de !ue el cambio de temperatura rompería la cristalería

8.9 una ve' alcan'ada la temperatura de 86SC en el orno con aire calientecoloca todo el material

!ue se empacó y toma el tiempo de - oras para su esterili'ación

CUESTIONARIO

.9 *or!ué antes de una esterili'ación es necesario lavar y desinectar elmaterialT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9 Es necesario un secado del material en el orno antes del empacado conpapel estra'aT *or!ueT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

1.9 "ué fnalidad tiene el empacado antes de la esterili'aciónT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 *uede ser utili'ado otro tipo de papel !ue el de estra'aT *or !uéT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

2.9 "ué fnalidad tienen los tapones de algodón !ue se colocan en los e(tremosde las pipetas y de los &atraces Erlen&eyerKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8.9 "ué desventaja tiene el utili'ar la esterili'ación por calor seco en estelaboratorioT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

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+.9 Cómo act$a la esterili'ación por calor seco en los microorganismosT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK /.9 A !ué temperatura y cuánto tiempo tendrás !ue emplear para esterili'ar

por calor seco el material de laboratorio para asegurar la destrucción demicroorganismos patógenos y esporasT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

OBSERVACIONES

>eali'a los dibujos correspondientes del procedimiento de empacado !uereali'aste para cada tipo de material de laboratorio. Así mismo dibuja el orno

en donde reali'aste la esterili'ación por calor seco.

CONCLUSIONES KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

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KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

ESTERILI-ACIÓN POR CALOR MEDO

Pr/$,#$a No 3=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK7rupoKKKKKK

=ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO

El alumno conocerá y aplicará el procedimiento de esterili'ación por calor$medo) así como las ventajas del procedimiento.

MATERIALSUSTANCIAS

>eloj Agua dela llaveAutoclave u olla de presión E(tran1 ,oporte universal AlOo(- mecero fscer&aterial de cristalería limpio) seco y empacado

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Asa de platino

INTRODUCCIÓN

AGENTES ÍSICOS ANTIMICROBIANOS.

A CALOR MEDO.9 %a temperatura elevada) combinada con una umedadelevada) es uno de los métodos más eectivos para matar microorganismos. Elcalor $medo mata a los microorganismos coagulando sus proteínas. Es mucomás rápido y eectivo !ue el calor seco. El vapor a presión proporcionatemperaturas por encima de las !ue se pueden obtener al ervir. 4iene laventaja de un calentamiento rápido) así como penetración rápida y abundanteumedad.. El aparato a esterili'ar !ue utili'a vapor de agua a presión regulada sedenomina autoclave. Consta de una cámara de doble pared !ue se llena devapor saturado libre de aire y se mantiene a la temperatura indicada y a lapresión establecida durante un periodo de tiempo determinado. 7eneralmenteel autoclave unciona a una presión de 2 librasQ pulgada cuadrada a -LCM -5:LF. El tiempo de uncionamiento para lograr la esterilidad depende de lanaturale'a del material !ue se va a esterili'ar) del tipo de envase y delvolumen del material. Una temperatura de l66LC es la sufciente para matar atodas las ormas bacterianas en - o 1 minutos) e(cepto a las esporas) paramatar a estas se re!uiere una temperatura de -LC durante 2 minutos y auna presión de 2 libras. Este método es adecuado para esterili'ar aparatos !ue tienen ule)

jeringas !ue contienen metal) para medios de cultivo !ue contienen un a'$carespecial de(trosa. El autoclave se puede sustituir por la olla de presión.

B CALOR SECO.> En este tipo de esterili'ación e(iste una destrucción de losmicroorganismos o(idando sus constituyentes !uímicos) desnaturali'ando lasproteínas y los ácidos nucleicos de las células así como ragmentando lasmembranas celulares. *ara materiales !ue deben permanecer secos comociertos instrumentos de vidrio de laboratorio tales como cajas de petri)pipetas) así como aceites) polvos M por ser impermeables al vapor) losmateriales !ue no se pueden esterili'ar por calor seco son &aterial te(tilMalgodón) sedas) lino) etc.) 7omas y &ateriales sintéticos

4odo material !ue se altere a la temperatura de trabajo se dispone de ornoseléctricos por los !ue circula aire caliente) en vista Nde !ue el calor es menosefca' en materiales secos) se acostumbra a aplicar una temperatura de 86LC

a +6LC durante una ora o más. *ara materiales de vidrio de laboratorio essufciente una e(posición de dos oras de duración a 86LC M 1-6 LF para !ue!uede esterili'ado. Dtras ormas $tiles de calor seco incluyen incineración paraobjetos !ue deben ser destruidos y @ameados por pasaje de agujas o pe!ue?osinstrumentos a través de la llama de un mecero bunsen

PROCEDIMIENTO

C ESTERILI-ACIÓN POR CALOR MEDO apor a pr)+#!"

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.9 %ava el material !ue te proporcione tu proesor con me'clas adecuadascomo E(tran) me'cla Crómica con concentraciones adecuadas tomando encuenta lo sucio del material) seca en estua o en orma manual con papelabsorbente y empácalo. 4enlo listo para su esterili'ación.

-.9 Coloca el agua necesaria en la autoclave u olla de presión asta la marca eintroduce unas gradillas metálicas !ue servirán de base al material aesterili'ar. Coloca el material a esterili'ar dentro de la autoclave u olla depresión) evitando !ue el material to!ue las paredes.

1.9 Cierra la autoclave u olla de presión) cuidando de dejar abierta la válvula desalida de vapor !ue ayudará a e(pulsar el aire contenido dentro y !ue éste esdespla'ado por el vapor !ue se produce. .9 si el aire no ue eliminadototalmente de la autoclave) el manómetro aumentará a 2 libras. *ero latemperatura no abrá alcan'ado los -lLC. *or esto se debe medir el tiempocuando la temperatura llegue a l-LC

5.9 Cierra la válvula cuando el vapor sea continuo. %a temperatura de l62LCindica !ue está libre de aire. igila el termómetro. Cuando vaya en -6LC)mantenla durante 2 minutos para !ue se eect$e la esterili'ación M2 libras depresión. 4ranscurrido este tiempo se corta la uente de calor.

2.9;eja enriar asta !ue el manómetro mar!ue cero. Abre la válvula de salidade vapor) para e(pulsar el vapor restante. Abre el autoclave y retira el material

8.9 ,i el material no está en estado lí!uido la válvula se puede abrir rápido a la

salida de vapor) pero si está en estado lí!uido la rápida pérdida de presión lasace ervir o bien saltar los tapones. *or lo tanto se espera unos minutos a !uese enríe perectamente

CUESTIONARIO.

.9 Cuál material se puede esterili'ar por calor seco y cuál no. *or!uéT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9 "ué tipo de material se puede esterili'ar por calor $medoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 A !ué condiciones de temperatura y presión se destruyen todas las ormasvegetativasT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 A !ué condiciones de temperatura y presión se destruyen las esporasT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

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2.9 Cuáles son las condiciones necesarias de tiempo y temperatura paraesterili'ar por calor secoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8.9 Cuáles son las condiciones necesarias de tiempo y temperatura para

esterili'ar por calor $medoT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

+.9Cómo act$a la esterili'ación por calor seco en los microorganismosT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK /.9 Cómo act$a la esterili'ación por calor $medo en los microorganismosT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK :.9 "ué tipo de esterili'ación es más recomendable y por !uéT


OBSERVACIONES

>eali'a es!uemas y dibujos correspondientes a la esterili'ación por calor$medo !ue reali'aste en la práctica

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CONCLUSIONES ________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS

Pr/$,#$a No 7=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK7rupoKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ro. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO:

Adiestrar al alumno en la preparación de dierentes medios decultivo

MATERIALSUSTANCIAS

5 &atra' Erlen &eyer de -26 ml Agar nutritivo

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#a?o maría &iuller 0inton1 4ripies Agar basesangre- &eceros Fiser Agar&acconOey

1 4elas de asbesto Agar9 &anitol9,al9 AgarAgitador5 aso de precipitado de -26 ml Espátula idrio de relojCajas de petri

4apones de algodónAutoclave u olla de presión*apel estra'a

4ubos de ensayo 8V26

INTRODUCCIÓN

Uno de los sistemas más importantes para la identifcación demicroorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticiasartifciales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el !uecrecen los microorganismos es el M)d#o d) C&l,#o y el crecimiento de losmicroorganismos es el C&l,#o.. *ara !ue las bacterias cre'canadecuadamente en un medio de cultivo artifcial debe reunir una serie decondiciones como son temperatura) grado de umedad y presión de o(ígeno

adecuado) así como un grado correcto de acide' o alcalinidad. Un medio decultivo debe contener los nutrientes y actores de crecimiento necesarios ydebe estar e(ento de todo microorganismo contaminante. %a mayoría de lasbacterias patógenas re!uieren nutrientes complejos similares en composición alos lí!uidos orgánicos del cuerpo umano. *or eso) la base de mucos mediosde cultivo es una inusión de e(tractos de carne y *eptona a la !ue se a?adiránotros ingredientes. El Agar es un elemento solidifcante muy empleado para lapreparación de medios de cultivo. En los dierentes medios de cultivo seencuentran numerosos materiales de enri!uecimiento como idratos decarbono) suero) sangre completa) bilis) etc. %os idratos de Carbono seadicionan por dos motivos undamentales para incrementar el valor nutritivodel medio y para detectar reacciones de ermentación de los microorganismos!ue ayuden a identifcarlos. El suero y la sangre completa se a?aden parapromover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. *or suaspecto ísico.

%os medios de cultivo preparados pueden ser clasifcados por sua+p)$,o en %í!uidos) ,emisólidos) ,ólidos. H por su &+o )": <.9 &edios decultivos básicos <<K &edios de cultivos especiales como mejorados) selectivos)dierenciales) de transporte.

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PROCEDIMIENTO:

9 *rimeramente se desinecta el área de trabajo con enol al 2G o alcool y seenciende el mecero

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS

.9 %eer las instrucciones del abricante para cada medio de cultivo y pesar lacantidad necesaria seg$n el volumen re!uerido.

-.9 Colocar el medio en un vaso de precipitado !ue contenga el agua destiladaen el volumen re!uerido) agitar y calentar a ebullición para disolver el Agar. Enel $ltimo paso se debe tener cuidado ya !ue el recipiente se calienta en e(cesoy el producto tiende a ervir y proyectarse) lo cual puede producir serias!uemaduras. El Agar disuelto ace transparente al medio !ue originalmenteestaba turbio. *uede utili'arse un ba?o maría para aumentar la solubilidad.

1.9 ,i se va a envasar en cajas de petri) es necesario conservar el medio en unmatra' y esterili'arlo a -LC durante 2 minutos. Al terminar) es convenientemantener el mecero encendido para ormar un área de esterilidad almomento del vaciado en las cajas de petri apro(imadamente de 2 ml. A -6ml ;e Agar por caja procurando !ue no se orman burbujas. 4apar la cajainmediatamente

5.9 ,i se desea !ue el Agar !uede en tubos) entonces se esterili'ará el Agardirectamente en ellos a -LC durante 2 minutos tapados con algodón) gasa y

papel estra'a. ,i desea !ue solidif!uen inclinados) colocarlos en una superfcielisa inclinándolos en un ángulo de -6 a 16 L sobre una varilla de vidrio.

2.9 . Para pr)parar )l A'ar ba+) Sa"'r) )+ ")$)+ar#o Ad#$#o"ar )"$o"d#$#o")+ d) a+)p+#a +a"'r) d)+Fbr#"ada )+,2r#l )" $o"$)",ra$#!"F"al d) 69@. D)+p&2+ d) la )+,)r#l#%a$#!" d)l A'ar ba+) M)%$lar$&#dado+a*)",) po")r )" $aHa+ p),r# )+,2r#l)+.

A VACIADO EN CA1AS DE PETRI

1.9 =o destapar las cajas de petri) sino asta el momento !ue vayan a serutili'adas. Es conveniente colocarse un cubre bocas la persona !ue va areali'ar el vaciado y evitar ablar en todo momento para no contaminar elmedio de cultivo.

5.9 Es conveniente mantener el mecero encendido y trabajar cerca del áreaestéril al momento del vaciado en las cajas de petri. %evantar la tapadera de la

caja petri con la mano i'!uierda ) sin soltarla y sin retirarla demasiado de la

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base de la misma caja mientras !ue con la mano dereca tomar el matra'!ue contiene el medio de cultivo y reali'ar el vaciado de apro(imadamente 2ml. A -6 ml de Agar por caja procurando !ue no se orman burbujas) seprocede a tapar la caja inmediatamente

2.9 ,i se orman burbujas) tomar el mecero) @amear el medio de cultivo sobrela superfcie de la caja de petri y de manera rápida. ,e procede a tapar la caja.

8.9 Esperar a !ue el medio solidif!ue) ,e rotulan los medios de cultivo)anotando la eca y con iniciales el tipo de medio de cultivo. ,i las placas nose van a utili'ar el mismo día se sujetan con cinta y se colocan en elrerigerador de manera invertida para evitar !ue el vapor condensado caigasobre el medio de cultivo y lo pueda contaminar

+.9 Cuando se vayan a utili'ar los medios de cultivo preparados) será necesariosecar las placas invertidas en estua a 1+ RC. Antes de reali'ar el sembrado demicroorganismos.

CUESTIONARIO

.9 "ué es un medio de cultivoT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

-.9 "ué es un cultivo de microorganismoT


1.9 "ué fnalidad tiene utili'ar medios de cultivo sólidosT


5.9 Escribe el nombre de 2 medios de cultivo !ue pueden ser empleados en ellaboratorio de microbiología.


2.9 ;e dónde es obtenido el e(tracto Agar9 Agar para la preparación demedios de cultivosT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK8.9 *or!ué es necesario esterili'ar la mesa entes de reali'ar el vaciado del medio decultivo en las cajas de petriT

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+.9*or !ué la base de mucos medios de cultivo es una inusión de e(tractos decarne y *eptonaT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK/.9Escribe la composición !uímica para cada medio de cultivo !ue utili'aste.

Agar nutritivo&iuller 0inton

Agar base sangre Agar&acconOey

Agar9 &anitol9 ,al9 Agar

OBSERVACIONES.

;ibuja todos los pasos reali'ados en la preparación de los medios de cultivo.

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CONCLUSIONES: KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDOS

Pr/$,#$a No 8

=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK7rupoKKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ro. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO:

El alumno aprenderá la técnica del vaciado en placa del medio de cultivo

preparado en la sesión anterior en cajas de petri ya esterili'adas ademáspreparará medios de cultivo lí!uido estéril.

MATERIAL SUSTANCIAS

1 4elas de asbesto1 4ripies o soportes Universales- &eceros Fiser- Agitadores &edio de cultivo para caldonutritivo

- asos de precipitado de -26 ml &edio de cultivo para caldotriptona- Espátulas Fenol al 2G- idrio de reloj

4ubos de ensaye -6 V -66 mm 4apones de algodónAutoclave u olla de presión*apel estra'aE!uipo para #a?o &aría

INTRODUCCIÓN

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CLASIICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

*ara el aislamiento) estudio y clasifcación de los microorganismos) esnecesario utili'ar un medio de cultivo en el !ue dispongan de las sustanciasorgánicas e inorgánicas necesarias indispensables para el normal desarrollo de

su metabolismo. En estos medios) los microorganismos además de podermultiplicarse) pueden maniestar características de crecimiento y propiedadesbio!uímicasW aspectos de gran importancia para su clasifcación. Estospreparados estériles !ue poseen los elementos necesarios para el desarrollo deun microorganismo) se denominan medios de cultivos y pueden dividirse porsu

A A,*EC4D

&edios lí!uidos. ,e emplean undamentalmente para9 Cultivar losmicroorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien laproducción de metabolitos específcos %a multiplicación bacteriana en losmedios de cultivos lí!uidos se manifesta generalmente por el enturbiamientode ésteW.9 Estimular y promover la selección de alg$n o algunosmicroorganismos e impedir !ue otros se multipli!uen.9 <dentifcar almicroorganismo estudiado mediante pruebas bio!uímicas.&edios semisólidos.9 ,e utili'an para identifcaciones bio!uímicas y averiguar siel germen estudiado es móvil. %os medios semisólidos tienen una consistenciablanda. &edios sólidos.9 ,e utili'an para obtener colonias aisladas demicroorganismos. %os medios sólidos constituyen la mayor parte de los mediosde cultivo !ue se emplean en &icrobiología. ) En los medios de cultivos sólidos

la multiplicación bacteriana se manifesta por una ormación macroscópicadenominada colonia bacteriana) !ue es el resultado de la multiplicación de unasola célula bacteriana.

# U,D

<.> M)d#o+ d) $&l,#o+ b/+#$o+. ,e caracteri'an por ser pobres en materialnutritivo) de manera !ue su uso es muy restringido) constituyen la base para lapreparación de otros medios. Como ejemplo pueden citarse el caldo peptonadoy el Agar9Agar corriente.II: M)d#o+ d) $&l,#o+ )+p)$#al)+. Entre estos se encuentran

a &edios mejorados. En general son los mismos medios básicos a los !uese les agrega una sustancia enri!uecedora como sangre) suero) etc. El uso deestos medios es universal y está orientado especialmente a obtener buendesarrollo de cual!uier tipo de bacteria) se utili'an en primera instancia en elaislamiento bacteriano) ya sea a partir de otros cultivos o de productospatológicos.%os medios de este tipo de uso más recuente son Agar tripticasa9sangre) caldo tripticasa) Agar cocolate) medio de &ueller90inton.

b &edios selectivos. ,on medios !ue contienen sustancias !ue impiden olimitan el crecimiento de algunas especies microbianas y permiten el desarrollo

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de otras. consiste en aislar un microorganismo de un sustrato !ue contienenumerosas otras especies.,e incluyen en este grupo el agar cristal violeta parael aislamiento de bacterias 7ramM9 y el agar telurito de potasio para elaislamiento de bacterias 7ramMX.

c &edios de cultivos dierenciales. ,e emplean para demostrar algunapropiedad bio!uímica de la bacteria como degradación de idratos decarbono) proteínas) idrólisis de la urea) etc.) contienen indicadores de ácidobase) redo( o sustancias !ue detectan cambios en el medio o en lascaracterísticas típicas de las colonias el estudio en estos medios debereali'arse empleando cepas bacterianas puras. E(isten numerosos medios deeste tipo) de uso preerencial en la bioidentifcación de bacilos 7ramM9 ya !ueellos no tienen características muy distintivas en las colonias o cultivos engeneral. Entre los de uso más corriente se encuentran Agar ferro9triple9a'$carM4,< agar &edio de ,<&) Caldo glucosado osatado) oges9*rosOauer o del rojo

de metilo) &edio agar9citrato de sodio M&edio de ,immons9 &edio caldo urea)

d &edios de transporte. ,irven para transportar los especimenes !uecontienen a los microorganismos) del sitio de la toma del producto asta ellaboratorio donde va a eectuarse el estudio. Estos medios impiden !ue sealtere la proporción original de la @ora microbiana en los especimenes.

PROCEDIMIENTO:

B PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDOS

J Pr)parar $aldo "&,r#,#o $aldo ,r#p,o"a

.9 %eer las instrucciones del abricante y pesar la cantidad necesaria seg$n elvolumen de medio de cultivo re!uerido.

-.9 ;isolver el medio en agua destilada agitando el recipiente

1.9 Envasar el volumen necesario en matraces) tubos u otros recipientes.*rocurar !ue el volumen del medio no rebase la mitad de la capacidad del

recipiente) pues de otra manera el medio se puede regar

5.9 4apar el recipiente con algodón) gasa y papel estra'a.

2.9 Esterili'ar en autoclave a -LC durante 2 minutos) a menos !ue seindi!ue otra cosa.

8.9 antes de usar el medio de cultivo) se debe someter a una prueba deesterilidad) para lo cual se debe meter a una estua a 1+LC durante -5 oras. Elmedio debe permanecer libre de crecimiento.

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CUESTIONARIO

.> "ué es un medio de cultivoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK ________________________________________________________________________________ -.9 "ué tipo de nutrientes re!uieren los microorganismos para poder crecer enun medio de cultivoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 Cómo nos podemos dar cuenta !ue e(istió crecimiento demicroorganismos en un medio lí!uidoT 5.9Cómo se manifesta el crecimientode los microorganismos en un medio de cultivo sólidoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 2.9Cuál es el elemento principal del medio de cultivo !ue avorece susolidifcaciónT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8.9 ;e acuerdo a su uso "ué tipo de medios de cultivos podemos encontraren el mercadoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK +.9 Escribe dos ejemplos de medios +)l)$,#o+ encontrados en el laboratorioen donde puedan desarrollarse los microorganismos

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK /). "ué fnalidad tiene guardar invertidos los medios de cultivo ya preparadosen las cajas de petri en el rerigerador o en la estua de incubaciónT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK :.9 Escribe dos medios de cultivos !ue nos permiten determinar alguna pruebabio!uímicaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK K

OBSERVACIONES

;ibuja todos los pasos del proceso de vaciado del Agar en cajas de petriesterili'adas

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CONCLUSIONES: KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK K

SEMBRADO EN PLACA DE MICROORGANISMOS DEL MEDIOAMBIENTE

Pr/$,#$a No 9=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK =ombre del

titularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK CaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVOS

- Dbservar la gran variedad de microorganismos presentes en el medioambiente) determinando las dierentes morologías de colonias !ue seobtienen.

- %os eectos de un desinectante por medio del crecimiento de colonias debacterias en un medio de cultivo en cajas de *etri.

MATERIAL• 1 cajas de *etri estériles preparadas con Agar nutritivo• Caja de isopos estériles +#" abr#r toallas de papel• 1 cajas de petri estériles preparadas con Agar sangre.• Cinta pegante• &arcador permanente o lápi' de cera• Un desinectante con +6G de solución de alcool) 6G de una solución

blan!ueadora ) jabón lí!uido E(tran o alOo(.

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INTRODUCCIÓN

%a población microbiana e(istente en nuestro entorno es grande y compleja.Cientos de especies microbianas abitan normalmente en distintas partes denuestro cuerpo) incluidas la boca) el tracto intestinal y la piel. Al nacer) los

microbios inmediatamente empie'an a coloni'ar nuestros cuerpos) así como acasi todos los objetos del mundo. Ellos @otan alrededor asta !ue entran encontacto con una superfcie !ue ore'ca comida y resguardo. ,e encuentranmás recuentemente en la oscuridad) en objetos $medos !ue a menudoentran en contacto con la comida) la suciedad o la vegetación. %as superfciesdel ba?o) los cepillos para el cabello) los rerigeradores) los lavaplatos y lastablas de cocina tienen a menudo mucos microbios. %as manijas y las paredestienen menos por!ue son pobres en nutrientes y secos.

Un estudio adecuado de microorganismos !ue ay en estos ábitat re!uiere

técnicas !ue permitan conocer y ordenar la compleja población mi(ta o cultivomi(to) separándole en sus distintas especies como cultivos puros. Un cultivopuro consta de una población de células derivadas todas ellas de una célulaparental. %os microorganismos se cultivan en el laboratorio sobre materialesnutritivos denominados medios. ,e dispone de una gran cantidad de medios yla clase !ue se debe de utili'ar depende de mucos actores) uno de los cualeses la clase de microorganismos !ue se va a cultivar. El material !ue se inoculasobre el medio se denomina inóculo mediante alguna técnica Msiembra porestría en placa o siembra en masa en placa. ;urante la incubación a 1+C ) lascélulas microbianas individuales se reproducen tan rápidamente !ue en unlapso de / a -5 oras producen masas visibles de células denominadas

colonias. Una colonia es visible a simple vista. Cada colonia dierente espresumiblemente un cultivo puro de una sola clase de microorganismo. ,i doscélulas microbianas procedentes del inóculo original !uedan muy cerca una deotra sobre el medio de Agar) la masa de células observables no será un cultivopuro. %a mayoría de los microbios en nuestro cuerpo y otras superfcies soninoensivas) pero algunos son patógenos o causan enermedad. *or esta ra'ón)!ueremos controlar el n$mero de microbios !ue nos rodea. %a posibilidad deinectarnos aumenta con el n$mero de microbios en los objetos circundantes.*ero !ué podemos acer para reducir el n$mero de microbios en lassuperfcies !ue nos rodeanT

PROCEDIMIENTO

En esta actividad escogerás un omite Mcual!uier objeto inanimado !ue puedacausar enermedad en los organismos por contener microorganismos como lamanija) el marco) el control remoto de la televisión) una moneda. Este omiteayudará a confrmar la presencia de microbios y los eectos de undesinectante por medio del crecimiento de colonias de bacterias en un mediode cultivo en cajas de *etri.

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. ,i tienes el cabello largo) recógetelo para mantenerlo lejos de las cajas de*etri cuando estés trabajando. %ava tus manos. %impia t$ área de trabajorotando suavemente) con la solución desinectante en una toalla de papel.,aca tus cajas de *etri pero no abras las cajas asta !ue se te indi!ue.

-. Escoge un objeto del salón de laboratorio Mlamanija) el marco) el control remoto de la televisión)una moneda) etc.. 4oma una caja de *etri +#"abr#r y con t$ lápi' de cera o marcador) divide labase de la caja en cuatro secciones iguales.Escribe el nombre del objeto al otro lado y designa las secciones de asta 5.Abre la caja de isopos de algodón y escoge uno con cuidado para no tocar lapunta. %impia t$ objeto escogido con todos los lados de la punta del isopovolteándolo y retorciendo el isopo a medida !ue lo mueves por la superfciedel objeto.

1. Aora abre la tapa de la caja y +&a)*)",)a' cuatro siembras sobre la superfcie de la cajacomo se muestra en la ilustración) empe'ando enla sección designada YY y continuando en el ordende las secciones) de manera !ue la $ltima siembraesté en la sección 5. *resiona frme pero suavemente y no reti?as las siembrasanteriores. 4us siembras sólo deben dejar una impresión muy ligera en el Agar.Cierra la caja y séllala con dos peda'os de cinta. =o cubras la caja con cinta ono podrás verla bien.

5. ;ivide una segunda caja de *etri en 5 secciones numeradas de asta 5 ydesígnala KCo",rol. %impia la *#,ad del objeto !ue escogiste anteriormentecon una toalla de papel umedecida con a'&a9solo rótala un par de veces "ola r)+,r#)'&)+. Con un nuevo isopo estéril) toma muestra del área limpiada.Abre la tapa de la segunda caja y a' ,UAE&E=4E 5 siembras en la superfciede la caja) siguiendo el orden de las secciones numeradas como lo icistepreviamente. Cierra la caja y séllala.

2. ;ivide la tercera caja de *etri en 5 secciones numeradas y desígnalas con elnombre del d)+#")$,a",) !ue escogiste Mpor ejemplo Yblan!ueadorY. Usa eldesinectante escogido para limpiar la o,ra *#,ad del objeto !ue trabajaste

antes. Con un nuevo isopo estéril) toma muestra del área. >epite el procesode sembrar la caja. Ciérrala y séllala.

8. Esterili'a los isopos usados con desinectante y descártalos. *on las cajasen un lugar apartado y déjalas incubar a la temperatura de 1+LC durante -5 a5/ oras. %impia tu área de trabajo con la solución desinectante y lava tusmanos.

+.9 >epite todo el e(perimento utili'ando Cajas de cultivo con Agar sangre sólo!ue aora selecciona otro o*#,) !ue no ayas empleado

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+. ;espués de !ue ayan pasado dos días) mira las cajas de *etri iniciales. =ola abras. A la ve' e(amina las otras cajas de *etri sin abrirlas. Crea una tabla!ue compare las cajas sembradas antes y después de limpiar el objeto Mmira latabla de ejemplo. Aseg$rate de indicar si los microbios crecieron en cadasiembra.

/. No,a: &" ad&l,o +&p)r#+or d)b) a$)r )+,) pa+o pr))r#bl)*)",).Cuidadosamente abre las cajas de *etri en un lavaplatos e in$ndalas conblan!ueador o alcool sin diluir. ;éjalas por una ora y enjuágalascompletamenteW colócalas en una bolsa plástica) amárrala y descártala.Aseg$rate de no tocar la superfcie de las cajas cuando las abras y lava tusmanos cuidadosamente después de manipularlas. %impia t$ área de trabajocon la solución desinectante.

CUESTIONARIO

.9 "ué es un cultivo puro de microorganismosT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9 "ué es in inóculoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 Físicamente en un medio de cultivo de microorganismos cuando se dice!ue no orma un cultivopuroT


KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 "ué tipo de técnica empleaste para la siembra de microorganismosT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 2.9 En cuál caja crecieron más y más grandes las coloniasT *or !ué piensasesoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8.9Cómo es el patrón !ue observas en el tama?o y cantidad de colonias encada cajaT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK +.9 Cómo podemos controlar la contaminación microbianaT


/.9 Completa en la siguiente tabla anotando ? en los espacioscorrespondientes a las divisiones reali'adas en donde ayan crecido losmicroorganismos

A &E;<D, ;E CU%4<D CD= A7A> =U4><4<D

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Caja Caja - Caja 1

,iembra - 1 5 - 1 5 - 1 5

Crecimiento

#&E;<D, ;E CU%4<D CD= A7A> ,A=7>E

Caja Caja - Caja 1

,iembra - 1 5 - 1 5 - 1 5

Crecimient

o

OBSERVACIONES ;ibuja todos los pasos empleados en el sembrado delas cajas de petri con Agar nutritivo. H los resultados de las coloniasbacterianas !ue crecieron.

CONCLUSIONES KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KK

AISLAMIENTO DE ONGOS MEDIANTE EL METODOE?TENSIÓN EN PLACA

Pr/$,#$a No =ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK CaliKKKKKKKKKKK

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OB1ETIVO

El alumno aislará actinomiceto del suelo mediante el método e(tensión enplaca utili'ando una varilla angular de vidrio

MATERIAL MATERIAL BIOLÓGICO

varilla de vidrio doblada &uestra de suelo- pipetas de ml - caja con medio de cultivo estéril C'apecO2 tubos de ensayo - caja con medio estéril de 7elosa glicerol e(tracto delevadura M77%Asa bacteriológico - caja con medio estéril 7elosa peptona ;e(trosa e(tractode levadura M7*;% Alcool al +6G

INTRODUCCION Uno de los problemas más recuentes en &icrobiología es el aislamientode un cultivo puro de una especie bacteriana dada. A pesar de !ue es muydiícil aislar una sola célula) e(isten técnicas capaces de apro(imar este ideal En &icrobiología) todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo demodo !ue se impida cual!uier tipo de contaminación en el área de trabajo. %osprocedimientos utili'ados par conseguirlo se conocen con el nombre de técnicaaséptica) y se citan a continuación9%as asas deben esterili'arse antes de utili'arlas y enriarse sobre el agar o elmaterial de vidrio Men 'onas estériles antes de tomar la muestra de

microorganismos) con objeto de no destruirlos por calor.9;espués de utili'arlas) las asas se vuelven a esterili'ar.9%as bocas de los tubos y matraces de vidrio se @amean ligeramente una ve'destapadas) y después de la inoculación.9;urante la inoculación) los tapones se mantienen en la mano sujetándolos porla parte !ue no entra en contacto con tubos y matraces.9%os tubos abiertos deben mantenerse en posición inclinada para !ue el riesgode contaminación sea mínimo.9%as tapas de las placas *etri no deben colocarse nunca sobre la mesa detrabajo.

T2$"#$a+ d) +#)*bra%a siembra de microorganismos puede reali'arse en medios lí!uidos o enmedios sólidos.En el primer caso) para la inoculación se utili'ará asa estéril si el medio departida es sólido) o pipeta estéril M*asteur o graduada si es lí!uido.En el segundo caso) cuando se parte de otro medio sólido) se utili'a el asa deplatino normal para siembra en placa o tubo inclinado y el asa recta parasiembra en picadura en tubos rectos o) en general) cuando se !uiere introducirel microorganismo en el seno del medio de cultivo sólidoW cuando el medio departida es lí!uido) se puede pasar al medio sólido con un asa de platinocalibrada) con la !ue se e(tiende la muestra directamente) o con pipeta

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M*asteur o graduada) depositando la muestra !ue luego se e(tenderá sobre laplaca con un asa de ;igralsOy. D con una varilla doblada.

En general) en &icrobiología se trabaja con cultivos puros de microorganismos.Un cultivo puro es a!uél en !ue todas las células provienen de una sola célula

inicial. Una colonia de cual!uier microorganismo es un cultivo puro) ya !uetodas sus células proceden de una inicialW por lo tanto) cuando se desea aislarun microorganismo de una muestra cual!uiera) es preciso ver colonias delmismo) lo !ue implica !ue el aislamiento a de reali'arse en medio sólido enplaca.%os pasos de un proceso de aislamiento de una especie microbiana se puedenresumir en los siguientes9,iembra en placa de la muestra de partida.94omar una colonia de la placa una ve' incubada) resuspenderla en agua estérily sembrar una segunda placa) en la !ue todas las colonias !ue cre'can debenser idénticas.9A partir de la segunda placa se puede resuspender una de las colonias enmedio lí!uido) consiguiéndose ya un cultivo puro.9*ara la conservación de los cultivos puros de un microorganismo e(istendiversos métodos) el más simple es la resiembra en tubos inclinados !ue semantienen) normalmente rerigerados) durante 198 meses.

PROCEDIMIENTO

.9 0acer diluciones decimales a partir de la muestra de suelo asta 692

-.9 ,ólo vas a necesitar las $ltimas dos diluciones es decir 695 ) 6 Z2 las demás

se desecarán.1.9 >otula dos cajas de petri con el nombre del medio de cultivo C'apecO enuna anota la dilución 695) y en la otra anota la dilución 692

5.9 >otula dos cajas de petri con el nombre del medio de cultivo M77% enuna anota la dilución 695) y en la otra anota la dilución 692

2.9 >otula dos cajas de petri con el nombre del medio de cultivo M7*;% enuna anota la dilución 695) y en la otra anota la dilución 692

8.9 Esterili'a el asa bacteriológica en el mecero) espera !ue se enríe cerca delárea estéril eintrod$cela en la dilución 695

+.9 Coloca una gota de esta dilución 695 en el centro de la superfcie del Agaren el primer medio de cultivo C'apecO.) tapa la caja de petri/.9 uelve a introducir en la misma dilución 6 95 y coloca una gota en elsiguiente medio M77%) repite lo mismo y coloca una gota en el tercer medio decultivo M7*;% . =o olvides tapar las cajas para evitar !ue se contamine.:.9Esterili'a el asa bacteriológica y aora introd$cela en la dilución 6 92 repitelos pasos anteriores) pero aora para todas las cajas !ue están rotuladas conla dilución 692 =o olvides tapar los medios de cultivo.6.9 ierte una o dos gotas de alcool al +6G sobre el bra'o más corto de lavarilla de vidrio y con el mecero enciende el alcool !ue se encuentra en la

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33



varilla . *ermite !ue arda asta !ue se !ueme todo el alcool. ;eja !ue lavarilla de vidrio se enríe por un minuto.9 Utili'a el bra'o corto de la varilla para dispersar uniormemente la gotade cada dilución sobre toda la superfcie de cada placa de Agar inicia con lasdiluciones 692

-.9 <nvierte la caja de petri) inc$bala a temperatura de 1+SC por -5 oras.

CUESTIONARIO

.9 A !ué grupo de microorganismos pertenecen los actinomicetosT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

-.9 *ara !ué son utili'ados en el área médica los actinomicetosT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

1.9"ué tipo de técnica utili'aste para sembrar a estos microorganismosT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 &enciona otra técnica para aislar cultivos puros de microorganismosT


2.9 Cuál ue la fnalidad de !uemar el alcool sobre la varilla de vidrioT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8.9 *or !ué iniciaste a distribuir con la varilla en orma uniorme lasdiluciones l692 !ue contenían a los microorganismos y no con las diluciones del65T

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK +.9"ué apariencia presentaron las colonias después del tiempo de incubaciónT


/.9 Es!uemati'a el proceso de dilución para la muestra de tierra !uereali'aste

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OBSERVACIONES

;ibuja todo el proceso llevado a cabo para el aislamiento del cultivo puro de

microorganismo por e(tensión en placa) así como los resultados obtenidos alcabo de -5 oras.

CONCLUSIONES KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

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AISLAMIENTO DE BACTERIAS MEDIANTE EL METODOSIEMBRA EN PLACA POR ESTRÍAS

Pr/$,#$a No ;=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK CaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO

;emostración de los medios de deensa del uésped en la piel y garganta

mediante el método de siembra en placa por estría.

MATERIAL MATERIALBIOLÓGICO

Cajas de petri con Agar9 ,angre M7, E(udadoaringeoCajas de petri con &anitol sal Agar M&,A ,oluciónsalina estérilCajas de petri con Agar vogel y Ponson MAP >aspado de

pielCajas de petri con Agar Estaflococo ,6&ecero FiserAsa de platino0isopos estériles

INTRODUCCIÓN

%a piel Men condiciones normales es una barrera !ue impide lapenetración de los gérmenes) por ello act$a como mecanismo de deensa. %os

mamíeros son recuentemente inectados por algunas de las bacteriaspree(istentes en su medio ambiente) aun!ue en general viven en e!uilibriocon estos microorganismos) manteniéndoles limitados a 'onas relativamentesuperfciales de su organismo. ,in embargo las bacterias inecciosas producenenermedades al invadir tejidos más proundos. *or lo tanto para mantener lasalud) el uésped debe deenderse constantemente rente a la invasión porparte de las bacterias. %os actores mecánicos) !uímicos y microbianos desempe?an un papelimportante al restringir la coloni'ación de las bacterias a las superfciescorporales.

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a$,or)+ *)$/"#$o+ %as superfcies epiteliales de la piel y de las mucosasconstituyen barreras !ue resultan más o menos impermeables a las bacterias.%a impermeabilidad de la piel es mayor !ue en la mayoría de las mucosas.Cuando se altera la integridad de la superfcie epitelial) pueden desarrollarseinecciones subcutáneas. %as bacterias !ue causan más recuentemente estas

inecciones son las !ue e(isten abitualmente en la superfcie cutánea)olículos pilosos y glándulas sudoríparas en la piel) es decir los estaflococos.a$,or)+ &(*#$o+: La acide' de las secreciones gástricas mantienen sinduda la esterilidad abitual del estómago. El * bajo de la piel M192) debido engran parte a los productos ácidos del metabolismo bacteriano) rena sin dudael crecimiento de mucos microorganismos !ue toman contacto con sussuperfciea$,or)+ *#$rob#a"o+: El antagonismo microbiano inibe el crecimiento demucas bacterias y ongos potencial mente patógenos en lugares superfcialesdonde de no ser así) podrían producirse enermedades. %a @ora de la región aríngea presenta problemas peculiares para elaislamiento e identifcación de microorganismos) por lo tanto se refere a loscomponentes de la @ora normal como a microorganismos con acción patógena.Es importante recordar !ue algunos microorganismos tienen capacidadpatógena defnida y su presencia es un indicio claro de enermedades) en tanto!ue otros) llamados oportunistas) guardan una posición ambigua y puedenencontrarse tanto como componentes de la @ora normal) como asociados aprocesos patológicos) causados por otros microorganismos !ue son verdaderosresponsables Mpor ejemplo los virus %os estaflococos están entre las primerasbacterias !ue se reconocieron como patógenas) y se descubrieron por primerave' a principios de la década de//6.

,e encuentran ampliamente distribuidos por la naturale'a) y a menudoorman parte de la @ora bacteriana de la piel y el tracto respiratorio superiorWmucas de las especies !ue se encuentran en el ombre son comensales. %aespecie predominante patógena para el ombre es el staphylococcus aureus)constituye la causa más com$n de las inecciones supurativas para el ombre.El aislamiento de ,. aureus a partir del e(udado aríngeo y e(udado de piel) notiene importancia diagnóstica) ya !ue se considera parte de la @ora normal dela aringe y nasoaringe) por lo !ue no tiene signifcado clínico.

PROCEDIMIENTO:

.9 %impiar y esterili'ar el área a trabajar con enol al 2G-.9 *render el mecero fscer cerca de donde se va a trabajar) si es posiblecolocar otro1.9 0umedecer el isopo en solución salina estéril) pasarlo sobre la superfciede la piel Mcon o sin pelo5.9 ;escargar el isopo en dos cajas de petri con el medio ya preparado. MEsrecomendable !ue para cada dos cajas se utilice un solo isopo con muestra.=o retires completamente las tapas de los medios de cultivo para evitar !ue secontaminen2.9 !uemar el isopo y tirarlo.

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8.9 Esterili'a el Asa de platino asta el rojo vivo) enríalo introduciéndolo en une(tremo del Agar+.9 >eali'a el sembrado de los microorganismos por el método de estríautili'ando el asa y como se muestra en la fgura. Evita destaparcompletamente la tapa de los medios de cultivo.

/9 >epetir el mismo proceso con otro isopo estéril y con solución salina paraotras dos cajas . siembra por estría utili'ando el Asa de platino y así asta !uese terminen se sembrar todos los medios preparados.:.9 <ncubar a 1+SC por -595/ oras y observar resultados.6.9 >epite el mismo procedimiento pero aora toma muestra de la aringe conisopos estériles en las 'onas aectadas como amígdalas) pared posterior dela aringe) en general cual!uier área !ue manifesta signos de in@amación)e(udados y $lceras) procurando no tocar con el isopo la lengua.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

A REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS MEDIOS

GELOSA SANGRE*ara el aislamiento) cultivo y detección de actividad emolítica de,tapylococcus) ,treptococcus y otros microorganismos astidiosos. ,eobservan colonias blancas casi grises) 7randes) conve(as de consistenciabutirácea) *resentan bordes regulares. ,e observa !ue *resenta emólisis. %ascolonias en medio sólido son redondeadas) uniormes) Estos crecenrápidamente a 1+ C pero tienden a ormar pigmentos mejor a temperatura

ambiente M-6 C.

MANITOL SAL AGAR MSA

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,e utili'a como medio selectivo) para cultivar y enumerar especies clínicas deestaflococos El manitol cuando es utili'ado por los microorganismos) vira de sucolor original rojo a amarillo. ,e observan colonias cicas) blancas) conve(as)de consistencia butirácea ) presentan bordes irregulares. S. aureus &anitol salColonia amarilla S. epidermidis &anitol sal Colonia incolora

AGAR VOGEL = 1ONSON AV1*ara la detección de ,tapylococcus aureus coagulasa9positivo) se observancolonias negras *e!ue?as. bordes irregulares con alo amarillo. *ara ,.epidermidis y otros *e!ue?as) negro9grisáceos) sin alo) El medio presenta unvire de rojo pálido a amarillo.

ESTAILOCOCO S664,6 Colonias blancas un poco amarillentas) ,e observan colonias cicas)conve(as) ;e consistencia butirácea y bordes >egulares.

B DESCRIPCIÓN DEL TIPO DE COLONIAS OBTENIDAS

Dbservar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta lassiguientes características.ORMA puntiorme) circular) ri'oide) irregular) flamentosa..TAMAO grande Mmás de 1 &m.) mediana M-91 &m.) pe!ue?a M9-&m..COLOR. >eportar el color fnal después de la incubación.BORDE entero) ondulado) lobulado) flamentoso) ondeado.ELEVACIÓN plano) elevado) conve(o) pulvinado) umbonado.SUPERICIE: suave) brillante) rugosa) plegada) seca) polvorienta

CUESTIONARIO:

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.9 Cuándo los microorganismos pueden causar da?o en nuestroorganismoT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

-.9 "ué tipo de bacterias son encontradas con mayor recuencia en nuestrapiel y !ue pretenden aislarse en esta prácticaT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 "ué fnalidad tiene umedecer el isopo con solución salina estérilT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 *or !ué no es recomendable utili'ar el mismo isopo para descargar enlas cinco cajas de petri con los medios ya preparadosT


2.9 *or !ué se recomienda enriar el asa de platino en el medio de cultivoya preparado antes de reali'a el sembrado por estrías de losmicroorganismosT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8 En !ué cosiste el aislamiento por estríasT


+.9 ;espués de aber incubado a -2LC por 5/ oras describe las colonias

obtenidas en cada medio de cultivo utili'ado

GELOSA SANGRE MANITOL SAL AGARMSA.ORMA ORMA : .TAMAO TAMAO:.COLOR. COLOR:.BORDE BORDE:.ELEVACIÓN ELEVACIÓN:

AGAR VOGEL = 1ONSON AV1 ESTAILOCOCO S664.ORMA ORMA : .TAMAO TAMAO:.COLOR. COLOR:.BORDE BORDE:.ELEVACIÓN ELEVACIÓN:

OBSERVACIONES:.

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;ibuja y colorea todos los resultados obtenidos después de las 5/ oras deaber sido incubados.

CONCLUSIONES: KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK


MANE1O = USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

Pr/$,#$a No <=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK7rupoKKKKKKK =ombre del

titularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKK

OB1ETIVO

El alumno reconocerá el microscopio compuesto) identifcará cada una de suspartes y lo manejará correctamente observando la *resencia demicroorganismos en muestras biológicas

MATERIAL. MATERIAL BILÓGICOSUSTANCIAS&icroscopio compuesto ,arro dental ,ol. ,alina. =aClal 6./2G*orta y cubre objetos &uestra de orina ,ol. de yodo9lugol*alillo &uestra de E(cremento0isopo

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INTRODUCCION. El microscopio es el instrumento más recuentemente utili'ado y el más$til en un laboratorio de microbiología) proporciona la amplifcación oagrandamiento !ue nos permite ver organismos y estructuras invisibles asimple vista. %os microscopios permiten una amplia gama de amplifcaciones)

desde cien veces a cientos miles de veces. %as dos categorías de microscopios disponibles son los microscopiosópticos y los microscopios electrónicos. %os microscopios ópticos utili'an unsistema de lentes ópticas y comprenden los microscopios de campo claro)campo oscuro) @uorescencia y contraste de ases. %os microscopioselectrónicos emplean aces de electrones en lugar de ondas de lu' paraproducir una imagen ampliada.

MANE1O = USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar laplatina completamente. ,i el microscopio se recogió correctamente en eluso anterior) ya debería estar en esas condiciones.

-. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pin'asmetálicas.

1. Comen'ar la observación con el objetivo de 5( Mya está en posición ocolocar el de 6 aumentos M6( si la preparación es de bacterias.

5. *ara reali'ar el eno!ue

a. Acercar al má(imo la lente del objetivo a la preparación)empleando el tornillo macrométrico. Esto debe acerse mirandodirectamente y no a través del ocular) ya !ue se corre el riesgo deincrustar el objetivo en la preparación pudiéndose da?ar alguno deellos o ambos.

b. &irando) aora sí) a través de los oculares) ir separandolentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y)cuando se observe algo nítida la muestra) girar el micrométricoasta obtener un eno!ue fno.

2.9 *asar al siguiente objetivo. %a imagen debería estar ya casi enocada y

suele ser sufciente con mover un poco el micrométrico para lograr el eno!uefno. ,i al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen) es preeriblevolver a enocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 1.El objetivo de 56( enoca a muy poca distancia de la preparación y por ello esácil !ue ocurran dos tipos de percances incrustarlo en la preparación si sedescuidan las precauciones anteriores y mancarlo con aceite de inmersión sise observa una preparación !ue ya se enocó con el objetivo de inmersión.

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PROCEDIMIENTO

4EC=<CA, ;E &D=4APE 0[&E;D%a gota pendiente o las preparaciones $medas permiten e(aminar

organismos vivos suspendidos en un @uido. %as preparaciones $medas seacen colocando una gota del @uido !ue contiene el organismo sobre unalámina de vidrio y cubriéndola con una fna pie'a de vidrio Mcubreobjetos parareducir la tasa de evaporación y eliminar corrientes de aire) generalmente serodea la gota con vaselina.

Cuando se e(aminan las preparaciones $medas por microscopía decampo claro) es importante ajustar la uente de lu' de orma adecuada. Esposible disminuir la intensidad de la lu' mediante la utili'ación de fltrosespeciales.

&D=4APE E= ,D%UC<D= ,A%<=A F<,<D%B7<CA M=aCl 6./2G D A7UA

Utili'ada para estudiar la movilidad de las bacteriasA .9 En el centro de un portaobjetos coloca una gota de solución salina-.9 Con un isopo toma muestra de +arro d)",al de un compa?ero !ue no se

aya lavado los dientes y colócala en la solución salina me'clandocuidadosamente 1.9 . E(aminar con objetivos de 56V y 86 V.

B.9 Centríuga apro(imadamente 6 ml de or#"a a -)266 rpm durante 2minutos.

-.9 ;eseca el lí!uido sobrenadante y procede a me'clar el sedimento urinario1.9 Coloca una gota del sedimento me'clado en el centro de un portaobjetoslimpio y seco5.9 ,obre el sedimento pon un cubreobjetos y observa con el objetivo de 56Vy 86V

C.9 En un tubo de 1 V 66mm coloca las tres cuartas partes de solución salinafsiológica-.9 Con un aplicador de madera toma muestra de e(cremento de varias partesde la muestra y deposítalo dentro del tubo con la solución salina) agitauniormemente.1.9 En un portaobjetos limpio y seco) coloca una gota de muestra preparada enlos pasos anteriores5.9Coloca un cubreobjeto sobre la preparación y observa en el microscopio conobjetivo 56V y 86V

&D=4APE E= ,D%UC<B= HD;D %U7D%Utili'ada para identifcar en eces ecales *roto'oos intestinales con susorganelos citoplasmáticos.9 En un portaobjetos limpio y seco) coloca una gota de solución de yodo lugol

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-.9 Con un palillo de madera toma una pe!ue?a cantidad de *&)+,ra )$al ydeposítala en el portaobjetos mediante movimientos de rotación y e(tendiendola muestra por toda la gota

• E" )l pa+o No 3 P&)d)+ &,#l#%ar la *&)+,ra +al#"a pr)parada )")l #"$#+o C )" l&'ar d) la *&)+,ra d) )$r)*)",o )" or*a

d#r)$,a1.9Coloca un cubreobjeto sobre la preparación y observa en el microscopio

CUESTIONARIO:.9 "ue es poder de resoluciónT

-.9 "ué fnalidad te proporciona el utili'ar microscopio compuesto KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK9KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 Cuál es la importancia !ue tiene el diaragma en el microscopioT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 "ué tipo de bacterias pudiste observar en las muestras !ue se estudiaron

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 2.9 "ué importancia tiene el estudiar y observar los microorganismos enmuestras biológicasT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8.9 Escribe el nombre de cada una de las partes del microscopio compuesto

OBSERVACIONES.;ibuja lo observado en los dierentes objetivos para cadamuestra !ue preparaste durante el e(perimento.

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http://www.ucol.mx/acerca/coordinaciones/cgd/DGEMS/micro.htm



CONCLUSIONES

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

TINCIÓN DE LA CÁPSULA BACTERIANA

Pr/$,#$a No 5=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK CaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO

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El alumno aprenderá diversas técnicas para la tinción de la cápsulabacteriana en distintos cultivos bacteriológicos.

MATERIAL

Cultivo de -5 oras de \lebsiella >inoscleromatis en &acconOey o citrato desimmons Mpuede aislarse del e(cremento seco de palomasCultivo de -5 oras de ,tapylococcus aureus en manitol sal Agar MmsaCepa de -5 oras en Agar ,aboraud Cryptococcus neoformans.

4inta cina M recientemente fltradaFrasco con mordente de \naysiFrasco con rojo congoFrasco con mordente de cápsula

INTRODUCCION %a cápsula bacteriana es una capa de material viscoso o mucoide. Eltama?o de estas cápsulas está in@uenciado por el medio en el !ue crece labacteria. En algunos casos el grosor de la cápsula es sólo una racción deldiámetro de la célula) en otros casos la cápsula es muco mayor !ue la célula.%as cápsulas bacterianas son importantes tanto para la bacteria como paraotros organismos. A las bacterias les proporcionan una cubierta protectora yademás sirven de reservorio de alimento almacenado. 4ienen *ropiedadAntiagocitaria ;ifculta o impide la agocitosis) lo cual potencia su virulenciaya !ue avorece la multiplicación y acilita la invasión. #rinda *rotección rente

a Fagos. ;ifculta la fjación de bacterióagos e impide el pasaje su pasaje !uepuedan aectar a la bacteria %as cápsulas de ciertas bacterias productoras deenermedades aumentan la capacidad inectiva de las bacterias. ,i la bacteriapierde totalmente su cápsula) puede perder su virulencia y por lo tanto sucapacidad de producir enermedad Algunos ejemplos de bacterias productorasde cápsulas son neumococos) \lebsiella.) aun!ue también puede estarpresente en bacterias gram positivas y 7ram. negativas ,in embargo las cápsulas tiene diversas propiedades como <nduce laproducción de anticuerpos protectores Mesto es $til en la producción de algunasvacunas y *ermite la dierenciación de tipos serológicos dentro de la mismaespecie ya sea por aglutinación con sueros

PROCEDIMIENTO

TINCION DE CÁPSULAA &E4D;D ;E ;U7U<;.9 *oner con el asa una gota pe!ue?a de tinta cina en el centro de unportaobjetos limpio.-.9*oner una gota de agua del mismo tama?o junto a la gota de tinta cina1.9 4omar con el Asa bacteriológica un pe!ue?o ragmento del cultivo debacterias

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http://www.monografias.com/trabajos14/trmnpot/trmnpot.shtml

http://www.monografias.com/trabajos16/estrategia-produccion/estrategia-produccion.shtml


http://www.monografias.com/trabajos11/vacsue/vacsue.shtml#VACUNAS

http://www.monografias.com/trabajos14/trmnpot/trmnpot.shtml



http://www.monografias.com/trabajos11/vacsue/vacsue.shtml#VACUNAS



5.9 0acer una suspensión M sin e(tenderla en la gota de agua2.9 &e'clarla con la tinta cina8.9 Colocar un cubreobjetos sobre la suspensión) evitando !ue !ueden burbujas+.9 Dbservar la preparación al microscopio con el objetivo seco uerte y deinmersión.

La $/p+&la +) ob+)ra $o*o &"a %o"a br#lla",) alr)d)dor d) laba$,)r#a )" &" $a*po o+$&ro.

# &E4D;D ;E% >DPD CD=7D.9 *oner una gota pe!ue?a de rojo congo en el centro de un portaobjetoslimpio-.94omar con el asa bacteriológica un pe!ue?o ragmento de crecimiento decolonia bacteriana1.9 ,uspender la muestra en la gota de rojo congo y acer un rotis5.9 cubrir el rotis M ,<= F<PA>%D A %A F%A&A ;E% &EC0E>D con una gotas delmordente

de cápsula y dejarlo actuar durante un minuto.2.9%avar el rotis con agua destilada y dejarlo secar al aire8.9 Dbservar la preparación al microscopio con el objetivo de inmersión

La $/p+&la +) ob+)ra $o*o &"a %o"a br#lla",) alr)d)dor d) laba$,)r#a d) $olor roHo )" &" $a*po d) a%&l o+$&ro.

CUESTIONARIO

.9 "ué importancia médica tiene la cápsula bacterianaT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9"ué características presenta la cápsula en las bacteriasT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 "ué importancia tiene la presencia de la cápsula en las bacteriasT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 "ué sucede con las bacterias cuando estas llegan a perder la cápsulaT


2.9 <nvestiga de !ué está compuesta la capa de material mucosa !ue orma lacápsula


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OBSERVACIONES

;ibuja lo !ue observaste en ambos objetivos indicados en la práctica con el

microscopio compuesto

CONCLUSIONES:

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

TINCIONES SELECTIVAS

Pr/$,#$a No 64=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

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=ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVOEl alumno aplicará la técnica de tinción específca para lograr observar en elmicroscopio la pared celular y endoesporas en distintas muestrasbacteriológicas

MATERIAL

Cultivo de - a / oras de #acillus ,uptillus M lacto bacilos en Agar nutritivoy Agar sangreCultivo de #acillus cereus M tierra contaminada y tratada a /6LC por 6minutos en Agar nutritivo y Agar sangre

Cultivo de -5 oras de ,tapylococcus aureus en manitol sal Agar Mmsa,olución de ácido osomolíbdico M G,olución acuosa de verde de metilo M Gerde mala!uita M solución acuosa al 2G,aranina M solución acuosa al 2G *ortaobjetosCubreobjetos&icroscopio compuestoAsa bacteriológica&ecero #unsen

INTRODUCCIÓNPARED CELULAR ;ebajo de las sustancias e(tracelulares tales como las cápsulas o capasmucosas y e(ternas a la membrana citoplasmática está la pared celular !ue esuna estructura muy rígida y !ue da orma a la célula. El espesor de la paredcelular oscila entre 6 y 12 nm) sin embargo algunas paredes celulares sonconsiderablemente más gruesas. %as paredes celulares bacterianas son esenciales para el crecimiento y ladivisión. 4odas las bacterias poseen paredes celulares rígidas !ue protegen a lacélula de e(plotar en medios de baja presión osmótica. Composición !uímica de las paredes celulares.9 %os peptidoglicanosproporcionan a la pared celular una estructura rígida. Estos grandes polímeros)están compuestos de tres clases de blo!ues estructurales =9 Acetil97lucosamina) Icido =9 Acetil9&urámico y un péptido !ue consta de cuatro ocinco aminoácidos !ue son %9 alanina) ;9Alanina) K;9Icido 7lutámico y %isina.Además contiene proteínas con polisacáridos) lipoproteínas y lipopolisacáridos*ropiedades y Funciones ] #rinda protección y resistencia a la bacteria rentea los posibles cambios de presión osmótica del medio en el !ue se encuentra ya la acción de ciertos agentes e(ternos.-] *resenta *oros !ue act$an comofltros) permitiendo el pasaje de agua y metabolitos esenciales.1] *resenta

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http://www.monografias.com/trabajos10/restat/restat.shtml

http://www.monografias.com/trabajos11/presi/presi.shtml

http://www.monografias.com/trabajos14/problemadelagua/problemadelagua.shtml


http://www.monografias.com/trabajos11/presi/presi.shtml

http://www.monografias.com/trabajos14/problemadelagua/problemadelagua.shtml



antígenos de tipo y grupo específcos.5] *articipa en la divisiónMmultiplicación bacteriana Mse invagina junto con la membrana plasmática2]En las bacterias 7ram .negativas tiene poder patógeno debido a !ue presentaendoto(inas M%ípido A.8] Es el sustrato donde act$an los 9 %actámicos y

otros antimicrobianos.

%a tinción para la pared celular se aproveca del eco de !ue loscontenidos citoplasmáticos se pueden idroli'ar dierencialmente con ácidoosomolíbdico) dejando la pared sin aectar. ;espués de te?ir se puedeobservar la pared celular con citoplasma como auecadoESPORAS

,on elementos de reproducción yQo de resistencia a un medio adverso!ue presentan algunas bacterias ) especialmente del género bacilar. ,u orma)tama?o y ubicación varía seg$n la especie. Estos cuerpos son producidos en el$ltimo estadío del crecimiento celular) !ue bajo condiciones apropiadas)germinan y producen la clase original de célula en crecimiento o vegetativa.

%as esporas son resistentes a mucos agentes !uímicos y ísicos.0esiten dos tipos de esporas E"do+pora+ espora presente en el interior dela bacteria. ;estinada a germinar originando la orma vegetativa de la !uederiva. Es un cuerpo de pared gruesa muy reringente y sumamente resistente.,on producidas por especies #acillus) clostridium y ,porosarcina. %asendoesporas resisten las condiciones ambientales adversas de desecación)calor y mal suministro de nutrientes M agentes !uímicos como desinectantesEo+pora+ esporo !ue permanece libre en el ambiente) constituyendo laorma de resistencia bacteriana ante condiciones adversas o desavorables

Mnutrición) desecación) temperatura) presencia de agentes !uímicos) presiones)etc.

PROCEDIMIENTOA TINCIÓN DE LA PARED CELULAR.9 *repara un rotis $medo relativamente concentrado de #acillus ,uptillussobre un portaobjetos limpio . =D %D F<PE, A %A F%A&A. *repara otro con #.cereus-.9Antes de !ue la suspensión bacteriana se se!ue sobre el portaobjetos)adiciónale la solución del ácido osomolíbdico cubriéndola por completo.1.9 ;éjalo reaccionar 5 minutos.5.9 <nclina completamente el portaobjetos sobre el regadero para eliminartotalmente el ácido osomolíbdico2.9Agrega el verde de metilo directamente sobre el rotis $medo y déjaloreaccionar 2 minutos.8.9 %ava suavemente en la llave. Es inevitable !ue al lavar en la llave) algo delmaterial sedesprenda del rotis) trata de minimi'ar el desprendimiento pero al mismotiempo lava bien) asta !ue el agua ya no arrastre colorante.+.9 ,eca al aire y después e(amina con aceite de inmersión

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http://www.monografias.com/trabajos14/dinamica-grupos/dinamica-grupos.shtml

http://www.monografias.com/trabajos12/foucuno/foucuno.shtml#CONCEP


http://www.monografias.com/trabajos15/medio-ambiente-venezuela/medio-ambiente-venezuela.shtml

http://www.monografias.com/Salud/Nutricion/

http://www.monografias.com/trabajos/termodinamica/termodinamica.shtml

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http://www.monografias.com/Salud/Nutricion/

http://www.monografias.com/trabajos/termodinamica/termodinamica.shtml



/.9 ,i se ti?ó correctamente) las paredes celulares aparecerán de verde oscuroo a'ul) mientras !ue el citoplasma se verá de un verde claro o incoloro.

TINCIÓN DE LA PARED CELULAR TCNICA DE NA=SI.9 0acer un rotis de #acillus subtilis en la orma usual y fjarlo con calor.

*repara otro con #acillus cereus-.9 Cubrir el rotis con mordente de \naysi y dejarlo actuar durante 6 minutos.1.9 %avar la preparación con agua5.9 Colocar con el asa bacteriológica una gota de uscina enicada sobre lapreparación.2.9 *oner un cubreobjetos sobre la preparación y observar al microscopio con elobjetivo de inmersión.

La par)d $)l&lar +) ob+)ra d) $olor roHo #",)"+o alr)d)dor d) laba$,)r#a $&o $#,opla+*a +) ) d) &" $olor ro+a o roHo ,)"&).

A TINCIÓN DE ESPORAS TCNICA DE SEAER = ULTON9*repare un dos e(tendidos del microorganismo aislado del cultivo demicroorganismo uno de #acillus ,uptillus y otro de #acillus cereus-9Fijar por calor y cubrir todo el portaobjeto con una solución de )rd) d)Mala&#,a.19Calentar asta emisión de vapores y seguir dico calentamiento durante 1minutos Mno permitir !ue se se!ue el colorante. ,i esto ocurriera) agregarcolorante) sobre el pree(istente y no sobre la parte seca) asta cubrirlonuevamente.59%avar con agua y cubrir con solución de Sara"#"a. ;ejar actuar 16

segundos. %avar con agua) secar y observar con objetivo de inmersión.29<normar morología) color y tipo de espora.

El $olora",) V)rd) *ala&#,a: $apa% d) ,)#r la+ )+pora+ )" $al#)",)..La Sara"#"a: $olora",) d) $o",ra+,) &) ,#) la+ or*a+ )'),a,#a+.La+ )"do+pora+ ,ra+ la pr#*)ra ,#"$#!" "o p)rd)r/" )l $olora",) )" )llaado $o" a'&a +( lo ar/" la+ or*a+ )'),a,#a+ &) &)dar/",)#da+ $o" )l +)'&"do $olora",)

TINCIÓN DE ESPORAS TCNICA DE COLORACIÓN DE GRAM

.9 0acer un rotis de #.suptilis de la orma usual y otra de #. cereus-.9 4e?ir con la coloración de 7ram

1.9Dbservar al microscopio con el objetivo de inmersión

la+ )+pora+ +) p&)d)" ob+)rar +#" ,)#r o +# +) )"$&)",ra d)",ro d)l

ba$#lo la )+pora "o +) ,#) )l $#,opla+*a +) ) d) $olor *orado

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CUESTIONARIO

.9 &enciona dos unciones !ue tiene la pared celular en las bacterias KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9Cuáles son los principales compuestos orgánicos de las paredes celularesT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1. "ué característica y !ue color ti?eron las paredes celulares de lasbacterias !ue lograste observarT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 <nvestiga las dierencias de la pared celular de las bacterias 7ram positivasy 7ram negativas

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 2.9 ;escribe dos dierencias para distinguir a una endospora de unae(ospora

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8. "ué característica y !ue color ti?eron las esporas observadas en lasdistintas muestras

microbiológicasT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK +.9 &enciona algunos microorganismos capaces de producir esporas


OBSERVACIONES

;ibuja las estructuras celulares !ue lograste observar con el objetivo deinmersión

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Localización y morfología de las esporas en Bacillus




TINCIÓN DE GRAM

Pr/$,#$a No 66=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO

El alumno aplicará una técnica de coloración dierencial para laidentifcación de bacterias 7ram positivas y 7ram negativas..

MATERIAL

Asa de platino Cultivos de Escericiacoli

&icroscopio Cultivo de ,tapylococcusaureus*orta objetos Cultivo de CándidaalbicansAceite de inmersión Esputo de tuberculoso procesado enautoclave

SUSTACIAS COLORANTESColorante violeta cristal de 7ram,olución decolorante alcool acetona,aranina de 7ram

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Hodo de 7ram o lugol para gram INTRODUCCIÓN

TINCION DE GRAM. 4inción empleada en microbiología para la visuali'ación de bacterias enmuestras clínicas. 4ambién se emplea como primer paso en la dierenciaciónbacteriana. El e(amen con microscopio óptico de preparación con tinción de7ram se emplea de rutina para determinar la orma de las bacterias. %asormas comunes son cocos M eséricas) bacilos Malargadas y ormasespiraladas %as bacterias pueden dierenciarse con esta tinción en dos grupos. %osmicroorganismos Gra*. po+#,#o+ +) ,#)" d) a%&l) mientras !ueapro(imadamente un tercio de los cocos) la mitad de los bacilos y todos losorganismos espira lados +) ,#)" d) roHo +) d#$) &) +o"

'ra*")'a,#o+. %as aplicaciones más comunes de la coloración de 7ram son lassiguientes

%a presencia de $o$o+ 'ra*po+#,#o+ agrupados sugiere estaflococosWen cadenas sugiere estreptococosW en orma de lanceta a los diplococos %a presencia de d#plo$o$o+ 'ra*")'a,#o+ son características deespecies de =eisseria %os ba$#lo+ Gra*. po+#,#o+ 'ra"d)+ sugieren especies de #acillus oclostridium) lo+ ba$#lo+ Gra*. po+#,#o+ p)&)o+ sugieren especies de%isteria o una de las corineiormes M diteroides Lo+ ba$#lo+ Gra*. ")'a,#o+ son las bacterias mas comunes alladas

en los laboratorios clínicos e incluyen a Enterobacteriaceae) bacilos noermentados y especies de 0aemopilus. El valor diagnóstico de esta tinción es variableW normalmente permite unabuena orientación al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo másadecuadas y también tiene valor en orientar acia un diagnóstico etiológico) enespecial para instaurar un tratamiento inicial.

PROCEDIMIENTO

REALI-ACIÓN DEL ROTIS. Colocar una pe!ue?a gota de agua en el centro de un portaobjetos

limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua) por lo !ue se puedeusar el asa de siembra) ya !ue en el e(tremo curvo de su flamento!ueda retenida una mínima gota de agua) !ue resulta sufciente.

-. Flamear el asa de siembra) tomar) en condiciones asépticas) unape!ue?a cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transerirlo ala gota de agua. >emover la me'cla con el asa de siembra asta ormaruna suspensión omogénea !ue !uede bastante e(tendida para acilitarsu secado. ,i la muestra se toma de un cultivo en medio lí!uido) no esnecesario reali'ar los dos primeros pasos ya !ue basta con colocar y

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http://es.wikipedia.org/wiki/Microbiolog%C3%ADa

http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria

http://es.wikipedia.org/wiki/Microbiolog%C3%ADa

http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria



e(tender una gota de la suspensión bacteriana) !ue se toma con el asade siembra) directamente sobre el portaobjetos.

1. Esperar asta !ue el lí!uido se evapore o acelerar su evaporaciónacercando el porta a la llama del mecero. En este caso ay !ue tenermuca precaución de no calentar demasiado el porta pues las células

pueden deormarse o romperse.

A TINCIÓN DE GRAM

. >eali'a la preparación del rotis bacteriano como se e(plicó en el pasoanterior

-. 4e?ir con cristal violeta min.1. %avar con abundante agua el e(ceso de colorante.5. Cubrir con %ugol min.2. %avar con agua el e(ceso de %ugol.8. ;ecolorar con alcool9acetona o simplemente con alcool asta !ue la

preparación deje de perder color M16seg+. %avar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente./. 4e?ir con saranina min.:. %avar con agua para eliminar el colorante de contraste.6. ,ecar la preparación.. E(aminar al microscopio con aceite de inmersión y fjándose sobre

todo en el color de cada preparación.

CUESTIONARIO

.9 "ué es un rotisT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9 Con !ué fnalidad se fja la muestra de microorganismos en el portaobjetosT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9"ué importancia tiene te?ir las muestras bacterianasT


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5.9 *or !ué es necesario emplear aceite de inmersión para la observación delos microorganismosT


2.9;e los reactivos !ue utili'aste para la tinción de 7ram) cuál es el !ueunciona como colorante primarioT


8.9"ué unción tiene el Hodo en la tinción de 7ramT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK +.9"ué coloración ti?en las bacterias 7ram positivasT


KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK /.9 "ué coloración ti?en las bacterias 7ram. negativasT

:.9 &enciona tres bacterias !ue ti?en 7ram positivas y escribe la enermedad!ue causa cada una de ellas


6.9 &enciona tres bacterias !ue ti?en 7ram negativas y escribe la

enermedad !ue causa cada una de ellas. KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

OBSERVACIONES:

>eali'a los dibujos y es!uemas correspondientes a las tinciones reali'adas

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TINCIÓN ÁCIDO>ALCOOL RESISTENTE

Pr/$,#$a No 63=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO:

El alumno aplicará las técnicas de coloración de microorganismosácido9resistentes para dierenciarlos e identifcarlos) en base a sus propiedades

morológicas

MATERIAL:

^Un cultivo de +- oras de mycobacterium. ,i es posible se les acilitará unesputo de tuberculoso procesado en autoclave.^ Un cultivo de -5 oras de streptococcus

REACTIVOS^ Fucsina de Jiel9 =eelsen

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^ A'ul de metileno^ Alcool acidulado

INTRODUCCIÓN%os microorganismos pertenecientes al género M$oba$,)r#&* se

caracteri'an por tener una pared celular completamente dierente a lasrestantes bacterias. %a pared de las &ycobacterias posee un alto contenido delípidos !ue la ace impermeable a los agentes idroílicos) por lo tanto estosmicroorganismos no se ti?en adecuadamente con los reactivos utili'ados en lacoloración de 7ram y no pueden ser clasifcados como 7ram positivos onegativos. %as &ycobacterias son te?idas adecuadamente por el método de-#)l>N))l+)" T#"$#!" Á$#do>R/p#da o A$#d>a+, S,a#" !ue utili'a comosolución decolorante una me'cla de etanol y ácido clorídrico. ,on bacilosácido9alcool resistentes por lo !ue la tinción de Jie=eelsen es $til para lacoloración de estos microorganismos obtenidos de muestras clínicas o de

cultivo. Con esta tinción) los bacilos aparecen de color rojo brillante sobre unondo a'ul. %os bacilos tuberculosos son diíciles de te?ir con la tinción de7ram) y se observan como bacilos gram positivos con tinción irregular. Estosmicroorganismos una ve' coloreados son resistentes a la decoloración ácido9alcoólica y por eso se denominan Ba$#lo+ Á$#do Al$ool R)+#+,)",)+BAAR. El género Mycobacterium incluye más de 66 especies !ue puedenclasifcarse en seis grupos desde el punto de vista bacteriológico) pero confnes didácticos se dividen en tres apartados Co*pl)Ho ,&b)r$&lo+#+. <ncluyelas especies M. tuberculosis, Mycobacterium bovis Mincluida la cepa #C7 yMycobacterium africanum) productoras todas ellas de tuberculosis. ,e incluyetambién Mycobacterium microti, productor de tuberculosis en rata Co*pl)Ho

l)pra. En el !ue se incluyen las especies M. leprae) productor de la lepraumana) y Mycobacterium lepraemurium) !ue produce lepra en roedoresel. ElMycobacterium leprae !ue es un parásito intracelular obligado !ue semultiplica lentamente en células agocitarias mononucleares como losistiocitos de la piel y en las células de ,_an de los nervios O,ra+M#$oba$,)r#a+. &icobacterias no comprendidas en los dos grupos anteriores.,ólo algunas de ellas suelen ser patógenas) otras pueden ser patógenasoportunistas y fnalmente otras suelen ser saproftas. *roducen lasdenominadas micobacteriosis las inecciones producidas por M. avium) M.kansakii) M. fortuitum y M. chelonei son consideradas oportunistas y notuberculosas

PROCEDIMIENTO

. *repara un rotis bacteriano. 0aciendo un delgado e(tendido del materialpara su estudio y permitir !ue se se!ue al aire.

-. Fijar el rotis con calor) evitar !ue ierva1. Cubrir la preparación con carboucsina. o uscina enicada5. Calentar la preparación en un mecero #unsen durante 2 min. =o debe

ervir. ,i se evapora) se a?ade más carboucsina para !ue no se se!ueen ning$n momento.

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2. %avar con agua el resto de colorante.8. ;ecolorar con la me'cla ácido9alcool. 0asta !ue solo permane'ca un

tenue color rosa.+. %avar con agua para !ue no prosiga la decoloración./. 4e?ir con a'ul de metileno min.

:. %avar con agua el resto de colorante.6. ,ecar la preparación.. E(aminar al microscopio. Con objetivo de inmersión por 66 V

M aceite

La ,#"$#!" )+ po+#,#a para ba$#lo+ roHo+ $o",ra &" o"do a%&l $laro

CUESTIONARIO

6.> "ué Clasifcación de bacterias pueden ser encontradas en este tipo de

tinciónT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9 "ué otro nombre recibe la tinción ácido9 alcool9 resistenteT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 "ué coloración se ti?en las bacterias bacilares en la tinción ácido9 alcool9resistente !ue da como resultado la reacción positivaT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9"ué unción tiene el alcool en la técnica de tinciónT


KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 2.9"ué especies de &ycobacterium son los causantes de la tuberculosisT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

8.9 "ué especie de &ycobacterium es el responsable de la lepraT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

OBSERVACIONES:

0a' un es!uema de los pasos !ue reali'aste durante la reali'ación de lapráctica) así como el dibujo de las bacterias bacilares observadas en elmicroscopio.

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CONCLUSIONES: ________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

EECTO DE LA PRESIÓN OSMÓTICA SOBRE LA VIABILIDAD = EL CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS

Pr/$,#$a No 67=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO:

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60



• El alumno manejará las técnicas para observar el eecto de la presiónosmótica !ue ejerce el Cloruro de sodio y la ,acarosa sobre elcrecimiento microbiano

MATERIAL:

1 4ubos de 8V 26 . En cada uno 6 ml de caldo nutritivo adicionado con-ml de cloruro de sodio al G) -ml de cloruro de sodio al 6G) -ml de clorurode sodio al -6G1 4ubos de 8V 26. En cada tubo 6 ml de caldo nutritivo adicionado con-ml de ,acarosa al G) - ml de ,acarosa al 6G) - ml de ,acarosa al -6G=eelómetro de &ac Farland*ipetas de 2 ml ) y de ml estérilesAgua destilada estéril

CEPAS: AGARESEscericia Coli ^ Agar sangre,tapylococcus aureus ^ Agar =utritivo\lebsiella pneumoniae ^ Caldo nutritivo

INTRODUCCIÓN:

A PRESIÓN %a osmosis es la diusión a través de una membrana semipermeable !uesepara a dos soluciones con distintas concentraciones de sustrato. El procesotiende a igualar la concentración de soluto a ambos lados de la memoran.

Cuando a ciertas células bacterianas se les suspende en una solución !uecontiene una concentración elevada de cloruro de sodio M-6G) el agua pasarádesde la región de menor concentración de sustancia disuelta M el interior de lacélula tiene una baja concentración salina a través de la membranacitoplasmática !ue es semipermeable a la solución !ue rodea a la célula. Así lacélula se desidrata produciéndose plasmólisis. ,i las bacterias se colocan enuna solución !ue contiene menos del G de cloruro de sodio) el @ujo de aguase invertirá) es decir ocurrirá la diusión) ya !ue @uirá el agua desde la solucióne(terna al interior de la célula y originará la plasmotipsis. ;entro de la célula seestablece una presión osmótica a causa de la gran cantidad de agua !ue seacumula allí) esta presión ará !ue se incen e incluso las células puedenreventar. El mecanismo de inibición microbiana es la plasmólisis las célulasse desidratan y por lo tanto ,on incapaces de metaboli'ar o crecer) puedenmorir o permanecer vivas pero en condiciones durmientes. ,in embargotambién e(isten microorganismos !ue re!uieren altas concentraciones salinasy son denominadas alóflos) y los !ue re!uieren presiones osmóticas elevadasse les conoce como osmóflos. %a mayor parte de las bacterias pueden toleraruna amplia gama de presiones osmóticas e(ternas y uer'as iónicas debido asu capacidad de regular la osmolaridad interna y la concentración iónica. %aosmolaridad está regulada por el transporte activo de iones potasio al interiorde la célula

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A E" *)d#o+ #po,!"#$o+ Mcon una a_`a_ del citoplasma es la pared celularla !ue ejerce todo el papel su rigide' se opone a la entrada de agua) y por lotanto) evita !ue la membrana citoplásmica tienda a surir una presión de turgore(cesiva.

B E" *)d#o+ #p)r,!"#$o+ Mcuando la a_ del e(terior es menor !ue la delcitoplasma. %as bacterias poseen mecanismos compensatorios por los !uetienden a aumentar la osmolaridad interior por encima de la del medio Mparagaranti'ar la entrada de agua del ambiente y mantener su metabolismo. Ellose logra esencialmente aumentando la concentración de un soluto muy solubleen agua en el interior celular) soluto llamado genéricamente +ol&,o$o*pa,#bl)) lo cual se puede lograr por varios posibles mecanismos

bombeando iones al interiorWsinteti'ando una molécula orgánica osmóticamente activaWbombeando sustancias osmoprotectoras.

PROCEDIMIENTO:

*>E*A>AC<B= ;E %A CE*A A E,4U;<A> ,uspender la cepa bacteriana en agua destilada logrado obtener unaturbiedad del =o 6 del neelómetro de &ac9 Farland. En caso de no tener el neelómetro solocuidar la turbiedad a manera de suspensión.

A EFEC4D ;E% C%D>U>D ;E ,D;<D

.9 Colocar en una gradilla en orden creciente de concentración una serie de 1tubos con 6 ml cada uno con caldo nutritivo y adiciona - ml de cloruro desodio con las distintas concentraciones M al G) 6G y -6 SG de =aCl-.9>otularlas de acuerdo a la concentración y nombre de la cepa !ue se va ainocular en ellos1.9 <nocular en cada tubo 6.l ml de la suspensión bacteriana correspondiente5.9 repetir los pasos del al 5 para cada cepa proporcionada2.9 <ncubar los tubos a 1+LC durante -59 5/LC98.9 0omogeni'ar el cultivo y leer el resultado de cada tubo en base a suturbiedad) comparándola con las ampolletas del neelómetro de &ac9 Farland

# EFEC4D ;E %A ,ACA>D,A

.9 Colocar en una gradilla en orden creciente de concentración una serie de 1tubos con 6 ml cada uno con caldo nutritivo y adiciona - ml de sacarosacon las distintas concentraciones M al G) 6G y-6G de ,acarosa-.9>otularlas de acuerdo a la concentración y nombre de la cepa !ue se va ainocular en ellos

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1.9 <nocular en cada tubo 6.l ml de la suspensión bacteriana correspondiente.5.9 repetir los pasos del al 5 para cada cepa proporcionada.2.9 <ncubar los tubos a 1+LC durante -59 5/LC.8.9 0omogeni'ar el cultivo y leer el resultado de cada tubo en base a suturbiedad) comparándola con las ampolletas del neelómetro de &ac9 Farland.

CUESTIONARIO:

.9 Cómo se defne la ósmosisT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9 "ué es plasmólisis y cuando ocurreT


KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 "ué sucedió con las bacterias al incrementar la concentración del =aCl ysacarosa en los distintos caldos nutritivosT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 "ué nombre reciben las bacterias !ue soportan grandes presionesosmóticasT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 2.9 "uién es el responsable en la célula bacteriana controlar la presión enmedios ipotónicosT


8.9 Cuándo se establece un medio ipotónicoT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

+.9 Cuándo se establece un medio ipertónicoT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

RESULTADOS:

Anota los resultados del eecto del cloruro de sodio y de la sacarosasobre el crecimiento) indicando el n$mero de ampolleta del neelómetro a !uecorresponda dico crecimiento. En caso de no contar con el =eelómetroregistra a manera de cruces dico crecimiento bacteriano

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63



CE*A, EFEC4D ;E %A *>E,<B= D,&B4<CA G =aCl 6G =aCl -6G =aClE.CD%<,.AU>EU,\.*=EU&D=<AE

CE*A, EFEC4D ;E %A *>E,<B= D,&B4<CA

G,acarosa

6Gsacarosa

-6G,acarosa

E.CD%<,.AU>EU,\.*=EU&D=<AE

OBSERVACIONES

;ibuja a manera de es!uema los pasos reali'ados en la elaboración de lapráctica) así como los resultados obtenidos después del tiempo de incubación.

CONCLUSIONES

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO = PUNTO TRMICO MORTAL ENMICROORGANISMOS

Pr/$,#$a No 68=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK

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=ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK =ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKK

OB1ETIVO

El alumno aplicará un método !ue le permitirá conocer la temperatura yel tiempo mínimos necesarios para esterili'ar una suspensión) así como eleecto !ue tienen dierentes diluyentes sobre dicas determinaciones.

MATERIAL

4ubos de 1 V 66 estériles

*ipetas de 2 ml estériles*ipetas de l ml estérilesCajas de Agar =utritivo o Agar sangre#a?os maría a 1+LC) +6LC) y ebullición

4ubos de ensaye con ml de puré de tomate) jugo de naranja y agua destiladaCEPASEscericia coli,tapylococcus aureus\lebsiella *neumoniae

INTRODUCCIÓN:

;ierentes especies microbianas varían ampliamente en sus @uctuacionesde temperatura óptima para su desarrollo %as llamadas psicróflas crecenmejor a temperaturas bajas M2 a -6LC) las ormas mesóflas lo acen mejor de16 a 1+LC) la mayor parte de la termóflas entre 26LC y 86LC. %a mayor parte de los microorganismos son mesóflos) 16LC es latemperatura óptima para mucas de las ormas de vida libre y la temperaturadel uésped es óptima para los simbiontes de los animales de sangre caliente. El límite superior de temperatura tolerada por cual!uier especie secorrelaciona bien con la estabilidad térmica general de las proteínas de dica

especie. %os microorganismos comparten con los vegetales y los animales larespuesta al co!ue por calor) una síntesis de proteínas por el calor cuando sone(puestos a una elevación s$bdita en la temperatura por arriba de la óptimapara el crecimiento. Al parecer estas proteínas son resistentes al calor yestabili'an a las proteínas de la célula sensible al calor. %as bacterias tambiéne(iben enómeno denominado co!ue por río) ósea la muerte de las célulaspor un enriamiento rápido) en oposición a uno lento. *or ejemplo) elenriamiento rápido de la escericia coli desde 1+LC a 2LC puede matar al :6Gde las células

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EFEC4D %E4A% ;E% CA%D>.

Al subir la temperatura por encima de la temperatura má(ima de crecimiento)se dejan sentir los eectos sobre la viabilidad la pérdida de viabilidad signifca!ue las bacterias dejan de ser capaces de crecer y dividirse. %a muerte se debe

a la destrucción o inactivación irreversible de una molécula o estructuraesencial Mcomo p. ej. el A;= cromosómico o por creación de un da?oirreparable en la membrana. Cómo podemos caracteri'ar o medir en lapráctica la inactivación por calor de una suspensión bacterianaT 0e a!uí algunos parámetros utili'ados

,#)*po ,2r*#$o *or,al es el tiempo mínimo re!uerido para !ue muerantodas las bacterias de una determinada suspensión a una determinadatemperaturaW,#)*po d) r)d&$$#!" d)$#*al es el tiempo re!uerido para reducir al 6Gla densidad de la suspensión) a una determinada temperatura Mtambiénllamado valor ;Wp&",o ,2r*#$o *or,al es la temperatura mínima !ue mata a todas lasbacterias en un tiempo determinado Mnormalmente el tiempo de reerenciaempleado es de 6 min.

PROCEDIMIENTO

A *>E*A>AC<B= ;E %A, ,U,*E=,<D=E, &<C>D#<A=A,.9 Adicionar agua destilada a cada cepa !ue se va a estudiar cuidado de !ue!uede turbia a manera de suspensión.

-.9 Colocar ml de jugo de naranja en un tubo de 1 V 66) ml de Aguadestilada en otro tubo de 1V66 y ml de puré de tomate en otro tubo de 1V 66. ,erá necesario rotularlos.1.9 transerir ml de la suspensión bacteriana preparada a cada tubo

# ;E4E>&<=AC<B= ;E% *U=4D 4E>&<CD &D>4A% M*4&

.9 Colocar en una gradilla una serie de 5 tubos de 1 V 66 para cada tipode bacteria a estudiar1.9 &arcar cada tubo con el nombre de la cepa !ue se va a estudiar.5.9 Anotar en cada tubo las t)*p)ra,&ra+ siguientes ,)+,#'o 7;WC ;4WC )b&ll#$#!"2.9 Colocar en cada tubo 6.2 ml de la suspensión bacteriana !ue preparastecon agua) jugo de naranja y puré de tomate a tratar8.9 Calentar la suspensión a la temperatura indicada en un ba?o maría durante6 minutos )l ,&bo ,)+,#'o NO SERA CALENTADO+.9 aciar el contenido de cada tubo en la superfcie de una placa de A'ar"&,r#,#o y0omogenei'ar por rotación sobre la mesa o mediante e(tensión con varilla devidrio doblada a :6 grados/.9 <ncubar a 1:C durante -59 5/ oras

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:.9 Dbservar si ay crecimiento.

C ;E4E>&<=AC<B= ;E% 4<E&*D 4>&<CD %E4A%M44%

.9 Colocar en una gradilla una serie de 5 tubos de 1 V 66 para cada tipo de

bacteria a estudiar-.9 &arcar cada tubo con el nombre de la cepa !ue se va a estudiar1.9 Anotar en cada tubo los ,#)*po+ !ue se indican a continuación T)+,#'o 9*#"&,o+ 69 *#"&,o+ 74 *#"&,o+5.9 colocar en cada tubo 6.2 ml de la suspensión bacteriana !ue preparaste conagua) jugo de naranja y puré de tomate a estudiar2.9 Calentar en ba?o maría a +6LC para todos los tubos y respetando lostiempos indicados )l ,&bo ,)+,#'o NO SE CALIENTA8.9 aciar el contenido de cada tubo sobre la superfcie de una placa de A'ar"&,r#,#o yomogenei'ar por rotación sobre la mesa o e(tensión con varilla de vidriodoblado a :6 grados+.9 <ncubar las placas a 1+LC durante -59 5/ oras/.9 Dbservar si presenta o no crecimiento

CUESTIONARIO:

"ué características presentan las bacterias llamadas psicróflasT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK -.9 A !ué temperatura crecen las bacterias mesóflasT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9 "ué sucede con las proteínas en la célula bacteriana cuando se aplica uncambio brusco en la temperatura

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9 En !ué consiste el tiempo térmico letalT


2.9 En !ué consiste el punto térmico mortalT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8.9 A !ué temperatura se reporta el punto térmico mortal para las bacteriasestudiadas en los distintos diluyentesT


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+.9 "ué muestras después de la incubación reporta el tiempo óptimo para ladestrucción de las bacterias en los distintos diluyentesT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

RESULTADOS:

Completa las siguientes tablas después del tiempo adecuado y temperatura deincubación para los distintos medios.

A *U=4D 4E>&<CD &D>4A% M*4&

Cepas ;iluyente Crecimiento después decalentar

E. coli 4estigo 1+SC +6SC Ebullic.Agua

Pugo de =aranja*uré de tomate

,. aureus 4estigo

1+SC

+6SC Ebullic.

Agua Pugo de =aranja*uré de tomate

\.pneumoniae 4estigo

1+SC

+6SC Ebullic.


# 4<E&*D 4>&<CD %E4A%M44%

Cepas ;iluyente Crecimiento después decalentar

E. coli 4estigo

2min

2min

16min.

Agua Pugo de =aranja

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*uré de tomate,. aureus 4estig

o 1+SC

+6SC Ebullic.

Agua Pugo de =aranja

*uré de tomate\.pneumoniae 4estig

o 1+SC

+6SC Ebullic.


OBSERVACIONES:;ibuja los pasos !ue seguiste para la reali'ación de la práctica

CONCLUSIONES:

INIBIDORES BACTERIANOS

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Pr/$,#$a No 69=ombre ;el AlumnoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK,emestreKKKKKK 7rupoKKKKKKK =ombre deltitularKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKFecaKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

=ombre del *ror. de %aboratorioKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKCaliKKKKKKKKKKK

OB1ETIVO El alumno manejará algunas técnicas para poner de manifesto laactividad de los antibióticos sobre el crecimiento microbiano.

MATERIALCajas de petri con medios de cultivo &uller90inton) o Agar nutritivo

Asa bacteriológica&ecero Fiser,ensidiscos M antibiogramasFenol al 2G

SUSTANCIAS BIOLÓGICASCultivo de en caldo nutritivo de -5 oras de #acillus subtilis M lactó bacilosCultivo de -5 oras ,tapylococcus aureus en manitol sal Agar MmsaCultivo de -5 oras de Escericia Coli en medio &acconOey

INTRODUCCIÓN

ANTIBIÓTICOS,on sustancias capaces de destruir y eliminar los microorganismos causantesde una inección producida por bacterias Maringitis) bron!uitis) otitis)neumonía) amigdalitis) etc. =o son efcaces cuando la inección es producidapor virus Mgripe.Cada tipo de antibiótico será eectivo para destruir una clase demicroorganismos en unción de su modo de actuación..,e les llama antibióticosde amplio espectro a los !ue son eectivos rente a un gran n$mero de agentesmicrobianos los microorganismos causantes de la inección son capaces dedesarrollar resistencias al antibiótico de manera !ue este no será efca' paraeliminarlos. Cada a?o se investiga creando nuevos antibióticos efcaces paralas ormas microbianas resistentes a sus anteriores tratamientos. ,e debenusar siempre bajo prescripción médica.

E(isten pruebas Mantibiogramas !ue determinan el antibiótico más efca' paracada inección) pero normalmente se sigue un protocolo de actuación de losantibióticos de elección para cada tipo de inección.Es el médico el proesional !ue ju'ga la inección e(istente y el antibióticoefca' para su tratamiento.%os antibióticos siempre se deben tomar bajo prescripción médica y cumplir el

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tratamiento completo. El incumplimiento del tratamiento puede dar lugar arecaídas !ue precisarán el tratamiento con otro tipo de antibiótico por aberdesarrollado resistencia al primero.

MODO DE ACCION DE LOS ANTIBIÓTICOS

.9 <nibición de la síntesis de la pared celular. -.9 Alteración sobre lamembrana citoplásmica. 1.9 <nibición de la síntesis proteica.5.9 #lo!ueo de lasíntesis de los ácidos nucleicos.

ANTIBIOGRAMAS *ara estudiar la sensibilidad de un microorganismo por técnicas dediusión se dispone de dos sistemas) el de discos de papel impregnados con elantibiótico y las tabletas) consistentes en una suspensión del antibióticoliofli'ada y comprimida en material inerte. %os abricantes recomiendan

conservar los discos a Z-6 RC para largos periodos o entre - y / RC si se utili'anen el pla'o de una semana. *or el contrario) las tabletas se an consideradomás estables) pudiéndose almacenar a temperatura ambiente y manteniendosu actividad más tiempo !ue los discos .*or lo !ue respecta a la temperaturade conservación) al comparar para cada antibiótico los diámetros de los alosde inibición de los discos conservados entre 5 y 8 RC con los conservados atemperatura ambiente no se encontraron dierencias signifcativas a lo largo detodo el estudioW tampoco se encontraron dierencias al comparar los alos delas pastillas conservadas entre 5 y 8 RC con las conservadas a temperaturaambiente) de modo !ue tanto los antibióticos !ue permanecieron establesdurante el tiempo del estudio como los !ue disminuyeron su actividad lo

icieron de modo paralelo a ambas temperaturas

PROCEDIMIENTO:

A *>E*A>AC<B= ;E %A, ,U,*E=,<D=E, &<C>D#<A=A,,uspender la cepa bacteriana en agua destilada logrado obtener una turbiedaddel =o 6del neelómetro de &ac9 Farland. En caso de no tener el neelómetro solocuidar la turbiedad a manera de suspensión.

# AC4<<;A; ;E %D, A=4<#<B4<CD, E= ;<,CD.9 &arcar - placas &uller90inton) o Agar nutritivo con el nombre de la cepa,.aureus y otra con el nombre de \.pneumoniae.-.9 4omar con un isopo dierente las muestras !ue ueron preparadas en elinciso A de este procedimiento y sembrar las placas rotuladas1.9 "uemar el isopo y desecarlo.5. Colocar un multidisco o discos individuales sobre las placas y presionarligeramente los discos contra la gelosa2.9<ncubar las placas a 1+SC durante -5 oras8.9 &edir el diámetro de los alos de inibición del crecimiento producidos porcada antibiótico y notar los resultaos

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C ;E4E>&<=AC<B= ;E <=0<#<;D>E, E= %A %EC0E.9 *reparar el medio de cultivo de la siguiente orma9*reparar medio de cultivo &uller90inton) o Agar nutritivo) esterili'arlo yenriarlo a 56SC

9 A?adir 6.2 ml de #. ,ubtilis obtenido de un cultivo de -5 oras en caldonutritivo en una caja de petri esterili'ada 9 aciar 2 ml del medio de cultivo ya enriado a 56SC. ;istribuir en ormaomogénea

9 ;ejarlo !ue solidif!ue.-.9 4omar una muestra de lece y calentar a ba?o &aría a /6SC durante 1minutos e(actamente) enriar bruscamente la lece en un ba?o con ielo1.9 <mpregnar un disco de papel fltro con la lece ría) secarlo ligeramente ycon unas pin'as esterili'adas depositarlos en el centro de una caja de petripreparada anteriormente5.9 <ncubar la placa de / a -6 oras a 1+SC y observar las 'onas de inibicióncausadas por los antibióticos sobre el #. ,ubtilis.2.9 ,i la muestra de lece contiene antibióticos) alrededor del disco se ormaráun alo) el cual indica la inibición de microorganismos y presencia deantibióticos en concentraciones superiores a las permitidas

CUESTIONARIO

.9 "ué unción tiene lo antibióticosT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK

-.9"ué son los antibiogramas y cuál es su unciónT KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 1.9&enciona dos causas del por!ue los microorganismos pueden llegar aacerse resistentes a los antibióticosT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 5.9En caso de no tener ,ensidiscos en el laboratorio cómo puedes abricarlosT

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 2.9Escribe dos Fuentes naturales de donde se puedan obtener los antibióticos

KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 8.9,eg$n los resultados de tu práctica . "ué medicamentos puedes utili'arpara destruir y eliminar a los microorganismos como ,tapylococcus yEscericia ColiT


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+.9 <nvestiga !ué tipo de enermedades pueden ocasionar los microorganismosestudiados en la práctica



/.9E(istió inibición de microorganismos y presencia de antibióticos superioresa las permitidas en la lece !ue estudiasteTKKKKKKKKpor !uéT


OBSERVACIONES

>eali'a los dibujos de los resultados obtenidos a las -5 oras deincubación


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BIBLIOGRAÍA

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/ %as tinciones 9 &onografas.com T#"$#!" ,imple utili'a un solo colorante. T#"$#!" de Gra* ... En lamuestra de la pr/$,#$a anterior 1 eran gran positivo por su coloración morada. T#"$#!"... ___.monografas.comQtrabajos2Q tincionesQtinciones.stml 9 -/O 9En cacé 9 *áginas similares

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http://www.google.com.mx/search?hl=es&lr=&q=related:www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones.shtml


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Microbiologia - practica