Microbiologia Lab Nº4

7/18/2019 Microbiologia Lab Nº4

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Título:

“MÉTODOS DE COLORACIÓN”

Asignatura: Microbiología

Docente responsale: Jacinto Hervias, Pedro

!rupo "e laoratorio: G1

Integrantes:

• Ajahuana Villafan, Teresa Mnica• !ru"at !a#$os, Ale%andra• &cheverría Vega, Patricia• Hua#an Pashanasi, Gisela• 'uintana (las, Paola• )ilva Villacre", Jhuliana• Vargas Hu*hua, Milagro

Se#estre aca"$#ico: +1- . +

Ciclo aca"$#ico: V///

LIMA %&ER'

()*+

INTROD,CCIÓN

AC,LTAD DE CIENCIAS -ARMACE,TICAS .IO0,IMICAS



&l ta#a0o de la #a*oría de las clulas bacterianas es tal 2ue resultandifíciles de ver con el #icrosco$io $tico3 4a $rinci$al di5cultad es la falta decontraste entre la clula * el #edio 2ue la rodea, * el #edio #6s si#$le deau#entar el contraste es la utili"acin de colorantes3 &stos $uedene#$learse $ara distinguir entre ti$os diferentes de clulas o $ara revelar la$resencia de deter#inados constitu*entes celulares, tales co#o 7agelos,es$oras, c6$sulas, $aredes celulares, centros de actividad res$iratoria, etc3

4a #a*oría de los colorantes son co#$uestos org6nicos 2ue tienen algunaa5nidad es$ecí5ca $or los #ateriales celulares3 Muchos colorantes utili"adoscon frecuencia son #olculas cargadas $ositiva#ente 8cationes9 * seco#binan con intensidad con los constitu*entes celulares cargadosnegativa#ente, tales co#o los 6cidos nucleicos * los $olisac6ridos 6cidos3&je#$los de colorantes catinicos son el a"ul de #etileno, el cristal violeta *la safranina3 :tros colorantes son #olculas cargadas negativa#ente

8aniones9 * se co#binan con los constitu*entes celulares cargados$ositiva#ente, tales co#o #uchas $roteínas3 &sos colorantes inclu*en laeosina, la fucsina 6cida * el rojo !ongo3 :tro gru$o de colorantes sonsustancias li$osolubles3 4os colorantes de este gru$o se co#binan con los#ateriales li$ídicos de la clula, us6ndose a #enudo $ara revelar lalocali"acin de las gotículas o de$sitos de grasa

&n el $resente infor#e se desarrollar6n los #todos de coloracin, así co#ola tincin 6cido resistente d6ndose a conocer los resultados obtenidos en la$r6ctica3



I1 COM&ETENCIAS

• ;eali"ar #anual#ente #todos de tincin habituales usadosen la $re$aracin de l6#inas de observacin

• <escribir #inuciosa#ente sus observaciones, al #icrosco$io

II1 MARCO TEORICO

TINCIONES ,TILI2ADAS EN MICRO/IOLO!IA

T$cnicas "e tinci3n1 -un"a#entos&l ta#a0o de la #a*oría de las clulas bacterianas es tal 2ue resultandifíciles de ver con el #icrosco$io$tico3 4a $rinci$al di5cultad es lafalta de contraste entre la clula * el

#edio 2ue la rodea, * el #edio #6ssi#$le de au#entar el contraste es lautili"acin de colorantes3 &stos$ueden e#$learse $ara distinguirentre ti$os diferentes de clulas o$ara revelar la $resencia dedeter#inados constitu*entescelulares, tales co#o 7agelos, es$oras, c6$sulas, $aredes celulares,centros de actividad res$iratoria, etc34as clulas general#ente son tratadas $ara coagular el $roto$las#a

antes de te0irlas, $roceso lla#ado 5jacin3 Para bacterias, la 5jacin$or el calor es lo #6s corriente, aun2ue ta#bin $uede 5jarse consustancias 2uí#icas co#o for#aldehido, 6cidos * alcoholes3 <es$usde la 5jacin, si se a0ade el colorante, no se $roducen ulterioresca#bios estruct=rales en el $roto$las#a3 4a 5jacin se reali"ahabitual#ente en clulas 2ue han sido 5jadas sobre un $ortaobjetos3

Tratando des$us ste con el agente 5jador, * siguiendoin#ediata#ente el $roceso de tincin3 4a 5jacin $roducehabitual#ente el encogi#iento de las clulas> la tincin, $or elcontrario, hace 2ue las clulas a$are"can #a*ores 2ue lo 2ue es

real#ente, de #anera 2ue las #edidas de las clulas 2ue han sido5jadas o te0idas no $ueden reali"arse con #ucha $recisin34a #a*oría de los colorantes son co#$uestos org6nicos 2ue tienenalguna a5nidad es$ecí5ca $or los #ateriales celulares3 Muchoscolorantes utili"ados con frecuencia son #olculas cargadas$ositiva#ente 8cationes9 * se co#binan con intensidad con losconstitu*entes celulares cargados negativa#ente, tales co#o los6cidos nucleicos * los $olisac6ridos 6cidos3 &je#$los de colorantescatinicos son el a"ul de #etileno, el cristal violeta * la safranina3:tros colorantes son #olculas cargadas negativa#ente 8aniones9 *

se co#binan con los constitu*entes celulares cargados $ositiva#ente,tales co#o #uchas $roteínas3 &sos colorantes inclu*en la eosina, la



fucsina 6cida * el rojo !ongo3 :tro gru$o de colorantes son sustanciasli$osolubles> los colorantes de este gru$o se co#binan con los#ateriales li$ídicos de la clula, us6ndose a #enudo $ara revelar lalocali"acin de las gotículas o de$sitos de grasa3 ?n eje#$lo decolorante li$osoluble es el negro )ud6n3

Algunos colorantes te0ir6n #ejor slodes$us de 2ue la clula ha*a sido tratadacon otra sustancia 2uí#ica, 2ue no es uncolorante $or sí #is#o3 &sta sustancia sedeno#ina #ordiente> un #ordientehabitual es el 6cido t6nico3 &l #ordiente seco#bina con un constitu*ente celular * loaltera de ta1 #odo 2ue ahora sí $odr6atacar el colorante3)i se desea si#$le#ente incre#entar el

contraste de las clulas $ara la#icrosco$ía, son su5cientes los $rocedi#ientos si#$les de tincin3 &/ a"ulde #etileno es un buen colorante si#$le 2ue act=a sobre todas las clulasbacterianas r6$ida#ente * 2ue no $roduce un color tan intenso 2ueoscure"ca los detalles celulares3 &s es$ecial#ente =til $ara detectar la$resencia de bacterias en #uestras naturales, $uesto 2ue la #a*or $artedel #aterial no celular no se ti0e34a tincin negativa es el reverso del $rocedi#iento de tincin usual@ lasclulas se dejan sin te0ir, $ero se colorea en ca#bio el #edio 2ue las rodea34o 2ue se ve, $or tanto, es el $er5l de las clulas3 4a sustancia utili"ada $ara

la tincin negativa es un #aterial o$aco 2ue no tiene a5nidad $or losconstitu*entes celulares * 2ue si#$le#ente rodea las clulas, tal co#o latinta china 82ue es una sus$ensin de $artículas de carbono coloidal9 o lanigrosina 8un colorante negro insoluble en agua93 4a tincin negativa es un#odo satisfactorio de au#entar el contraste de las clulas en la #icrosco$ia$tica, $ero su #6%i#a utilidad est6 en revelar la $resencia de c6$sulasalrededor de las clulas bacterianas34os #todos de tincin son de gran utilidad, $ero deben usarse sie#$re con$recaucin, *a 2ue $ueden conducir a errores3 4as #olculas de colorantefor#an en ocasiones $reci$itados o agregados 2ue $arecen estructuras

celulares autnticas, $ero 2ue son for#aciones co#$leta#ente arti5cialesinducidas $or el #is#o colorante3 Tales estructuras se deno#inanartefactos, * deben to#arse #uchas $recauciones $ara tener la seguridadde 2ue no nos esta#os e2uivocando al creer 2ue un artefacto es unaestructura real#ente e%istente3

E4a#en #icrosc3pico "e las #uestras clínicas1 Sin tinci3no se utili"a ning=n ti$o de colorante3&s el #ontaje directo h=#edo o e%a#en en fresco@ las #uestras se

e%tienden directa#ente sobre la su$er5cie de un $ortaobjetos $ara suobservacin3 &l #aterial 2ue es de#asiado es$eso $ara $er#itir la



diferenciacin de sus ele#entos $uede diluirse con igual volu#en desolucin salina 5siolgica estril3 )e de$osita suave#ente un cubreobjetossobre la su$er5cie del #aterial3&ste ti$o de $re$aracin se e#$lea $ara detectar trofo"oítos #viles de$ar6sitos intestinales co#o Giardia, &nta#oeba, huevos * 2uistes de otros

$ar6sitos, larvas * gusanos adultos, Tricho#onas, hifas de hongos, etc3

E4a#en #icrosc3pico Tinci3n si#ple)e utili"a un solo colorante, $or lo 2ue todas las estructuras celulares seti0en con la #is#a tonalidad 8Tinta china, A"ul Metileno de 4oeBer, A"ul delactofenol93&l Hidr%ido de $otasio al 1C8solucin de D:H9 $er#ite verele#entos de hongos *a 2ue el

D:H digiere $arcial#ente losco#$onentes $roteicos, $or eje#$lode la clula hus$ed, $ero no act=asobre los $olisac6ridos de las$aredes celulares de los hongos34a tinta china o igrosina $er#iteobservar clulas levadurifor#esca$suladas 8!r*$tococcus9, sobretodo en 4!;3 4os $olisac6ridos ca$sulares recha"an la tinta china * lac6$sula a$arece co#o un halo claro alrededor de los #icroorganis#os3 A"ul

de #etileno de 4oeBer $uede agregarse a las $re$araciones en fresco deheces $ara observar la $resencia de leucocitos3

E4a#en #icrosc3pico "e las #uestras clínicas #u5 #o"i6ca"as1Tinci3n "i7erencial)e utili"an varios colorantes co#binados3 4as estructuras celulares sediferencian en funcin de los diferentes colorantes 2ue 5jan de acuerdo consu $ro$ia constitucin 2uí#ica34os eje#$los cl6sicos serían la tincin de G;AM o la de EiehlFeelsen3

E4a#en "e #uestras al #icroscopio: la tinci3n !RAM4a tincin de Gra# es uno de los #todos de tincin #6s i#$ortantes en ellaboratorio bacteriolgico * con el 2ue el estudiante debe estar$erfecta#ente fa#iliari"ado3 )u utilidad $r6ctica es indiscutible * en eltrabajo #icrosc$ico de rutina del 4aboratorio de Microbiología lasreferencias a la #orfología celular bacteriana 8cocos, bacilos, $ositivos,negativos, etc39 se basan justa#ente en la tincin de G;AM



<escrita en for#a breve, lasecuencia de la tincin es lasiguiente@ el rotis 5jado con calor seti0e 1 #in con Violeta !ristal, se lavacon agua, se cubre con solucin

odada durante 1 #in * se lava denuevo con agua, decolorar con#e"cla alcohol etílicoIacetona3&scurrir * cubrir con )afranina 8colorde contraste9 durante + seg3 4avar* secar3&sta tincin se deno#inada así $or elbacterilogo dans !hristian Gra#,2uien la desarroll en 1KK3 )obre labase de su reaccin a la tincin de

Gra#, las bacterias $ueden dividirse en dos gru$os, Gra# $ositivas *gra#negativos 8en este caso, los tr#inos $ositivo * negativo no tiene nada2ue ver con carga elctrico, sino si#$le#ente designan dos gru$os#orfolgicos distintos de bacterias934as bacterias Gra#F$ositivas * Gra#Fnegativas ti0en de for#a distintadebido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus $aredescelulares3 4a $ared de la clula bacteriana sirve $ara dar su ta#a0o * for#aal organis#o así co#o $ara $revenir la lisis os#tica3 &l #aterial de la $aredcelular bacteriana 2ue con5ere rigide" es el $e$tidoglicano3 4a $ared de laclula Gra#F$ositiva es gruesa * consiste en varias ca$as interconectadas

de $e$tidoglicano así co#o algo de 6cido teicoico3 General#ente, CFLCde la $ared de la clula Gra#F$ositiva es $e$tidoglicano3 4a $ared de laclula Gra#Fnegativa, $or otro lado, contiene una ca$a #ucho #6s delgada,=nica#ente de $e$tidoglicano * est6 rodeada $or una #e#brana e%teriorco#$uesta de fosfolí$idos, li$o$olisac6ridos, * li$o$roteínas3 )lo 1C F+C de la $ared de la clula Gra#Fnegativa es $e$tidoglicano3<ebido a su i#$ortancia en ta%ono#ía bacteriana * a 2ue indica diferenciasfunda#entales de la $ared celular de las distintas bacterias, describire#osa2uí con algún detalle la tinción de Gram y las interpretaciones que

actualmente se hacen sobre el porqué de su funcionamiento.

4as clulas 5jadas al calor sobre un $ortaobjetos se ti0en, $ri#ero con unasolucin de cristal violeta 8otros colorantes b6sicos no son tan efectivos9 *son lavadas des$us $ara 2uitar el e%ceso de colorante3 &n este estado,todas las clulas, tanto las Gra# $ositivas co#o las gra#negativos, est6nte0idas de a"ul3&l $ortaobjetos se cubre entonces con una solucin de *odoF*oduro$ot6sico3 &l ingrediente activo es a2uí el /+> el D/ si#$le#ente hace solubleel /+ en agua3 &l /+ entra en las clulas * for#a un co#$lejo insoluble enagua con el cristal violeta3 <e nuevo tanto las clulas Gra# $ositivas co#olas gra#negativos se encuentran en la #is#a situacin3

)e lleva a cabo des$us la decoloracin, usando una #e"cla de alcoholFacetona, sustancias en las 2ue es soluble el co#$lejo /+Fcristal violeta3



Algunos organis#os 8Gra# $ositivos9 no se decoloran, #ientras 2ue otros8gra#negativos9 lo hacen3 4a diferencia esencial entre esos dos ti$os declulas est6 $or tanto en su resistencia a la decoloracin> esta resistencia sedebe $robable#ente al hecho de 2ue en el caso de bacterias Gra#Fnegativas, la #e"cla de alcoholIacetona es un solvente li$ídico * disuelve la

#e#brana e%terior de la $ared de la clula 8* ta#bin $uede da0ar la#e#brana cito$l6s#ica a la 2ue se une $e$tidoglicano93 4a delgada ca$a de$e$tidoglicano es inca$a" de retener el de co#$lejo cristal violetaF*odo * laclula se decolora3 4as clulas Gra# $ositivas, a causa de sus $aredescelulares #6s es$esas 8tienen #6s $e$tidoglicano * #enos lí$ido9, no son$er#eables al disolvente *a 2ue ste deshidrata la $ared celular * cierra los$oros, dis#inu*endo así el es$acio entre las #olculas * $rovocando 2ue elde co#$lejo cristal violetaF*odo 2uede atra$ado dentro de la $ared celular3<es$us de la decoloracin las clulas Gra# $ositivas son todavía a"ules,$ero las gra#negativos son incoloras3

Para $oner de #ani5esto las clulas gra#negativos se utili"a una coloracinde contraste3 Habitual#ente es un colorante de color rojo, co#o la safraninao la fucsina b6sica3 <es$us de la coloracin de contraste las clulasgra#negativos son rojas, #ientras 2ue las Gra# $ositivas $er#anecena"ules3<eben destacarse algunos as$ectos cruciales de la tincin de Gra#@

19 &l trata#iento con cristal violeta debe $receder al trata#iento con*odo3 &l *odo $or sí solo tiene $oca a5nidad con las clulas3+9 4a decoloracin debe reali"arse con $oca agua $ara evitar 2ue

$ierdan la tincin las clulas Gra# $ositivas3 &/ $roceso dedecoloracin debe ser corto * es esencial un c6lculo $reciso deltie#$o $ara obtener resultados satisfactorios39 !ultivos #6s viejo de +K horas $uede $erder su habilidad deretener el co#$lejo cristal violetaF*odo3

&l car6cter de Gra# $ositivo no es sie#$re un fen#eno del todo o nada3Algunos organis#os son #6s Gra# $ositivos 2ue otros * algunos son Gra#Fvariables, es decir, unas veces Gra# $ositivos * otras gra#negativos3

Otras tinciones "e uso 8aitualRODAMINA9A,RAMINA4os 6cidos #iclicos de las $aredes celulares de las #ico bacterias $oseena5nidad $ara los 7uorocro#os aura#ina * roda#ina3 &stos colorantes se5jan a las bacterias, 2ue a$arecen de color a#arillo o naranja brillantecontra un fondo verdoso3 &l $er#anganato de $otasio, e#$leado co#ocontraste, evita la 7uorescencia ines$ecí5ca3 Todos los #icroorganis#os6cidoFalcohol resistentes, inclu*endo los es$oro"oarios $ar6sitos, se ti0encon estos colorantes3?n as$ecto i#$ortante de la coloracin roda#inaFaura#iria es 2ue luego los

frotis $ueden ser rete0idos con la coloracin de EiehlFeelsen o Din*oundirecta#ente sobre la tincin con el 7uorocro#o, si se eli#ina antes el



aceite de in#ersin3 <e esta for#a, los resultados $ositivos $ueden sercon5r#ados con las coloraciones tradicionales, 2ue ade#6s $er#iten ladiferenciacin #orfolgica3

NARANA DE ACRIDINA&l 7uorocro#o naranja de acridina se une al 6cido nucleico *a sea en sufor#a nativa o desnaturali"ada3 &n algunas $re$araciones de naranja deacridina, el color de la 7uorescencia $uede variar, de$endiendo del $H * dela concentracin3 &l naranja de acridina ha sido e#$leado co#o colorantevital, 2ue da una 7uorescencia verde si el #icroorganis#o est6 vivo * roja siest6 #uerto3 <e todos #odos, co#o el colorante se intercala en el 6cido

nucleico, el ger#en viable se inactivar6 $oco tie#$o des$us de la tincin3 &l uso de naranja de acridina $ara detectar la $resencia de bacterias en loshe#ocultivos ha sido a#$lia#ente ace$tado3 <e hecho, una gran cantidadde estudios han de#ostrado 2ue la tincin de he#ocultivos con naranja deacridina es tan sensible co#o el subcultivo ciego $ara la deteccin inicial dehe#ocultivos $ositivos3

2IE;L9NEELSEN </AAR=4as $aredes celulares de ciertos $ar6sitos * bacterias3 !ontienen 6cidos

grasos 86cidos #iclicos9 de cadena larga 8- a L 6to#os de carbono9 2ueles con5eren la $ro$iedad de resistir la decoloracin con alcoholF6cido,des$us de la tincin con colorantes b6sicos3 Por esto se deno#inan 6cidoFalcohol resistente3 4as #icro bacterias co#o M3 tuberculosis * M3 #arinu# *los $ar6sitos coccídeos co#o !r*$tos$oridiu# se caracteri"an $or sus$ro$iedades de 6cidoFalcohol resistencia3 4a coloracin cl6sica de EiehlFeelsen re2uiere calenta#iento $ara 2ue el colorante atraviese la $aredbacteriana 2ue contiene ceras3 )e ha desarrollado una coloracin de 6cidoFalcohol resistencia #odi5cada 2ue diferencia las es$ecies de ocardia8bacterias ra#i5cadas 5la#entosas cu*as $aredes celulares contienen

6cidosFgrasos de unos - 6to#os de carbono9, de los actino#iceos 8#u*se#ejantes $ero no 6cidoFalcohol resistentes93 ocardia s$$ son



decoloradas $or la #e"cla 6cidoFalcohol est6ndar $ero no $or untrata#iento #6s suave con 6cido sulf=rico ,- a 1C3 &stos #icroorganis#osse deno#inan 6cidoFalcohol resistentes $arciales o dbiles3&l frotis se ti0e durante unos - #in con !arbolfucsina a$licando calor suave34avar con agua3 <ecolorar con alcohol etílico L-C con un C de !lH

concentrado3 4avar * te0ir durante FN seg con A"ul de Metileno 8color decontraste93 4avar * secar

/LANCO DE CALCO-L'OR4as $aredes celulares de los hongos 5jan el colorante blanco de calco 7=orau#entando considerable#ente su visibilidad en los tejidos * otras#uestras3 )eg=n fue descrito $or Hageage * Harrington, este colorante see#$lea en lugar de D:H al 1C $ara el e%a#en inicial de los #aterialesclínicos3 Ta#bin se e#$lea $ara au#entar la visuali"acin de los ele#entos

#orfolgicos de los cultivos $uros de los hongos3 &n algunos laboratorios hasu$lantado al a"ul de lactofenol en #uchas a$licaciones3 4os organis#os7orecen con lu" blancoFa"ulada o verde #an"ana, seg=n la fuente lu#inosa2ue se utilice3

III1 METODO E>&ERIMENTAL

a= COLORACION SIM&LE

*1 3)e to# una $e2ue0a cantidad de la $laca 2ue contenía lasie#bra de Streptococcus agalactiae con el asa de

sie#bra * la es$arci#os en el $orta objeto 8li#$io *desinfectado9 agregando una gota de agua destilada3



(1 ija#os al calor la $ortaFobjeto, a travs del #echero3

?1 !ubri#os el $orta objeto correcta#ente seco con a"ul de#etileno * deja#os actuar $or #inutos3

@1 4ava#os con agua a chorro lento, retirando la #a*orcantidad de coloracin a"ul $osible * deja#os secar3



+1 :bserva#os al #icrosco$io 3

= COLORACION !RAM

*1 )e utili" co#o cultivo Shigella fexneri(1 )e to#o una $e2ue0a cantidad de la $laca 2ue contenía la

sie#bra de con la asa de sie#bra * la es$arci#os en $ortaobjeto 8li#$io * desinfectado9 agregando una gota de aguadestilada 3

shigella



?1 3ija#os al calor el $ortaFobjeto , a travs del #echero 3

@1 !ubri#os el frotis con reactivo de cristal violeta durante un #inuto *luego lo lava#os agua lenta#ente3

+1 !ubri#os el frotis con solucin de lugol * lo deja#os durante +#inutos3

1 4ava#os con agua corriente, * a$lica#os lenta#ente el alcoholFacetona3



B1 Volve#os lavar el frotis * agrega#os fuscina fenicada 3

1 4ava#os con agua corriente * deja#os secar, $ara luego observarlo

en el #icrosco$io 3

c= COLORACION ACIDO RESISTENTE



a= )e utili"o co#o cultivo Enterobacter cloacas= )e to#o una $e2ue0a cantidad de la $laca 2ue contenía la sie#bra

de con la asa de sie#bra * la es$arci#os en $orta objeto 8li#$io *desinfectado9 agregando fucsina fenicada al -C * deja#os re$osar Nsegundos antes de calentarlo3

c= !alenta#os la $re$aracin con suavidad en el #echero de alcohol$or debajo del $ortaobjeto, haciendo 2ue se des$rendan algunosva$ores * evitando 2ue la fucsina hierva , esto se re$iti $or + veces3



"= &nfría#os el $ortaFobjeto con la #uestra * lava#os con aguacorriente 3<ecolora#os con alcohol . 6cido hasta 2ue no arrastrecolorante3

e= Procede#os a cubrir el $orta objeto con a"ul de #etileno $or 1

#inuto 3

1 4ava#os con agua corriente el $orta objeto * lo de#os secar$ara observarlo en el #icrosco$io3



"= COLORACION NE!ATIA*1 !oloca#os varias asadas de cultivo en un $orta objeto li#$io,

cerca de uno de los bordes , el cultivo utili"ado fue Escherichia

coli 3

(1 !oloca#os un volu#en igual de tinta china cerca del cultivo * los#e"cla#os con el cultivo hasta es$arcirlo hasta todo el $orta objeto3

?1 <eja#os secar el frotis3 cubri#os con fucsina fenicada durante1 segundos, enjuaga#os con agua * luego lo deja#os secar,Procede#os a observarlo en el #icrosco$io 3

I1 RES,LTADOS . DISC,SION

MÉTODOS DE COLORACIÓN

Método de coloracion

microorganismo Coloración

simple

Coloracion de la

Gram

Coloraci3n

aci"oresistente

Coloración de

esporas

Coloración

negativa:Gram Gram -



+ tinci3nespecial o"e 2ie8l9Neelsen </AAR=

Estreptococcusagalacteae

+++ ~ ~ ~ ~ ~

Shigella fexneri ~ ~ ++ ~ ~ ~

Enterobacter

cloacae

~ ~ ~ -- ~ ~

~ ~ ~ ~ ~ ~ ~

Escherichiacoli

~ ~ ~ ~ ~ +++

No se presento: ---

No se realizo:~ Muestra encontradas en microscopio:+++

1. PRIMER MICROORGANISMO:Estreptococcus agalacteae

• <urante un tie#$o deter#inado * luego se lava * acontinuacion el$ortaobjetos se seca * se e%a#ina , en algunos caso se hace uso deun #ordiente $ara auentar la a5nidad de la #uestra biologica $orun colorante otra es cubrir una estructura 8co#o un 7agelo9 $aradarle #a*or es$esor * facilitar la observacion des$ues del te0ido3 &lcolorante se a$lica e%tendida#ente una de las funciones de una#ordiente es au#entar la a5nidad de la #uestra biolgica $or ucolorante , cubrir otra estructura387agelo9$ara darle #a*or es$sor *

fragilidad a la observacin des$us del te0ido3

De que manera lo

identifico

Se mostró una

coloración del azul

metileno identificando al

microorganismo .

https://www.google.com.pe/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja&uact=8&sqi=2&ved=0CBsQFjAA&url=http%3A%2F%2Fes.wikipedia.org%2Fwiki%2FEscherichia_coli&ei=As10VfOXKoergwTFjYKoBw&usg=AFQjCNHC0WRgPJhIbTeYuO4iDTx9tV8tzg&bvm=bv.95039771,d.eXY







Ti0e #e#brana cito$las#a de la bacteria encontrado enIntro"ucci3n a la #icroiología escrita $or Gerard J3 Tortora,(erdell ;3

. SEGN!O MICROORGANISMO: Shigellaspp fexneri

4as bacterias Gra#Fnegativas tienen una bica$a li$ídica gruesa en la$arte e%terior, 2ue es selectiva#ente $er#eable, no todo $uede$asan a travs de ella, * una de esas cosas es la tincin de Gra#3encontrado en Microbiología clínica práctica escrita por Pedro García

Martos

!. "ERCER MICROORGANISMO: Enterobacter cloacae

la $ro$iedad de la acido alcohol resistencia no se conoce a fondo $erose sabe 2ue solo las celulas intactas con alto contenido li$ídico$oseen este car6cter , de$endiente dela #a*or solubilidad del

colorante fenicado en los lí$idos celulares 2ue en decolorante son las#icobacterias (AA; $or e%celencia $rinci$al#ente su contenido

De que manera lo

identifico

Se o"ser#o una tinción

ro$iza esto se de"e por el

colorante usado como

contrastador.

encontrando Gram

negativas

De que manera lo

identifico

No se pudo identificar

zonas coloradas estose de"e a que el

microorganismo no es

acido resistente por ello

se #io de color azul



fosfoli$idico abarca KC de $eso secototal, en la fraccioninsa$oni5cable se encuentran sustancias de elevado $eso #olecularco#o el acido #icolico 2ue es el res$onsable del acido alcoholresistencia encontrado en Intro"ucci3n a la #icroiología escritapor Gerard J3 Tortora, (erdell ;3

• 4as $aredes celulares de ciertas bacterias contienen 6cidos grasos86cidos #iclicos9 de cadena larga 8- a L 6to#os de carbono9 2ueles con5eren la $ro$iedad de resistir la decoloracín con alcoholF6cido, des$us de la tincin con colorantes b6sicos3 Por esto sedeno#inan 6cidoFalcohol resistentes3

4a coloracin cl6sica de EiehlFeelsen re2uiere calenta#iento $ara2ue el colorante atraviese la $ared bacteriana 2ue contiene ceras3 Alsus$ender el calenta#iento * enfriar con agua, $rovoca una nuevasolidi5cacin de lo 6cidos grasos de #odo 2ue el colorante *a no$uede salir de las bacterias3 Por otro lado, elcalenta#iento au#enta la energía cintica de

las #olculas del colorante lo cual ta#binfacilita su entrada a las bacterias3 4asbacterias 2ue resisten la decoloracin son decolor rojo * las 2ue no, se ven de color a"ul*a 2ue se utili"a a"ul de #etileno co#otincin de contraste3encontrado enMicroiología clínica prctica Escrita por&e"ro !arcía Martos

%. CAR"O MICROORGANISMO: nose reali#o

&. $IN"O MICROORGANISMO:Ec%eric%a coli

De que manera lo

identificoSe presento

r'pidamente la

coloración azul de la

tinta c(ina en

microorganismo como

una zona transparente

que rodea a la pared



1 CONCL,SIONES

• &n la $r6ctica se anali" en base a la teoría las distintos #todos decoloracin * se reali" su res$ectivo ensa*o

• &l #icroorganis#o Estreptococcus agalacteae se $uso anali"ar

con ra$ide" en el #icrosco$io sin necesidad de ning=n #ordiente• Mediante el an6lisis del #todo de coloracin Gra# se $udo

deter#inar 2ue el #icroorganis#o o inoculo era un Gra# negativodebido a su descoloracin

• &l #icroorganis#o usado fue el Shigella fexneri este se $udoobservarlo al llevarlo al #icrosco$io su color roji"a característica$rinci$al de la G;AM negativa

• 4os #icroorganis#o acido resistentes #ediante la $r6ctica se $udodeter#inar 2ue estos $oseen un gran contenido fosfoli$idico 2uehace 2ue $esar de un descolorante $er#ane"can del color de su

colorante3• &n caso del Enterobacter cloacae no es acido resistente debido a

2ue este ca#bio a color a"ul 3si hubiese sido acido resistente seria decolor roji"o

• &n caso del Ec8eric8a coli se observ una "ona trans$arente 2uerodea a la $ared $er#itiendo deter#inar la ubicacin dela c6$sulabacteriana3

I1 C,ESTIONARIO

*1 F0u$ i#portancia tiene la pare" celular acteriana en lacoloraci3n "e !ra#G

4a tincin de Gra# es uno de los #todos de tincin #6s i#$ortantes en ellaboratorio bacteriolgico * con el 2ue el estudiante debe estar$erfecta#ente fa#iliari"ado, *a 2ue $er#ite diferenciar dos grandes gru$osde bacterias 8Gra#O * Gra#F9, seg=n se co#$orten ante esta tincin3 &lfunda#ento radica en la diferente estructura de la $ared celular de a#bosgru$os@ las bacterias Gra#O tienen una gruesa ca$a de $e$tidoglicano ensu $ared, #ientras 2ue las bacterias Gra#F tienen una ca$a de

$e$tidoglicano #6s 5na * una ca$a li$o$olisacarídica e%terna3 Tras la tincincon el $ri#er colorante 8!ristal violeta9 se efect=a un lavado con etanol 2uearrastrar6 al colorante slo en las Gra# 8F9, #ientras 2ue en las Gra# 8O9 elcolorante 2ueda retenido * las clulas $er#anecer6n a"ules3 4as clulasGra# 8F9 se te0ir6n des$us con un colorante de contraste 8safranina9 $ara2ue $uedan observarse3

(1 FCules son las "i7erencias Huí#icas i#portantes Hue e4plican elesta"o ci"o9resistenteG

4a ;esistencia acidoF alcohol tiene ca$acidad de incor$orar ciertos

colorantes * retenerlos des$us de so#eterlos a la accin de 6cidos *alcoholes * est6 deter#inada $or la $resencia en la $ared celular de los



6cidos #iclicos 2ue son 6cidos grasos de cadenas ra#i5cadas de alto $eso#olecular 8N a 6to#os de carbono93 4as #icobacterias son bacilos6cidoFalcohol resistente, corto, ligera#ente curvo3 &l gneroM*cobacteriu#, incluido en esta clasi5cacin, co#$rende es$ecies$atgenas $ara el ho#bre, ani#ales * es$ecies sa$r5tas3 &l grado de

“6cidoFalcohol resistenciaQ es variable entre las es$ecies de este gnero *est6 relacionado #uchas veces con las condiciones culturales, no $udiendoutili"arse esta diferencia $ara distinguirlos entre sí3 4os bacilos “6cidoFalcohol resistentesQ 8(AA;9 se observan de color rojo al ser coloreados conlos colorantes $ara Eiehl eelsen, #ientras 2ue otros gr#enes * clulasto#an distintos tonos de a"ul debido al a"ul de #etileno 2ue se utili"a co#ocolorante de contraste3 4a coloracin de Eiehl eelsen constitu*e unatcnica sencilla r6$ida * econ#ica, de baja sensibilidad3

II1 RE-ERENCIAS

• M/!;:(/:4:GRA !4R/!A M&</:) <& !?4T/V: 8!?;): +1+F+198G;?P:) 1 * +9 universidad -,,

• Microbiología Mdica O )tudent!onsult, Na ed3, PatricS ;3 Murra*,edicin + , +L,, N 3L

• !entro acional de(io$re$arados3 4a Habana, !uba, &nterococcus,#edios de cultivo convencionales * cro#ognicos ,M)c3 Maril*n <ía"

Pre", <r3 !3 !laudio ;odrígue" Martíne", <ra3 !3 ;aisaEhurbenSo,• !ruicSshanS, ;3 Medical Microbiolog*, 11th ed3, 4ondon@ 4ivingstone

4T<, 1LN, $3+N3 F Macaddin3 1L-3• Media forisolationFcultivationFidenti5cation#aintenance of #edical

bacteria, volu#e 13 illia#s UilSins, (alti#ore, Md3 F Gras#icS31LL+3

• /n /senberg 8ed39, !linical#icrobiolog*$rocedureshandbooS, vol3 13A#erican )ociet*forMicrobiolog*, ashington, <3!3

• ;ojas , !haves &, García 8+N9 (acteriología <iagnstica, !osta;ica, ?niversidad de !osta ;ica, acultad de Microbiología3

•

García ;, !rdoba ;, 81L9 Manual /lustrado $ara 4aboratorio de(acteriología * Micología Veterinaria3









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Microbiologia Lab Nº4