BACTERIAS

BACTERIASM.C. VANIA MARILYN MARIN RANGELCARACTERISTICAS GENERALESDEFINICION Y UBICACIN TAXONOMICAM.O. UNICAELULARES SE REPRODUCEN POR FISION BINARIAVIDA LIBRE; ALGUNOS SON INTRACELULARES: Clamydia y RicketsiasINTEGRAN EL REINO DE LAS PROCARIOTASADN CIRCULAR CERRADOMORFOLOGIA MICROSCOPICA

Staphylococcus aureusEnterococcus faecalisBacillus megateriumRodospirillum rubrumFORMAS MICROSCOPICAS ATIPICAS

RELACION DE TAMAO ENTRE BACTERIAS Y VIRUS6Elementos estructuralesCpsula: Se presenta en muchas bacterias, sobre todo patgenas. Es una estructura viscosa compuesta por sustancias glucdicas. Tiene funcin protectora de la desecacin, de la fagocitosis o del ataque de anticuerpos.Pared Bacteriana: Formada por pptidoglucanos y otras sustancias. Es una envoltura rgida que soporta las fuertes presiones osmticas a las que est sometida la bacteria. Por la estructura de su pared distinguiremos las bacterias Gram+ y Gram-.Membrana plasmtica: Similar en estructura y composicin a la de las clulas eucariotas. Presenta unos repliegues internos llamados mesosomas.Mesosomas: Repliegues de la membrana con importantes funciones pues contienen importantes sustancias responsables de procesos metablicos como el transporte de electrones, la fotosntesis o la replicacin del ADN.Ribososmas: Similares a los de la clula eucariota aunque de menor tamao. Intervienen en la sntesis de protenas.Cromosoma bacteriano: Est formado por una sola molcula de ADN de doble hlice, circular y no asociado a histonas.Plsmidos: Molculas de ADN extracromosmico tambin circular.Inclusiones: Depsitos de sustancias de reserva.Fagelos: Estructuras filamentosas con funcin motriz, formados por fibrillas proteicasFimbrias o Pili: Filamentos largos y huecos con funciones relacionadas con el intercambio de material gnico y la adherencia a sustratos.Esquema clula procariota

78Bacteria EncapsuladaEn numerosas bacterias se forma en la parte externa de la pared una cpsula viscosa compuesta por sustancias glucdicas. Esta envoltura, que se presenta en casi todas las bacterias patgenas, las protege de la desecacin y de la fagocitosis por los leucocitos del hospedador, as como del ataque de los anticuerpos, lo que aumenta la virulencia de las bacterias encapsuladas. La presencia de la cpsula no es, sin embargo, un carcter diferenciador, pues determinadas bacterias pueden o no formarla en funcin de los medios de cultivo.

9Reproduccin BacterianaReproduccin asexualGeneralmente las bacterias se multiplican por biparticin o divisin binaria, tras la replicacin del ADN, que est dirigida por la ADN polimerasa de los mesosomas, la pared bacteriana crece hasta formar un tabique transversal que separa las dos nuevas bacterias. (Simple divisin)

10Crecimiento Bacteriano

Rezago o letargo: las bacterias se estn adaptando a las condiciones ambientales para iniciar su crecimiento, lo que requiere de la sntesis de nuevas enzimas y protenas especficas.Exponencial: las bacterias se dividen ilimitadamente, porque las condiciones ambientales son ptimas y no existe ningn tipo de limitacin para su desarrollo.Estacionaria: el crecimiento experimenta una reduccin por el agotamiento de los nutrientes y por la acumulacin de desechos metablicos producidos por las propias bacterias, que les resultan letales. Finalmente el aumento del nmero de individuos se detiene por completo, alcanzando la fase estacionaria mxima, y luego comienza a disminuir.Declinacin o muerte: la mortalidad de la poblacin aumenta sostenidamente, lo que determina su extincin.Preparacin y Tincin de las muestrasAunque los microorganismos vivos se pueden examinar directamente con un microorganismos ptico, a menudo hay que fijarnos y teirlos para aumentar la resolucin, acentuar las caractersticas morfolgicas y conservarlos para su estudio en el futuro.2 tipos de tincionesPositivas: se emplea el uso de colorantes que tien al microorganismo y no al medio.Negativas: se emplea el uso de colorantes que no tienen afinidad por los constituyentes celulares (Ejemplo: nigrosina). Tien al medio y no a las bacterias, sirven para ver celulas con capsulas de mucopolisacaridos.Simples: uso de un solo colorante. Sirven para distinguir formas.Diferenciales: uso de un colorante inical y luego un colorante de contraste. Sirven para diferenciar distintos tipos de celulas (Ejemplo: tincion Gram)TincionesPermite distinguir dos grandes grupos de bacterias que poseen diferencias estructurales en la pared celular.

PeptidoglicanoPolimero de N-acetilglucosamina y N-acetilmuramico unidos por peptidos.Tincion Gram

Peptidoglicano

Tincion GramTincion Gram1) Preparar un extendidoA partir de cultivos en medio liquido: Se toma un poco de cultivo con el ansa y se desparrama sobre un portaobjeto.A partir de cultivos en medio solido: Se apoya el ansa sobre una colonia, luego se coloca una gota de agua sobre el portaobjeto y se desparrama el material con el ansa..Protocolo2) Fijar el materialUna vez que el material esta seco, pasar el portaobjeto sobre el mechero.Tincion Gram

3) Cubrir el portaobjeto con Cristal violetaSe deja el colorante durante 20 segundos.

4) Lavar con agua

Gram +Gram_5) Agregar el mordiente (lugol)(Lugol: solucion de I2 y KI). Se deja actuar el mordiente durante 20 segundos y luego se lava con agua.Tincion Gram6) Agregar el decolorante(Decolorante: solucion de acetona y EtOH).

El agregado del decolorante produce una DESHIDRATACIN de la pared de pptido glicano que la transforma en una barrera fsica impermeable al solvente. Como consecuencia se impide el lavado del cristal violeta, quedando atrapado en el interior de las bacterias Gram +. Gram +Gram_Tincion Gram7) Agregar el colorante de contraste (safranina)

8) Lavar con agua

Gram +Gram_

Tincion GramRosa (Gram -)Violeta (Gram +)Pared celular bacterianaEstructura exclusiva de las bacteriasFunciones:Confiere rigidezResponsable de la forma celularBarrera contra ciertos agentes txicosComponente bsico: Peptidoglicano

Peptidoglicano o murena

Envuelta de Grampositivos

Envuelta de Gramnegativos

EndotoxinaLipopolisacrido (LPS)

Diferencias Grampositivos y GramnegativosGrampositivosGramnegativos

No siempre presenteNaturaleza polisacardica o peptdicaPropiedades antifagocticasCpsulaTincion de esporasEndospora bacteriana: estructura bacteriana altamente resistente al calor y a condiciones ambientales desfavorables. El principal desencadenante de la formacon de esporas es la falta de nutrientes. Se observan en los generos Bacillus y Clostridium (gram +).Son altamente resistentes a:-Calor-Desecacion-Acidos-Alcali-Desinfectantes

esporangioexosporiumCubierta de la esporacortezaNucleo (pared celular, membrana plasmatica, acidos nucleicos, etc...)

Clasificacion en funcion de su posicionTincion de esporasPreparacion del extendido y fijacion por calor.Cubrir con verde de malaquita calentando durante 3 minutos.Lavar con agua.Agregar colorante de contraste (safranina).Lavar con agua.Protocolo:Tincion de esporas

Tincion de acido resistencia (Ziehl-Neelsen)Permite distinguir bacterias del genero Mycobacterium. Estas poseen en su pared acido micolico (hidroxilipido de cadena ramificada que se encuentra acomplejado al peptido glicano de la pared celular.

Protocolo:Preparacion del extendido y fijacion por calor.Cubrir el portaobjeto con fucsina fenicada (fucsina basica con fenol).Calentar hasta emision de vapores.Lavar con agua.Agregar decolorante (HCl 3%, EtOH 95%).Lavar con agua.Agregar el colorante de contraste (Azul de metileno).Lavar con agua.Tincion de acido resistencia (Ziehl-Neelsen)TINCION SIMPLELos microorganismos se pueden teir satisfactoriamente mediante Tincin Simple, esto es, utilizando solo un colorante. El valor de esta clase de tincin radica en su simplicidad y facilidad de empleo. El frotis, previamente fijado, se cubre con un colorante durante el tiempo adecuado, se lava el exceso de colorante con agua y se seca el portaobjetos. Los colorante es bsicos como cristal violeta, azul de metileno y carbolfucsina se emplea con frecuencia para determinar el tamao, la forma y la organizacin de las bacterias.

TINCION DIFERENCIALEn el primer paso de esta tincin, se tie con el colorante bsico cristal violeta (violeta de genciana), el colorante primario. A continuacin, se trata con una solucin yodada que acta como mordiente.

Esto es, el yodo aumenta la interaccin entre la clula y el colorante, de forma que aquella se tie ms intensamente.

Luego se decolora el frotis lavndolo con etanol o acetona. Este paso produce el aspecto diferencial de la tincin de Gram; las bacterias Gram positivas retienen el cristal violeta, mientras que las Gram negativas lo pierden y aparecen incoloras.

Finalmente, el frotis se tie de nuevo con un colorante bsico de diferente color al cristal violeta. La safranina es el colorante de contraste ms comn y tien las bacterias Gram negativas de rosa o rojo, dejando a las Gram positivas de color violeta.

La tincin de acido- alcohol resistencia es otro mtodo importante de tincin diferencial. Unas pocas especies, particularmente Mycobacterium no se unen fcilmente a colorantes simples y hay que teirlas con un tratamiento ms fuerte: calentando una mezcla de fucsina bsica y fenol. Una vez que la fucsina bsica ha penetrado en la cella con la ayuda del calor y el fenol, las clulas acido-alcohol resistentes no se decoloran fcilmente con una solucin acidoalcohlica, permaneciendo de color rojo. Esto se debe al elevado contenido en lpidos de las paredes de estas clulas; en partculas, los cidos miclicos, los responsables de la propiedad de cido- alcohol resistencia. Las bacterias no cido-alcohol resistentes se decoloran con la solucin acidoalcoholico, por lo que se tien de azul con azul de metileno (tincin de contraste).Este mtodo se emplea para identificar Mycobacterium tuberculosis y M.Leprae., agente patogenos responsables de la tuberculosis y la lepra.

TINCION DE ESTRUCTURAS ESPECIFICASUno de los mas sencillos es la tincin negativa, tcnica que revela la presencia de cpsulas difusa alrededor de muchas bacterias. Se mezcla las bacterias con tinta china o colorante de nigrosina y se extienden en una capa fina sobre el portaobjetos. Despus de secarlo al aire, las bacterias aparecen como cuerpos ms claros en medio de un fondo azul oscuro, porque la tinta y las partculas de colorantes no pueden penetrar ni la clula bacteriana ni su cpsula.

La extensin de la regin de luz est determinada por el tamao de la cpsula y por la propia clula. Apenas se produce modificacin de la forma bacteriana y la clula se puede teir posteriormente para conseguir una mejor visibilidad.

Las bacterias de los gneros Bacillus y Clostridium forman una estructura de supervivencia en condiciones ambientales desfavorables, excepcionalmente resistentes durante periodos largos de tiempo. Esta estructura se denomina endospora pues se desarrolla dentro de la clula. La morfologa y la localizacin de las esdosporas varan con la especie y son a menudo de un gran valor para la identificacin bacteriana; pueden ser esfricas a elpticas, con un dimetro menor o superior al de la bacteria madre. Se puede observar con el microscopio de contraste de fases o mediante tincin negativa. Las endosporas no se tien bien o mediante tincin negativa. Las endoporas no se tien bien con la mayora de los colorantes, pero una vez teidos, resisten intensamente la decoloracin. Esta propiedad es la base de la mayora de los mtodos de Tincin de endosporas..

Con el metodo de Schaeffer-Fulton, las endosporas se tien primero calentando las bacterias con verde malaquita, la preparacin con agua para eliminar el resto de colorante y se contratie con safranina. Esta tcnica revela endosporas de color rosa a rojo

TINCION DE FLAGELOSLos flagelos son estructuras de locomocin en forma de hilo, tan delgados que slo se pueden observar directamente con el microscopio electrnico. Para observarlos con el M. optico, se aumenta su grosor cubrindolos con mordientes, como cido tnico y alumbre de potasio, y tindolos con pararosanilina o fucsina bsica. Los mtodos de tincin de flagelos ofrecen una informacin taxonmica importante acerca de su presencia y el modelo de su distribucin.

45Relacin Bacterias y AntibiticosEl balance del cuerpo entre la salud y la enfermedad se llama homeostasis. Que depende de la relacin del cuerpo y las bacterias con que vive. Comnmente las bacterias invasoras son destruidas por las clulas de sangre y por diversas acciones del sistema inmune. Cuando hay demasiadas bacterias como para ser manejadas por el sistema, o la persona infectada tiene una resistencia baja a la infeccin, resulta la enfermedad y se necesitan los antibiticos para ayudar a restaurar la homeostasisAntibiosisesLa relacin general entreunAntibiticoOrganismo InfecciosoHomeostasis46Antibiticos Sustancias obtenidassondeBacterias u HongosSntesis QumicasEmpleadas en El Tratamiento de InfeccionesVa de Administracin puede sersuOralTpicaInyectable47Antibiticos Actan a travs de dos mecanismos principalesAccin Bactericida Accin BacteristaticaMatan microorganismos existentesImpide su reproduccin

48Tcnica del antibiograma

ACTIVIDADES1.-CUESTIONARIO

2.-INVESTIGAR LOS GENEROS BACTERIANOS RESPONSABLES DE INFECCIONES:RESPIRATORIASGASTROINTESTINALESVIAS URINARIAS SEXUALESCUTANEAS (OJOS, PIEL ) INVESTIGAR CARACTERISTICAS GENERALES ,MORFOLOGICAS Y GRAM.