8/2/2019 Tecnicas Imunologicas- Parte 1

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TCNICAS IMUNOLGICAS

Parte 1

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IMUNODIAGNSTICO: Diagnsticolaboratorial por meio de tcnicas

imunolgicas.

Busca: Anticorpo ou Antgeno no organismo do pacientepor meio de ensaios de Precipitao, Aglutinao, Fixaode complemento, Neutralizao ou Imunoensaios queutilizam sinalizadores da interao Ag-Ac com conjugadosligantes, como Imunofluorescncia, Radioimunoensaio,Imunoenzimticos, Imunofluorimtricos e

QuimioluminiscnciaOutros testes: Hipersensibilidade a Antgenos: Reaesintradrmicas e percutneas.

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INTERAESANTGENO-ANTICORPO

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[Ag] + [Ac ] [Ag-Ac]

KA= [Ag-Ac] ([Ag] + [Ac])

KAKA= Constante intrnseca deassociao

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Reatividade Cruzada

Quando os antgenos so estruturalmente

relacionados podendo ocorrer a reatividade de

um anticorpo com outro epitopo antignico.

Anti-A

Ab

Ag A

Anti-A

Ab

Ag B

Epitopocompartilhado

Anti-A

Ab

Ag C

Epitopo similar

Reaes Cruzadas

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FORAS QUE ATUAM NAS INTERAESANTGENO/ANTICORPO

Atua em molculas no polaresfacilitando a aproximao, oschoques moleculares e asligaes.

Molculas que apresentam grupos lateraisinicos de cargas opostas que se atraemfortalecendo a interao Ag-Ac.

Foras fracas que ocorremdevido proximidade fsica entre

as molculas.

A mais fraca das ligaes. Ocorrem entre oncleo de um tomo e a nuvem de eltronsde outro formando dipolos que se atraem.

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Avidez

So as foras totais de interao entre um

antgeno com o anticorpo

Keq = 104

Afinidade

106

Avidez

1010

Avidez

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Metodologias que utilizam reagentes nomarcados:

PrecipitaoAglutinao

Hemlise (Fixao de Complemento)

Metodologias que utilizam reagentes marcadosRadioimunoensaios

ELISA

Imunofluorescncia

Western Blotting

Citometria de Fluxo

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IMUNOPRECIPITAO

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Zona de equivalncia: Ag-Ac se ligam equimolarmenteformando uma rede estvel.

Excesso de antgeno: Oscomplexos podem serdissolvidos quando hexcesso de Ag pois o Ac fica

livre para se ligar a novos Agadicionados diminuindo aformao de complexosinsolveis.

Excesso de Ac: Ocorrereduo de imunocomplexospois todo o Ag estprecipitado e fica Ac livre no

sobrenadante.Pr-Zona

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IMUNODIFUSO

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Imunodifuso radial (Mancini)

Interpretao Dimetro do anel

proporcional concentrao do Ag

Quantitativo Nveis de Ig

Mtodo Anticorpo no gel

Antgeno no poo

Ag Concentrao

Diameter2

AgAgAgAg

Ac no gel

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Imunoeletroforese/Precipitao

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Agglutinao/Hemaglutinao

Definio - testes que possuem como alvo umantgeno de natureza particulada

Aglutinina/hemaglutinina

+

Teste de aglutinao qualitativa

Ag ou Ac

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AGLUTINAO

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Fixao do Complemento

Antgeno misturado com o soro teste Complemento adicionado

Eritrcitos recobertos com anticorpo so adicionados

A quantidade de lise determinada

Ag

Patients

serum

Ag No Ag

Ag

Metodologia

INIBIO DA AGLUTINAO TESTE

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INIBIO DA AGLUTINAO: TESTEDE GRAVIDEZ

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AGLUTINAO EM LTEX:

FATOR REUMATIDEFator Reumatide: Anticorpos que reconhecem eptopospresentes na frao cristalizvel (Fc) da molcula de IgG.A maioria destes Acs so da classe IgM porm pode-se

encontrar tambm Acs IgA e IgG.Teste: Visualizao de aglutinao das partculas de ltexrevestidas pelo antgeno (no caso IgG humana ou decoelho)

Interpretao: Igs com atividade FR esto presentes empequena quantidade e com baixa avidez no soro de amiorparte das pessoas. No caso de artrite reumatide surgeuma alta quantidade de FR de alta afinidade

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Causas virais HBV, HCV, Mononucleose, influenza,AIDS, ps vacinao

Doenas auto-imunes Artrite Reumatide, Lpus

Eritematoseo sistmico, Esclerosesistmica, polimiosite,dermatomiosite, sndrome deSjrgren, cirrose biliar, hepatiteauto-imune, etc

Neoplasias Aps irradiao ou quimioterapia

Infeces bacterianas Tuberculose, sfilis, hansenase,salmonelose, endocardite bacterianasubaguda, brucelose, borreliose

Doenas parasitrias Malria, esquistossomose, filariose,tripanossomase

Enfermidades em que o encontro de Fator Reumatide comum