Lab 1 Productos Naturales I

7/14/2019 Lab 1 Productos Naturales I

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Laboratorio de Productos Naturales I 2013

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CURSO: Productos Naturales I

PROFESOR: Danilo Barreto YayaNOMBRES:

Morales Centeno, Miguel

Ochoa Ascencios, Alexandra

Sernaque Amaya, Carlos

2013I

PREPARACIN Y

RECONOCIMIENTO DE

METABOLITOS

SECUNDARIOS


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I. RESUMEN

Las plantas producen una serie de metabolitos secundarios, algunos responsables

de la coloracin, otras vinculadas con interacciones ecolgicas. Estos compuestos

participan en el mecanismo de defensa de las plantas, lo que a su vez ha generadouna gama de usos y aplicaciones en la agricultura y en la medicina.

Por el potencial que representan estos metabolitos, las investigaciones no slo se

han dirigido a la elucidacin de estructuras qumicas y evaluacin de su actividad,

pues constituyen principios bsicos para fabricacin de frmacos.

La identificacin de metabolitos a travs de estos mtodos permiti observar

diferencias entre las especies vegetales escogidas, como en la actividad de

saponinas, o la presencia de polifenoles y alcaloides.

Este tipo de fitocompuestos identificados tienen una diversidad de bioactividades,

entre ellas la antioxidante, a lo que se adiciona su origen natural. Estos estudios

resultan ser beneficiosos para la salud en seres humanos y animales y ayudan a

elucidar la etnobotnica de las comunidades.

II. OBJETIVOS

Seleccionar y recolectar las muestras para el reconocimiento de metabolitossecundarios.

Lavar y desinfectar las muestras

Estabilizar las muestras por el secado

Preparar los reactivos de identificacin de metabolitos secundarios

Identificar y clasificar los diferentes metabolitos secundarios presentes en el

tejido vegetal por medio de pruebas qumicas de coloracin y precipitacin.

III. MARCO TEORICO

La cosecha de las plantas medicinales est relacionada con el rgano de la planta

que contiene los principios activos relevantes para la medicina natural; es

importante tambin considerar la etapa fenolgica de la planta, la poca del ao y

.la hora de la cosecha. Por ejemplo los alcaloides y los aceites esenciales se

concentran ms durante la maana.


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Metabolitos primarios

Son los productos qumicos resultantes del metabolismo vital de todo ser vivo, son:

los carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos.

Metabolitos secundarios

Son subproductos de rutas metablicas normales que ocurren en ciertas especies,

siendo particulares dentro de un grupo taxonmico, estado de vida o tejido,

presentando una distribucin restringida dentro del Reino vegetal, dando origen a

la quimiotaxonoma.

Su ocurrencia depende de ataque de patgenos, predadores, cambios trmicos o

lumnicos, deficiencias nutricionales o presencia de otros organismos intra o

interespecficos. El metabolismo secundario determina la especializacin, puede no

ser importante para la clula, pero si para el organismo como un todo.

Reconocimiento de los metabolitos

Se realiza mediante pruebas fitoqumicas preliminares, consisten en reacciones

qumicas que producen una alteracin rpida en la estructura molecular del

compuesto, por ejemplo modificacin de un grupo funcional, apertura de un anillo,

formacin de un aducto o un complejo, lo cual da por resultado un cambio de

color, la formacin de un precipitado o el desprendimiento de un gas, lo cual nos

indica la presencia o ausencia de un metabolito secundario en particular.

Reconocimiento de alcaloides.

La base de un alcaloide es soluble en solventes orgnicos y

pueden formar sales solubles en solventes polares, cuando

se encuentran en cidos minerales diluidos.

Su presencia se observa con los reactivos yodados de

Dragendorff, Mayer, Wagner, Bouchardat, etc., con los cuales precipita.

Reconocimiento de Flavonoides

Son compuestos fenlicos con 15 tomos de

carbono, su esqueleto se representa por el

sistema C6-C3-C6.

La aparicin de colores naranja, rosado, rojo o


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violeta con el reactivo de Shinoda es prueba positiva para la existencia de

flavonoides en la muestra.

Reconocimiento de cardiotnicos

Una aglicona cardiotnica es un

ncleo esteroidal con los grupos

metilo C18 y C19, un grupo

hidroxilo en el C3 y un anillo

lactnico ,-insaturado de 4

miembros, unido al C17,

estimulan el msculo cardaco

cuando estn en la forma de glicsidos.

Reconocimiento de Saponinas

Son glicsidos solubles en agua que pueden

hemolizar la sangre y disminuir la tensin

superficial del agua, formando abundante

espuma. Por hidrlisis se desdoblan en

carbohidratos y una aglicona llamada

sapogenina.

La sapogenina puede tener el sistema anular esferoidal o de un triterpeno

pentacclico. Los anillos E y F de la saponina esferoidal conforman el llamado

sistema espirostanal. El enlace glicosdico se forma siempre con el carbono 3.

Reconocimiento de Cumarinas

Son compuestos fenlicos con la estructura de1-

benzopiran-2-ona. Presentan fluorescencia bajo la

luz ultravioleta a 365 nm.

Reconocimiento de taninos


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Son productos de excrecin de muchas plantas, como mecanismos de defensa

contra organismos parsitos. Comnmente estn en hojas, ramas y debajo de la

corteza.

Son polmeros de polifenoles y se clasifican en:

Taninos hidrosolubles o piroglicos, son steres fcilmente hidrolizables, se

reconocen con el reactivo gelatina sal y con solucin de FeCl3 con el que dan

color azul. Son comunes en plantas dicotiledneas.

Taninos condensados, por hidrlisis dan azcar y cido elgico, algunos son

llamados proantocianidinas. Tambin se reconocen con solucin de FeCl3, con el

que dan coloracin verde.

Reconocimiento de esteroides y/o triterpenoides

Presentan la estructura del

ciclopentano

perhidrofenantreno,

metilos en los carbonos 10

y 13 y un radical lineal en el

carbono 17. La formacin

de colores rojo, azul o

violeta o verde con el reactivo de Liebermann Bourchard, es positivo de la

reaccin.

Reconocimiento de quinonas

Son dicetonas cclicas insaturadas, pueden ser

benzoquinonas, naftoquinonas, antraquinonas,

fenantroquinonas.

Se reconocen con el reactivo de Borntrager, si la capa

acuosa se colorea de rosado a rojo intenso es una prueba positiva

Reconocimiento de antocianinas

Son pigmentos flavonoides que se comportan como indicadores cido base. Se

encuentran en la savia de las plantas y en forma de slidos amorfos o cristalinos en

las hojas de tejido leoso y en frutos.


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IV. MATERIALES

bureta de 25 ml

algodn

soporte universal

pinzas dobles

papel filtro

capilares

10 tubos de ensayo

parrilla de calentamiento

vaso de precipitados de 100 ml

lmpara de rayos UV

gradilla

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

PREPARACIN DE LAS MUESTRAS PARA EL TAMIZAJE FITOQUIMICO

1. Lavamos las partes de la planta seleccionadas. Llantn, t verde, rosas rojas,

manayupa y la soya.


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2. Las desinfectamos por inmersin, durante 10 minutos con solucin NaClO (2 gotas

por litro de agua).

3. Las secamos en estufa a 40C por 24 horas.

4. El material seco se muele hasta obtener partculas muy pequeas.

5. Para cada una de las siguientes muestras se trabaj de la siguiente manera:

RECONOCIMIENTOSDEMETABOLITOSSECUNDARIOS


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1. Seleccionar, recolectar limpiar y estabilizar las muestras frescas.2. RECONOCIMIENTO DE ALCALOIDES

El reconocimiento de alcaloides se realiz en:

Plantago major(LLANTN)

The sinensis (TE VERDE)

Desmodium molliculum (MANAYUPA)

Pesamos toda la cantidad de lamuestra que tenemos luego la

dividimos y trabajamos solo con lamitad.

Llevamos a bao mara por 5

minutos para que los vaporescaliente la suspensin.

Agregamos HCl al 5% demodo que lo cubra y lo

humedezca en una placapetri.

Luego cuando ya todo este humedecido dejamos decantarporque necesitamos la solucin para filtrar.


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REACTIVO LLANTN TE VERDE MANAYUPA

Recibimos la solucin en tresdiferentes tubo

Utilizamos los reactivos deWarner, Mayer y Dragendorff

para la deteccin de alcaloides.

A cada tubo le agregamos5 gotas de reactivos que

identifican alcaloides.

Draggendorff, Mayer yWagner.


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3. RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES

El reconocimiento de flavonoides se realiz en manayupa y t verde

Draggendorff Enturbia un poco. Se observa una turbidez,

indicio de alcaloides color

negro.

Enturbia un

poco.

Mayer Enturbia un poco. Enturbia y cambia de

color a naranja.

No se observa

turbidez.

Warger si enturbia Debera formar turbidez,

pero no se observa.

Enturbia un

poco.

Para observar indicio de polifenoles agregamos FeCl3 en manayupa y en te verde.

Manayupa,

presenta un

color verde

petrleo.

Te verde

presenta un

color verde

marrn.

Pesamos 2,5 g de la muestra

luego le agregamos alcoholhasta que se cubra la disolucin.

Y llevamos a bao Mara.


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4. RECONOCIMIENTO DE SAPONINAS

Luego de 5 min. Filtramos

pero como est muy

concentrado le agregamos

Con esto cambia el color, se

vuelve ms claro, se lleva a la

centrifuga para ver la parte

gelatinosa.

Manayupa

T verde

Le agregamos HCl concentrado y

magnesio en polvo.

Ambos cambian de color a

naranja, lo que demuestra la

presencia de flavonoides


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El reconocimiento de saponinas se realiz en Glycine max(SOYA)

5. RECONOCIMIENTO DE TANINOS

Se desmenuz 10 g de

soya con agua, luego

filtramos. Se obtiene una

solucin as:

Separamos en 2 tubos y agitamos durante 1 minuto el filtrado acuoso.

Observamos la

formacin de la

espuma lo que indica


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El reconocimiento de taninos se realiz en manayupa y t verde.

Pesamos 2,5 g de la muestraluego le agregamos agua hasta

que se cubra la disolucin.

Luego de 5 min. Filtramos y leagregamos reactivo de

gelatina-sal.

Se forma precipitado, y lo llevamos a la centrifuga por 5 minutos. Luego

le agregamos Urea 10M y 2 gotas de FeCl3

T verde

Manayupa

Se observa un cambio de color; al manayupa verde oscuro y al t

verde negro, lo que indica la presencia de taninos de las muestras.


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6. RECONOCIMIENTO DE ANTOCIANINA

El reconocimiento de antocianina se realiz en Rosa hybrida (ROSA ROJA)

En un tubo de ensayo hechamos 1graproximadamente de las rosas rojas enparticulas. Agregamos agua. Y llevamos

a bao maria por 5 minutos.

Filtramos la soluciony la recibimos en dostubos con la misma

altura.


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IDENTIFICACIN DE ANTOCIANINA

Agregamos 3 gotas NH4OH Agregamos 2 gotas de HCl

Rojo con una turbidez verde

botella.

Rojo casi fucsia

7. RECONOCIMIENTO DE CUMARINAS

El reconocimiento de cumarinas se realiz en Cuminum cyminum (comino) y

Matricaria chamomilla (manzanilla).

Pesamos 1 g de la muestra

luego le agregamos etanol

hasta que se cubra la

disolucin.


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Tapamos los tubos de ensayo

con papel de filtro (para el

reconocimiento en luz UV). Y

a re amos NaOH.

Llevamos a ebullicin

por 5 minutos.

Retiramos el papel de filtro y lo observamos en luz ultravioleta.

Observamos a 356 nm la

aparicin de una coloracin

fluorescente que se puede

ver amarilla en el papel de

filtro.


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VI. RESULTADOS

Identificacin de Alcaloides

La formacin de un precipitado o turbidez indica la presencia de alcaloides

Mayer Wagner Dragendorff

Manayupa - - -

T verde + + +

Llantn - +/- +

*+/- significa que presenta poca turbidez

La reaccin general que ocurre es la siguiente, con ello se puede derivar para

los dems alcaloides. Tomaremos el ejemplo de cafena en el t verde


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Identificacin de Polifenoles con FeCl3

La formacin de un color verde indica la presencia de polifenoles

FeCl3

Soya +

T verde +

Manayupa +

Llantn +

Los tipos de polifenoles como metabolitos secundarios son los flavonoides,

isoflavonoides, antraquinonas, taninos, etc. Como la reaccin no es especfica

para el tipo de metabolito, utilizaremos uno de los constituyentes polifenlicos

de la planta para las reacciones y de esta manera derivar para los dems.

T verde flavonoide: catequina


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Llantn flavonoide: luteolina

Identificacin de Saponinas en la soya

La soya contiene la soyasaponina I y II:


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Fig 1: Saponinas presentes en glycine max(soya)

Estas saponinas formaron espuma por ms de dos minutos al agitarse

fuertemente. La explicacin es que estas molculas se disuelven en agua y

disminuyen la tensin superficial de sta; por tanto, al sacudir sus soluciones,

se forma una espuma abundante y relativamente estable.

Reconocimiento de Antocianinas en flores rojas

En las flores rojas se encuentra una serie de antocianinas con una estructura

bsica experimentaron la siguiente reaccin al variar el pH del medio.


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VII. DISCUSIN

alcaloides, ya que dio un escaso precipitado con los reactivos de Mayer, Wagner y

Dragendorf, presentando reaccin positiva con los tres reactivos: y para las


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semillas la reaccin fue dudosa, debido a la gran cantidad de colorante presente en

las semillas.

Para las Quininas se realiz la prueba de Borntranger que reconoce antraquinonas,

naftoquinonas, o benzoquinonas, en general todo tipo de quinonas.

El perxido es para oxidar las antraquinonas y/o naftoquinonas que pueden estar

parcialmente reducidas. Con el tolueno extraemos las quinonas de la solucin pero

por la carencia de este reactivo utilicemos ter de petrleo.

El NaOH es el que hace que se forme la sal coloreada rosada-roja lo cual es nuestra

prueba positiva de la presencia de quinonas.

Las Antocianinas para identificar la presencia de antocianinas se tiene que variar el

pH del medio de esta manera da un color rojo oscuro caracterstico en medio

cido y verde azulado en medio bsico.

En las Las cumarinas son un grupo muy amplio de principios activos fenlicos y

tienen en comn la estructura qumica de 1 -benzopiran-2-ona. Se caracterizan

porque presentan fluorescencia bajo la luz ultravioleta a 365 nm. Adems

Producieron fluorescencia bajo la lmpara UV a 365 nm, originando un colorfluorescente de colores como verde o amarilla

VIII. CONCLUCIONES


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Se reconoci la presencia de cumarinas en la ruda (Ruta graveolens) mediante la prueba de

fluorescencia, formando un color verde amrela de muy pequea intensidad pero

muy caracterstico en este ensayo.

Algunas cumarinas poseen propiedades fotoqumicas ya

qu e son capa ce s d e a um en ta r l a sensibilidad de la piel a los rayos

ultravioletas, por eso encuentran aplicacin en la terapia de enfermedades en la

piel como el vitligo

Las cumarianas estn biogenticamente relacionadas a los fenilpropanoides como

flavonoides y ligninas as como a las sustancias derivadas del acetato, como

esteroides y terpenoides, ya que su biosntesis transcurre por ambas vas:

va Shikimato y va Polictido del acetato.

IX. BIBLIOGRAFIA.

Li PV Actividad biolgica del extracto acuoso atomizado de hojas de

Bixa orellana L (Achiote) en animales de experimentacin.

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