Download docx - 12-Determinacion de Vitamina c en Bebidas No Alcoholicas Por Hplc

PRACTICA Nº 12: “DETERMINACION DE VITAMINA C EN BEBIDAS

NO ALCOHÒLICAS POR HPLC”

CURSO : INSTRUMENTACIÓN Y ANÁLISIS

GRUPO : B2

SECCIÓN : V - B

ALUMNA : TORRES SALDAÑA, Marleny

DOCENTE :

Mg. Q.F. Roger Rengifo Penadillos

SECCIÓN ACADÉMICA DE QUÍMICA E INSTRUMENTACIÓN

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOQUÍMICA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

TRUJILLO - PERÚ

2014

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

I. MATERIALES Y EQUIPO:

Material:

Muestra: Bebida no alcohólica: néctar pulp durazno.

Ácido Ascórbico grado reactivo

Equipo de Filtrado con Filtro de Menbrana de Nylon NFM 0,45

(47mm OD- 0,45 um PORE SIZE)

Bomba de vacío

Equipo de ultrasonido

Filtros para jeringa de 0,45 um de tamaño de poro

Jeringas descartables de 10 mL.

Aparatos:

Cromatógrafo líquido HPLC (HP 1050)

INSTRUMENTACIÓN Y ANÁLISIS

CROMATÓGRAFO LÍQUIDO HPLC (HP 1050)


II. PROCEDIMIENTO:

1. FASE MÓVIL .-Preparar 500 mL, filtrar a través de la membrana NMF 0,45 y

desgasar por 10 minutos con ultrasonido.

2. PREPARACIÓN PATRÓN : Pesamos 25mg de acido ascórbico, depositar en una fiola

de 25 mL y disolver agua destilada a 40°C.Aforar con agua a las mismas condiciones.

Transferir o.1 mL de esta solución a una fiola de 10 ml y aforar con agua como antes se

ha indicado. Ésta es la SOLUCIÓN PATRÓN para inyectar al cromatógrafo HP 1050.



3. PREPARACIÓN ENSAYO: Medir 0,5 mL de la bebida

no alcohólica y en fiola de 10 mL, aforar con agua estilada

a 40ºC. Con la jeringa utilizando aguja Nº 21 medir 1 mL

de esta solución y filtrar.Este filtrado es la SOLUCIÓN

ENSAYO para inyectar al cromatógrafo HP 1050.

4. Colocar la fase móvil en el frasco correspondiente.

5. Nos dirigimos al laboratorio multifuncional a usar el cromatógrafo liquido

HPLC(HP1050) y realizamos lo siguiente:

En el programa cargar el método y secuencia creados para el análisis.



6.- Fijar un flujo de 1 mL/min y con detección a 254 nm.

7.- Permitir que la columna esté en equilibrio antes del análisis. El oxígeno residual

presente en la columna puede ser removido por inyecciones sucesivas de SOLUCIÓN

PATRÓN, hasta obtener un área de pico constante.



8.- Inyectar cada vez 20 uL de SOLUCIÓN PATRÓN Y SOLUCIÓN ENSAYO.

III. ANÁLISIS DE DATOS Y RESULTADOS:







Fórmula para el cálculo de concentración:

o Donde:

o As: área del pico en la muestra

o Am: área del pico en el estándar

o Cs: Concentración de estándar (0.01 mg/mL)

o Cm: Concentración de Vitamina C en la ecuación de la muestra.

Calculo de la concentración de Ac. Ascórbico presente en la muestra de néctar de durazno

Cm= 0.01294500982 mg/mL

0.01357129394 mg/mL 1mL de solución néctar de DuraznoX 300 ml de solución néctar de Durazno

X= 3.883502946mg/mL

IV. CONCLUSIONES:

El tiempo de retención para la solución patrón (Ác. Ascórbico) en min. es de 1.400

El tiempo de retención para la muestra (néctar de durazno) en min. es de 1.399.

Se determinó la presencia de vitamina C presente en la muestra de néctar de durazno

que fue de 0.01294500982 mg/mL.


121588059392658

=0.01mg /mLCm

AsAm

= CsCm