repository.ub.ac.idrepository.ub.ac.id/179911/1/Indiana Zulfa (2).pdf · 2020. 3. 5. · Author: pÓ :5e²5 W^;\^GFN¨q¡ °&õ þ ÇÅ Created Date R K@N XGMölg¢èJ>ò °êav¨Æne

Penentuan Kondisi Optimum Xilanase dari Aspergillus

niger yang Diamobilkan pada Matriks Bentonit Teraktivasi

SKRIPSI

Oleh:

INDIANA ZULFA

165090200111017

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2019

i

Penentuan Kondisi Optimum Xilanase dari Aspergillus

niger yang Diamobilkan pada Matriks Bentonit Teraktivasi

SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains

dalam bidang Kimia

Oleh:

INDIANA ZULFA

165090200111017

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2019

ii

LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI

Penentuan Kondisi Optimum Xilanase dari Aspergillus niger

yang Diamobilkan pada Matriks Bentonit Teraktivasi

Oleh:

INDIANA ZULFA

165090200111017

Setelah diseminarkan di depan Majelis Penguji

pada tanggal……………………….

dan dinyatakan memenuhi syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains dalam bidang Kimia

Pembimbing I

Drs. Sutrisno, M.Si.

NIP. 196203181990021001

Pembimbing II

Dr. Sasangka Prasetyawan, MS.

NIP. 196304041987011001

Mengetahui,

Ketua Jurusan Kimia

Fakultas MIPA Universitas Brawijaya

Masruri, S.Si., M.Si., Ph.D.

NIP. 197310202002121001

iii

LEMBAR PERNYATAAN

Saya yang bertanda di bawah ini :

Nama : Indiana Zulfa

NIM : 165090200111017

Jurusan : Kimia

Penulis skripsi berjudul :



Dengan ini menyatakan bahwa:

1. Isi dan skripsi yang saya buat adalah benar-benar karya sendiri dan tidak menjiplak karya orang lain, selain nama-nama yang

termaktub di isi dan tertulis di daftar pustaka dalam skripsi ini.

2. Apabila dikemudian hari ternyata skripsi yang saya tulis terbukti hasil jiplakan, maka saya akan bersedia menanggung segala

resiko yang akan saya terima.

Demikian pernyataan ini dibuat dengan segala kesadaran.

Malang, 23 Desember 2019

Yang menyatakan,

(Indiana Zulfa)

165090200111017

iv



ABSTRAK

Xilanase merupakan enzim ekstraseluler yang dapat menghidrolisis

xilan menjadi xilosa. Pada penelitian ini, xilanase yang digunakan

diisolasi dari biakan Aspergillus niger. Xilanase dapat dalam bentuk

bebas dan amobil yang memiliki kondisi lingkungan yang berbeda.

Amobilisasi enzim xilanase dilakukan untuk meningkatkan stabilitas

enzim xilanase dengan proses pengikatan enzim pada matriks. Pada

penelitian ini digunakan bentonit teraktivasi asam sebagai matriks.

Tujuan penelitian ini yaitu untuk mengetahui nilai aktivitas optimum

enzim xilanase bebas dan amobil dalam matriks bentonit pada variasi

pH, suhu dan waktu inkubasi. Variasi pH yang digunakan yaitu pH 5,

6, 7, 8, dan 9. Variasi suhu yang dilakukan yaitu (40, 45, 50, 55, dan

60)°C dan variasi waktu inkubasi yang dilakukan yaitu (40, 45, 50, 55,

dan 60) menit. Kondisi optimum xilanase ditentukan secara

spektrofotometri dengan mengukur aktivitas xilanase bebas dan

amobil menggunakan reagen DNS sedangkan kadar protein awal dan

jumlah enzim xilanase yang teradsorpsi menggunakan reagen biuret.

Pada penelitian ini didapatkan kondisi optimum xilanase bebas adalah

pada pH 6 sebesar 3,029 µg/mg.menit, pada suhu 50°C sebesar 3,811

µg/mg.menit dan pada waktu inkubasi 45 menit sebesar 4,743

µg/mg.menit. Sedangkan kondisi optimum xilanase amobil adalah

pada pH 8 sebesar 0,821 µg/mg.menit, pada suhu 50°C sebesar 0,311

µg/mg.menit dan pada waktu inkubasi 55 menit sebesar 0,315

µg/mg.menit.

Kata Kunci: Xilanase, Aspergillus niger, Amobilisasi, Bentonit,

Optimum

v

Determination of Xylanase Optimum Condition from Aspergillus

niger Immobilized on Activated Bentonite Matrix

ABSTRACT

Xylanase is an extracellular enzyme that can hydrolyze xylan to

xylose. In this study, the xylanase used was isolated from the culture

of Aspergillus niger. Xylanase can be in a free and immobile form

which has different environmental conditions. Immobilization of

xylanase enzymes is done to increase the stability of xylanase enzymes

by binding the enzyme to the matrix. In this research, acid activated

bentonite is used as a matrix. The purpose of this study was to

determine the optimum activity value of free and immobilized

xylanase enzymes in the bentonite matrix on variations in pH,

temperature and incubation time. The pH variations used were pH 5,

6, 7, 8, and 9. The temperature variations carried out were (40, 45, 50,

55, and 60)°C and the incubation time variations made were (40, 45,

50, 55 and 60) minutes. The optimum condition of xylanase was

determined spectrophotometry by measuring the activity of free and

immobilized xylanases using DNS reagents while the initial protein

content and the amount of xylanase enzymes adsorbed using biuret

reagents. In this study, the optimum condition of free xylanase was

obtained at pH 6 of 3,029 µg/mg.minute, at 50°C at 3,811

µg/mg.minute and at 45 minutes incubation time of 4,743

µg/mg.minute. While the optimum condition of immobilized xylanase

is at pH 8 of 0,821 µg/mg.minute, at 50°C at 0,311 µg/mg.minute and

at 55 minutes incubation time of 0,315 µg/mg.minute.

Keywords: Xylanase, Aspergillus niger, Immobilization, Bentonite,

Optimum

vi

KATA PENGANTAR

Puji syukur Alhamdulillah penulis panjatkan kehadirat Allah

SWT atas limpahan nikmat, rahmat serta hidayah-Nya sehingga

penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Penentuan

Kondisi Optimum Xilanase dari Aspergillus niger yang

Diamobilkan pada Matriks Bentonit Teraktivasi” sebagai salah

satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains dalam bidang Kimia

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam di Universitas

Brawijaya. Sholawat serta salam tetap tercurahkan kepada junjungan

Nabi Muhammad SAW beserta keluarga dan sahabatnya.

Penulis menyadari bahwa selama pelaksanaan skripsi ini telah

banyak mendapat bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu,

penulis menyampaikan terima kasih kepada:

1. Drs. Sutrisno, M.Si. selaku dosen pembimbing I atas kesabaran, arahan, dan bimbingan selama penyusunan

proposal penelitian, pelaksanaan penelitian hingga

penyelesaian skripsi.

2. Dr. Sasangka Prasetyawan, MS. selaku dosen pembimbing II atas arahan, saran, motivasi dan bimbingan selama

penyusunan proposal penelitian, pelaksanaan penelitian

hingga penyelesaian skripsi.

3. Dr. Dra. Tutik Setianingsih, M.Si. selaku pembimbing akademik atas arahan dan bimbingan selama masa studi dan

penyelesaian skripsi ini.

4. Masruri, S.Si., M.Si., Ph.D. selaku Ketua Jurusan Kimia Universitas Brawijaya yang memberikan dukungan dalam

proses penyelesaian skripsi ini.

5. Riswoyo dan Sunarmi Ami selaku orang tua penulis yang selalu mendoakan, memberi dukungan dan motivasi untuk

penulis demi kelancaran skripsi.

6. Bapak Maryono selaku PLP Biokimia dan Nuril Fadilla selaku rekan satu tim penelitian atas dukungan semangat dan

berbagi ilmu terkait penelitian ini.

7. Farid Nur Huda dan seluruh sahabat Rastogi yang selalu memberikan dukungan dan motivasi kepada penulis sehingga

penulisan skripsi ini dapat terselesaikan.

vii

8. UKM Seni Religi dan HMK UB sebagai tempat berkembang penulis selama masa studi.

9. Teman-teman Kimia 2016 atas kebersamaan dan dukungan kepada penulis selama masa studi.

10. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu yang telah memberikan dukungan kepada penulis hingga

terselesaikannya skripsi ini.

Penulis menyadari banyak kekurangan dan kesalahan dalam

penulisan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan

saran untuk memperbaiki kesalahan dalam penulisan selanjutnya.

Penulis berharap semoga naskah ini bermanfaat dan memberi

informasi bagi pembaca.

Malang, 23 Desember 2019

Penulis

viii

DAFTAR ISI

COVER

HALAMAN JUDUL i

HALAMAN PENGESAHAN ii

HALAMAN PERNYATAAN iii

ABSTRAK iv

ABSTRACT v

KATA PENGANTAR vi

DAFTAR ISI viii

DAFTAR GAMBAR xi

DAFTAR TABEL xii

DAFTAR LAMPIRAN xv

BAB I PENDAHULUAN 1

1.1 Latar Belakang 1

1.2 Rumusan Masalah 2

1.3 Batasan Masalah 3

1.4 Tujuan Penelitian 3

1.5 Manfaat Penelitian 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 4

2.1 Klobot Jagung 4

2.2 Xilan 4

2.3 Aspergillus niger 5

2.4 Enzim 6

2.5 Xilanase 6

2.6 Amobilisasi Enzim 7

ix

2.7 Matriks Bentonit 7

2.8 Aktivitas Enzim 8

BAB III METODOLOGI PENELITIAN 10

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian 10

3.2 Alat dan Bahan Penelitian 10

3.2.1 Alat 10

3.2.2 Bahan 10

3.3 Tahapan Penelitian 11

3.4 Prosedur Penelitian 12

3.4.1 Pembuatan Tepung Klobot Jagung 12

3.4.2 Pembuatan Media Padat 12

3.4.3 Peremajaan Biakan Murni Aspergillus niger 12

3.4.4 Pembuatan Media Cair 13

3.4.5 Pembuataan Inokulum 13

3.4.6 Produksi Enzim 13

3.4.7 Isolasi Ekstrak Kasar Xilanase dari Biakan Aspergillus

niger 14

3.4.8 Penentuan Kadar Protein Awal 14

3.4.9 Penentuan Kurva Baku Gula Pereduksi Xilosa 15

3.4.10 Penentuan Aktivitas Xilanase Bebas 16

3.4.11 Amobilisasi Enzim Xilanase pada Matriks Bentonit

Teraktivasi 18

3.4.12 Penentuan Aktivitas Xilanase Amobil 19

3.4.13 Penentuan Kadar Protein Enzim Xilanase Sisa 20

3.4.14 Analisa Data 20

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 21

4.1 Produksi dan Isolasi Xilanase dari Aspergillus niger 21

4.2 Amobilisasi Xilanase pada Matriks Bentonit Teraktivasi 23

x

4.3 Penentuan Kondisi Optimum Xilanase Bebas dan Amobil 24

4.3.1 Penentuan pH Optimum 24

4.3.2 Penentuan Suhu Optimum 26

4.3.3 Penentuan Waktu Inkubasi Optimum 28

BAB V PENUTUP 31

5.1 Kesimpulan 31

5.2 Saran 31

DAFTAR PUSTAKA 32

LAMPIRAN 37

xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1: Struktur xilan 5 Gambar 2.2: Struktur Montmorillonit 8

Gambar 4.1: Mekanisme reaksi enzimatis yang terjadi pada

pembentukan xilosa 22 Gambar 4.2: Reaksi reagen DNS dengan Xilosa 23

Gambar 4.3: Kurva Pengaruh pH terhadap Aktivitas Enzim

Xilanase Bebas dan Amobil 25

Gambar 4.4: Kurva Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Enzim

Xilanase Bebas dan Amobil 27 Gambar 4.5: Kurva Pengaruh Waktu Inkubasi terhadap

Aktivitas Enzim Xilanase Bebas dan Amobil 29

Gambar D.1: Kurva Penentuan λmaks Kasein 46

Gambar D.2: Kurva Baku Larutan Kasein 47

Gambar F.1: Kurva Penentuan λ maks Xilosa 49 Gambar F.2 Kurva Baku Larutan Xilosa 50

xii

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1: Komposisi Kimia Klobot Jagung 4 Tabel D.1: Data Absorbansi Kasein pada λ = 460-600 nm 46

Tabel D.2: Data Absorbansi Kasein pada Panjang Gelombang

Maksimum (λmaks = 540 nm) 47 Tabel F.1: Data Absorbansi Larutan Xilosa 300 µg/mL pada λ 480-

600 nm 49

Tabel F.2: Data Absorbansi Larutan Xilosa pada Panjang Gelombang

Maksimum (λmaks = 490 nm) 50 Tabel G.1: Data Absorbansi Xilanase Bebas Variasi pH 6-9 pada

λmaks 490 nm 51

Tabel G.2: Data Konsentrasi Xilosa Xilanase Bebas pada Variasi pH

Dengan Pengenceran 25 mL 51 Tabel G.3: Data Aktivitas Xilanase Bebas Variasi pH 52 Tabel G.4: Data Absorbansi Xilanase Bebas Variasi Suhu 40, 45,

50,55 dan 60°C pada λmaks 490 nm 52 Tabel G.5: Data Konsentrasi Xilosa Xilanase Bebas pada Variasi

Suhu dengan Pengenceran 25 mL 53 Tabel G.6: Data Aktivitas Xilanase Bebas Variasi Suhu 53 Tabel G.7: Data Absorbansi Xilanase Bebas Variasi Waktu Inkubasi

40, 45, 50, 55 dan 60 menit pada λmaks 490 nm 53 Tabel G.8: Data Konsentrasi Xilosa Xilanase Bebas pada Variasi

Waktu Inkubasi Dengan Pengenceran 50 mL 54 Tabel G.9: Data Aktivitas Xilanase Bebas pada Variasi Waktu

Inkubasi 55 Tabel H.1: Data Absorbansi Protein Xilanase Sisa pada λmaks 540

nm 55

Tabel H.2: Kadar Protein Xilanase Sisa 55 Tabel I.1: Data Absorbansi Xilanase Bebas Variasi pH 6-9 pada

λmaks 490 nm 56

Tabel I.2: Data Konsentrasi Xilosa Xilanase Amobil pada Variasi pH

Dengan Pengenceran 15 mL 57 Tabel I.3: Data Aktivitas Xilanase Amobil Variasi pH 57 Tabel I.4: Data Absorbansi Xilanase Bebas Variasi Suhu 40, 45,

50,55 dan 60°C pada λmaks 490 nm 58 Tabel I.5: Data Konsentrasi Xilosa Xilanase Amobil pada Variasi

Suhu dengan Pengenceran 15 mL 58

xiii

Tabel I.6: Data Aktivitas Xilanase Amobil Variasi Suhu 59 Tabel I.7: Data Absorbansi Xilanase Amobil Variasi Waktu Inkubasi

40, 45, 50, 55 dan 60 menit pada λmaks 490 nm 59 Tabel I.8: Data Konsentrasi Xilosa Xilanase Amobil pada Variasi

Waktu Inkubasi Dengan Pengenceran 15 mL 60 Tabel I.9: Data Aktivitas Xilanase Amobil pada Variasi Waktu

Inkubasi 60 Tabel J.1: Data Pengaruh Variasi pH terhadap Aktivitas Xilanase

Bebas 61 Tabel J.2: Data Uji F Pengaruh pH terhadap Aktivitas Xilanase Bebas

62 Tabel J.3: Data Analisis Pengaruh pH terhadap Aktivitas Xilanase

Bebas dengan Uji BNT 5% 63 Tabel J.4: Data Pengaruh Variasi Suhu terhadap Aktivitas Xilanase

Bebas 63 Tabel J.5: Data Uji F Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Xilanase

Bebas 65 Tabel J.6: Data Analisis Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Xilanase

Bebas dengan Uji BNT 5% 66 Tabel J.7: Data Pengaruh Variasi Waktu Inkubasi terhadap Aktivitas

Xilanase Bebas 66 Tabel J.8: Data Uji F Pengaruh Waktu Inkubasi terhadap Aktivitas

Xilanase Bebas 68 Tabel J.9: Data Analisis Pengaruh Waktu Inkubasi terhadap Aktivitas

Xilanase Bebas dengan Uji BNT 5% 68 Tabel J.10: Data Pengaruh Variasi pH terhadap Aktivitas Xilanase

Amobil 69 Tabel J.11: Data Uji F Pengaruh pH terhadap Aktivitas Xilanase

Amobil 71 Tabel J.12: Data Analisis Pengaruh pH terhadap Aktivitas Xilanase

Amobil dengan Uji BNT 5% 71 Tabel J.13: Data Pengaruh Variasi Suhu terhadap Aktivitas Xilanase

Amobil 72 Tabel J.14: Data Uji F Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Xilanase

Amobil 73

xiv

Tabel J.15: Data Analisis Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Xilanase

Amobil dengan Uji BNT 5% 74 Tabel J.16: Data Pengaruh Variasi Waktu Inkubasi terhadap Aktivitas

Xilanase Amobil 74 Tabel J.17: Data Uji F Pengaruh Waktu Inkubasi terhadap Aktivitas

Xilanase Amobil 76 Tabel J.18: Data Analisis Pengaruh Waktu Inkubasi terhadap

Aktivitas Xilanase Amobil dengan Uji BNT 5% 77

xv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran A. Diagram Alir 37 Lampiran B. Preparasi Larutan 39 Lampiran C. Perhitungan 43 Lampiran D. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum dan Kurva

Baku Kasein 46 Lampiran E. Uji Kadar Protein Awal dan Perhitungan Kadar

Xilanase Bebas (Kadar Protein Awal) 48 Lampiran F. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum dan Kurva

Baku Gula Pereduksi Xilosa 49 Lampiran G. Penentuan Aktivitas Xilanase Bebas 50 Lampiran H. Perhitungan Kadar Protein Xilanase Sisa 55 Lampiran I. Penentuan Aktivitas Xilanase Amobil pada Matriks

Bentonit 56 Lampiran J. Analisis Data Statistika 61

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Klobot jagung merupakan kulit terluar sebagai penutup biji

pada tanaman jagung. Klobot jagung sebagai limbah pertanian

mengandung hemisesulosa yang cukup tinggi. Tingginya

hemiselulosa dalam klobot jagung dapat digunakan sebagai induser

pertumbuhan jamur dalam produksi xilanase.

Xilanase adalah enzim ekstraseluler yang menghidrolisis

hemiselulosa atau xilan menjadi xilosa [1]. Xilanase dapat dihasilkan

dari beberapa mikroorganisme melalui proses fermentasi antara lain

jamur, ragi dan bakteri. Salah satu jamur yang dapat memproduksi

xilanase yaitu Aspergillus niger. Jamur ini memiliki kemampuan

dalam produksi beberapa jenis enzim, salah satunya enzim xilanase.

Selain itu, jamur ini memiliki morfologi yang sangat kompleks [2].

Enzim yang dihasilkan dari bakteri umumnya mempunyai ketahanan

pada suhu tinggi dibanding jamur, namun enzim yang dihasilkan dari

jamur mempunyai aktivitas xilanase lebih tinggi dibanding dari

bakteri. Selain itu, hasil produksi lebih banyak dan mudah dalam

kultivasi sehingga jamur banyak digunakan dalam produksi enzim [3].

Secara umum, xilanase dimanfaatkan dalam bentuk enzim

bebas. Padahal dalam penggunaan enzim bebas membutuhkan biaya

mahal, bersifat tidak stabil terhadap lingkungan dan hanya dapat

digunakan satu kali dalam reaksi. Karena enzim xilanase bebas tidak

stabil terhadap lingkungan, maka dilakukan amobilisasi enzim untuk

meningkatkan stabilitas enzim xilanase dan mencegah kerusakan

ketika pada pH dan suhu tertentu [4]. Amobilisasi enzim adalah upaya

untuk meningkatkan stabilitas operasional enzim dengan proses

pengikatan enzim pada suatu media pendukung serta memberikan

kemampuan pada enzim untuk dapat digunakan kembali secara

berulang-ulang. Enzim amobil secara fisik terjebak dalam ruang

tertentu dengan retensi dari aktivitas katalitiknya sehingga dapat

digunakan secara berulang-ulang.

Metode adsorpsi adalah salah satu metode amobilisasi

sederhana yaitu enzim dijerat berdasarkan interaksi ikatan ionik,

2

ikatan hidrogen, ikatan hidrofobik antara enzim dan bahan pendukung

[5]. Dilakukan metode adsorpsi pada amobilisasi enzim dikarenakan

mudah, memiliki efek perubahan konformasi enzim yang kecil dan

mudah meregenerasi enzim yang tidak aktif [6]. Salah satu matriks

yang dapat digunakan dalam metode amobilisasi enzim yaitu bentonit.

Bentonit merupakan lempung yang bersifat plastis dan koloidal tinggi

dengan kandungan utama mineral montmorillonit yaitu dengan kadar

85-95%. Montmorillonit memiliki luas permukaan spesifik yang

besar, yaitu 700-800m2/gram. Oleh karena luas permukaannya besar,

bentonit merupakan adsorben yang baik [7].

Xilanase mempunyai kondisi optimum untuk bekerja secara

maksimal. Kondisi optimum xilanase dipengaruhi oleh beberapa

faktor diantaranya konsentrasi, pH lingkungan, suhu lingkungan serta

waktu selama enzim bekerja. Kondisi kerja optimum xilanase bebas

telah dilakukan pada penelitian Sujarwo dengan hasil kondisi

optimum xilanase bebas pada pH 8, suhu 55°C dan waktu inkubasi 55

menit. Karena kondisi lingkungan enzim bebas dan enzim amobil

berbeda, maka perlu dilakukan penentuan aktivitas xilanase bebas dan

amobil untuk mengetahui kondisi kerja optimum xilanase amobil yang

kemungkinan terjadi pergeseran dari enzim bebasnya. Oleh karena itu,

berdasarkan latar belakang tersebut, maka dilakukan penelitian

tentang penentuan kondisi optimum xilanase dari Aspergillus niger

yang diamobilkan pada matriks bentonit berdasarkan pengaruh suhu,

pH dan waktu inkubasi.

1.2 Rumusan Masalah Rumusan masalah dalam penelitian ini antara lain:

1. Bagaimana pengaruh pH terhadap kondisi optimum aktivitas xilanase yang diamobilkan pada matriks bentonit?

2. Bagaimana pengaruh suhu terhadap kondisi optimum aktivitas xilanase yang diamobilkan pada matriks bentonit?

3. Bagaimana pengaruh waktu inkubasi terhadap kondisi optimum aktivitas xilanase yang diamobilkan pada matriks

bentonit?

3

1.3 Batasan Masalah Batasan masalah dalam penelitian ini antara lain :

1. Induser produksi enzim xilanase dari Aspergillus niger menggunakan klobot jagung.

2. Enzim xilanase yang digunakan berupa ekstrak kasar hasil isolasi dari Aspergillus niger.

3. Amobilisasi enzim xilanase dilakukan pada pH 8 dengan menggunakan matriks bentonit teraktivasi.

4. Parameter yang dianalisis antara lain variasi pH (5, 6, 7, 8, 9), variasi suhu (40, 45, 50, 55, 60)°C dan variasi waktu inkubasi

(40, 45, 50, 55, 60) menit terhadap aktivitas enzim xilanase

bebas dan amobil.

1.4 Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini antara lain:

1. Melakukan variasi pH untuk menentukan pengaruhnya terhadap kondisi optimum aktivitas xilanase yang

diamobilkan pada matriks bentonit.

2. Melakukan variasi suhu untuk menentukan pengaruhnya terhadap kondisi optimum aktivitas xilanase yang

diamobilkan pada matriks bentonit.

3. Melakukan variasi waktu inkubasi untuk menentukan pengaruhnya terhadap kondisi optimum aktivitas xilanase

yang diamobilkan pada matriks bentonit.

1.5 Manfaat Penelitian Manfaat penelitian ini adalah dapat memberikan informasi

tentang pengaruh pH, suhu dan waktu inkubasi terhadap kondisi

optimum aktivitas enzim xilanase yang diamobilkan pada matriks

bentonit teraktivasi.

4

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Klobot Jagung

Tanaman jagung adalah salah satu makanan pokok yang

banyak dikonsumsi di Indonesia sehingga menghasilkan jumlah cukup

banyak limbah alami. Salah satu limbah alami tanaman jagung yaitu

klobot jagung. Limbah klobot jagung dapat dimanfaatkan menjadi

produk yang dapat menambah nilai dari limbah alami tanaman jagung

[8]. Komponen utama serat kasar klobot jagung yaitu hemiselulosa

sehingga disebut salah satu sumber xilan. Kandungan hemiselulosa

dalam klobot jagung sekitar 32%. Klobot jagung berperan menjadi

induser dalam media pertumbuhan untuk menginduksi biosintesis

enzim dari mikroorganisme. Komponen yang terdapat dalam klobot

jagung antara lain [9] :

Tabel 2.1: Komposisi Kimia Klobot Jagung

Komponen Kandungan (%)

Serat kasar 38

Selulosa 6.41

Hemiselulosa 32

Lignin 6.3

Abu 4.47

Protein kasar 6.41

2.2 Xilan

Ekstrak xilan adalah senyawa polisakarida yang tersusun atas

rantai karbon kompleks sehingga dapat menjadi sumber karbon.

Ekstrak xilan dapat berfungsi sebagai induser dalam produksi enzim

xilanolitik [10]. Xilan adalah komponen utama penyusun

hemiselulosa pada dinding sel tanaman. Selain itu, xilan merupakan

polisakarida kedua paling berlimpah di alam setelah selulosa, yaitu

menyusun 20-30% komposisi dinding sel tanaman [11]. Polimer xilan

terdiri dari rantai utama residu D-xilosa dengan ikatan β-1,4 dan

memiliki berbagai cabang, antara lain L-arabinosa, D-glukosa, D-

5

galaktosa, D-manosa, asam D-glukoronik, dan residu asam 4-O-metil

glukoronik [12].

Gambar 2.1: Struktur xilan [13]

2.3 Aspergillus niger

Aspergillus niger adalah jamur berfilamen memiliki hifa

berseptat yang banyak ditemukan di alam. Jenis jamur ini mudah

diisolasi dari tanah, air, udara, kapas, buah-buahan, beras, kopi, teh,

tebu serta jagung. Aspergillus niger merupakan mikroba jenis jamur

yang dapat tumbuh dengan cepat dan tidak berbahaya, hal ini

dikarenakan jamur tersebut tidak menghasilkan mikotoksin. Selain itu,

Aspergillus niger dapat bertumbuh dengan cepat sehingga banyak

digunakan secara komersial [14]. Aspergillus niger dapat

mendekomposisi polisakarida di dalam kayu, bersifat aerob,

bertumbuh pada suhu 30-37°C dan pH 4-6. Klasifikasi Aspergillus

niger yaitu [15] :

Kingdom : Fungi

Divisi : Fungi imperfecti

Kelas : Deuteromycetes

Sub Kelas : Hyphomyces

Ordo : Monoliales

Famili : Monoleaceae

Genus : Aspergillus

Spesies : Aspergillus niger

6

2.4 Enzim

Enzim merupakan benda tak hidup yang diproduksi oleh sel

hidup. Enzim berfungsi sebagai biokatalisator dengan mempercepat

laju reaksi kimia tanpa terlibat dalam reaksi tersebut. Enzim memiliki

ciri khas, yaitu bersifat tidak diubah oleh reaksi yang dikatalisnya,

tidak mengubah kedudukan normal dari keseimbangan kimia

meskipun dapat mempercepat reaksi [16]. Jumlah enzim dinyatakan

dalam unit aktivitas enzim. Persetujuan internasional menyebutkan

1.0 unit aktivitas enzim adalah jumlah yang menyebabkan

pengubahan 1.0 mikromol (µmol = 10-6) substrat per menit pada

kondisi optimum. Jumlah unit enzim per miligram protein disebut

aktivitas spesifik yang merupakan ukuran kemurnian suatu enzim.

Selama pemurnian nilainya akan meningkat, menjadi maksimum dan

konstan saat enzim sudah dalam keadaan murni [17].

2.5 Xilanase

Xilanase adalah kelompok enzim yang mampu

menghidrolisis hemiselulosa dalam hal ini ialah xilan atau polimer

dari xilosa dan xilo-oligosakarida. Xilanase merupakan protein kecil

yang memiliki berat molekul antara 15.000-30.000 Dalton, aktif pada

suhu 55°C dan pada pH 9. Xilanase dapat dihasilkan dari jenis

mikroorganisme seperti jamur dan bakteri. Xilan merupakan sumber

karbon dalam produksi enzim xilanase. Xilosa dapat terbentuk dari

reaksi hidrolisis antara xilan dan aktivitas xilanase yang dihasilkan

oleh mikroorganisme. Enzim xilanase memiliki banyak kegunaan

antara lain untuk proses pemutihan kertas, pembuatan gula xilosa,

sebagai campuran pakan ternak, memperbaiki mutu produk makanan

dan minuman [18].

Xilan merupakan sumber karbon dalam produksi enzim

xilanase. Aktivitas xilanase yang dihasilkan oleh mikroorganisme

menjadikan xilan akan terhidrolisis menjadi xilosa [15] :

(C5H8O4)n + H2O C5H10O5

Xilan Xilosa

7

2.6 Amobilisasi Enzim

Enzim merupakan molekul bebas terlarut air sehingga sangat

sulit dipisahkan dari substrat dan produknya. Amobilisasi enzim

adalah salah satu upaya untuk menjadikan enzim pada kondisi tidak

bergerak dan tidak larut. Amobilisasi enzim dapat dilakukan dengan

[16] :

1. Pengikatan enzim secara kovalen pada permukaan bahan yang tidak larut air

2. Pengikatan silang dengan bahan yang cocok untuk menghasilkan partikel baru

3. Penjebakan di dalam suatu matrik atau gel yang permeabel terhadap enzim, substrat dan produk

4. Enkapsulasi 5. Absorbsi pada zat pendukung

Amobilisasi adalah metode menguntungkan yang dapat

meningkatkan efisiensi penggunaan enzim agar dapat digunakan

berulang-ulang serta memisahkan katalis dari media reaksi dengan

mudah. Amobilisasi enzim merupakan proses penahanan pergerakan

molekul enzim dalam reaksi kimia pada tempat tertentu yang

dikatalisnya. Amobilisasi enzim menjadikan enzim lebih stabil

terhadap suhu, pH dan lebih mudah dipisahkan dari campuran pada

akhir reaksi [19]. Spesifisitas substrat enzim dapat ditingkatkan

dengan amobilisasi sehingga dapat meningkatkan sifat enzim dan

dapat mengurangi efek inhibitor [20]. Keuntungan lain amobilisasi

enzim antara lain enzim yang sudah digunakan dapat digunakan

kembali, ideal untuk proses berkelanjutan, dapat mengontrol

keakuratan proses katalis, meningkatkan stabilitas enzim dan

memungkinkan pengambangan sistem reaksi multienzim [16].

2.7 Matriks Bentonit

Matriks atau bahan pendukung dapat meningkatkan kinerja

operasi sistem amobilisasi dan enzim yang diamobilisasi memiliki

sifat keduanya matriks dan enzim. Beberapa karakteristik penting dari

matriks untuk amobilisasi enzim antara lain stabilitas mekanisnya,

afinitas yang kuat, aksesibilitas situs aktif enzim untuk perubahan

kimia dengan mudah, hidrofilisitas dan lain-lain [21]. Salah satu

matriks yang dapat digunakan dalam produksi xilanase yaitu bentonit.

8

Bentonit merupakan bijih tanah liat yang melimpah. Bentonit

dapat digunakan sebagai matriks karena memiliki ukuran partikel

halus, luas permukaan tinggi dan kapasitas pertukaran kation,

keasaman permukaan. Bentonit yang diaktivasi dengan asam akan

menghasilkan bentonit dengan situs aktif yang lebih besar sehingga

daya adsorpsinya semakin tinggi dibandingkan bentonit yang belum

diaktivasi [22].

Kandungan utama bentonit yaitu mineral montmorillonit

sebesar 80% dengan rumus kimia MX(Al4.xMgx)Si8O20(OH)4.NH2O.

Selain itu, kandungan lain dalam bentonit yaitu kwarsa, ilit, kalsit,

mika dan klorit. Montmorillonit memiliki struktur terdiri 3 layer yaitu

1 lapisan alumina (AlO6) berbentuk oktahedral pada bagian tengah

diapit oleh 2 lapisan silika (SiO4) yang berbentuk tetrahedral.

Dibagian antara lapisan oktahedral dan tetrahedral terdapat kation

monovalent maupun bivalent, diantaranya Na+, Ca2+ dan Mg2+ [23].

Silika sering digunakan sebagai matriks inert dan stabil untuk

amobilisasi enzim. Hal ini dikarenakan silika mempunyai luas

permukaan spesifik yang tinggi dan diameter pori yang dapat

dikontrol sesuai dimensi enzim. Sebagian besar enzim berdiameter 3

- 6 nm, sehingga silika yang digunakan berbentuk mesopori yaitu

berukuran 2 – 50 nm [20].

Gambar 2.2: Struktur Montmorillonit [24]

2.8 Aktivitas Enzim

Enzim adalah protein yang mempunyai sifat khas seperti berat

molekul, kondisi reaksi pada aktivitas optimum dan stabilitas enzim.

Aktivitas dan stabilitas enzim dipengaruhi oleh perubahan kondisi

fisik dan kimia yang menyebabkan struktur sekunder, tersier dan

9

kuartener dari molekul enzim berubah [25]. Faktor-faktor yang

mempengaruhi aktivitas enzim xilanase antara lain suhu, pH,

konsentrasi substrat, konsentrasi enzim, pengaruh inhibitor dan

aktivator [26]:

1. Suhu Enzim mempunyai suhu optimum masing-masing. Suhu

optimum adalah suhu ketika enzim bekerja dengan sangat baik. Suhu

yang terlalu rendah akan mengakibatkan aktivitas enzim kecil,

sedangkan suhu yang terlalu tinggi akan mengakibatkan enzim

terdenaturasi sehingga merusak kemampuannya sebagai katalisator

[27].

2. pH Enzim mempunyai profil yang berbeda terkait dengan pH

lingkungannya. Sebagian besar enzim aktif pada kisaran pH antara

4,5-8. Perubahan pH dapat menyebabkan pecahnya ikatan sehingga

mengubah konformasi enzim dan juga aktivitasnya. Pada pH ekstrim,

enzim akan terdenaturasi karena enzim merupakan suatu protein dan

akan terjadi perubahan muatan pada residu asam amino yang penting

untuk proses katalisis. [28].

3. Konsentrasi substrat dan enzim Peningkatan konsentrasi substrat atau enzim akan

meningkatkan kecepatan reaksi enzim. Kecepatan reaksi enzim akan

meningkat dengan meningkatnya substrat pada konsentrasi tertentu,

namun pada suatu titik penambahan konsentrasi substrat tidak

meningkatkan kecepatan reaksi enzim karena enzim mengalami

kejenuhan [28].

4. Inhibitor dan Aktivator Inhibitor merupakan senyawa yang dapat menurunkan kecepatan

reaksi enzimatik akibat menurunnya kemampuan enzim mengikat

substrat. Sedangkan aktivator merupakan suatu senyawa, unsur atau

ion yang mampu meningkatkan aktivitas kerja enzim. Aktivator dapat

berupa ion-ion anorganik terutama ion logam atau kation [29].

Faktor-faktor tersebut dapat menganggu stabilitas enzim.

Stabilitas enzim adalah kestabilan aktivitas enzim selama

penyimpanan, penggunaan, dan kestabilan terhadap senyawa tertentu

(asam, basa) serta pengaruh suhu dan pH yang tinggi [16].

10

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini bertempat di Laboratorium Biokimia, Jurusan

Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas

Brawijaya Malang. Penelitian dilakukan dari bulan Agustus sampai

dengan Desember 2019.

3.2 Alat dan Bahan Penelitian

3.2.1 Alat

Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain

gelas kimia (100 mL dan 250 mL), erlenmeyer (50 mL,100 mL, 250

mL, dan 300 mL), labu ukur (10 mL, 25 mL, 50 mL dan 100 mL),

tabung reaksi, pipet ukur 10 mL, bola hisap, pipet tetes, gelas arloji,

pengaduk gelas, botol semprot, corong gelas, botol sampel, rak tabung

reaksi, blender dan grinder, inkubator, tanur, sentrifuse dingin, shaker,

autoklaf, jarum ose, magnetic stirrer, spectronic genesys 20, kuvet,

kertas pH, aluminium foil, kertas saring, kapas steril, oven, pemanas

listrik, ayakan 120, neraca analitik, cutter, kertas cokelat, karet gelang,

bunsen, dan laminar air flow.

3.2.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain

hasil biakan murni Aspergillus niger dari Laboratorium Mikrobiologi

Jurusan Biologi Universitas Negeri Malang. Bahan-bahan dengan

kemurnian pro analisis (p.a) antara lain KH2PO4, CaCl2, (NH4)2SO4,

Na2EDTA, ZnSO4.7H2O, MgSO4.7H2O, NaMoO4, MnSO4.H2O,

FeSO4.7H2O, padatan NaOH, HCl, dekstrosa, DNS (asam

dinitrosalisilat), Na2SO3, natrium asetat, asam asetat glasial, asam

sulfat pekat, CuSO4.5H2O, NaKC4O6H4, kristal fenol, akuades dan

bentonit. Bahan-bahan yang memiliki kualitas for microbiology antara

lain klobot jagung, kentang, pepton, urea, tepung agar, tween-80,

kasein, xilosa dan xilan.

11

3.3 Tahapan Penelitian

Tahapan penelitian yang akan dilakukan yaitu :

1. Pembuatan tepung klobot jagung 2. Pembuatan media padat 3. Peremajaan biakan murni Aspergillus niger 4. Pembuatan media cair 5. Pembuatan inokulum 6. Produksi enzim 7. Isolasi ekstrak kasar xilanase dari biakan Aspergillus niger 8. Penentuan kadar protein awal

a) Penentuan panjang gelombang maksimum larutan kasein b) Pembuatan kurva baku larutan kasein c) Uji kadar protein awal

9. Penentuan kurva baku gula pereduksi xilosa a) Penentuan panjang gelombang maksimum gula pereduksi

xilosa

b) Pembuatan kurva baku gula pereduksi xilosa 10. Penentuan aktivitas xilanase bebas

a) Penentuan pH optimum xilanase bebas b) Penentuan suhu optimum xilanase bebas c) Penentuan waktu inkubasi optimum xilanase bebas d) Pengukuran aktivitas xilanase bebas

11. Amobiliasi enzim xilanase pada matriks bentonit teraktivasi a) Aktivasi matriks bentonit b) Amobilisasi xilanase pada matriks bentonit teraktivasi

12. Penentuan aktivitas enzim xilanase amobil a) Penentuan pengaruh pH terhadap aktivitas xilanase amobil b) Penentuan pengaruh suhu terhadap aktivitas xilanase

amobil

c) Penentuan pengaruh waktu inkubasi terhadap aktivitas xilanase amobil

13. Penentuan kadar protein enzim xilanase sisa 14. Analisa data

12

3.4 Prosedur Penelitian

3.4.1 Pembuatan Tepung Klobot Jagung

Klobot jagung dipisahkan dari tongkol jagung. Kemudian

dicuci dengan akuades dan dikeringkan di dalam oven pada suhu

100°C. Setelah kering, klobot jagung dipotong menjadi ukuran kecil-

kecil. Lalu dihaluskan menggunakan blender dan grinder. Setelah

klobot jagung halus, diayak menggunakan ayakan berukuran 120

mesh. Serbuk halus hasil ayakan digunakan sebagai induser.

3.4.2 Pembuatan Media Padat

Media padat yang digunakan yaitu Potatoes Dextrose Agar

(PDA). PDA dibuat dari kentang yang telah dikupas, lalu ditimbang

di neraca analitik sebanyak 20 g. Setelah itu, kentang dicuci dengan

akuades dan dipotong menjadi kecil-kecil. Kemudian dimasukkan ke

dalam gelas kimia 250 mL, ditambahkan akuades hingga volumenya

menjadi 100 mL lalu dipanaskan di atas pemanas listrik hingga

mendidih selama 1 jam serta dijaga volume tetap 100 mL. Selanjutnya

disaring menggunakan kertas saring sehingga didapatkan sari kentang.

Pada sari kentang, ditambahkan dekstrosa sebanyak 2 g, buffer asetat

0,2 M pH 5 sebanyak 1 mL dan dipanaskan kembali hingga mendidih

sambil ditambahkan tepung agar sebanyak 1,5 g. Kemudian diambil

larutan PDA sebanyak 4 mL, dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu

ditutup dengan kapas dan dilapisi dengan kertas cokelat lalu diikat

dengan karet gelang. Selanjutnya disterilkan dalam autoklaf selama 15

menit. Setelah disterilkan, didinginkan pada suhu ruang dengan posisi

miring dan dibiarkan selama 24 jam. Media PDA yang sudah padat

disimpan di dalam refrigerator.

3.4.3 Peremajaan Biakan Murni Aspergillus niger

Peremajaan biakan murni Aspergillus niger dilakukan di

dalam laminar air flow. Disiapkan jarum ose, kemudian disterilkan

mulut tabung biakan murni Aspergillus niger dan mulut tabung media

dengan cara dipanaskan pada nyala api Bunsen. Selanjutnya, diambil

spora Aspergillus niger sebanyak satu mata ose, dipindahkan ke dalam

media padat steril secara aseptis dan segera ditutup kembali tabung

dengan kapas steril yang dilapisi dengan kertas cokelat serta diikat

13

dengan karet gelang. Kemudian tabung disimpan dan diinkubasi

selama 6 hari (144 jam) dalam inkubator pada suhu 30°C.

3.4.4 Pembuatan Media Cair

Ditimbang pepton sebanyak 0,09 g; urea sebanyak 0,054 g;

KH2PO4 sebanyak 0,054 g; CaCl2 sebanyak 0,054 g; tween-80

sebanyak 0,036 g; (NH4)2SO4 sebanyak 0,252 g; MgSO4.7H2O

sebanyak 0,054 g; unsur renik sebanyak 0,18 mL dan tepung klobot

jagung sebanyak 0,9 g. Selanjutnya, dimasukkan ke dalam gelas kimia

250 mL lalu dibuat larutan sebanyak 180 mL. Kemudian ditambahkan

buffer asetat pH 5 sebanyak 1 mL, diaduk campuran dan dipanaskan

hingga mendidih. Setelah itu, dimasukkan ke dalam erlenmeyer lalu

ditutup dengan kapas steril dan dilapisi kertas cokelat serta diikat

dengan karet gelang. Selanjutnya, disterilkan dalam autoklaf selama

15 menit pada suhu 121°C pada tekanan 15 Psi.

3.4.5 Pembuataan Inokulum

Pembuatan inokulum dilakukan di dalam laminar air flow.

Spora hasil pembiakan murni Aspergillus niger yang telah berumur 6

hari dipindahkan sebanyak satu mata ose secara aseptis ke dalam

erlenmeyer 100 mL yang telah berisi 25 mL media cair steril.

Kemudian dikocok dengan shaker pada kecepatan 100 rpm hingga

mencapai pertengahan fase logaritma (49 jam). Selanjutnya, diambil

larutan inokulum sebanyak 5 mL secara aseptis dan dimasukkan ke

dalam 4 erlenmeyer yang berisi media cair steril sebanyak 50 mL.

Setelah itu, dikocok kembali dengan shaker pada kecepatan 100 rpm

pada suhu ruang hingga mencapai fase logaritma (49 jam).

3.4.6 Produksi Enzim

Diambil larutan inokulum sebanyak 8 mL. Selanjutnya

dimasukkan secara aseptis ke dalam 8 erlenmeyer yang berisi media

cair steril sebanyak 180 mL di dalam laminar air flow. Setelah itu,

larutan dikocok menggunakan shaker pada kecepatan 100 rpm selama

60 jam.

14

3.4.7 Isolasi Ekstrak Kasar Xilanase dari Biakan Aspergillus niger

Enzim xilanase diisolasi dengan metode ekstraksi yaitu

dengan dilakukan penambahan buffer tris-HCl pH 8 sebanyak 15 mL.

Kemudian disentrifuse pada suhu 4°C dengan kecepatan 5000 rpm

selama 10 menit. Supernatan yang diperoleh merupakan ekstrak kasar

enzim xilanase.

3.4.8 Penentuan Kadar Protein Awal

3.4.8.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Larutan

Kasein

Diambil larutan kasein dengan konsentrasi 5000 µg/mL

sebanyak 2 mL lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian

ditambahkan reagen biuret sebanyak 8 mL dan ditambahkan akuades

sebanyak 2 mL serta dikocok hingga homogen. Selanjutnya diinkubasi

selama 30 menit pada suhu 50°C. Setelah itu, diukur absorbansi

menggunakan spectronic genesys 20 pada rentang panjang gelombang

460-600 nm.

3.4.8.2 Pembuatan Kurva Baku Larutan Kasein

Kasein ditimbang sebanyak 1 g lalu dimasukkan ke dalam

gelas kimia 250 mL serta dilarutkan dengan akuades. Kemudian

diaduk menggunakan pengaduk magnetik dan ditambahkan beberapa

tetes larutan NaOH 0,1 N hingga kasein larut sempurna. Setelah kasein

larut, dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL dan ditambahkan

akuades sampai tanda batas serta dikocok hingga homogen. Sehingga

diperoleh larutan stok kasein 10000 µg/mL. Setelah itu, dipipet larutan

stok dengan volume 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 dan 9 mL dan masing-masing

dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL. Selanjutnya ditambahkan

akuades sampai tanda batas dan dikocok hingga homogen. Sehingga

diperoleh larutan kasein 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000,

8000 dan 9000 µg/mL. Kemudian dipipet masing-masing konsentrasi

larutan kasein sebanyak 2 mL dan dimasukkan ke dalam tabung

reaksi. Setelah itu, ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi

sebanyak 2 mL akuades dan reagen biuret sebanyak 8 mL. Larutan

dikocok hingga homogen dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu

15

50°C. Selanjutnya diukur absorbansi larutan menggunakan spectronic

genesys 20 pada panjang gelombang maksimum kasein, yaitu 540 nm.

Dibuat kurva baku hubungan antara konsentrasi (µg/mL) pada sumbu

x dengan absorbansi pada sumbu y.

3.4.8.3 Uji Kadar Protein Awal

Dipipet ekstrak xilanase sebanyak 2 mL ke dalam tabung

reaksi lalu ditambahkan reagen biuret sebanyak 8 mL dan larutan

kasein 5000 µg/mL sebanyak 2 mL serta dikocok larutan hingga

homogen. Selanjutnya diinkubasi selama 30 menit pada suhu 50°C.

Diukur absorbansi menggunakan spectronic genesys 20 pada panjang

gelombang maksimum kasein, yaitu 540 nm. Kadar protein awal

diketahui dengan cara memplotkan nilai absorbansi pada persamaan

kurva baku kasein.

3.4.9 Penentuan Kurva Baku Gula Pereduksi Xilosa

3.4.9.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Gula

Pereduksi Xilosa

Dipipet larutan stok xilosa 300 µg/mL sebanyak 1 mL lalu

dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Selanjutnya ditambahkan

akuades sebanyak 1 mL dan reagen DNS sebanyak 2 mL. Kemudian

dipanaskan campuran larutan dalam penangas air mendidih selama 15

menit. Setelah itu, didinginkan dengan air mengalir. Setelah dingin,

dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL dan ditambahkan akuades

sampai tanda batas serta dikocok hingga homogen. Diukur nilai

absorbansi pada kisaran panjang gelombang 480-530 nm.

3.4.9.2 Pembuatan Kurva Baku Gula Pereduksi Xilosa

Xilosa ditimbang sebanyak 0,15 g lalu dimasukkan ke dalam

gelas kimia 100 mL serta ditambahkan akuades secukupnya.

Kemudian dipindahkan larutan ke dalam labu ukur 10 mL dan

ditambahkan akuades sampai tanda baras serta dikocok hingga

homogen, sehingga diperoleh larutan stok gula 1500 µg/mL.

Selanjutnya dipipet larutan stok gula 1500 µg/mL sebanyak 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8 mL dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL yang berbeda.

Setelah itu, ditambahkan akuades sampai tanda batas dan dikocok

16

hingga homogen, sehingga diperoleh larutan stok 300, 450, 600, 750,

900, 1050 dan 1200 µg/mL. Kemudian diambil setiap konsentrasi

larutan stok sebanyak 1 mL dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi

yang berbeda. Setelah itu, ditambahkan akuades sebanyak 1 mL dan

reagen DNS sebanyak 2 mL pada masing-masing tabung reaksi lalu

dipanaskan semua campuran larutan dalam penangas air mendidih

selama 15 menit. Selanjutnya didinginkan dengan air mengalir.

Setelah dingin, dimasukkan masing-masing larutan ke dalam labu

ukur 25 mL yang berbeda dan ditambahkan akuades sampai tanda

batas serta dikocok hingga homogen. Diukur absorbansi

menggunakan spectronic genesys 20 pada panjang gelombang

maksimum xilosa yaitu 490 nm.

3.4.10 Penentuan Aktivitas Xilanase Bebas

3.4.10.1 Penentuan pH Optimum Xilanase Bebas

Dimasukkan substrat xilan 1% (w/v) sebanyak 1 mL ke

dalam tabung reaksi lalu dipanaskan dalam penangas air selama 15

menit ada suhu 60°C. Selanjutnya ditambahkan xilanase, variasi pH

5-9 yaitu buffer asetat pH 5 dan 6 serta buffer tris-HCl 0,2 M pH 7,8

dan 9 dan air bebas reduktor masing-masing sebanyak 1 mL dan

dipanaskan campuran larutan selama 55 menit pada suhu 55°C.

Kemudian ditambahkan reagen DNS sebanyak 2 mL ke dalam tabung

reaksi dan dimasukkan dalam penangas air mendidih selama 15 menit.

Setelah itu, didinginkan dengan air mengalir. Setelah dingin,


sampai tanda batas serta dihomogenkan. Diukur absorbansi


maksimum xilosa, yaitu 490 nm.

3.4.10.2 Penentuan Suhu Optimum Xilanase Bebas



menit ada suhu 60°C. Selanjutnya ditambahkan xilanase, larutan

buffer pH kondisi optimum pada tahap 3.4.10.1 dan air bebas reduktor

masing-masing sebanyak 1 mL dan dipanaskan campuran larutan

17

selama 55 menit pada variasi suhu 40°C, 45°C, 50°C, 55°C dan 60°C.

Kemudian ditambahkan reagen DNS sebanyak 2 mL ke dalam tabung

reaksi dan dimasukkan dalam penangas air mendidih selama 15 menit.

Setelah itu, didinginkan dengan air mengalir. Setelah dingin,


sampai tanda batas serta dihomogenkan. Diukur absorbansi



3.4.10.3 Penentuan Waktu Inkubasi Xilanase Bebas



menit ada suhu 60°C. Selanjutnya ditambahkan xilanase, larutan

buffer pH kondisi optimum pada tahap 3.4.10.1 dan air bebas reduktor

masing-masing sebanyak 1 mL dan dipanaskan campuran larutan

dengan variasi waktu inkubasi selama 40,45, 50, 55 dan 60 menit pada

suhu optimum tahap 3.4.10.2. Kemudian ditambahkan reagen DNS

sebanyak 2 mL ke dalam tabung reaksi dan dimasukkan dalam

penangas air mendidih selama 15 menit. Setelah itu, didinginkan

dengan air mengalir. Setelah dingin, dimasukkan ke dalam labu ukur

25 mL dan ditambahkan akuades sampai tanda batas serta

dihomogenkan. Diukur absorbansi menggunakan spectronic genesys

20 pada panjang gelombang maksimum xilosa, yaitu 490 nm.

3.4.10.4 Pengukuran Aktivitas Xilanase Bebas

Aktivitas xilanase dinyatakan dalam satuan µg/mg menit.

Satuan unit aktivitas enzim bebas dinyatakan sebagai 1 µg xilosa yang

dihasilkan per menit per mg enzim. Nilai aktivitas xilanase bebas

dapat diperoleh dengan cara memplotkan nilai absorbansi yang

diperoleh pada persamaan kurva baku gula pereduksi xilosa, sehingga

diperoleh konsentrasi gula pereduksi dari hidrolisis xilan oleh

xilanase. Berikut adalah persamaan untuk mengetahui satu unit

aktivitas enzim:

𝐴𝐸 = 𝑋 𝑥 𝑉 𝑥 𝑓𝑝

𝑝 𝑥 𝑞 (3.1)

18

Keterangan :

AE = aktivitas enzim (µg.mg-1.menit-1)

X = konsentrasi gula pereduksi (µg.mL-1)

V = volume total sampel (mL)

fp = faktor pengenceran

p = konsentrasi protein xilanase bebas (mg/mL)

q = waktu reaksi (menit)

3.4.11 Amobilisasi Enzim Xilanase pada Matriks Bentonit

Teraktivasi

3.4.11.1 Aktivasi Matriks Bentonit

Bentonit hasil preparasi ditimbang sebanyak 10 g dan

dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 mL. Selanjutnya ditambahkan

larutan HCl 0,4 M sebanyak 200 mL. Kemudian dikocok larutan

campuran dengan shaker dengan kecepatan 100 rpm selama 4 jam.

Setelah itu, disaring menggunakan kertas saring dan dicuci dengan

akuades hingga pH air pencuci sama dengan pH akuades. Selanjutnya

dikeringkan endapan bentonit yang tidak tersaring ke dalam oven pada

suhu 105°C hingga berat konstan. Kemudian dikalsinasi bentonit hasil

aktivasi selama 4 jam pada suhu 500°C.

3.4.11.2 Amobilisasi Enzim Xilanase pada Matriks Bentonit

Teraktivasi

Amobilisasi enzim xilanase dilakukan dengan cara ekstrak

kasar xilanase dipipet sebanyak 2 mL lalu dimasukkan ke dalam labu

ukur 5 mL. Setelah itu, ditambahkan buffer tris-HCl 0,2 M pH 8

hingga tanda batas dan dihomogenkan. Campuran larutan dimasukkan

ke dalam erlenmeyer yang berisi 0,1 g bentonit yang telah diaktivasi.

Selanjutnya dishaker selama 3 jam dengan kecepatan 100 rpm.

Kemudian disaring dengan kertas saring. Endapan yang diperoleh

merupakan xilanase amobil, sedangkan filtratnya merupakan xilanase

sisa yang tidak teradsorpsi pada matriks bentonit.

19

3.4.12 Penentuan Aktivitas Xilanase Amobil

3.4.12.1 Penentuan pH Optimum Xilanase Amobil

Dimasukkan substrat xilan 1 % (w/v) sebanyak 1 mL ke


menit pada suhu 60°C. Selanjutnya, ditambahkan 0,1 g xilanase

amobil, 1 mL variasi pH 5-9 yaitu buffer asetat pH 5 dan 6 serta buffer

tris-HCl 0,2 M pH 7,8 dan 9, dan 1 mL air bebas reduktor di tabung

reaksi yang berbeda. Kemudian dipanaskan campuran larutan selama

55 menit pada suhu 55°C. Setelah itu, didinginkan larutan dan disaring

enzim xilanase. Filtrat dalam tabung reaksi ditambah reagen DNS

sebanyak 2 mL dan dimasukkan dalam penangas air mendidih selama

15 menit. Selanjutnya didinginkan dengan air mengalir. Setelah

dingin, diencerkan dengan akuades sampai volumenya 15 mL lalu



3.4.12.2 Penentuan Suhu Optimum Xilanase Amobil




amobil, 1 mL larutan buffer pH kondisi optimum pada tahap 3.4.12.1

dan 1 mL air bebas reduktor. Selanjutnya masing-masing larutan

campuran diinkubasi pada variasi suhu 40, 45, 50, 55 dan 60°C selama

55 menit. Setelah itu, didinginkan larutan dan disaring enzim xilanase.

Filtrat dalam tabung reaksi ditambah reagen DNS sebanyak 2 mL dan

dimasukkan dalam penangas air mendidih selama 15 menit.

Selanjutnya didinginkan dengan air mengalir. Setelah dingin,

diencerkan dengan akuades sampai volumenya 15 mL lalu



3.4.12.3 Penentuan Waktu Inkubasi Optimum Xilanase Amobil




20

amobil, 1 mL larutan buffer pH kondisi optimum pada tahap 3.4.12.1

dan 1 mL air bebas reduktor di tabung reaksi yang berbeda. Kemudian

dipanaskan campuran larutan dengan variasi waktu inkubasi 40, 45,

55, dan 60 menit pada suhu optimum pada tahap 3.4.12.2. Setelah itu,

didinginkan larutan dan disaring enzim xilanase. Filtrat dalam tabung

reaksi ditambah reagen DNS sebanyak 2 mL dan dimasukkan dalam

penangas air mendidih selama 15 menit. Selanjutnya didinginkan

dengan air mengalir. Setelah dingin, diencerkan dengan akuades

sampai volumenya 15 mL lalu dihomogenkan. Diukur absorbansi



3.4.13 Penentuan Kadar Protein Enzim Xilanase Sisa

Ditentukan kadar protein yang tidak terjebak dengan cara

filtrat dari enzim yang tidak teramobilkan sebanyak 2 mL

ditambahkan larutan kasein 5000 µg/mL sebanyak 2 mL dan reagen

biuret sebanyak 8 mL. Kemudian diinkubasi selama 30 menit pada

suhu 50°C. Diukur absorbansi menggunakan spectronic genesys 20

pada panjang gelombang maksimum kasein yaitu 540 nm sehingga

diketahui kadar protein xilanase sisa dengan memplotkan nilai

absorbansi pada persamaan regresi kurva standar kasein.

3.4.14 Analisa Data

Data aktivitas xilanase bebas dan amobil pada matriks

bentonit teraktivasi yang dipengaruhi oleh pH, suhu dan waktu

inkubasi dianalisis dengan uji F dan diulang tiga kali setiap perlakuan.

Selanjutnya jika F hitung lebih besar dari F tabel maka dilakukan uji

Beda Nyata Terkecil (BNT).

21

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Produksi dan Isolasi Xilanase dari Aspergillus niger

Xilanase merupakan enzim yang mampu menghidrolisis xilan

menjadi xilosa. Xilosa dapat terbentuk dari reaksi hidrolisis antara

xilan dan aktivitas xilanase yang dihasilkan dari jenis mikroorganisme

seperti jamur atau bakteri [18]. Pada penelitian ini digunakan klobot

jagung sebagai induser dalam media pertumbuhan untuk menginduksi

biosintesis enzim xilanase dari mikroorganisme Aspergillus niger.

Digunakan klobot jagung karena memiliki kandungan hemiselulosa

yang tinggi [9]. Tingginya kandungan hemiselulosa dalam klobot

jagung digunakan sebagai sumber xilan dalam produksi enzim

xilanase.

Xilanase dihasilkan dari jenis kapang Aspergillus niger yang

telah diremajakan pada media padat PDA. Aspergillus niger yang

ditumbuhkan pada media cair mengalami beberapa fase untuk

beradaptasi dengan lingkungannya karena adanya keterbatasan nutrisi.

Fase pertumbuhan yang dialami antara lain fase adaptasi, fase

logaritma, fase stasioner dan fase kematian [30]. Produksi xilanase

ketika memasuki fase pertengahan hingga akhir fase logaritma

sehingga diperlukan biakan aktif berupa inokulum agar diperoleh hasil

yang maksimal. Isolasi xilanase dilakukan dengan cara sentrifugasi

dingin untuk memisahkan antara supernatan berupa ekstrak kasar

xilanase dengan endapan yang merupakan komponen sisa yang

memiliki berat molekul tinggi. Dilakukan menggunakan sentrifuse

dingin untuk mencegah terjadinya denaturasi akibat panas.

Dilakukan uji aktivitas enzim dengan mereaksikan ekstrak

kasar xilanase dan substrat xilan agar terbentuk reaksi enzimatis yang

menghasilkan xilosa. Xilosa dapat diukur dengan penambahan DNS

yang mengalami reaksi redoks atau reduksi oksidasi, xilosa akan

teroksidasi menjadi asam xilonat dan DNS akan tereduksi menjadi

asam-3-amino-5 nitrosalisilat. Reaksi yang terjadi memberikan warna

merah kecokelatan. Semakin pekat warna yang dihasilkan maka

absorbansi yang terukur semakin besar pula. Nilai absorbansi yang

dihasilkan dikonversi pada persamaan kurva baku xilosa dan dihitung

aktivitas xilanase menggunakan persamaan aktivitas enzim (AE).

22

Selain itu, dilakukan uji kadar protein awal dengan mereaksikan

ekstrak kasar xilanase dengan reagen biuret. Penambahan reagen

biuret untuk mengidentifikasi adanya ikatan peptida dari protein yang

terkandung dalam ekstrak kasar xilanase. Kadar protein awal xilanase

bebas sebesar 0,94 mg/mL.

Gambar 4.1: Mekanisme reaksi enzimatis yang terjadi pada

pembentukan xilosa

23

Gambar 4.2: Reaksi reagen DNS dengan Xilosa

4.2 Amobilisasi Xilanase pada Matriks Bentonit Teraktivasi

Amobilisasi xilanase dilakukan menggunakan bentonit

sebagai matriks. Bentonit diaktivasi terlebih dahulu menggunakan

HCl untuk memperbesar ukuran pori bentonit sehingga dapat

meningkatkan adsorpsi, selain itu menghilangkan pengotor yang

terdapat pada bentonit sehingga luas permukaan menjadi lebih besar

menyebabkan dapat mengadsorpsi xilanase lebih maksimal.

Amobilisasi xilanase pada matriks bentonit melalui metode

adsorpsi fisik yaitu xilanase akan teradsorp atau menempel pada

permukaan matriks. Hasil ekstrak kasar xilanase dicampurkan dengan

bentonit teraktivasi kemudian dishaker pada suhu ruang selama 3 jam

dengan kecepatan 100 rpm. Interaksi hidrogen terjadi ketika enzim

xilanase teradsorp dalam matriks bentonit akibat adanya kontak antara

atom H dari gugus amino pada rantai samping asam amino penyusun

xilanase (-NH2) maupun atom H pada gugus karboksil (-COOH) dari

residu asam amino dengan atom oksigen pada bentonit (Si-O-Al).

Dilakukan uji kadar protein sisa dengan mereaksikan filtrat xilanase

yang tidak teramobilkan dengan reagen biuret. Kadar protein xilanase

sisa sebesar 0,22 mg/mL dan massa enzim yang teradsorp pada

matriks bentonit ketika amobil sebesar 1,44 mg.

24

4.3 Penentuan Kondisi Optimum Xilanase Bebas dan Amobil

4.3.1 Penentuan pH Optimum

Enzim bebas dan amobil memiliki kondisi pH lingkungan

yang berbeda untuk mencapai aktivitas enzim tertinggi. Aktivitas

maksimum enzim terjadi pada pH optimum ketika kondisi tingkat

keasaman sesuai untuk bereaksi dengan substrat. Pada penelitian ini,

variasi pH yang digunakan untuk menentukan aktivitas enzim bebas

dan amobil adalah 5, 6, 7, 8, dan 9. Berdasarkan data yang diperoleh,

diketahui pH optimum xilanase bebas yaitu pada pH 6 dengan

aktivitas enzim sebesar 3,029 µg/mg.menit, sedangkan pH optimum

xilanase amobil pada pH 8 dengan aktivitas enzim sebesar 0,821

µg/mg.menit.

Pada xilanase bebas dengan pH 5 aktivitas enzim yang

dihasilkan sebesar 2,718 µg/mg.menit, kemudian mengalami

kenaikan pada pH 6 dengan aktivitas enzim sebesar 3,029

µg/mg.menit, pada pH 7 dan pH 8 mengalami penurunan dengan

aktivitas enzim masing-masing sebesar 2,284 µg/mg.menit dan 1,808

µg/mg.menit. Pada pH 9 aktivitas xilanase bebas sebesar 2,074

µg/mg.menit, mengalami kenaikan dari aktivitas enzim sebelumnya.

Sedangkan pada xilanase amobil dengan variasi pH 5, 6, 7,

dan 8 mengalami kenaikan aktivitas xilanase amobil sampai pH

optimum yaitu 8, aktivitas xilanase amobil berturut-turut 0,221

µg/mg.menit, 0,220 µg/mg.menit, 0,301 µg/mg.menit dan 0,821

µg/mg.menit. Pada pH 9 aktivitas xilanase amobil mengalami

penurunan, aktivitas xilanase amobil pada pH 9 yaitu 0,209

µg/mg.menit. Data yang diperoleh dapat dilihat pada Gambar 4.1.

25

0,000

1,000

2,000

3,000

5 6 7 8 9

Aktivitas

Enzi

m (

µg/m

g.m

enit)

pH

Amobil

Bebas

Gambar 4.3: Kurva Pengaruh pH terhadap Aktivitas Enzim

Xilanase Bebas dan Amobil

Berdasarkan kurva tersebut, diketahui bahwa terjadi

pergeseran aktivitas enzim xilanase bebas dan amobil yaitu dari

aktivitas enzim tertinggi pada pH 6 (xilanase bebas) ke pH 8 (xilanase

amobil). Hal ini dapat disebabkan karena adanya perbedaan jumlah

ion H+ pada lingkungan dan jumlah anion pada matriks. Perubahan pH

berpengaruh terhadap ionisasi gugus fungsi yang menyebabkan

terjadinya perubahan bentuk atau konformasi enzim xilanase dan sifat

katalitiknya. Kenaikan aktivitas enzim xilanase sampai pada pH

optimum disebabkan adanya perubahan gugus aktif (-COOH) dari

asam amino glutamat yang telah bermuatan negatif menjadi ion

karboksilat (-COO-). Semakin tinggi pH maka ion karboksilat semakin

banyak sehingga mudah terjadinya protonasi oksigen glikosidik

menyebabkan aktivitas enzim xilanase semakin meningkat dengan

dihasilkannya gula pereduksi yang banyak.

Berdasarkan analisis data statistik, Fhitung xilanase bebas

sebesar 485,516 sedangkan Ftabel sebesar 3,480 sehingga Fhitng > Ftabel,

maka dapat diartikan bahwa perlakuan masing-masing pH

berpengaruh nyata terhadap aktivitas enzim xilanase bebas. Pada

xilanase amobil, Fhitung yang diperoleh sebesar 3254,659 sedangkan

Ftabel sebesar 3,480 sehingga Fhitng > Ftabel, maka dapat diartikan bahwa

perlakuan masing-masing pH berpengaruh nyata terhadap aktivitas

26

enzim xilanase amobil. Uji BNT 5% dilakukan untuk mengetahui

variasi pH mana saja yang menunjukkan perbedaan yang sangat nyata.

Berdasarkan hasil uji BNT 5%, xilanase bebas pada pH 5, 6, 7, 8, dan

9 terdapat perbedaan yang sangat nyata. Sedangkan xilanase amobil

pada pH 5 dan 9 serta pH 5 dan 6 tidak berbeda nyata.

4.3.2 Penentuan Suhu Optimum

Enzim bebas dan amobil memiliki suhu optimum masing-

masing yang merupakan suhu ketika enzim bekerja dan memiliki laju

reaksi yang sangat baik. Semakin jauh dari suhu optimum, maka

aktivitas enzim semakin rendah [27]. Pada penelitian ini, variasi suhu

yang digunakan untuk menentukan aktivitas enzim bebas dan amobil

adalah 40°C, 45°C, 50°C, 55°C dan 60°C. Berdasarkan data yang

diperoleh, diketahui suhu optimum xilanase bebas dan xilanase amobil

yaitu pada suhu 50°C dengan aktivitas xilanase bebas sebesar 3,811

µg/mg.menit, sedangkan aktivitas xilanase amobil sebesar 0,311

µg/mg.menit.

Aktivitas xilanase bebas pada variasi suhu 40°C, 45°C dan

50°C mengalami kenaikan, antara lain 0,966 µg/mg.menit, 2,528

µg/mg.menit dan 3,811 µg/mg.menit. Namun pada suhu 55°C dan

60°C mengalami penurunan dari sebelumnya yaitu 3,027 µg/mg.menit

dan 1,862 µg/mg.menit.

Sedangkan pada xilanase amobil, aktivitas enzim mengalami

kenaikan dari suhu 40°C, 45°C dan 50°C antara lain 0,224

µg/mg.menit, 0,238 µg/mg.menit dan 0,311 µg/mg.menit. Namun

pada suhu 55°C dan 60°C mengalami penurunan yaitu 0,216

µg/mg.menit dan 0,176 µg/mg.menit. Data yang diperoleh dapat

dilihat pada Gambar 4.2.

27

0,000

1,000

2,000

3,000

4,000

40 45 50 55 60

Aktivitas

Enzi

m (

µg/m

g.m

enit)

Suhu (°C)

Amobil

Bebas

Gambar 4.4: Kurva Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Enzim

Xilanase Bebas dan Amobil

Berdasarkan kurva tersebut, diketahui bahwa tidak terjadi

pergeseran aktivitas enzim xilanase bebas dan amobil yaitu suhu

optimum terjadi pada suhu 50°C. Namun xilanase bebas dan amobil

pada suhu optimum yang sama menghasilkan aktivitas enzim yang

berbeda, aktivitas xilanase bebas lebih besar yaitu 15,880

µg/mg.menit dibandingkan aktivitas amobil sebesar 1,553

µg/mg.menit. Pada suhu optimum, enzim xilanase dan substrat

bertumbukan efektif sehingga menghasilkan kompleks enzim-substrat

dengan mudah dan produk yang terbentuk lebih banyak. Hal ini

menyebabkan aktivitas enzim xilanase meningkat pada suhu

optimum. Setelah mencapai suhu optimum, aktivitas enzim xilanase

menurun dan mengalami denaturasi pada suhu tinggi sehingga

didapatkan aktivitas enzim yang jauh lebih kecil akibat perubahan

konformasi dan struktur sekunder dan tersier enzim xilanase.

Berdasarkan Analisis data statistik, Fhitung xilanase bebas


maka dapat diartikan bahwa perlakuan masing-masing suhu


xilanase amobil, Fhitung yang diperoleh sebesar 899,363 sedangkan

Ftabel sebesar 3,480 sehingga Fhitng > Ftabel, maka dapat diartikan bahwa

perlakuan masing-masing suhu berpengaruh nyata terhadap aktivitas

enzim xilanase amobil. Uji BNT 5% dilakukan untuk mengetahui

28

variasi suhu mana saja yang menunjukkan perbedaan yang sangat

nyata. Berdasarkan hasil uji BNT 5%, xilanase bebas dan xilanase

amobil pada suhu 40°C, 45°C, 50°C, 55°C dan 60°C terdapat

perbedaan yang sangat nyata.

4.3.3 Penentuan Waktu Inkubasi Optimum

Waktu inkubasi optimum ditentukan untuk mengetahui waktu

yang dibutuhkan enzim untuk berikatan dengan substrat sehingga

dapat bekerja maksimal menghasilkan produk tinggi. Pada penelitian

ini, variasi waktu inkubasi yang digunakan untuk menentukan

aktivitas enzim bebas dan amobil adalah 40 menit, 45 menit, 50 menit,

55 menit dan 60 menit. Berdasarkan data yang diperoleh, diketahui

waktu inkubasi optimum xilanase bebas selama 45 menit dengan

aktivitas xilanase bebas sebesar 4,743 µg/mg.menit, sedangkan waktu

inkubasi optimum xilanase amobil selama 55 menit dengan aktivitas

enzim sebesar 0,315 µg/mg.menit.

Pada xilanase bebas, aktivitas enzim mengalami kenaikan dari

waktu inkubasi 40 menit ke 45 menit antara lain 1,917 µg/mg.menit

dan 4,743 µg/mg.menit. Namun pada waktu inkubasi 50 menit, 55

menit dan 60 menit mengalami penurunan aktivitas enzim yaitu dari

4,414 µg/mg.menit ke 4,110 µg/mg.menit dan 4,107 µg/mg.menit.

Sedangkan pada xilanase amobil, aktivitas xilanase amobil

mengalami kenaikan dari waktu inkubasi 40 menit, 45 menit, 50 menit

dan 55 menit antara lain 0,259 µg/mg.menit, 0,280 µg/mg.menit,

0,301 µg/mg.menit dan 0,315 µg/mg.menit. Namun pada waktu

inkubasi 60 menit mengalami penurunan aktivitas enzim menjadi

0,169 µg/mg.menit. Data yang diperoleh dapat dilihat pada Gambar

4.3.

29

0,000

1,000

2,000

3,000

4,000

5,000

40 45 50 55 60

Aktivitas

Enzi

m (

µg/m

g.m

enit)

Waktu Inkubasi (menit)

Amobil

Bebas

Gambar 4.5: Kurva Pengaruh Waktu Inkubasi terhadap Aktivitas

Enzim Xilanase Bebas dan Amobil

Berdasarkan kurva, diketahui bahwa terjadi pergeseran

aktivitas enzim xilanase bebas dan amobil yaitu dari aktivitas enzim

tertinggi pada waktu inkubasi 45 menit (xilanase bebas) ke waktu

inkubasi 55 menit (xilanase amobil). Waktu inkubasi xilanase amobil

lebih lama dibandingkan xilanase bebas untuk mencapai aktivitas

maksimumnya. Hal ini dikarenakan terdapat efek tahanan difusi akibat

bahan pendukung pada xilanase amobil sehingga membutuhkan waktu

yang lama agar substrat dan enzim bertemu. Substrat akan berdifusi

masuk terlebih dahulu ke dalam partikel xilanase amobil untuk

membentuk produk.

Sebelum mencapai waktu inkubasi optimum, aktivitas enzim

xilanase belum maksimal karena enzim dan substrat belum

berinteraksi optimal. Pada saat mencapai waktu inkubasi optimum,

enzim dan substrat bereaksi maksimal karena sisi aktif enzim

mengikat lebih banyak substrat. Setelah tercapai waktu inkubasi

optimum, aktivitas xilanase menurun dikarenakan sisi aktif enzim

untuk mengikat substrat sudah jenuh.

Berdasarkan Analisis data statistik, Fhitung xilanase bebas


maka dapat diartikan bahwa perlakuan masing-masing waktu inkubasi


30

xilanase amobil, Fhitung yang diperoleh sebesar 62,245 sedangkan Ftabel

sebesar 3,480 sehingga Fhitng > Ftabel, maka dapat diartikan bahwa

perlakuan masing-masing waktu inkubasi berpengaruh nyata terhadap

aktivitas enzim xilanase amobil. Uji BNT 5% dilakukan untuk

mengetahui variasi waktu inkubasi mana saja yang menunjukkan

perbedaan yang sangat nyata. Berdasarkan hasil uji BNT 5%, xilanase

bebas pada waktu inkubasi 55 menit dan 60 menit tidak berbeda nyata.

Sedangkan xilanase amobil pada waktu inkubasi 40°C dan 45°C, 45°C

dan 50°C serta 50°C dan 55°C tidak ada beda nyata.

31

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat

disimpulkan bahwa:

1. pH, suhu dan waktu inkubasi berpengaruh terhadap aktivitas enzim xilanase bebas dan amobil.

2. pH optimum xilanase bebas yaitu pada pH 6 dengan aktivitas enzim sebesar 3,029 µg/mg.menit sedangkan xilanase amobil

pada pH 8 dengan aktivitas enzim sebesar 0,821

µg/mg.menit.

3. Suhu optimum xilanase bebas dan xilanase amobil pada suhu 50°C dengan aktivitas enzim masing-masing sebesar 3,811

µg/mg.menit dan 0,311 µg/mg.menit.

4. Waktu inkubasi optimum xilanase bebas selama 45 menit dengan aktivitas enzim sebesar 4,743 µg/mg.menit,

sedangkan pada xilanase amobil selama 55 menit dengan

aktivitas enzim sebesar 0,315 µg/mg.menit.

5.2 Saran

Enzim amobil dapat digunakan kembali secara berulang-

ulang sehingga perlu ditentukan efisiensi penggunaan ulang xilanase

amobil dengan matriks bentonit teraktivasi.

32

DAFTAR PUSTAKA

1. Microbial Xylanases And Their Industrial Applications As Well

As Future Perspectives: A Review. (2017). Global Journal of

Biology, Agriculture & Health Sciences, 6(3), 5–12.

https://doi.org/10.24105/gjbahs.6.3.1702

2. Wucherpfennig, T., Hestler, T., & Krull, R. (2011).

Morphology engineering - Osmolality and its effect on

Aspergillus niger morphology and productivity. Microbial

Cell Factories, 10(1), 58. https://doi.org/10.1186/1475-2859-

10-58

3. Pangesti, N. W. I., Pangastuti, A., & N, E. R. (2012). Pengaruh

penambahan molase pada produksi enzim xilanase oleh

fungi Aspergillus niger dengan substrat jerami padi.

Bioteknologi Biotechnological Studies, 9(2), 41–48.

https://doi.org/10.13057/biotek/c090202

4. Sari, I. P., Sutrisno, S., & Prasetyawan, S. (2014). Optimasi

Amobilisasi Xilanase Dari Trichoderma Viride Dengan

Matriks Zeolit. Jurnal Ilmu Kimia Universitas Brawijaya, 2(1),

pp.421-427-427.

5. Guisan, J. M. (2016). Immobilization of Enzymes and Cells.

Humana Press.

6. Mulyasuryani, A. (2018). Elektroanalitik: Dasar dan

Aplikasi. Deepublish.

33

7. Buchari, H., Muji. (1996). Karakterisasi Bentonit Pacitan.

JKTI, 6, 1–2.

8. Ginting, A. (2016). Pemanfaatan Limbah Kulit Jagung untuk

Produk Modular dengan Teknik Pilin. Dinamika Kerajinan

dan Batik: Majalah Ilmiah, 32(1), 51–62.

https://doi.org/10.22322/dkb.v32i1.1180

9. Mayangsari, D. (2009). Pengaruh Sumber Karbon terhadap

Produksi Enzim Xilanase dari Trichoderma viride. Jurnal

Ilmu Kimia Universitas Brawijaya.

10. Jatmiko, Efendi. (2016). Pemanfaatan Xilan Asal Tongkol

Jagung Sebagai Sumber Karbon Dan Induser Untuk

Produksi Enzim Xilanolitik Dari Escherichia Coli

Rekombinan Campuran [Gbtxyl43b] Dan [Abfa51]

(Skripsi). Universitas Airlangga. Retrieved from

http://lib.unair.ac.id

11. Siv, S., & Prema, P. (2002). Biotechnology of Microbial

Xylanases: Enzymology, Molecular Biology, and

Application. Critical reviews in biotechnology, 22, 33–64.

https://doi.org/10.1080/07388550290789450

12. Agung Istri Ratnadewi, A., Handayani, W., & Nur Avida, S.

(2016). Optimasi Konsentrasi Substrat Xilan Ampas Tahu

Terhadap Endo-Β-1,4-D-Xylanase Untuk Memproduksi

Xilooligosakarida. Jurnal Kimia Riset, 1, 73.

https://doi.org/10.20473/jkr.v1i2.3084

34

13. Lachke, A. (2002). Biofuel fromD-xylose — The second most

abundant sugar. Resonance, 7(5), 50–58.

https://doi.org/10.1007/BF02836736

14. Natawijaya, D., Saepudin, A., & Pangesti, D. (2015). Uji

Kecepatan Pertumbuhan Jamur Rhizopus Stolonifer Dan

Aspergillus Niger Yang Diinokulasikan Pada Beberapa Jenis

Buah Lokal. Jurnal Siliwangi Seri Sains dan Teknologi, 1(1).

Retrieved from

http://jurnal.unsil.ac.id/index.php/jssainstek/article/view/24

15. Budiman, A., & Setyawan, S. (n.d.). Pengaruh Konsentrasi

Substrat, Lama Inkubasi Dan pH Dalam Proses Isolasi

Enzim Xylanase Dengan Menggunakan Media Jerami Padi,

11.

16. Susanti, R., & Fibriana, F. (2017). Teknologi Enzim. Penerbit

Andi.

17. Agustina, I. (2011). Studi Awal Produksi Enzim Selulase Oleh

Trichoderma Sp. Strain T004 Dan T051 Menggunakan

Substrat Pelepah Sawit = Preliminary Study Of Cellulase

Enzyme Production By Trichoderma Sp. Strains T004 And

T051 Using Palm Frond As Substrates. Universitas Indonesia,

1.

18. Richana, N. (2002). Produksi dan Prospek Enzim Xilanase

dalam Pengembangan Bioindustri di Indonesia, 5(1), 8.

35

19. Vilma, M., Winkelhausen, E., & Slobodanka, K. (2005). Lipase

Immobilized By Different Techniques On Various Support

Materials Applied In Oil Hydrolysis. Journal of the Serbian

Chemical Society, 70. https://doi.org/10.2298/JSC0504609M

20. Betancor, L., & Luckarift, H. R. (2008). Bioinspired Enzyme

Encapsulation For Biocatalysis. Trends in Biotechnology,

26(10), 566–572. https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2008.06.009

21. Millicent Mabel, M., Parthasarathy, N., Rajkumar, J., Gururaj,

P. N., & Thulasi Priyadharshini, M. (2016). A Study On The

Immobilization Of Acid Xylanase On Chitosan From Chitin

Of Shrimp Shells. Journal of Chemical and Pharmaceutical

Sciences, 9, 268–271.

22. Komadel, P. (2003). Chemically Modified Smectites. Clay

Minerals, 38(1), 127–138.

https://doi.org/10.1180/0009855033810083

23. Hamzah, S., Rachmad, W., Suwardi, J., & Rohman, S. (2009).

Modifikasi Bentonit (Clay) menjadi Organoclay dengan

Penambahan Surfaktan. Jurnal Nanosains & Nanoteknologi.

24. Volzone, C., Rinaldi, J. O., & Ortiga, J. (2002). N2 and CO2

Adsorption by TMA- and HDP-Montmorillonites. Materials

Research, 5(4), 475–479. https://doi.org/10.1590/S1516-

14392002000400013

25. Muawanah, A. (2006). Produksi Enzim Xilanase Termostabil

Dari Thermomyces Lanuginosus Ifo 150 Pada Substrat

36

Bagasse Tebu. Retrieved from

http://repository.ipb.ac.id/xmlui/handle/123456789/8484

26. Sukmana, E., Sutrisno, S., & Roosdiana, A. (2014). Pengaruh

Suhu Dan Lama Penyimpanan Terhadap Kestabilan Enzim

Xilanase Dari Trichoderma Viride. Jurnal Ilmu Kimia

Universitas Brawijaya, 2(1), pp.340-344-344.

27. Sumardjo, D. (2009). Pengantar Kimia Buku Panduan

Kuliah Mahasiswa Kedokteran. EGC.

28. Sutrisno, A. (2017). Teknologi Enzim. Universitas Brawijaya

Press.

29. Salirawati, D. (2017). Karakterisasi Beberapa Ion Logam

Terhadap Aktivitas Enzim Tripsin. Jurnal Penelitian Saintek,

21, 107. https://doi.org/10.21831/jps.v21i2.12581

30. Hamdiyati, Y. (2011). Pertumbuhan Dan Pengendalian

Mikroorganisme II. Retrieved December 15, 2019, from

https://docplayer.info/36951119-Pertumbuhan-dan

pengendalian-mikroorganisme-ii-oleh-dra-yanti-hamdiyati-m-

si.html

37

LAMPIRAN

Lampiran A. Diagram Alir

A. Tahapan Penelitian

Pembuatan tepung klobot

jagung

Pembuatan media padat

Peremajaan biakan murni Aspergillus niger

Pembuatan media cair

Pembuatan inokulum

Produksi enzim xilanase

Isolasi ekstrak kasar xilanase dari biakan Aspergillus niger

Penentuan kadar protein awal

Penentuan kurva baku gula pereduksi xilosa

Penentuan aktivitas xilanase bebas

pH Suhu Waktu Inkubasi

38

Amobilisasi enzim xilanase pada matriks bentonit

teraktivasi

Penentuan kadar protein enzim xilanase sisa

Penentuan aktivitas xilanase amobil

pH Suhu Waktu Inkubasi

Analisa Data

39

Lampiran B. Preparasi Larutan

B.1 Larutan Asam Asetat 0,2 M

Asam glasial 98% (BJ: 1,05 g/mL; BM: 60 g/mol; konsentrasi

17,15 M) dipipet sebanyak 1,17 mL. Selanjutnya, dimasukkan ke

dalam labu ukur 100 mL dan ditambahkan akuades hingga tanda batas.

Kemudian dikocok hingga homogen.

B.2 Larutan Natrium Asetat 0,2 M

Natrium asetat (BM: 82 g/mol) ditimbang sebanyak 1,64 g.

Selanjutnya, dilarutkan dengan akuades dan dimasukkan ke dalam

labu ukur 100 mL. Kemudian ditambahkan dengan akuades hingga

tanda batas dan dikocok hingga homogen.

B.3 Larutan Buffer Asetat 0,2 M pH 5

Larutan asam asetat 0,2 M dipipet sebanyak 50 mL ke dalam

gelas kimia. Kemudian ditambahkan larutan natrium asetat 0,2 M

sebanyak 90,99 mL dan diaduk menggunakan magnetik stirrer hingga

homogen. Selanjutnya, diukur pH menggunakan kertas pH hingga

menunjukkan pH 5.

B.4 Larutan Buffer Asetat 0,2 M pH 6

Larutan asam asetat 0,2 M dipipet sebanyak 2 mL ke dalam

gelas kimia. Kemudian ditambahkan larutan natrium asetat 0,2 M

sebanyak 36,39 mL dan diaduk menggunakan magnetik stirrer hingga

homogen. Selanjutnya, diukur pH menggunakan kertas pH hingga

menunjukkan pH 6.

B.5 Unsur Renik

Ditimbang Na2EDTA sebanyak 3,0229 g; NaOH sebanyak

0,5171 g; MgSO4.7H2O sebanyak 0,2502 g; ZnSO4.7H2O sebanyak

0,1004 g; MnSO4.4H2O sebanyak 0,1006 g; CuSO4.5H2O sebanyak

0,0256 g; Na2SO4 sebanyak 2,5005 g; NaMoO4 sebanyak 0,0254 g dan

FeSO4.7H2O sebanyak 0,5002 g lalu dimasukkan ke dalam erlenmeyer

250 mL. Ditambahkan H2SO4 pekat sebanyak 0,125 mL dan

40

dihomogenkan. Setelah itu, ditambahkan akuades hingga volumenya

menjadi 250 mL dan dihomogenkan. Ditutup menggunakan kapas dan

dilapisi dengan kertas cokelat serta diikat dengan karet gelang.

Disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.

B.6 Larutan HCl 0,2 M

Larutan HCl 37% (BJ: 1,19 g/mL; BM: 36,5 g/mol;

konsentrasi 12,06 M) dipipet sebanyak 1,66 mL lalu dimasukkan ke

dalam labu ukur 100 mL. Setelah itu, ditambahkan akuades hingga

tanda batas dan dihomogenkan.

B.7 Larutan Buffer Tris-HCl 0,2 M pH 8

Padatan Tris (BM: 121,1 g/mol) ditimbang sebanyak 6,055 g

lalu dimasukkan ke dalam gelas kimia dan dilarutkan dengan akuades

secukupnya. Ditambahkan larutan HCl 0,2 M sedikit demi sedikit

hingga pHnya menjadi 8. Setelah itu, masukkan ke dalam labu ukur

250 mL dan ditambahkan akuades hingga tanda batas serta

dihomogenkan.


Padatan Tris (BM: 121,1 g/mol) ditimbang sebanyak 0,2422

g lalu dimasukkan ke dalam gelas kimia dan dilarutkan dengan

akuades secukupnya. Ditambahkan larutan HCl 0,2 M sedikit demi

sedikit hingga pHnya menjadi 7. Setelah itu, masukkan ke dalam labu

ukur 10 mL dan ditambahkan akuades hingga tanda batas serta

dihomogenkan.


Padatan Tris (BM: 121,1 g/mol) ditimbang sebanyak 0,6055

g lalu dimasukkan ke dalam gelas kimia dan dilarutkan dengan

akuades secukupnya. Ditambahkan larutan HCl 0,2 M sedikit demi

sedikit hingga pHnya menjadi 9. Setelah itu, masukkan ke dalam labu

ukur 25 mL dan ditambahkan akuades hingga tanda batas serta

dihomogenkan.

41

B.10 Larutan NaOH 10%

NaOH ditimbang sebanyak 10 g dan dilarutkan menggunakan

akuades secukupnya serta diaduk hingga homogen. Setelah itu,

dipindahkan ke dalam labu ukur 100 mL dan ditambahkan akuades

hingga tanda batas serta dihomogenkan.

B.11 Larutan NaOH 0,1N

NaOH ditimbang 0,4 g dan dilarutkan menggunakan

akuades secukupnya serta diaduk hingga homogen. Setelah itu,

dipindahkan ke dalam labu ukur 100 mL dan diencerkan dengan

akuades hingga tanda batas serta dihomogenkan.

B.12 Reagen Biuret

Ditimbang CuSO4.5H2O sebanyak 0,3754 g dan NaKC4O6H4

sebanyak 1,5 g. Setelah itu, dilarutkan dengan akuades secukupnya

dan diaduk hingga homogen. Ditambahkan larutan NaOH 10%

sebanyak 75 mL sambil diaduk menggunakan magnetik stirrer.

Larutan yang sudah tercampur, dimasukkan ke dalam labu ukur 250

mL dan ditambahkan akuades hingga tanda batas serta dihomogenkan.

B.13 Xilan 1%

Xilan ditimbang sebanyak 1 g dan dimasukkan ke dalam gelas

kimia. Setelah itu, dilarutkan dengan buffer asetat pH 5 secukupnya.

Larutan dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL lalu ditambahkan

buffer asetat pH 5 hingga tanda batas dan dihomogenkan.

B.14 Reagen DNS

Ditimbang NaOH 1 g; NaKC4O6H4 18,2 g; Na2SO3 0,5 g;

kristal fenol 0,2 g lalu dimasukkan ke dalam gelas kimia dan

dilarutkan dengan akuades secukupnya. Ditambahkan asam

dinitrosalisilat sedikit demi sedikit sebanyak 1 g lalu diaduk hingga

larut menggunakan magnetik stirrer. Setelah itu, dimasukkan ke dalam

42

labu ukur 100 mL dan ditambahkan akuades hingga tanda batas serta

dihomogenkan.

B.15 Larutan HCl 0,4 M

Larutan HCl 37% (BJ: 1,19 g/mL; BM: 36,5 g/mol;

konsentrasi 12,06 M) dipipet sebanyak 3,3 mL lalu dimasukkan ke

dalam labu ukur 100 mL. Setelah itu, ditambahkan akuades hingga

tanda batas dan dihomogenkan.

B.16 Air Bebas Reduktor

Akuades sebanyak 250 mL dimasukkan ke dalam erlenmeyer

lalu ditambahkan larutan KMnO4 hingga berubah warna menjadi

ungu. Selanjutnya dilakukan destilasi sehingga didapatkan air bebas

reduktor yang tidak berwarna.

43

Lampiran C. Perhitungan

C.1 Larutan Asam Asetat 0,2 M

Larutan asam asetat 0,2 M dibuat dari larutan asam asetat glasial 98%

(BJ: 1,05 g/mL; BM: 60 g/mol):

[𝐴𝑠𝑎𝑚 𝑎𝑠𝑒𝑡𝑎𝑡 𝑔𝑙𝑎𝑠𝑖𝑎𝑙] =𝑝 𝑥 𝜌 𝑥 10

𝑀𝑟=

98% 𝑥 1,05𝑔/𝑚𝐿 𝑥 10

60 𝑔/𝑚𝑜𝑙

[𝐴𝑠𝑎𝑚 𝑎𝑠𝑒𝑡𝑎𝑡 𝑔𝑙𝑎𝑠𝑖𝑎𝑙] = 17,15 𝑀

Jadi, untuk membuat asam asetat glasial konsentrasi 0,2 M dilakukan

pengenceran dengan rumus:

𝑉1 𝑥 𝑀1 = 𝑉2 𝑥 𝑀2 𝑉1 𝑥 17,15 𝑀 = 100 𝑚𝐿 𝑥 0,2 𝑀

𝑉1 = 100 𝑚𝐿 𝑥 0,2 𝑀

17,15 𝑀= 1,17 𝑚𝐿

C.2 Larutan Natrium Asetat 0,2 M

Larutan natrium asetat 0,2 M dibuat sebanyak 100 mL dengan cara

(BM: 82 g/mol):

mol natrium asetat = [natrium asetat] x V

= 0,2 mol/L x 0,1 L

= 0,02 mol

massa natrium asetat = mol natrium asetat x BM natrium asetat

= 0,02 mol x 82 g/mol

= 1,64 g

C.3 Pembuatan Buffer Asetat 0,2 M pH 5

Ka asam asetat = 1,8 x 10-5

pKa asam asetat = 4,74

pH = pKa – log [𝑎𝑠𝑎𝑚 𝑎𝑠𝑒𝑡𝑎𝑡]

[𝑛𝑎𝑡𝑟𝑖𝑢𝑚 𝑎𝑠𝑒𝑡𝑎𝑡]

5 = 4,74 – log

44

5-4,74 = - log 50

𝑉

V = 90,99 mL

Jadi, perbandingan volume CH3COOH : CH3COONa = 50 mL : 90,99

mL.

C.4 Pembuatan Buffer Asetat 0,2 M pH 6

Ka asam asetat = 1,8 x 10-5

pKa asam asetat = 4,74

pH = pKa – log [𝑎𝑠𝑎𝑚 𝑎𝑠𝑒𝑡𝑎𝑡]

[𝑛𝑎𝑡𝑟𝑖𝑢𝑚 𝑎𝑠𝑒𝑡𝑎𝑡]

6 = 4,74 – log

2 𝑚𝐿 𝑥 0,2 𝑚𝑚𝑜𝑙/𝑚𝐿

(2+𝑉)𝑚𝐿𝑉 𝑚𝐿 𝑥 0,2 𝑚𝑚𝑜𝑙/𝑚𝐿

(2+𝑉)𝑚𝐿

6-4,74 = - log 2

𝑉

V = 36,39 mL

Jadi, perbandingan volume CH3COOH : CH3COONa = 2 mL : 36,39

mL.

C.5 Pembuatan Buffer Tris 0,2 M

Larutan tris 0,2 M dibuat sebanyak 250 mL dengan cara (BM: 121,1

g/mol) :

mol tris = [tris] x V

= 0,2 mol/L x 0,25 L

= 0,05 mol

massa tris = mol tris x BM tris

= 0,05 mol x 121,1 g/mol

= 6,055 g

C.6 Pembuatan Larutan HCl 0,2 M

Larutan HCl 0,2 M dibuat dari larutan HCl 37% dengan cara (BJ: 1,19

g/mL; BM: 36,5 g/mol):

45

[𝐴𝑠𝑎𝑚 𝐾𝑙𝑜𝑟𝑖𝑑𝑎] =𝑝 𝑥 𝜌 𝑥 10

𝑀𝑟=

37% 𝑥 1,19𝑔/𝑚𝐿 𝑥 10

36,5 𝑔/𝑚𝑜𝑙

[𝐴𝑠𝑎𝑚 𝐾𝑙𝑜𝑟𝑖𝑑𝑎] = 12,06 𝑀

Jadi, untuk membuat asam klorida konsentrasi 0,2 M dilakukan

pengenceran dengan rumus:

𝑉1 𝑥 𝑀1 = 𝑉2 𝑥 𝑀2 𝑉1 𝑥 12,06 𝑀 = 100 𝑚𝐿 𝑥 0,2 𝑀

𝑉1 = 100 𝑚𝐿 𝑥 0,2 𝑀

12,06 𝑀= 1,66 𝑚𝐿

C.7 Pembuatan Larutan HCl 0,4 M

Larutan HCl 0,4 M dibuat dari larutan HCl 37% dengan cara (BJ: 1,19

g/mL; BM: 36,5 g/mol):

[𝐴𝑠𝑎𝑚 𝐾𝑙𝑜𝑟𝑖𝑑𝑎] =𝑝 𝑥 𝜌 𝑥 10

𝑀𝑟=

37% 𝑥 1,19𝑔/𝑚𝐿 𝑥 10

Documents

repository.ub.ac.idrepository.ub.ac.id/179911/1/Indiana Zulfa (2).pdf · 2020. 3. 5. · Author: pÓ :5e²5 W^;\^GFN¨q¡ °&õ þ ÇÅ Created Date R K@N XGMölg¢èJ>ò °êav¨Æne