Upload
votram
View
232
Download
1
Embed Size (px)
Citation preview
Mikroteknik (Mikroskop, Jenis
Mikrotom dan Reagen)
Gamaliel Septian Airlanda, M.Pd
Mikrotom
Mikrotom adalah sebuah alat yang digunakan untuk
memotong secara tipis sebuah jaringan hewan/tumbuhan.
Microtome is the instrument which is used to cut thin section of tissue. Microtome are machines that will advance an object for a predetermined distance then slide the object to the cutting tool.
Jenis-jenis Mikrotom
Ada beberapa tipe mikrotom yang dibuat atau di desain berdasarkan tujuan
tertentu dan memiliki fungsi sesifik. Beberapa mikrotom ini diberi nama
sesuai dengan cara penggunaannya, yaitu:
1. Rotary microtome
2. Rocking microtome
3. Rotary rocking microtome
4. Base sledge microtome
5. Sliding microtome
6. Freezing microtome
Tipe-tipe Pisau pada Microtome
berdasarkan kemiringannya 1. Planar Concave
Sangat tajam tetapi dapat menghasilkan potongan sampel yang sangat lembut dan tipis.
2. Wedge Profile Knives
Bentuknya lebih seimbang dan digunakan untuk memotong sampel yang cukup keras
3. Chisel Profile memiliki bentuk mata pisau yang tumpul namun memiliki kestabilan bentuk potongan. Pisau ini menghasilkan potongan dengan ukuran relatif besar
Tipe-tipe Pisau pada
Microtome berdasarkan
bahan dasarnya 1. Glass Microtome Blades
digunakan untuk memotong sampel yang akan diamati dibawah mikroskop cahaya
2. Diamond Blades
i. Industrial grade blades digunakan untuk memotong sampel yang sangat
keras seperti gigi dan tulang. ii. Gem quality blades digunakan untuk sampel yang khusus diamati
dibawah mikroskop elektron
Rotary Microtome
Mikrotom yang digunakan untuk memotong sampel yang
akan terlihat dibawah mikroskop cahaya. Biasanya
dioperasikan secara manual dengan memutar handel
hingga mendekati mata pisau. Rotary microtome dapat
memotong sampel yang keras (biasanya sampel jaringan
dilapisi parafin).
Ketebalan yang dihasilkan antara 0,5 m hingga 60 m
Bagian-bagian Rotary
Microtome
1. Block holder
2. Knife clamps screws
3. Knife clamps
4. Block adjustment
5. Thickness gauge
6. Angle of tilt adjustment
7. Operating handle
8. Internal and
external lock
Disebut dengan nama The rotary microtome karena penggunaannya
dengan cara diputar
Mikrotom jenis ini adalah yang paling sering digunakan dalam berbagai
penelitian dasar
Pergerakan pisau pemotong secara vertikal
Biasanya menggunakan tipe wedge knife
Tingkat ketebalan ditentukan oleh micrometer screws
Mikrotom jenis ini membutuhkan bantuan parafin sebagai pelapis
sampel agar tidak rusak pada saat dipotong.
Karakteristik Rotary Microtome
Keuntungan Menggunakan Rotary
Microtome
Tidak lebih berat daripada rocking microtome
Tidak ada gelombang yang terjadi pada hasil potongan
Dapat digunakan untuk memotong jaringan yang cukup keras
Sudut kemiringan pisau dapat disesuaikan
Pisau mudah dipindahkan atau diatur
The ability to cope with very hard tissues , together with cutting good accurate section at 3mm gives the flexibility that is now required.
Electrically driven microtome can be used when the necessary to produce ribbons for serial reactions required.
This microtome are employed to their best advantage with resign embedded tissues.
Manual or electrically driven rotary microtome are successfully used in cryostats.
Rocking Microtome
• Tipe mikrotom yang paling tua
• Namanya didasarkan dari cara penggunaan handel mikrotom secara mengayun
(rocking action of the handle)
• Metode pemotongan menghasilkan bagian dari permukaan sedikit silinder
• Efektif untuk memproduksi serangkaian berkualitas baik 6-20 mikron
• Mikrotom ini tidak dapat memotong sampel yang keras seperti kayu atau tulang
• Menggunakan pisau biconcave yaang sangat tajam namun juga mudah tumpul
Bagian-bagian Rocking Microtome
Kelemahan
Ukuran sampel yang dilapisi blok parafin terbatas (kecil)
Mikrotom ini cenderung menghasilkan gelombang pada hasil pita (potongan).
Sudut kemiringan pisau tidak dapat diatur
Bentuk pita hasil potongan menyerupai busur
Sledge Microtome
Merupakan mikrotom yang digunakan untuk memotong
sampel yang lebar dan dapat digunakan untuk sampel kasar
seperti kayu dan tulang.
Digunakan untuk memotong blok parafin yang besar seperti sampel: bola mata, otak, paru-paru dan jaringan yang keras
Mikrotom ini ukurannya cukup besar dan berat
Jenis pisau yang digunakan adalah wedge atau planar
Ketebalan potongan dapat diatur melalui micrometer yang ada di bagian bawah
Cara Menggunakan
1. Mengatur ketebalan potongan dengan micormeter yang ada di bagian bawah
2. Meletakkan sampel / blok parafin
Cara Menggunakan
3. Mengatur letak pisau dan memastikan holder pada pisau telah diputar
4. Mulai memotong sampel dengan memaju mundurkan pisau
Ultra Microtome
Ultra mikrotom adalah alat yang digunakan untuk
memotong sampel dengan metode ultramicrotomy. Metode
ini adalah cara memotong yang sangat tipis dan disiapkan
untuk pengamatan pada mikroskop elektron. Ketebalan
blok parafin yang dapat digunakan tidak lebih dari 0,7 mm.
Jenis pisau yang digunakan adalah diamond knives
FREEZING MICROTOME
Sering digunakan untuk penyayatan jaringan yang tidak ditanam dalam paraffin maupun dalam celloidin, jadi jaringan yang disayat adalah jaringan yang tidak di tanam tetapi dibekukan dengan memakai gas CO2.
Keuntungan dari mikrotom ini adalah waktu yang dipakai lebih pendek, karena langsung disayat setelah proses fiksasi. Kerugiannya adalah bila temperature kamar tinggi, objek menjadi lunak sehingga sulit dipotong.
VIBRATING MICROTOME
– Instrumen dengan silet bergetar untuk memotong
jaringan. Pengguna dapat memanipulasi amplitudo
getaran, kecepatan, dan sudut pisau. potongan jaringan
tetap segar karena tertanam dalam agarose dengan suhu
rendah.
Keuntungan
– membran sel tidak patah atau rusak, sitosol tetap dalam sel.
– Dapat menjaga sel-sel hidup karena Jaringan mendapat oksigen di dalam media
agar saat pemotongan.