5
Tp chí Khoa hc Lc Hng 57 XÂY DNG QUY TRÌNH NUÔI MUI AEDES AGYPTI TRONG PHÒNG THÍ NGHIM VÀ ÁNH GIÁ KH NNG DIT B GY AEDES AGYPTI CA TINH DU S CHANH (CYMBOPOGON CITRATUS) BCH ÀN CHANH (EUCALYPTUS CITRIODORA) Rearing of aedes agypti mosquitoes in the laboratory and assessing the larvicide of lemongrass oil (Cymbopogon citratus) and lemon eucalyptus oil (Eucalyptus citriodora) against Aedes agypti larvae H Dng Mnh 1a* , inh Ngc Xuân Hng 1,b , Th Hng Hnh 1,c , Nguyn Th Thu Dng 1,d 1 Khoa Dc, Trng i hc Lc Hng, Biên Hòa, ng Nai, Vi t Nam a [email protected]; b [email protected]; c [email protected]; d [email protected] TÓM TT. Vi mc tiêu tìm kim các hp cht t nhiên có kh nng bo v con ngi khi s lan truyn ca bnh st xut huyt (SXH) do mui Aedes agypti và ch ng ánh giá hiu qu ca các dung dch di t b gy Aedes aegypti, chúng tôi ã xây dng quy trình nuôi mui trong phòng thí nghim và ánh giá kh nng dit b gy ca tinh du s chanh (Cymbopogon citratus) và tinh du bch àn chanh (Corymbia citriodora). Nghiên cu ã xây dng các quy trình nuôi mui Aedes aegypti bao gm các bc: cho trng n thành b gy; nuôi b gy thành nhng; nuôi mui; ly và bo qun trng mui. Lá s chanh và bch àn chanh c chng ct bng phng pháp lôi cun theo hi nc thu c tinh du ln lt có hàm lng là 0.33% và 2.13%. Phân tích thành phn hoá hc tinh du bng phng pháp GC-MS, tinh du s chanh có các hp cht chính là là cis-citral (36.19%) và trans-citral (49.32%). Tinh du bch àn chanh vi các hp cht chính là (R)-(+)-citronellal (78.55%) và (R)-(+)--citronelol (12.08%). ánh giá kh nng dit b gy Aedes agypti tui 3 hoc 4 cho thy i vi s chanh nng gây cht trung bình LC50 = 117,93 ppm và LC90 = 196,57 ppm, trong khi ó i vi bch àn chanh LC50 98.46 ppm, và LC90 là 165.84 ppm. Trong tng lai, chúng tôi có th ch ng nghiên cu và tìm kim nhi u hp cht t nhiên mi có tim nng dit b gy Aedes agypti. T KHOÁ: b gy aedes agypti, tinh du, cymbopogon citratus, eucalyptus citriodora, c tính dit b gy ABSTRACT. We aim to find natural compounds that can protect people from the spread of dengue by Aedes agypti mosquitoes and proactively evaluate the effectiveness of Aedes aegypti larvicide. Here, we present a protocol for the rearing of Aedes agypti mosquitoes in the laboratory and evaluate the larvicide of lemongrass oil ( Cymbopogon citratus) and lemon eucalyptus oil (Eucalyptus citriodora) against Aedes agypti larvae. Four steps to rear Aedes aegypti mosquitoes, including: hatching eggs into larvae; feeding larve into pupae; raising mosquitoes; take and preserve mosquito eggs. Lemongrass leaves and lemon eucalyptus leaves are extracted by steam distillation obtaining an oil yield of 0.33% and 2.13%, respectively. The two essential oils were analyzed by GC-MS method. The main compounds in lemongrass oil are cis-citral (36.19%) and trans-citral (49.32%). The main compounds in lemon eucalyptus essential oil are (R)-(+)-citronellal (78.55%) and (R)-(+)-- citronelol (12.08%). Larvicide of lemongrass oil agaists Aedes agypti larvae showed that the average lethal concentration LC50 = 117.93 ppm and LC90 = 196.57 ppm. Meanwhite, LC50 is 98.46 ppm, and the LC90 is 165.84 ppm for lemon eucalyptus oil. In the future, we can actively search for many natural compounds that have the potential to kill Aedes agypti larvae. KEYWORDS: Aedes agypti larve, essential oils, cymbopogon citratus, eucalyptus citriodora, larvicide 1. GII THIU St xut huyt Dengue là bnh truyn nhim cp tính, bnh lan truyn ch yu qua trung gian mui Aedes aegypti vi hn 50 triu ngi b mc hàng nm trên th gii [1]. Vi t Nam là ni có t l mc bnh st xut huyt (SXH) cao, lu hành hu ht các tnh/thành ph trên c nc, nhng ph bin hn khu vc phía Nam và thng bùng phát thành dch ln vào mùa ma, nht là t tháng 7 n tháng 10 [2-3]. Hi n cha có thuc iu tr c hi u bnh SXH và cng cha có vc-xin phòng nga bnh SXH nào c cp phép s dng t i Vit Nam. Cho n nay các bin pháp ch yu hn ch s lan truyn bnh SXH vn là dit b gy, dit mui và phòng tránh mui t. Hi n nay, vi c s dng các hoá cht tng hp nh organophosphate, pyrethroid tiêu dit mui và b gy vi mc thng xuyên qui mô ln, ang dn n nguy c kháng thuc [4-6] , cng nh nh hng ti môi trng và sc kho con ngi. Vic tìm kim các ch phm t nhiên thay th cho các hoá cht tng hp ang c nhiu nhà khoa hc quan tâm. c bi t là các tinh du thiên nhiên cha các thành phn có hot tính sinh hc chng li vect mui [7]. Các nghiên cu v kh nng dit b gy ca các tinh du Vi t nam rt hn ch, và có rt ít công b khoa hc theo tác gi c bi t. Các th nghi m kim tra hi u qu ca các dung dch còn hn ch, ch yu c thc hin các vin St rét - K sinh trùng - Côn trùng [8]. Do ó, vic ch ng ánh giá hiu qu ca các sn phm di t b gy, mui là ht sc cn thi t, nhanh chóng tìm ra nhng sn phm có hiu qu tt và an toàn cho ngi s dng. Received: May, 31st, 2019 Accepted: July, 24th, 2019 *Corresponding Author Email: [email protected] JOURNAL OF SCIENCE OF LAC HONG UNIVERSITY JSLHU https://tapchikhdt.lhu.edu.vn Tp chí Khoa hc Lc Hng

JOURNAL OF SCIENCE · St xut huyt Dengue là bnh truyn nhim cp tính, bnh lan truyn ch yu qua trung gian mui Aedes aegypti vi hn 50 triu ngi b mc hàng nm trên th gii [1]. Vit Nam

  • Upload
    others

  • View
    2

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: JOURNAL OF SCIENCE · St xut huyt Dengue là bnh truyn nhim cp tính, bnh lan truyn ch yu qua trung gian mui Aedes aegypti vi hn 50 triu ngi b mc hàng nm trên th gii [1]. Vit Nam

T�p chí Khoa h�c L�c H�ng 57

JS

JSLHU JOURNAL OF SCIENCE OF LAC HONG UNIVERSITY http://tapchikhdt.lhu.edu.vn T�p chí Khoa h�c L�c H�ng 2019, 7, 001-001

XÂY D�NG QUY TRÌNH NUÔI MU�I AEDES AGYPTI TRONG PHÒNG THÍ NGHI�M VÀ �ÁNH GIÁ KH� N�NG DI�T B� G�Y AEDES

AGYPTI C�A TINH D�U S� CHANH (CYMBOPOGON CITRATUS) VÀ B�CH �ÀN CHANH (EUCALYPTUS CITRIODORA)

Rearing of aedes agypti mosquitoes in the laboratory and assessing the larvicide of lemongrass oil (Cymbopogon citratus) and lemon eucalyptus oil

(Eucalyptus citriodora) against Aedes agypti larvae

H� D�ng M�nh1a*, �inh Ng�c Xuân H��ng1,b , Lê Th� H�ng H�nh1,c, Nguy�n Th� Thu� D��ng1,d 1Khoa D��c, Tr��ng ��i h�c L�c H�ng, Biên Hòa, ��ng Nai, Vi�t Nam

[email protected];[email protected];[email protected];[email protected]

TÓM T�T. V�i m�c tiêu tìm ki�m các h�p ch�t t� nhiên có kh� n�ng b�o v� con ng��i kh�i s� lan truy�n c�a b�nh s�t xu�t huy�t (SXH) do mu�i Aedes agypti và ch� ��ng �ánh giá hi�u qu� c�a các dung d�ch di�t b� g�y Aedes aegypti, chúng tôi �ã xây d�ng quy trình nuôi mu�i trong phòng thí nghi�m và �ánh giá kh� n�ng di�t b� g�y c�a tinh d�u s� chanh (Cymbopogon citratus) và tinh d�u b�ch �àn chanh (Corymbia citriodora). Nghiên c�u �ã xây d�ng các quy trình nuôi mu�i Aedes aegypti bao g�m các b��c: cho tr�ng n� thành b� g�y; nuôi b� g�y thành nh�ng; nuôi mu�i; l�y và b�o qu�n tr�ng mu�i. Lá s� chanh và b�ch �àn chanh ���c ch�ng c�t b�ng ph��ng pháp lôi cu�n theo h�i n��c thu ���c tinh d�u l�n l��t có hàm l��ng là 0.33% và 2.13%. Phân tích thành ph�n hoá h�c tinh d�u b�ng ph��ng pháp GC-MS, tinh d�u s� chanh có các h�p ch�t chính là là cis-citral (36.19%) và trans-citral (49.32%). Tinh d�u b�ch �àn chanh v�i các h�p ch�t chính là (R)-(+)-citronellal (78.55%) và (R)-(+)-�-citronelol (12.08%). �ánh giá kh� n�ng di�t b� g�y Aedes agypti tu�i 3 ho�c 4 cho th�y ��i v�i s� chanh n�ng �� gây ch�t trung bình LC50 = 117,93 ppm và LC90 = 196,57 ppm, trong khi �ó ��i v�i b�ch �àn chanh LC50 là 98.46 ppm, và LC90 là 165.84 ppm. Trong t��ng lai, chúng tôi có th� ch� ��ng nghiên c�u và tìm ki�m nhi�u h�p ch�t t� nhiên m�i có ti�m n�ng di�t b� g�y Aedes agypti.

T� KHOÁ: b� g�y aedes agypti, tinh d�u, cymbopogon citratus, eucalyptus citriodora, ��c tính di�t b� g�y

ABSTRACT. We aim to find natural compounds that can protect people from the spread of dengue by Aedes agypti mosquitoes and proactively evaluate the effectiveness of Aedes aegypti larvicide. Here, we present a protocol for the rearing of Aedes agypti mosquitoes in the laboratory and evaluate the larvicide of lemongrass oil (Cymbopogon citratus) and lemon eucalyptus oil (Eucalyptus citriodora) against Aedes agypti larvae. Four steps to rear Aedes aegypti mosquitoes, including: hatching eggs into larvae; feeding larve into pupae; raising mosquitoes; take and preserve mosquito eggs. Lemongrass leaves and lemon eucalyptus leaves are extracted by steam distillation obtaining an oil yield of 0.33% and 2.13%, respectively. The two essential oils were analyzed by GC-MS method. The main compounds in lemongrass oil are cis-citral (36.19%) and trans-citral (49.32%). The main compounds in lemon eucalyptus essential oil are (R)-(+)-citronellal (78.55%) and (R)-(+)-�-citronelol (12.08%). Larvicide of lemongrass oil agaists Aedes agypti larvae showed that the average lethal concentration LC50 = 117.93 ppm and LC90 = 196.57 ppm. Meanwhite, LC50 is 98.46 ppm, and the LC90 is 165.84 ppm for lemon eucalyptus oil. In the future, we can actively search for many natural compounds that have the potential to kill Aedes agypti larvae.

KEYWORDS: Aedes agypti larve, essential oils, cymbopogon citratus, eucalyptus citriodora, larvicide

1. GI�I THI�U

S�t xu�t huy�t Dengue là b�nh truy�n nhi�m c�p tính, b�nh lan truy�n ch� y�u qua trung gian mu�i Aedes aegypti v�i h�n 50 tri�u ng��i b� m�c hàng n�m trên th� gi�i [1]. Vi�t Nam là n�i có t� l� m�c b�nh s�t xu�t huy�t (SXH) cao, l�u hành � h�u h�t các t�nh/thành ph� trên c� n��c, nh�ng ph� bi�n h�n � khu v�c phía Nam và th��ng bùng phát thành d�ch l�n vào mùa m�a, nh�t là t� tháng 7 ��n tháng 10 [2-3]. Hi�n ch�a có thu�c �i�u tr� ��c hi�u b�nh SXH và c�ng ch�a có v�c-xin phòng ng�a b�nh SXH nào ���c c�p phép s� d�ng t�i Vi�t Nam. Cho ��n nay các bi�n pháp ch� y�u �� h�n ch� s� lan truy�n b�nh SXH v�n là di�t b� g�y, di�t mu�i và phòng tránh mu�i ��t.

Hi�n nay, vi�c s� d�ng các hoá ch�t t�ng h�p nh� organophosphate, pyrethroid �� tiêu di�t mu�i và b� g�y v�i m�c �� th��ng xuyên � qui mô l�n, �ang d�n ��n nguy c� kháng thu�c [4-6] , c�ng nh� �nh h��ng t�i môi tr��ng và

s�c kho� con ng��i. Vi�c tìm ki�m các ch� ph�m t� nhiên �� thay th� cho các hoá ch�t t�ng h�p �ang ���c nhi�u nhà khoa h�c quan tâm. ��c bi�t là các tinh d�u thiên nhiên ch�a các thành ph�n có ho�t tính sinh h�c ch�ng l�i vect� mu�i [7]. Các nghiên c�u v� kh� n�ng di�t b� g�y c�a các tinh d�u � Vi�t nam r�t h�n ch�, và có r�t ít công b� khoa h�c theo tác gi� ���c bi�t.

Các th� nghi�m ki�m tra hi�u qu� c�a các dung d�ch còn h�n ch�, ch� y�u ���c th�c hi�n � các vi�n S�t rét - K� sinh trùng - Côn trùng [8]. Do �ó, vi�c ch� ��ng �ánh giá hi�u qu� c�a các s�n ph�m di�t b� g�y, mu�i là h�t s�c c�n thi�t, �� nhanh chóng tìm ra nh�ng s�n ph�m có hi�u qu� t�t và an toàn cho ng��i s� d�ng.

Received: May, 31st, 2019 Accepted: July, 24th, 2019 *Corresponding Author Email: [email protected]

JOURNAL OF SCIENCEOF LAC HONG UNIVERSITY

JSLHU https://tapchikhdt.lhu.edu.vnT�p chí Khoa h�c L�c H�ng ����� �� �������

Page 2: JOURNAL OF SCIENCE · St xut huyt Dengue là bnh truyn nhim cp tính, bnh lan truyn ch yu qua trung gian mui Aedes aegypti vi hn 50 triu ngi b mc hàng nm trên th gii [1]. Vit Nam

T�p chí Khoa h�c L�c H�ng58

H� D�ng M�nh, �inh Ng�c Xuân H��ng, Lê Th� H�ng H�nh, Nguy�n Th� Thu� D��ng

V�i nh�ng l� do và tính c�p thi�t �ã nêu � trên, chúng tôi ti�n hành �� tài nghiên c�u “Xây d�ng quy trình nuôi mu�i Aedes aegypti trong phòng thí nghi�m và �ánh giá kh� n�ng di�t b� g�y Aedes agypti c�a tinh d�u s� chanh, b�ch �àn chanh”.

2. ��I T��NG, V�T LI�U VÀ PH��NG PHÁP

2.1 ��i t��ng nghiên c�u

Mu�i Aedes aegypti ���c thu th�p t�i Biên Hòa, ��ng Nai nh� sau: thu th�p b� g�y � trong các chai l� ch�a n��c tù trong nhà. Nuôi b� g�y phát tri�n thành mu�i, cho �� �� l�y tr�ng. Tr�ng mu�i ���c dùng �� th�c hi�n xây d�ng quy trình nuôi mu�i Aedes aegypti trong �i�u ki�n phòng thí nghi�m. Mu�i ���c ��nh danh b�i B� môn K� sinh trùng, Khoa D��c, ��i h�c L�c H�ng.

Nguyên li�u lá s� chanh thu hái � Qu�n 9, Thành ph� H� Chí Minh và lá b�ch �àn chanh ���c thu hái � Trung tâm B�o t�n ngu�n gen cây thu�c ��ng Tháp M��i, huy�n M�c Hóa, t�nh Long An vào tháng 12/2018. M�u ���c l�u l�i � Trung tâm Khoa h�c và �ng d�ng, ��i h�c L�c H�ng.

2.2 V�t li�u nghiên c�u

Hoá ch�t và d�ng c� nuôi mu�i: - Khay nh�a nuôi b� g�y có kích th��c � = 11 cm và chi�u

cao 8 cm, �ng pipet dùng �� hút b� g�y, ��a petri, becher 100 mL, chai th�y tinh 500 mL, �ng �ong 100 mL, gi�y l�c, b�ng keo �en, h�p nh�a ��ng tr�ng có n�p ��y, nhi�t k�, �m k�.

- L�ng nuôi mu�i b�ng inox có kích th��c 20 cm x 30 cm x 20 cm bên ngoài ���c bao ph� b�i l�p v�i tuyn

-Th�c �n cho b� g�y là th�c �n cho m�o whiskas (M�) -Th�c �n cho mu�i là dung d�ch ���ng sucrose 10% D�ng c� chi�t xu�t tinh d�u: b� ch�ng c�t tinh d�u

Clevenger, Na2SO4 khan, màng l�c Milipore 0.45�m Thi�t b� phân tích thành ph�n hoá h�c c�a tinh d�u: Máy

s�c kí khí- kh�i ph� (Gas Chromatography/ Mass Spectrometry - GC/MS) v�i máy GC Agilent 6890N, MSD 5973 inert, s� d�ng c�t HP5 – MS (30 m; 0,25 mm; 0,25 �m film), khí mang là Helium.

2.3 Ph��ng pháp nghiên c�u

Quy tr�nh nuôi mu�i Aedes aegypti Xây d�ng các quy trình nuôi mu�i Aedes aegypti trong

�i�u ki�n phòng thí nghi�m, d�a vào các công trình �ã ���c công b� [8-10]: - Quy trình cho tr�ng n� - Quy trình nuôi b� g�y - Quy trình nuôi mu�i - Quy trình l�y tr�ng và b�o qu�n tr�ng mu�i.

Chi�t xu�t tinh d�u Lá s�, b�ch �àn t��i sau khi thu hái v�, cân 150 gram lá

cho vào bình c�u 1000 ml v�i 500 ml n��c c�t, ti�n hành ch�ng c�t trong 2h b�ng b� ch�ng c�t tinh d�u Clevenger. Tinh d�u sau khi ch�ng c�t, ���c lo�i n��c b�ng Na2SO4 khan, r�i l�c qua màng l�c Milipore, sau �ó ���c cho vào l� kín có màu, b�o qu�n trong ng�n mát t� l�nh. Hàm l��ng tinh d�u ���c tính theo công th�c:

Hàm l��ng tinh d�u ��� �Th� tích �ml�

Kh�i l��ng �g�� ��� �

Xác ��nh thành ph�n hóa h�c c�a tinh d�u b�ng ph��ng pháp s�c ký khí – kh�i ph�

Tinh d�u sau khi ch�ng c�t ���c phân tích thành ph�n hoá h�c b�ng h� th�ng s�c kí khí - kh�i ph� (Gas

Chromatography/ Mass Spectrometry - GC/MS) t�i Vi�n Khoa h�c V�t li�u �ng d�ng Thành ph� H� Chí Minh. Ch��ng trình nhi�t �� �o m�u: 500C gi� trong 2 phút, sau �ó t�ng 20C/ phút ��n 800C, t�ng 50C/ phút ��n 1500C, ti�p t�c t�ng 100C/ phút ��n 2000C, t�ng 200C/ phút ��n 3000C gi� trong 5 phút. M�u tinh d�u (25 �l) pha trong 1.0 ml n- hexan. Th� tích b�m m�u là 1.0 �l. S� d�ng th� vi�n ph� NIST �� nh�n bi�t các thành ph�n tinh d�u.

�ánh giá kh� n�ng di�t b� g�y c�a các tinh d�u D�a vào tài li�u h��ng d�n c�a WHO (2005) [11], m�i

lô th� nghi�m s� d�ng 25 b� g�y tu�i 3 ho�c 4 ch�a trong các c�c 100ml, �� sâu n��c trong c�c kho�ng 5-10 cm. N�ng �� cho th� nghi�m t� 0-200 ppm. S� b� g�y ch�t ���c quan sát sau 24 gi�. N�u s� l��ng b� g�y chuy�n thành nh�ng sau 24 gi� l�n h�n 2 con trong các c�c, thì th� nghi�m �ó b� lo�i b�. L�p l�i 3 l�n cho m�i th� nghi�m. Giá tr� LC50, LC90 ���c xác ��nh b�ng ph��ng pháp phân tích Probit analysis [12] s� d�ng ph�n m�m Microsoft Excel 2013.

3. K�T QU� VÀ BÀN LU�N

3.1 Quy trình nuôi mu�i

Hình 1 mô t� chi ti�t quy trình nuôi mu�i trong phòng thí nghi�m, bao g�m b�n quy trình chính sau:

Quy tr�nh cho tr�ng n�: Tr�ng mu�i Aedes aegypti thu ���c t� các l�ng nuôi mu�i

(sau 2-3 ngày) s� ���c cho n� thành b� g�y. Tr�ng s� n� nhanh trong n��c có n�ng �� oxy th�p. �un n��c cho ��n sôi r�i cho ngay vào chai th�y tinh 500mL, v�n kín n�p và �� n��c ngu�i ��n nhi�t �� phòng. Cho tr�ng mu�i Aedes aegypti vào chai n��c �ã ngu�i, v�n n�p kín, và �� yên trong kho�ng 1-2 gi� cho tr�ng mu�i n� thành b� g�y.

Quy tr�nh nuôi b� g�y: Khi tr�ng mu�i �ã n� thành b� g�y tu�i 1, �� h�t b� g�y

vào khay nuôi b� g�y. M�i khay kho�ng 100 con v�i m�t �� 1 con/1 ml n��c. Th�c �n b� g�y ���c cho tu� theo giai �o�n phát tri�n c�a b� g�y. B� g�y tu�i 1-2 kho�ng 30mg/khay, b� g�y tu�i 3 kho�ng 80mg/khay, b� g�y tu�i 4 kho�ng 160mg/khay. Th�c hi�n thay n��c s�ch hàng ngày cho b� g�y � tu�i 3, 4 �� tránh làm ô nhi�m n��c nuôi b� g�y.

Quy tr�nh nuôi mu�i: T� ngày th� 6 tr� �i b� g�y s� b�t ��u l�t xác thành nh�ng.

Dùng pipet paster �� hút nh�ng vào c�c n��c s�ch. Giai �o�n nh�ng phát tri�n không c�n cho th�c �n. Nh�ng cái th��ng có kích th��c l�n h�n nh�ng ��c. Cho nh�ng c�c nh�ng vào các l�ng nuôi mu�i. Các l�ng mu�i ��t trong phòng có nhi�t �� 28±20C, �� �m 70±10%. Sau kho�ng 2 ngày t� khi b�t ��u giai �o�n nh�ng, nh�ng s� b�t ��u l�t xác thành mu�i. Th�c �n cho mu�i là dung d�ch ���ng sucrose 10% ���c th�m ��t vào các mi�ng bông trong các ��a petri ���c ��t trong l�ng nuôi mu�i.

Quy tr�nh l�y tr�ng và b�o qu�n tr�ng Sau khi mu�i n� và ���c cho �n b�ng dung d�ch sucrose

10% trong 3 ngày, ti�n hành cho mu�i hút máu ng��i tình nguy�n, �� mu�i �� tr�ng. S� d�ng becher 100 mL ���c qu�n b�ng keo �en �� b�c kín quanh m�t ngoài c�a c�c t�o n�i thích h�p cho mu�i �� tr�ng. C�t gi�y l�c thành mi�ng hình ch� nh�t dài �� qu�n tròn và ��t bên trong becher. �� kho�ng 50 mL n��c vào c�c ch�a gi�y l�c cho th�m ��t ��u toàn b� gi�y l�c và ��t becher vào l�ng mu�i. �� c�c n��c trong l�ng mu�i và thay c�c n��c thu l�y tr�ng h�ng ngày. Sau khi l�y gi�y l�c trong c�c n��c, �� gi�y l�c � n�i thoáng gió �� gi�y l�c khô ráo.

Page 3: JOURNAL OF SCIENCE · St xut huyt Dengue là bnh truyn nhim cp tính, bnh lan truyn ch yu qua trung gian mui Aedes aegypti vi hn 50 triu ngi b mc hàng nm trên th gii [1]. Vit Nam

T�p chí Khoa h�c L�c H�ng 59

Xây d�ng quy tr�nh nuôi mu�i Aedes Agypti trong phòng thí nghi�m và �ánh giá kh� n�ng di�t b� g�y Aedes Agypti c�a tinh d�u s� chanh

1. Cho tr�ng n� thành b� g�y

2. Cho b� g�y �n

3. S� phát tri�n b� g�y 4. B� g�y thành nh�ng

5. Nh�ng thành mu�i

6. Mu�i �n ���ng

7. Chu�n b� c�c cho mu�i �� tr�ng

8. L�y tr�ng và b�o qu�n

Hình 1. Quy tr�nh nuôi mu�i trong phòng thí nghi�m

Page 4: JOURNAL OF SCIENCE · St xut huyt Dengue là bnh truyn nhim cp tính, bnh lan truyn ch yu qua trung gian mui Aedes aegypti vi hn 50 triu ngi b mc hàng nm trên th gii [1]. Vit Nam

T�p chí Khoa h�c L�c H�ng60

H� D�ng M�nh, �inh Ng�c Xuân H��ng, Lê Th� H�ng H�nh, Nguy�n Th� Thu� D��ng

Gi�y l�c ch�a tr�ng sau khi khô �� vào c�c ��ng. Trên c�c có ghi chú ngày tháng l�y tr�ng, và b�o qu�n các c�c trong h�p nh�a ��y kín.

3.2 Hàm l��ng và thành ph�n hoá h�c chính c�a các tinh d�u

Hàm l��ng tinh d�u s� chanh (Cymbopogon citratus) và tinh d�u b�ch �àn chanh (Eucalyptus citriodora) thu ���c b�ng ph��ng pháp ch�ng c�t lôi cu�n h�i n��c theo kh�i l��ng lá t��i l�n l��t là 0.33% và 2.13%.

B�ng 1 cho th�y k�t qu� phân tích GC-MS c�a tinh d�u s� chanh (Cymbopogon citratus) có 7 thành ph�n chính v�i t�ng hàm l��ng là 99.96%. Trong �ó 2 thành ph�n có hàm l��ng l�n nh�t là là cis-citral (36.19%) và trans-citral (49.32%). K�t qu� này khá phù h�p v�i nghiên c�u tinh d�u s� chanh Cymbopogon citratus c�a Hoàng Th� Kim Vân, 2017 [13]. Nghiên c�u này có k�t qu� v�i thành ph�n chính là cis-citral (30.8%) và trans-citral (38.5%).

B�ng 1. Thành ph�n hoá h�c chính c�a tinh d�u c�a Cymbopogon citratus

STT Tên ch�t Th�i gian l�u (phút)

Hàm l��ng (%)

1 �-Myrcene 10.14 7.80 2 Isoneral 20.04 0.72 3 Isogeranial 20.90 0.93 4 cis-Citral 23.38 36.18 5 trans-Geraniol 23.92 4.10 6 trans-Citral 24.54 49.31 7 Geraniol acetate 28.20 0.92

B�ng 2. Thành ph�n hoá h�c chính c�a tinh d�u b�ch �àn chanh (Corymbia citriodora)

STT Tên ch�t Th�i

gian l�u (phút)

Hàm l��ng (%)

1 Isopulegol 18.87 7.19

2 (R)-(+)-Citronellal 19.59 78.55

3 (R)-(+)-�-Citronellol 22.90 12.08

4 Citronellol acetate 27.25 1.72

B�ng 2 ch� k�t qu� phân tích GC-MS c�a tinh d�u b�ch �àn chanh (Eucalyptus citriodora). Có 4 thành ph�n chính trong tinh d�u b�ch �àn chanh v�i t�ng hàm l��ng là 99.54%. Tinh d�u ch�a các thành ph�n chính nh� citronellal (78.55%), citronelol (12.08%), isopulegol (7.19%) và citronellol acetate (1.72%). Các thành ph�n hóa h�c c�a nghie n c�u này cho th�y k�t qu� phù h�p v�i nghie n c�u c�a Hanna, 2017 [14], tinh d�u b�ch �ành chanh c�ng ���c pha n tích b�ng ph� GC-MS cho th�y các thành ph�n chính có h�m lu �ng cao nh�t là citronellal (53.1%) và citronelol (13.7%), isopulegol (6.6%).

3.3 �ánh giá kh� n�ng di�t b� g�y c�a các tinh d�u

B�ng 3 cho th�y t� l� ph�n tr�m b� g�y ch�t sau 24h v�i m�i tinh d�u � các n�ng �� t� 50-200ppm, v�i n�ng �� 0 ppm ��i ch�ng. � n�ng �� l�n h�n 200ppm thì 100% b� g�y ��u ch�t sau 24h. K�t qu� cho th�y � cùng n�ng �� thì tinh d�u b�ch �àn chanh có kh� n�ng di�t b� g�y t�t h�n so v�i s� chanh.

B�ng 3. T� l� b� g�y ch�t sau 24h N�ng �� (ppm)

T� l� ch�t sau 24 h (%)

B�ch �àn chanh S� chanh

(Trung bình ±SD) (Trung bình ±SD)

0 0 0

50 9.3±4.6 5.3±4.6

75 20.0±0 10.7±6.1

100 46.7±2.3 32.0±8.0

125 58.7±2.3 49.3±6.1

150 90.7±2.3 62.7±12.2

175 96.0±0 86.0±8.5

200 100.0±0 96.0±0

B�ng 4 xác ��nh ���c n�ng �� gây ch�t trung bình LC50 = 117,9 ppm và LC90 = 196 ppm c�a tinh d�u s� chanh ��i v�i b� g�y. Trong khi �ó kh� n�ng di�t b� g�y c�a tinh d�u b�ch �àn chanh t�t h�n v�i n�ng �� LC50 là 102.2 ppm và LC90 là 175.3ppm. K�t qu� này khá phù h�p v�i nghiên c�u c�a Vera, 2014 [7], trong nghiên c�u này LC50 c�a tinh d�u s� chanh và b�ch �àn chanh có LC50 l�n l��t là 120ppm và 70ppm.

B�ng 4. Giá tr� LC50, LC90 gi�a các thí nghi�m

Tinh d�u LC50 LC90 (Trung bình

± SD) (Trung bình ±

SD)

S� chanh 117.5 ± 11.8 196.0 ± 8.2

B�ch �àn chanh 102.2 ± 4.8 175.3 ± 2.6

�ây là nghiên c�u ��u tiên � Vi�t nam xác ��nh n�ng ��

gây ch�t c�a tinh d�u s� chanh và b�ch �àn chanh ��i v�i b� g�y theo tác gi� ���c bi�t. �� tài này ��a ra vi�c xác ��nh n�ng �� tinh d�u gây ch�t ��i v�i b� g�y, ng�n ch�n phát tri�n thành mu�i. Dùng tinh d�u thiên nhiên không gây t�n d�, không gây ��c h�i, c�ng nh� tránh ���c nguy c� kháng thu�c thay vì dùng các hoá ch�t t�ng h�p có tác d�ng không có l�i nh� hi�n nay. Tinh d�u ngoài kh� n�ng di�t b� g�y, còn ���c bi�t ��n là các h�p ch�t có tác d�ng xua mu�i r�t t�t. Trong t��ng lai chúng tôi s� ti�p t�c xây d�ng ph��ng pháp th� kh� n�ng xua mu�i c�a nh�ng tinh d�u này trên mu�i Aedes agypti ���c nuôi trong phòng thí nghi�m.

4. K�T LU�N

Nghiên c�u �ã xây d�ng các quy trình nuôi mu�i Aedes aegypti trong phòng thí nghi�m bao g�m các quy trình cho tr�ng n�, quy trình nuôi b� g�y, quy trình nuôi mu�i, quy trình l�y và b�o qu�n tr�ng mu�i. Tinh d�u S� chanh và B�ch �àn chanh �ã ���c chi�t xu�t b�ng ph��ng pháp lôi cu�n h�i n��c, t� �ó �ánh giá ���c ti�m n�ng di�t b� g�y Aedes agypti c�a hai tinh d�u này � n�ng �� th�p. Trong t��ng lai chúng tôi có th� ch� ��ng nghiên c�u ���c nhi�u tinh d�u h�n, có ti�m n�ng trong �ng d�ng di�t b� g�y, phòng ch�ng s� lan truy�n c�a b�nh s�t xu�t huy�t.

5. C�M �N

Các tác gi� xin chân thành c�m �n Tr��ng ��i h�c L�c H�ng �ã tài tr� kinh phí cho nghiên c�u này theo mã s� �� tài LHU-RF-MP-18-01-12.

Page 5: JOURNAL OF SCIENCE · St xut huyt Dengue là bnh truyn nhim cp tính, bnh lan truyn ch yu qua trung gian mui Aedes aegypti vi hn 50 triu ngi b mc hàng nm trên th gii [1]. Vit Nam

T�p chí Khoa h�c L�c H�ng 61

Xây d�ng quy tr�nh nuôi mu�i Aedes Agypti trong phòng thí nghi�m và �ánh giá kh� n�ng di�t b� g�y Aedes Agypti c�a tinh d�u s� chanh

6. TÀI LI�U THAM KH�O

[1] Cameron, P.S.; Jeremy J.F., Nguyen V.V.C.; Bridget W.

Dengue. New England Journal of Medicine, 2012, 366 (15),

1423-1432.

[2] Cuong, H.; Vu, N.; Cazelles, B.; Boni, M.F.; Thai, K.; Rabaa,

M.A; Anders, K.L. Spatiotemporal Dynamics of Dengue

Epidemics, Southern Vietnam. Emerging Infectious Diseases,

2013, 19(6), 945-953.

[3] Anders, K.L.; Nguyet, N.M.; Chau, N.V.; Hung, N. T.; Thuy,

T.T. et al. Epidemiological factors associated with dengue

shock syndrome and mortality in hospitalized dengue patients

in Ho Chi Minh City, Vietnam. Am J Trop Med Hyg. 2011, 84:

127-134.

[4] Duong, T.T., Van, D.N. Mapping Insecticide Resistance in

Dengue Vectors in the Northern Viet Nam, 2010-2013. Vector

Biol J. 2016, 1(1):1-6.

[5] Huong, V.D.; Nguyen, T.B.N.; Thi, H.D.; Thi B.L. N.

Susceptibility of Aedes aegypti to insecticides in Viet Nam.

Dengue Bull. 2014, 28:179-183.

[6] Kawada, H.; Higa, Y.; Nguyen, Y.T.; Tran, S.H.; Nguyen, H.T.;

Takagi, M. Nationwide investigation of the pyrethroid

susceptibility of mosquito larvae collected from used tires in

Vietnam. PLoS Negl Trop Dis. 2009, 3(3):1-8.

[7] Vera, S.S.; Zambrano, D.F.; Méndez-Sanchez, S.C.;

Rodríguez-Sanabria, F.; Stashenko, E.E.; Duque Luna, J.E.

Essential oils with insecticidal activity against larvae of Aedes

aegypti (Diptera: Culicidae). Parasitol Res. 2014, 113(7):2647-

2654.

[8] Le, T.D.; Hu�nh, K.T.H. "Xây d�ng quy trình k� thu�t nuôi và

b�o qu�n mu�i � phòng thí nghi�m", Nghiên c�u Y h�c. 2013,

t�p 17 (ph� b�n s� 1), 240-245.

[9] Elizabeth, K.; Anne, P.; Mary, A. F.; Michael, A. S.; Eva, H.;

Laura, D.K. Rearing of Culex spp. and Aedes spp. Mosquitoes.

Bio-protocol. 2017, 7 (17), e2542.

[10]Danilo, O. C.; Derric, N.; Neil, N.; Andrew, R. M.; Pam, G.;

André, B. B. W.; Mauro, T. M.; Jair, F. V.; Luke, A.;

Margareth, L. C. Mass Production of Genetically Modified

Aedes aegypti for Field Releases in Brazil. JoVE. 2014, 83,

e3579.

[11] WHO (2005) Guidelines for laboratory and field testing of

mosquito larvicides. WHO/CDS/WHOPES/GCDPP/2005.13.

[12]Finney, J.D. Probit analysis, 3rd ed.; Cambridge University

Press: Cambridge, 1971.

[13]Hoàng ,T.K.V.; Hoàng, T.L.; Tr�n, T. H.; Nguy�n, M. Q.;

Quách, T.T.V.; Nguy�n, T. H.; Nguy�n, T. �.; Nguy�n, H. V.

Nghiên c�u thành ph�n hóa h�c và kh�o sát ho�t tính sinh h�c

c�a tinh d�u s� chanh Cymbopogon citratus. 2017. T�p chí phân

tích Hóa, L� và Sinh h�c - T�p 22/ s� 1.

[14]Hanaa, S. H.; Ahmed, M. S. Repellent, attractive, and

insecticidal effects of essential oils from Schinus

terebinthifolius fruits and Corymbia citriodora leaves on two

whitefly species, Bemisia tabaci, andmTrialeurodes ricini",

Scientia Horticulturae. 2017, 216, 111-119.