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UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA FACULTADDECIENCIASYFILOSOFA

DEPARTAMENTOACADMICODECIENCIASCELULARESYMOLECULARES

LABORATORIODEFARMACOLOGIA

GUADEPRCTICAS

CURSO

FarmacologaGeneral(FGI)

(SegundoAoMedicina)

2013LIMAPER

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Preparadopor:MSc.MaraSalasArruzDr.AlfonsoZavaletaMartnezVargasMSc.WalterDelaCruzRamrezC.D.CarolZavaletaBozaDr.EduardoHuamanEgoavil.LaboratoriodeFarmacologaDpto.AcadmicodeCienciasCelularesyMolecularesFacultaddeCienciasyFilosofaUniversidadPeruanaCayetanoHerediaAgosto2013UniversidadperuanaCayetanoHerediaAv.HonorioDelgado430,SanMartndePorras,Lima,Per.A.P.4314,Lima100,Per

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INTRODUCCION

La presente gua contiene la descripcin, objetivos y procedimientos de lasprcticas del curso, las que han sido seleccionadas con el propsito de introducir alestudiante en el campo de la Farmacologa bsica y experimental ayudando de estamaneraacomprenderycomplementarlasexposicionestericas.

Para cada prctica, el estudiante deber revisar anticipadamente los conceptostericos correspondientes a partir de las preguntas propuestas para cada prctica,desarrollara la prctica y registrar sus resultados, procediendo luego a su anlisis,discusine interpretacinde los resultados.Comoproductode laprctica cada grupopreparar un informe, el que ser presentado en la Secretaria de la Seccin deFarmacologa dentro de las siguientes 72 horas de efectuada la prctica segn loespecificadoenelsyllabusdelcurso.

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INDICE

Calculodedosisypreparacindesoluciones 5Prctica1 Experimento1:Curvadosisrespuestayantagonismocompetitivo 69Experimento2:Antagonismofisiolgico(Oxitcicosytocolticos)enteronogrvido

1011

Experimento3:Antagonismo fisiolgicoycompetitivoenelmsculo lisogstrico

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Prctica2 Experimento:Antagonismocompetitivo(pilocarpinayatropina) 1415Prctica3 Experimento:Discusindecasosclnicofarmacolgicos 1618Anexo 1: Tabla de soluciones fisiolgicas comnmente utilizadas enexperimentosconrganosaislados

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Anexo 2: Tabla de submltiplos de unidades de masa del sistemainternacionaldeunidades

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CALCULODEDOSISYPREPARACINDESOLUCIONES

Enlaexperimentacinfarmacolgicalasdosisseexpresan,generalmente,encantidaddefrmacoporkilogramodepesocorporaldelanimal.Ejemplo:10mg/kg,0,5mg/kg. Los frmacosque seutilizan enel laboratorio se encuentran, en lamayorade loscasos,disueltosen liquido (aguadestilada, solucin fisiolgica,etc.),demaneraque laconcentracindelfrmacoenellquidoseexpresaencantidad(mg,gramo,unidad,etc.)pormililitrodesolucin,obienenporcentajes.Ejemplo:5mg/mL,1g/2mL,100UI/mL. Para determinar la cantidad total de frmaco que hay que administrar a undeterminadoanimal,hayqueconocer ladosisdelfrmacoycalcularelvolumenenquedebeestarcontenidaesacantidad.Parafacilitarelclculosepuedeemplearlasiguientefrmula:

Volumen(mL) = Dosis delfrmaco (mg/kg) x Pesodelanimal(kg)

Concentracindelfrmaco(mg/mL)

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PRACTICA1EXPERIMENTO1

Curvadosisrespuestayantagonismocompetitivo1. Materialesyfrmacos

Equipodediseccin Acetilcolinaal1/10,1/100,1/1000,1/10000,1/100000,1/1000000 Atropinaal1/100000 SolucinTyrode Sistemaderganosaislados(Preparacinisomtrica,Kimgrafo)

2. Animales:Rataadultamachoohembra.3. Metodologa

SistemaderganosAislados:PreparacinIsotnica:Constadeunbao,unregistradoryunsistemaderecirculacindeaguaconuntermostatosegnseindicaenlaFigura1.Elbaoesdeaproximadamente50mLdecapacidadytienedoblecapa,ensuinteriorsecolocalasolucinfisiolgicaylacapaexternaestconectadaalsistemaderecirculacindeaguaconectadaauntermostatoafindemantenerunatemperaturaconstanteparaelrgano.

Diseccin:a. Sacrificarlaratamediantedislocacincervical.Luegoconayudadelequipode

diseccincortaryabrirelabdomen, localizarel intestinodelgado(leon)(VerFigura2).

b. Lavar la luz intestinal del rgano a baja presin con una jeringa de 23ccconteniendosolucinTyrodeysepararaproximadamente3cmdelleon.

c. Montarelrganocon cuidadodenopresionarloniestirarlo,enelbaodelsistemaderganosaisladospreviamenteacondicionadoa30CensolucindeRingerTyrode(Figura1).

d. Registrarlascondicionesbsales(lneadebase,amplituddelascontraccionesespontneas).

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Montajedelrgano(leon):Elrganodiseccionadoes atado endosextremos,unodeellos aunpunto fijomediante una pesa y el otro dejando aproximadamente 15 cm de hilo a unapalanca registradora, demodo que cuando el rgano se contrae la palanca sedesplazahaciaarribaycuandoserelajalapalancasedeslizahaciaabajo

AgonistasyAntagonistas:a. Instilar en el bao dosis crecientes logartmicas, acumulativas de

ACETILCOLINAapartirde lasolucin1/1000000.Luegode instilarcadadosisobservar y registrar la amplitud de la contraccin aproximadamente 30segundos y dejar correr el papel registrador un centmetro. Terminado elexperimento lavarelrganopor lomenos2vecesmedianteelcambiode lasolucinRingerTyrodedelbao.

b. Previainstilacinde0.1mLdelasolucindeATROPINAal1/100000repetirelensayoanteriorempleando lasmismasdosisdeACETILCOLINAempleadasenelexperimentoanterior.

PrepararlasgrficasLogdosisrespuestadeambosexperimentoseinterpretarlosresultadosobtenidos.

Tabla 1. Respuesta en milmetros y porcentaje de respuesta segn dosis, antes ydespusdeantagonista.

Dosisprogresivas

Antes DespusRespuesta(mm) %derespuesta Respuesta(mm) %derespuesta

Basal 1/1000000 1/100000 1/10000 1/1000 1/100 1/10

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4. Cuestionariopreprctica:

Definalostrminosagonistayantagonista. Describalosdiversostiposdeantagonismodefrmacosqueexisten. Definayestablezcalasdiferenciasentreeficaciaypotenciadeunfrmaco.

5. Cuestionariopostprctica: Describaloqueesunagonistainversoyunagonistaparcial. Expliqueporquelaatropinaescatalogadocomoantagonistacompetitivo. Explique de que manera la atropina afecta la relacin dosisrespuesta de la

acetilcolinasobreelmsculolisointestinal.

Figura1:Montajedelrganoaisladoenelsistemaderganosaislados

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Figura2:ubicacindelleonenlarata

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EXPERIMENTO2

Antagonismofisiolgico(Oxitcicosytocolticos)enteronogrvido1. Materialesyfrmacos

Equipodediseccin Adrenalinaal1/10000 Ergonovina0.2mg/mL Papaverina2% Oxitocina5UI/mL SolucinJalon Sistemaderganosaislados(Preparacinisomtrica,Kimgrafo)

2. Animales:Unarataadultahembra.3. Metodologa Sacrificarelanimalenestadodeestromediantedislocacincervical.Luegoconayuda

delequipodediseccincortar,abrirelabdomenysepararlasramasuterinas.

Figura3:Ubicacindelasramasuterinasenlarata

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Montar una de las ramas uterinas con cuidadodenopresionarla ni estirarla en elbao de rganos aislados previamente acondicionado a 30C en solucin Jalon.Registrar las condiciones basales (lnea de base, amplitud y frecuencia de lascontraccionesespontneas)

Despusdeunperiododeestabilizacinde5minutos,instilar0.1mLdeunasolucinde ADRENALINA al 1/10000, ERGONOVINA de 0.2mg/mL, PAPAVERINA al 2% yOXITOCINAde5UI/mL(despusdelainstilacindecadafrmacodebeesperarqueseproduzcalarespuestamximaylavardosveceselsegmentouterinoantesdeinstilarelsiguiente).

Midalaamplituddelasrespuestasyanoteeltipoderespuestaparacadafrmaco. Graficareinterpretarlosresultadosobtenidos.

Tabla2.Antagonismofisiolgico:oxitcicosytocolticos

Frmacoydosis Tipoderespuesta Amplitud(mm) Tono

4. Cuestionariopreprctica:

Definalostrminosagonistayantagonista. Describalosdiversostiposdeantagonismodefrmacosqueexisten. Definayestablezcalasdiferenciasentreeficaciaypotenciadeunfrmaco.

5. Cuestionariopostprctica: Describaloqueesunagonistainversoyunagonistaparcial. Quefectosproducelaergonovinaylaoxitocinaenelterogrvidoycualessu

aplicacinclnica? Porqulosefectosdelaoxitocinasondiferentesenterogrvidoynogrvido?

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EXPERIMENTO3

Antagonismofisiolgicoycompetitivoenelmsculolisogstrico1. Materialesyfrmacos

Equipodediseccin SolucindeRingerSapo Cnuladevidrio AzuldeEvans 02ligaduras 01jeringadetuberculina 01aguja27x 03jeringasde2cc Soporte Acetilcolinaal1% Adrenalina0.1% Atropinaal1%

2. Animales:Unsapo.3. Metodologa

Abrirlacavidadabdominalyobservarlascontraccionesperistlticasespontneasaloslargodeltractoestomacal.Denoexistirprovocarlosconestmulomecnicos.

Aislarelestmagoyextirparlocortandoporencimadelcardiasypordebajodelploro.Luego,vaciarelcontenidodelestmagoyligarpordebajodelploro.

Insertelacnuladevidrioatravsdelcardiasyfjelomedianteunaligadura. Carguen la jeringadetuberculinacon lasolucindeRingera30Ccoloreadacon

AzuldeEvanse inserta laagujaN27x1/2anguladaa90para luego inyectarelpreparado introduciendo laagujaentre lacnuladevidrioymucosadelcardias,procurando que la solucin coloreada se deposite en el estmago en cantidadsuficientehastaalcanzar2cmvisiblesenlacnuladevidrio.

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Fijelapreparacinenunsoporte. Apliqueaproximadamente5gotasdecadaunade las sustancias sobre lapared

delestmagoenelordenestrictoqueacontinuacinsedetalla:Acetilcolina1%,Adrenalina0,1%,Acetilcolina1%,Atropina1%,Acetilcolina 1%;observando losefectos producidos, anotando los tiempos de aparicin y graficando lasalteraciones.TenercuidadoqueentrecadasustanciaaplicadasedebedelavarlapreparacinconlasolucindeRingera30C,antesdecontinuarconlasiguientesustancia.

Registrelosresultadosobtenidosconcadaunadelasdrogas.

Tabla3.Antagonismofisiolgicoycompetitivo enelmsculolisogstricoFrmaco Tiempodelatencia

(segundos)Respuesta(mm) Comentario

Acetilcolina1% Adrenalina0.1% Acetilcolina1% Atropina1% Acetilcolina1%

4. Cuestionariopreprctica:

Definalostrminosagonistayantagonista. Describalosdiversostiposdeantagonismodefrmacosqueexisten. Definayestablezcalasdiferenciasentreeficaciaypotenciadeunfrmaco.

5. Cuestionariopostprctica: Describaloqueesunagonistainversoyunagonistaparcial. Expliqueporquelaatropinaescatalogadocomoantagonistacompetitivo. Expliquedequemaneralaadrenalinaafectalosefectosdelaacetilcolinasobreel

msculolisointestinal.

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PRACTICA2

EXPERIMENTOAntagonismocompetitivo(pilocarpinayatropina)

1. Materialesyfrmacos

Atropina0.5mg/mL Pilocarpina20mg/mL(gotasoftalmicas) Pentobarbital65mg/mL Jeringasdescartablesde1mL Balanza Catterintravenoso

2. Animales:Conejoalbinode23kgdepesocorporalaproximadamente.3. Metodologa:

Cateterizarlavenamarginaldelaorejadelconejoconuncatterintravenoso(IV). Administrar25mg/kgdePENTOBARBITALporvaIV. Una vez que se encuentre anestesiado el conejo, administrar 5 mg/kg de

PILOCARPINAporva IVydejaralanimalsobreunasuperficiealtacon lacabezahacia abajo para evitar que aspire las secreciones salivales. Una vez que seevidencien todas las manifestaciones colinrgicas muscarnicas antagonizar losefectoscon0.25mg/kgdeATROPINAporvaIV.

LaadministracindeATROPINAserealiza lentamenteysiesnecesariosepuederepetirlasdosishastarevertirtodoslosefectoscolinrgicos.

Elanimaldebequedarenobservacinporlomenosmediahoraohastaquesalgadelestadoanestsico.

Todoslosefectosdebenseranotadosenlatablaadjunta.

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Tabla4:Antagonismocompetitivo:pilocarpinayatropinaParmetro Basal Pilocarpina Pilocarpina+AtropinaFrecuenciacardiaca Frecuenciarespiratoria Tamaodepupila Salivacin Secreciones Movimientosintestinales Miccin Defecacin *Segradaencruces(+)dependiendodelaintensidad

4. Cuestionariopreprctica:

Describalosdiferentestiposdereceptorescolinrgicosqueexisten. Describayexpliquelosefectosdelaatropinaydelapilocarpinaascomolosusos

teraputicosdeestosdosfrmacos.

5. Cuestionariopostprctica: DescribalasmanifestacionesqueproducelaadministracindePilocarpina. Explique por qu fue necesario administrar pentobarbital al conejo antes de

empezareltrabajoconfrmacoscolinrgicos.

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PRACTICA3DISCUSIONDECASOSCLINICOFARMACOLOGICOS

CASOCLINICO1

Mujerprimigestade26aosedadcon24semanasdegestacinquepresentaedemaenmiembrosinferioreseincrementosignificativodepesodehasta10kilosdesdeeliniciodela gestacin, acude por presentar cefalea, malestar general y fatiga. Se le realizanexmenesencontrandohipoalbuminemiaseverade1.8mg/mL,hemoglobinade7mg/dL;adems la paciente presenta incremento de la frecuencia urinaria sobre todo en lasnochesysupresinarterialesde150/90mmdeHg.Alrealizarleexmenesderutina,seencuentrasedimentourinariopatolgico,presenciadeprotenasybacteriasabundantes,por lo que se diagnostica unabacteriuria asintomtica, sin embargo a los tres das derecibir tratamiento presenta dolor en zona del bajo vientre y contracciones uterinasespaciadas,acompaadasdehipertensinypoliuria;selediagnosticainfeccindetractourinarioyamenazadepartoprematuro,porloqueseiniciamedicacin.Parmetrosfarmacocinticosatenerencuenta: Barreras:placentaria. Cambiodevolumendedistribucin(retencinhdrica) Hipoproteinemiayanemia InteraccionesmedicamentosasCuestionariopreprctica: QumedicamentosdebernemplearseparalaITU? Qumedicamentosdebernemplearseparalaamenazadepartoprematuro? Sernalasdosisusualesodeberemoscorregirlas? Deberemosrestringirloslquidosoincrementarlasdosis? Qu enfermedad pudiera agravar el problema y por lo que debemos realizar el

monitoreoenestapaciente?

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CASOCLINICO2

Paciente adulto mayor de 75 aos que sufre deshidratacin aguda por diarreascoleriformesqueocasionanecrosistubularagudaeinsuficienciarenalaguda,elpacienteademsesdiabticoyobeso, recibehipoglicemiantesoralesycidoacetilsaliclicoporlos factoresde riesgoquepresenta.Enaproximadamente5dasretornacondolorprecordialqueseirradiaalbrazo,selediagnosticasndromecoronarioagudoeinsuficienciacardaca congestiva. Se indica restriccin hdrica y la alimentacin es mediante dietahipoglicmicasevera(paradiabticos).Parmetrosfarmacocinticosatenerencuenta: Correccindedosisrenal Incrementodeaguacorporaltotal Obesidad InteraccionesmedicamentosasconantidiabticosoralesCuestionariopreprctica: Sedebecorregirladosisdelosmedicamentos? Estamosfrenteaunsndromemetablico,quedebemoshacer? Porlaobesidadlaresistenciaalainsulinaesmayor? Qumedicamentospodrasafectarsusriones?

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CASOCLINICO3

Paciente varn de 42 aos, alcohlico, ha recibido psicoterapia sin resultados; conantecedentedeTBCpulmonarhace3aos,porlosexmenescomoradiografas,pruebasde sensibilidad como PPD, se determina que el paciente sufre de TBC pulmonar entratamiento por multidrogo resistencia. Se le realizan una serie de exmenes, dondeadems de comprobar la recidiva de TBC, se encuentra anormalidad en el perfilbioqumicodelaspruebashepticas,porloquesedecidetratamientocondrogasmenoshepatotxicas,peseaelloelpacientepresentasignosdePelagra,estasmanifestacionesse acrecientan cuando el paciente presenta diarreas con presencia de alimentos nodigeridos,seencuentraunpacientedesnutridopormalabsorcinintestinal.Parmetrosfarmacocinticosatenerencuenta: Inmunosupresin Mltiplesdrogas Desnutricin Insuficienciaheptica.Cuestionariopreprctica: CuleselagentecausaldelaTBCycmosecontagia? Ques laPelagra, cuales son susprincipales caractersticas y conque frmaco se

trata? AquesedenominaTBCmultidrogoresistente(TBCMDR)? Culesson losmedicamentosqueseempleanenel tratamientode laTuberculosis

pulmonar? QueeselPPD?SeproduceenelPer? Qu medicamentos debemos emplear en este paciente, cual es el esquema del

MINSA? Comopodemosmejorarladesnutricincrnicareagudizada? Elgradodeinmunosupresindeberegistrarse,seemplearnmedicamentos Debemoscorregirladosisdelosmedicamentos?Porqu?

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ANEXO1

TABLADESOLUCIONESFISIOLGICASCOMNMENTEUTILIZADASENEXPERIMENTOSCONRGANOSAISLADOS

[Gramos(g)paraunlitrodesolucin]

Sales SolucindeRingerTyrode Locke Sapo Jalon

NaCL 8.00 9.00 6.50 9.00KCl 0.20 0.42 0.14 0.42Mg.8O4.7H2O 0.26 . . .NaH2PO4 0.05 . 0.005 .NaHCO3 1.00 0.50 0.40 0.50Glucosa 1.00 1.00 2.00 0.50CaCl2(1molar) 2ml 1.2ml 1.2ml 0.3mlGas Oxigenooaire Oxigeno Aire Oxigeno+CO2al5%Utilidad Intestino Msculo

cardiacoTejidodebatracio

teroderata

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ANEXO2

TABLADESUBMULTIPLOSDEUNIDADESDEMASADELSISTEMAINTERNACIONALDEUNIDADES

NOMBRE SIMBOLO g Exponentede10

Gramo g 1 1Miligramo mg 0.001 3Microgramo ug 0.000001 6Nanogramo ng 0.000000001 9Picogramo pg 0.000000000001 12Femtogramo fg 0.000000000000001 15Attogramo ag 0.000000000000000001 18g/ml mg/ml ug/ml1/100 10 100001/1000 1 10001/10000 0.1 1001/100000 0.01 101/1000000 0.001 1