LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

Laboratorio de Microbiologa-91GUniversidad Nacional del Callao

INTEGRANTES: -Gamboa Lpez Annette Gabriela 11261110044 - Mendoza Vidal Carla Gwendoline 101012E -Otero Len Jersson Jess 1326120127 -Pinto Quispe Medardo 1216120477 -Rios Rodrguez Luis Antonio 1326120047

ING.QUMICA: Mg. Herrera Snchez Sonia.GRUPO HORARIO: 91 G

TEMA: ESCHERICHIA COLI Y CLOSTRIDIUM

I. INTRODUCCIN

Las enfermedades del aparato digestivo humano son causadas por microorganismos que entran al cuerpo a travs de la boca, ya sea porque estn contaminados los alimentos mismos, los utensilios o incluso las manos de quienes los preparan. En el caso de las frutas y verduras, esta contaminacin es posible inclusive antes de que se cosechen debido al abono utilizado o a las aguas residuales con las que se riegan, que pueden llevar residuos de heces fecales humanas o animales. La deteccin de microorganismos coliformes se usa como un indicador de la calidad sanitaria del agua, o como indicador general de las condiciones higinicas del ambiente en un rea de procesamiento de alimentos, adems de indicar la posibilidad de haber ocurrido una contaminacin posterior a la etapa de eliminacin de microorganismos en el alimento. Los coliformes son bacterias entricas, es decir, que viven en el intestino de animales, que fermentan la lactosa a una temperatura de 35 C o 37 C, con produccin de cido y gas en un periodo de 24 a 48 hrs. Escherichia coli (E. coli) es una bacteria que se encuentra normalmente en el intestino del ser humano y de los animales de sangre caliente. La mayora de las cepas de E. coli son inofensivas. Sin embargo algunas de ellas, pueden causar graves enfermedades a travs de los alimentos (OMS). E. coli es considerado uno de los tipos de bacteria enteropatgena de mayor preocupacin en la industria alimenticia, debido a que se le ha catalogado como uno de los principales agentes causales de epidemias por contaminacin de alimentos, provocando en el humano, severos trastornos gastrointestinales, principalmente en nios y ancianos.

II. OBJETIVOS

Detectar la presencia de escherichia coli y clostridium, en los alimentos mediante mtodo cualitativo.

Determinar el nmero de Escherichia coli en el agua y Clostridium en el Atn, por medio de la cuenta en placa.

Determinar si el alimento es apto para el consumo humano segn la norma 591-2008/ MINSA.

III. MARCO TERICO

Escherichia ColiLaEscherichia coli, tambin conocida por laabreviacinde su nombre,E. coli, es quizs el organismoprocariotams estudiado por el ser humano. Se trata de unaenterobacteriaque se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en lasaguas negras, pero se lo puede encontrar en todos lados, dado que es un organismo ubicuo. Fue descrita por primera vez en1885porTheodore von Escherich,bacterilogoalemn, quien la denomin Bacterium coli. Posteriormente lataxonomale adjudic el nombre deEscherichia coli, en honor a su descubridor. Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto delproceso digestivo, adems de producir lasvitaminasByK. Es un bacilo que reacciona negativamente a latincin de Gram(gramnegativo), esanaerobio facultativo, mvil porflagelos peritricos(que rodean su cuerpo), no formaesporas, es capaz defermentarlaglucosay lalactosay su prueba deIMVICes ++--. Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de gentica y biologa molecular. LaEscherichia coli, en su hbitat natural, vive en los intestinos de la mayor parte de losmamferossanos. Es el principal organismoanaerobio facultativodelsistema digestivo. En individuos sanos, es decir, si la bacteria no adquiereelementos genticosque codifican factores virulentos, la bacteria acta como uncomensalformando parte de laflora intestinaly ayudando as a laabsorcin de nutrientes. En humanos, la Escherichia colicoloniza eltracto gastrointestinalde un neonato adhirindose a las mucosidades delintestino gruesoen el plazo de 48horas despus de la primera comida. Tiene un ancho variable.

Escherichia coli O157:H7LaEscherichia coliO157:H7es una de las cientos decepasde laEscherichia coli. Aunque la mayora de las cepas son inocuas y viven en losintestinosde los seres humanos y animales saludables, esta cepa produce una potentetoxinay puede ocasionar enfermedades graves como elsndrome urmico hemoltico.LaEscherichia coliO157:H7 fue reconocida inicialmente como causa de enfermedad en 1982 durante un brote dediarreaaguda consangreenEstados UnidosSe determin que el brote se deba ahamburguesas contaminadas. Desde entonces, la mayora de las infecciones han provenido de comercarnedevacunopicada insuficientemente cocinada. El escritorRobin Cookescribi una novela sobre el tema tituladaToxina.En 1996, cerca deSeattlese produjo un brote a causa de esta bacteria, que se encontr en botellas dezumodemanzanade la marcaOdwalla Inc.. Muchas personas, entre ellas bebs y nios, murieron despus de tomar este zumo. La bacteria entr en las botellas porque las manzanas que se exprimieron contenan excrementos devenadosde la zona y no hubo ningn tipo de pasteurizacin.Se diferencia de las otrasEscherichia colien que no fermenta elsorbitol, no crece a 44C y no produce -glucoronidasa. La combinacin de letras y nmeros en el nombre de la bacteria se refiere a los marcadoresantignicosespecficos que se encuentran en su superficie y la distingue de otros tipos deEscherichia coli: El antgeno somtico O, proveniente del lipopolisacrido de lapared celular; El antgenoflagelarH, compuesto por 75polisacridos.Elgrupo de riesgocomprende prcticamente a todas las personas, inmunocompetentes o no. Los nios menores de 5aos de edad con problemas de alimentacin, as como los ancianos son los ms susceptibles de sufrir complicaciones graves.

PatogeniaLaEscherichia colipuede causar infecciones intestinales y extra intestinales generalmente graves, tales como infecciones delaparato excretor, vas urinarias,cistitis,Uretritis,meningitis,peritonitis,mastitis,septicemiayneumonaGram-negativa.VirulenciaLaEscherichia coliest dividida por sus propiedadesvirulentas, pudiendo causar diarrea en humanos y otros animales. Otras cepas causan diarreashemorrgicaspor virtud de su agresividad, patogenicidad y toxicidad. En muchos pases ya hubo casos de muerte por esta bacteria. Generalmente le pasa a nios entre 1ao y 8aos. Causado generalmente por la contaminacin de alimentos, y posterior mala coccin de los mismos, es decir, a temperaturas internas y externas menores de 70C.Infecciones UrinariasSon ms comunes en mujeres por la corta longitud de la uretra (25 a 50mm), en comparacin con los hombres (unos 15cm). Entre los ancianos, lasinfecciones urinariastienden a ser de la misma proporcin entre hombres y mujeres. Debido a que la bacteria invariablemente entra al tracto urinario por lauretra(una infeccin ascendente), los malos hbitos sanitarios pueden predisponer a una infeccin, sin embargo, otros factores cobran importancia, como elembarazo,hipertrofia benignaomalignadeprstata, y en muchos casos el evento iniciante de la infeccin es desconocido. Aunque las infecciones ascendentes son las causantes de infecciones del tracto urinario bajo ycistitis, no es necesariamente esta la causa de infecciones superiores como lapielonefritis, que puede tener origen hematgeno.

TratamientoEl uso deantibiticoses poco eficaz y casi no se prescribe. Para la diarrea se sugiere el consumo de abundante lquido y evitar la deshidratacin. Cuando una persona presenta diarrea no debe ir a trabajar o asistir a lugares pblicos para evitar el contagio masivo.En algunas patologas como lapielonefritishay que considerar el uso de algunacefalosporinaendovenosa.Clasificacin Micrografa electrnica, de baja temperatura, de un cmulo de bacteriasE. coliampliado 10.000 veces. Cada cilindro redondeado es un individuo.Se distinguen seis cepas segn su capacidad patgena, -tambin se les puede llamarvirotipos-:Escherichia colienteropatognica (ECEP), enterotoxignica (ECET), enteroinvasiva (ECEI), enterohemorrgica (ECEH), enteroagregativa (ECEA) y de adherencia difusa (ECAD).Escherichia colienteropatognica (ECEP)Esta cepa causa diarrea en humanos, conejos, perros y caballos, al igual que la enterotoxignica, pero la etiologa y los mecanismos moleculares de colonizacin son diferentes. Carece defimbriasy no produce las toxinas ST y LT, pero utilizan la protena intimina, unaadhesina, para adherirse a las clulas intestinales. Este virotipo posee una serie de factores de virulencia que son similares a los que se encuentran enShigella, como la toxina shiga.12La adherencia a la mucosa intestinal causa una reordenacin de laactinaen la clula hospedante, que induce una deformacin significativa. Estas bacterias son moderadamente invasivas: penetran en las clulas hospedadoras provocando una respuesta inflamatoria. La causa principal de diarrea en los afectados por esta cepa son seguramente los cambios provocados en la estructura de las clulas intestinales.

Escherichia colienterotoxignica (ECET)Se parece mucho aVibrio cholerae, se adhiere a la mucosa delintestino delgado, no la invade, y elaboratoxinasque producen diarrea (diarrea del viajero). No hay cambios histolgicos en las clulas de la mucosa y muy poca inflamacin. Produce diarrea no sanguinolenta en nios y adultos, sobre todo en pases en vas de desarrollo, aunque los desarrollados tambin se ven afectados. Emplea varias toxinas, incluyendo laenterotoxina resistente al calory laenterotoxina termolbil.Escherichia colienteroinvasiva (ECEI)Es inmvil, no fermenta lalactosa. Invade el epitelio intestinal causando diarrea sanguinolenta en nios y adultos. Libera elcalcioen grandes cantidades impidiendo la solidificacin sea, produciendo artritis y en algunos casosarterioesclerosis. Es una de lasE. colique causa ms dao debido a la invasin que produce en el epitelio intestinal.Escherichia colienterohemorrgica o verotoxignica (ECEH)La convencin internacional de nomenclatura de patgenos ha recomendado el uso de STEC (Shiga ToxinEscherichia coli) para este grupo, debido a que estas bacterias producen una toxina citotxica para clulas Vero de cultivo de similaridad estructural a la toxina producida porShigella dysenteriae. Las STEC producenverotoxinasque actan en elcolon. Sus sntomas son: primero colitis hemorrgica, luegosndrome urmico hemoltico(lo anterior ms afeccin del rin, posible entrada en coma y muerte), y por ltimo,prpura trombocitopnica trombtica(lo de antes ms afeccin del sistema nervioso central). Esta cepa no fermenta elsorbitoly posee unfago, donde se encuentran codificadas las verotoxinas, tambin llamadas "Toxinas Shiga", no posee unafimbriaformadora de mechones, en vez de esto posee una fimbria polar larga que usa para adherencia.

Escherichia colienteroagregativa o enteroadherente (ECEA)Slo encontrada en humanos. Son llamadas enteroagregativas porque tienen fimbrias con las que aglutinan clulas en loscultivos de tejidos. Se unen a la mucosa intestinal causando diarrea acuosa sin fiebre. No son invasivas. Producenhemolisinay una enterotoxina ST similar a la de las enterotoxignicas. se le asocian dos toxinas: toxina termoestable enteroagregante (EAST) toxina codificada por plasmidos (PET)

Escherichia colide adherencia difusa (ECAD)Se adhiere a la totalidad de la superficie de las clulas epiteliales y habitualmente causa enfermedad en nios inmunolgicamente no desarrollados o malnutridos. No se ha demostrado que pueda causar diarrea en nios mayores de un ao de edad, ni en adultos y ancianos.

Clostridium Clostridiumes un gnero debacteriasanaerobias,bacilosgrampositivas,parsitasysaprfitasalgunas de ellas, queesporulan,1y sonmviles, en general por intermedio deflagelosperitricos. Toman la forma defsforo, palillo de tambor ohusode hilar, de ah su nombre griego "Klostro", que significa huso de hilar.2Las especies ms importante son elClostridium botulinumproductor delbotulismo, elClostridium novyi,Clostridium septicum,Clostridium perfringensproductor de lagangrena gaseosayClostridium tetaniproductor delttanos.El gnero est definido por cuatro caractersticas:1. Presencia deendosporas2. Metabolismoanaerobio estricto3. Incapacidad parareducirsulfatosasulfitos4. Pared celulargrampositivaHabitadNo todas las especies son patgenas, algunas forman parte de laflora intestinalnormal. Las especies deClostridiumestn ampliamente distribuidas en elambiente, habitando el tracto gastrointestinal tanto de humanos como animales. A pesar del inters en relacin deClostridiumpor razn de que estos organismos estn involucrados condiarreaen nios y en laetiologadelcncer de colon, hay pocos datos disponibles sobre el hbitat intestinal de la bacteria.

CaractersticasLosClostridiumson organismos que se observan solo, en parejas o a lo mximo en cadenas cortas. Son mviles por flagelos peritrcos -con la excepcin deC. perfringens. Algunas especies producencpsulay formanesporasde aspectos esfricos u ovalados, situados en el centro del bacilo o en un extremo subterminal y resistentes al calor. A pesar de ser bacterias anaerobias obligadas, no todos tienen la misma sensibilidad al oxgeno.C. tetani, por ejemplo, requiere total anaerobiosis yC. perfringestiende a ser menos exigente. Crecen a temperatura de 37C y a unpHentre 7 y 7,4, de modo que son fcilmente inactivadas a pH cido o bsico, como elcido estomacal, el de limpiadores y desinfectantes como elcloroe incluso el pH decidos orgnicosencontrados en elzumo de limn, por ejemplo. Son fermentadoras deazcares, aspecto que resulta de utilidad en la diferenciacin de las especies.Poseenantgenossomticos y flagelares que permiten dividirlas en tipos y subtipos. Producenexotoxinasde efectonecrosante,hemolticosy potencialmente letales. Las toxinas son nombradas con letras, as por ejemplo, la toxina necrosante es nombrada con la letra C y la enterits en animales es causada por las toxinas B, D y E.PatologaLosClostridiumincluyen bacterias comunes y libres en la naturaleza, as comopatgenosde importancia.4Hay cuatroespeciesprincipales responsables deenfermedadesen humanos: C. botulinum(de la palabrabotulus, salchicha) es unorganismoproductor de unatoxinaalimenticia causante debotulismo,5un desorden neurolgico agudo potencialmente letal. C. difficile(llamado as por su dificultad a ser aislado ycultivado) puede sobrepoblar laflora saprfitaintestinal duranteterapiasconantibiticos, causandocolitis seudomembranosa.6 C. perfringens(llamadoperfringens, literalmente "que atraviesa" por estar asociado a unanecrosis invasiva) causa un amplio rango de sntomas, desdeintoxicacin alimentariahastagangrenagaseosa. Es tambin causante de unaenterotoxemia, frecuentementehemorrgicaencarneros(en especialcorderos),novillos,ovejasycabras.7 C. tetani(detetani, que significa rigidez) es el organismo causante dettano(trismo), caracterizada por una rigidez muscular excesiva.8 C. septicum(su nombre proviene de la palabrasepticum, traducido como "putrefactor") es uno de los agentes etiolgicos de la septicemia y una elevada mortalidad.2 C. sordellii, nombrado as en honor al bacterilogoSordelliquien lo aisl por primera vez. Puede formar parte de la flora genital femenino, ha estado involucrado en casos de choque txico despus del parto.Usos Comerciales C. thermocellumpuede generaretanola partir de ciertos desperdicios, hacindolo un posible candidato en el uso y produccin de etanol. Al no tener requerimientos deoxgenoy por ser termoflico, se reducen los costos de refrigeracin C. acetobutylicum, conocido tambin como elorganismo Weizmann, el cual fue usado por primera vez porJaim Weizmannen la produccin deacetonaybiobutanola partir dealmidnen1916en la produccin deplvorayTNT. C. ljungdahlii, recientemente descubierto en desechos de pollos comerciales, puede producir etanol a partir de fuentes de un solocarbono, incluyendoSyngas, unamezcladedixido de carbonoehidrgenoque puede ser generada a partir de lacombustinparcial tanto debiomasaycombustible fsil. El uso de estas bacterias para producir etanol ya es un proyecto en diversas plantas energticas.9Debido al peligro que supone elClostridium botulinumy otros agentes patgenos, el nico mtodo seguro de envasar la mayora de los alimentos es bajo condiciones depresiny temperatura altas, normalmente de unos 116-121C.IV. MATERIALES, MUESTRA Y REACTIVOS

MATERIALES Y REACTIVOSAGAR MUELLER HINTON

SOLUCION SALINA 0.8%

PROBETA

PAPEL DE FONDO BLANCO

AGUA POTABLE

ATUN

GORRO

PIPETA

VASO PRECIPITADO

GUANTES

MECHERO DE BUNSEN

BUCONASAL

PLACAS PETRI

TRIPODE

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Preparacin de la muestra

Primero elegimos una muestra donde tengamos E. coli, que en este caso ser 100ml de agua potable.

Procedemos a preparar 100ml de solucin salina al 8%

Colocamos 90ml de la solucin en una probeta, le agregamos 10ml de la muestra y homogenizamos.

Paralelamente nuestro medio de cultivo (Agar Mueller hinton) lo calentamos hasta volverlo lquido.

Separamos en una probeta graduada alrededor de 20 ml. Y dejamos que enfre hasta una temperatura aproximada de (40 60) C no dejar que solidifique.

Sacamos 1 ml de la nueva solucin y la colocamos en la placa Petri, a esto agregamos los 20ml del agar.

No olvidar que siempre hay que flamear el rea.

Luego rotulamos.

Y colocamos en la incubadora.

INFORME DE ENSAYO NALISIS: Microbiolgico de Escherichia coli

MUESTRA:100 ml de agua potable

FECHA DE MUESTREO: 16 de Junio del 2015

FECHA DE EJECUCIN:19 de Junio del 2015

RESULTADOS DE MICROBIOLGICOS Ensayo UFC/100mlLimite Permisible

Escherichiacoli10 UFC/100ml

Se corrobora con la norma (RM N591-2008/MINSA)

VI. CONCLUSIONES Se pudo observar que el agua potable analizada no cumple con las condiciones establecidas, por lo tanto no es recomendable su consumo sin antes hervirla.

VII. RECOMENDACIONES

Desinfectar apropiadamente el rea de trabajo, as como los instrumentos a usar.

Usar todos los elementos de higiene como cofia, guantes y mascarillas.

Manipular con cuidado el mechero para evitar quemaduras.

Parte Experimental Primero elegimos una muestra donde probablemente tengamos Clostridium, que en este caso ser una lata de atn.

La ponemos con el abre fcil hacia abajo encima de una hoja de papel.

Rotulamos y la metemos a la incubadora

INFORME DE ENSAYO NALISIS: Microbiolgico de Clostridium

MUESTRA:1 lata de grated de atn

FECHA DE MUESTREO: 16 de Junio del 2015

FECHA DE EJECUCIN:19 de Junio del 2015

RESULTADOS MICROBIOLGICOS Ensayo UFC/100mlLimite Permisible

ClostridiumEstril comercialmente100 UFC/1g

Se corrobora con la norma (RM N591-2008/MINSA)

CONCLUSIONES Se descarta la existencia de clostridium en nuestra muestra, ya que al retirarla de la incubadora no presenta deformacin alguna ni derrames de lquido.

VIII. BIBLIOGRAFIA

1. Alcoba Leza M, Carro Fernndez JA, Prez Simn MR, et al. Meningitis por Listeria monocytogenes en el adulto en Espaa. Presentacin de 10 casos y revisin de la literatura. Rev Clin Esp. 2002

2. Ledermann DW. Listeria monocytogenes, de Murray a Seeliger. En: Una historia personal de las bacterias. Santiago de Chile: Ril Editores; 2007

3. Parrilla F. Estudio de incidencia de la Listeriosis en Espaa. Universidad Autnoma de Barcelona. Barcelona. 2011

4. R.M 591-2008 MINSA. Muestra.

Pginas web:

www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/pdf/Listerias_Medicine2010.pdf

www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/84002/fpv1de1.pdf;jsessionid=1D043C21BD6AF267CC9C3F29BE9A32F6.tdx1?sequence=1

www.bvsops.org.uy/pdf/listeria.pdf