antimikroba kelompok 2

8/18/2019 antimikroba kelompok 2

1/46

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar BelakangMikrobiologi merupakan suatu cabang ilmu biologi yang mempelajari tentang

mikroorganisme dan interaksi mereka dengan organism lain dan lingkungannya. Sementara

mikroba sendiri merupakan jasad renik yang mempunyai kemampuan sangat baik untuk

bertahan hidup. Jasad tersebut dapat hidup hampir di semua tempat di permukaan bumi.

Mikroba mampu beradaptasi dengan lingkungan yang sangat dingin hingga lingkungan yang

relative panas, dari ligkungan yang asam hingga basa.Pengujian dalam mikrobiologi memanfaatkan mikroorganisme sebagai indicator

pengujian. Dalam hal ini mikroorganisme digunakan sebagai penentu konsentrasi komponen

tertentu pada campuran kompleks kimia, untuk mendiagnosis penyakit tertentu, serta untuk

menguji bahan kimia guna menentukan potensi mutagenikatau karsinogenik suatu bahan.

Macam-macam uji dapat dilakukan adalah ui antibiotic antimicroba, bioautografi , uji

vitamin dan asam amino, uji ames,dan penggunaan mikroorganisme sebagai model

metabolisme obat mamalia.Definisi dari senya!a antimikroba adalah senya!a kimia yang dapat menghambat

pertumbuhan atau membunuh mikroba. "ntimikroba dapat dikelompokkan menjadi

antiseptikdan desinfektan. "ntiseptik adalah pembunuh mikroba dengan daya rendah dan biasa digunakanpada kulit, misalnya alkohol dan deterjen. Desinfektan adalah senya!a kimia

yang dapatmembunuh mikroba dan biasa digunakan untuk membersihkan meja, lantai, dan

peralatan.#ontoh desinfektan yang digunakan adalah senya!a klorin, hipoklorit, dan

tembaga sulfat. Mekanisme daya kerja antimikroba terhadap sel dapat dibedakan atas

beberapa kelompok sebagai berikut diantaranya merusak dinding sel, mengganggu

permeabilitas sel, merusak molekul protein dan asam nukleat, menghambat aktivitas en$im,

menghambat sintesa asam nukleat.

Pada a!alnya antibiotika diisolasi dari mikroorganisme, tetapi sekarang beberapaantibiotika telah didapatkan dari tanaman tinggi atau binatang. Suatu $at antibiotik

kemoterapeutik yang idealnya hendaknya memiliki sifat-sifat sebagai berikut% harus

mempunyai kemampuan untuk merusak atau menghambat mikroorganisme patogen spesifik.

Makin besar jumlah dan macam mikroorganisme yang dipengaruhi makin baik. &idak

1


2/46

mengakibatkan berkembangnya bentuk-bentuk resiten parasit. Sehingga memungkinkan

mikroba yang biasanya nonpatogenik atau bentuk-bentuk patogenik yang

semuladikendalikan oleh flora normal, untuk menimbulkan infeksi baru."ntibiotika pertama kali ditemukan oleh "le'ander (leming pada tahun )*+*, yangsecara

kebetulan menemukan suatu $at antibakteri yang sangat efektif yaitu penisilin. Penisilin ini

pertama kali dipakai dalam ilmu kedokteran tahun )* * oleh #hain dan (lorey. "ntibiotik

ialah suatu bahan kiia yang dikeluarkan oleh jasadrenik hasil sintetis semi-sintetis yang

mempunyai struktur yang sama dan $at ini dapatmerintangi memusnahkan jasad renik

lainnya. "ntibiotik yang efektif bagi banyak spesies bakteri, baik kokus, basil maupun

spiril,dikatakan mempunyai spektrum luas. Sebaliknya, suatu antibotik yang hanya efektif

untuk spesies tertentu, disebut antibiotik yang spektrumnya sempit. Penisilin hanya efektif

untuk memberantas terutama jenis kokus, oleh karena itu penisilin dikatakan mempunyaispektrum yang sempit. &etrasiclin efektif bagi kokus, basil dan jenis spiril tertentu. leh

karena itutetrasiclin dikatakan mempunyai spectrum luas D!idjoseputro, +// 0. 1urahol

Stelechocarpus burahol0 termasuk keluarga "nnonaceae. 2ebanyakan suku ini mengandung

senya!a sitotoksik, antimikroba, dan juga sebagai insektisida. Jenis bahan kimia pembersih

dan sanitiser yang digunakan dalam industri pangan harussesuai persyaratan yang ditetapkan.

1ahan kimia harus mampu mengendalikan pertumbuhan bakteri antimikroba0. "ntibiotika

pertama kali ditemukan oleh "le'ander (leming pada tahun )*+*, yangsecara kebetulan

menemukan suatu $at antibakteri yang sangat efektif yaitu penisilin. Penisilin ini pertama

kali dipakai dalam ilmu kedokteran tahun )* * oleh #hain dan (lorey. Sebagianbesar dari

antibiotika rumus kimianya telah diketahui dan beberapa di antaranya dapat dibuatsecara

sintesis."ktivitas antimikroba dapat dikendalikan dengan mengatur factor-faktor lingkungan yang

meliputi factor biotic makhluk hidup dan adanya asosiasi atau kehidupan bersama antar

mikroorganisme dapat dalam bentuk simbiose, sinergisme,abtibiose dan sintropisme0 dan

abiotik temperature,kelembapan, p3, radiasi,penghancuran secara mekanik0.

1.2 Rumusan Masalaha. "pa saja jenis metode yang digunakan untuk mengukur daya antimikroba4

b. "pa keunggulan dan kelemahan dari metode-metode yang digunakan untuk mengukur

daya antimikroba4

2


3/46

c. &ermasuk metode apa uji aktivitas antibakteri yang dilakukan4d. 1agaimana mekanisme kerja antibiotic yang digunakan dalam pengujian4e. 1agaimana prinsip terbentuknya $ona hambat4f. "pa pengaruh konsentrasi dan jenis bakteri uji terhadap $ona hambat yang terbentuk4g. 1agaimana evaluasi akhir uji potensi antibiotik4

1.3 Tujuan

&ujuan penulisan laporan praktikum ini adalah agar mahasis!a dapat mengetahui%

a. 1erbagai jenis metode yang digunakan untuk mengukur daya antimikroba. b. 2eunggulan dan kelemahan dari metode-metode yang digunakan untuk mengukur daya

antimikroba.c. &ermasuk metode apa uji aktivitas antibakteri yang dilakukan.d. Mekanisme kerja antibiotik yang digunakan dalam pengujian.e. Prinsip terbentuknya $ona hambat.f. Pengaruh konsentrasi dan jenis bakteri uji terhadap $ona hambat yang terbentuk.g. 5valuasi akhir uji potensi antibiotik

3


4/46

BAB II

TIN AUAN PU!TA"A

Sensitifitas menyatakan bah!a uji sentifitas bakteri merupakan suatu metode untuk

menentukan tingkat kerentanan bakteri terhadap $at antibakteri dan untuk mengetahui senya!a

murni yang memiliki aktivitas antibakteri. Metode 6ji sensitivitas bakteri adalah metode cara

bagaimana mengetahui dan mendapatkan produk alam yang berpotensi sebagai bahan anti bakteri

serta mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan atau mematikan bakteri pada

konsentrasi yang rendah. uji sentivitas bakteri merupakan suatu metode untuk menentukan

tingkat kerentanan bakteri terhadap $at antibakteri dan untuk mengetahui senya!a murni yang

memiliki aktivitas antibakteri.

"ntibiotik digunakan untuk membasmi mikroba penyebab terjadinya infeksi. 7ejala

infeksi terjadi akibat gangguan langsung oleh mikroba dan berbagai $at toksik yang dihasilkan

mikroba. Pada dasarnya suatu infeksi dapat ditangani oleh sistem pertahanan tubuh, namun

adakalanya sistem ini perlu ditunjang oleh penggunaan antibiotik. "ntibiotik yang digunakan

untuk membasni mikroba penyebab infeksi pada manusia, harus memiliki sifat toksisitas selektif.

"rtinya antibiotik harus bersifat toksik untuk mikroba, tetapi relatif tidak toksik untuk hospes.

&oksisitas selektif tergantung kepada struktur yang dimiliki sel bakteri dan manusia misalnyadinding sel bakteri yang tidak dimiliki oleh sel manusia, sehingga antibiotik dengan mekanisme

kegiatan pada dinding sel bakteri mempunyai toksisitas selektif relatif tinggi 7anis!arna, )**80.

Sensitivitas bakteri terhadap antibiotik tergantung kapada kemampuan antibiotik tersebut untuk

menembus dinding sel bakteri. "ntibiotik lebih banyak yang efektif bekerja terhadap bakteri

7ram positif karena permeabilitas dinding selnya lebih tinggi dibandingkan bakteri 7ram negatif.

Jadi suatu antibiotik dikatakan mempunyai spektrum sempit apabila mampu menghambat

pertumbuhan bakteri 7ram positif, sedangkan antibiotik berspektrum luas jika pertumbuhan

bakteri 7ram positif dan bakteri 7ram negatif dapat dihambat oleh antibiotik tersebut Sumadio,

dkk. )**90.

1erdasarkan sasaran tindakan antibiotik terhadap mikroba maka antibiotik dapat

dikelompokkan menjadi lima golongan yaitu antibiotik penghambat sintesis dinding sel mikroba,

antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah penisilin, sefalosporin, basitrasin, dan vankomisin.

4


5/46

:ang kedua yaitu antibiotik penghambat sintesis protein sel mikroba, antibiotik yang termasuk

kelompok ini ialah golongan aminoglikosida, makrolida, kloramfenikol, linkomisin dan tetrasilin.

:ang ketiga yaitu antibiotik penghambat sintesis asam nukleat sel mikroba, antibiotik yang

termasuk kelompok ini ialah rifampisin dan golongan kuinolon. 2eempat yaitu antibiotik

pengganggu fungsi membran sel mikroba, antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah golongan

polien. Dan yang kelima yaitu antibiotik penghambat metabolisme mikroba, antibiotik yang

termasuk kelompok ini ialah sulfonamida, trimetoprin dan asam p-amino salisilat 7anis!arna,

)**80.

2.1 Met#$e uj% akt%&%tas ant%m%kr#'a

a. Metode Difusi #akram

#ara yang mudah untuk menetapkan kerentanan organisme terhadap antibiotik

adalah dengan menginokulasi pelat agar dengan biakan dan membiarkan antibiotik

terdifusi ke media agar. #akram yang telah mengandung antibiotik diletakkan di

permukaan pelat agar yang mengandung organisme yang diuji. Pada jarak tertentu pada

masing-masing cakram, antibiotik terdifusi sampai titik antibiotik tersebut tidak lagi

menghambat pertumbuhan mikroba. 5fektivitas antibiotik ditunjukkan oleh $ona

hambatan. ;ona hambatan terlihat sebagai area jernih atau bersih mengelilingi cakram

tempat $at dengan aktivitas antimikroba terdifusi. Diameter $ona dapat diukur dengan penggaris. 6kuran $ona hambatan dapat dipengaruhi oleh kepadatan media biakan,

kecepatan difusi antibiotik, konsentrasi antibiotik pada cakram filter, sensitivitas

organisme terhadap antibiotik, dan interaksi antibiotik terhadap media.suatu $at yang

mempunyai efek samping signifikan tidak boleh digunakan.

b. Metode Sumuran

Pada metode ini, sumuran dibuat pada agar di ca!an petri dengan dibagi tiga garis

yang sama sesuai dengan kebutuhan. 2emudian diinjeksi dengan ekstrak yang akan

diuji ke dalamnya. Setelah dilakukan inkubasi selama +9 jam, pertumbuhan bekteri

diamati untuk melihat ada tidaknya $ona hembatan disekeliling lubang.

2.2 Bakter% Escherichia coli

5


6/46

E.coli berbentuk batang pendek cocobasil 0, 7ram negatif, ukuran sel E.coli

memiliki panjang sekitar /,9 sampai /,< µm dan lebar ),9 µm, beberapa strain

mempunyai kapsul, motil, anaerob fakultatif =ucky, dkk , )** 0. E.coli tumbuh pada

suhu antara )/ o# sampai 9/ o#, dengan suhu optimum < o#. p3 optimum untuk

pertumbuhannya adalah


7/46

3.2.1 Ant%m%kr#'a ( Escherchia coli ) Menggunakan Met#$e Pa*er +%lter D%sk

1. ,engkeh ( Syzygium aromaticum atau Eugenia caryophyllata)

Mith, +/)901erdasarkan penelitian oleh Mith +//90, Eugenilla caryophyllus memiliki

sifat antimikroba terhadap Escherchia coli yang menghasilkan $ona hambat )9,A mm.

2. !ereh (!era%) ( Cymbopogon citratus) 1erdasarkan penelitian oleh (arias +/)+0, Cymbopogon citrates memiliki

sifat antimikroba terhadap Escherchia coli yang menghasilkan $ona hambat 8,A

mm

(arias, +/)+0

3. -entam% %n 1/0g 1erdasarkan penelitian oleh Sara Jelodarian +/)+0, 7entamicin memiliki

sifat antimikroba terhadap Escherchia coli yang menghasilkan $ona hambat +/

mm.

7


8/46

Sara Jelodarian, +/)+0

4. "l#ram en%k#l 3/0g 1erdasarkan penelitian oleh Mith +//90, kloramfenikol memiliki sifat

antimikroba terhadap Escherchia coli yang menghasilkan $ona hambat ++, mm.

Mith, +/)90

3.2.2 Ant%m%kr#'a ( Escherchia coli ) Menggunakan Met#$e !umuran1. ,engkeh

8


9/46

&aufik0 3asilnya menunjukkan bah!a cengkeh dapat membentuk $ona hambat

bakteri Escherchia coli dengan metode sumuran yaitu sepanjang ++,


10/46

10


11/46

BAB III

MET5DE PENELITIAN

3.1. Alat $an BahanAlat6• &abung reaksi• Media mueller hinton M30• Mikropipet• yello! tip• 1unsen• Jangka sorong• S!an• se mata bulat• #ork borer steril

Bahan6

• Suspensi ?a#l• Minyak cengkeh• Minyak sereh• 2ontrol negatif % " uadest steril• 1akteri % E.coli dan Staphyllococcus aureus

3.2. ,ara "erja3.2.1. Pem'uatan me$%a agar

11

#airkan media M3 steril yang ada di tabung reaksi

&uang ke ca!an petri secara aseptis

&unggu hingga media beku

se dipanaskan


12/46

3.2.2. Pem'uatan me$%a $engan met#$e sumuran

12

1akteri E.coli diambil dari tabung biakan dan diletakkan di ?a#l.

&abung berisi bakteri E.coli di vorte' selama 8 menit

Membagi media agar menjadi bagian dengan tanda " untuk " uadeststeril control0, # untuk minyak cengkeh dan S untuk minyak Sereh

Mens!ap bakteri pada media agar dengan memasukkan cotton s!apke tabung reaksi berisi suspensi bakteri E.coli secara merata

Pada bagian bertanda ", S, dan # dibuat ) sumuran dengan cork borer steril

Membandingkan hasil suspensi dengan suspensi standar


13/46

3.2.3. Anal%s%s $ata

13

"mbil )/ mikroliter minyak cengkeh, )/ mikroliter minyak sereh dan)/ mikroliter a udest steril dengan mikropipet yello! tip dan

dimasukkan ke lubang pada media agar yang telah diberi tanda.=akukan di kedua media berisi bakteri E.coli

@nkubasi pada < derajat celcius selama +9 jam

Data berupa diameter hambat pada setiap sampel dan larutan bakustandar diukur dengan jangka sorong

Dilakukan berdasarkan uji aktivitas antibakteri dan uji potensiantibiotik


14/46

BAB I7

HA!IL DAN PEMBAHA!AN

4.1 Has%l Pengamatan

4.1.1 Pem'uatan !us*ens% Bakter%#ara pengerjaan %• Siapkan + ka!at ose, + bunsen, + tabung reaksi berisi ?a#l, + media agar

miring berisi biakan bakteri Escherichia coli dan Staphyllococcus aureus .

• Menghidupkan kedua bunsen dan mensterilisasikan kedua ka!at ose dengan

memanaskannya, lalu didinginkan.

• Membuka tutup tabung reaksi yang berisi media agar yang terdapat

bakteri Escherichia coli , memanaskan ujung tabungnya.

• Mengambil biakan bakteri Escherichia coli pada media agar miring dengan

cara menggoreskan ka!at ose yang telah dingin ke media agar yang berisi

bakteri tersebut.

• Memanaskan mulut tabung kemudian menutupnya kembali.• Mengambil ) tabung yang berisi larutan ?a#l, lalu memanaskan mulut

tabungnya.• Mencelupkan ka!at ose yang sudah digoreskan pada media agar miring

bakteri Escherichia coli ke larutan ?a#l, lalu memanaskan mulut tabungnya

dan menutupnya kembali.


15/46

• Memvorte' tabung yang berisi suspensi bakteri tersebut selama 8 menit, lalu

membandingkan kekeruhannya dengan suspensi standarnya.

• Melakukan hal yang sama untuk bakteri Staphyllococcus aureus .

4.1.2 Pem'uatan met#$e sumuran#ara pengerjaan %

• Siapkan + cotton s!ap, mikropipet, + media agar ca!an, minyak cengkeh,

minyak sereh, dan control negatif berupa a ua steril.

• Memanaskan mulut tabung yang berisi suspensi bakteri Escherichia coli .

• Mencelupkan cotton s!ap ke dalam suspensi bakteri , lalu mengoleskan

secara merata ke seluruh bagian agar ca!an.


16/46

• Membuat garis pembagi pada ca!an, dibagi menjadi bagian, lalu memberi

tanda pada masing-masing bagiannya sesuai antibakteri yang akan diberikan.

• Membuat sumuran pada media agar ca!an tersebut menggunakan cork

borer steril.

• Memipet larutan minyak cengkeh, minyak sereh dan a ua steril sebanyak

)/ µl menggunakan mikropipet.

• Memasukan larutan antibakteri minyak cengkeh, minyak sereh0 dan a ua

steril ke dalam sumuran yang sesuai dengan pada bagian yang sudah diberi

tanda.

• Menginkubasi media ca!an tersebut selama +9 jam dalam suhu < °#.


17/46

4.1.3 Pertum'uhan 'akter% setelah %nku'as% 24 jama. Metode % Sumuran

1akteri % Escherichia coli"ntibakteri % #engkeh, Sereh, 2loramfenikol dan 7entamian2ontrol negative % " uadest steril

3asil %#engkeh % +,< cmSereh % ),8 cm2loramfenikol % cm # /07entamian % ),+ cm #?)/0" uadest % ),) cm

2esimpulan % "ntibakteri yang paling efektif terhadap bakteri Escherichia coli adalah kloramfenikol karena bagian yang

tidak ditumbuhi oleh bakteri memiliki diameter lebih besar

dibandingkan pada bagian minyak sereh, cengkeh,

gentamian dan a uadest steril.

b. Metode % Paper (ilter Disk

1akteri % Escherichia coli

"ntibakteri % Sereh dan #engkeh

3asil %

Sereh % /,*/ cm#engkeh % ),+8 cm

2esimpulan % "ntibakteri yang paling efektif terhadap bakteri Escherichia coli adalah minyak cengkeh, karena bagian yang

tidak ditumbuhi oleh bakteri memiliki diameter lebih besar

dibandingkan sereh.


18/46

c. Metode % &=# 1ioautography

1akteri % Escherichia coli

"ntibakteri % Sereh dan Metanol

3asil %

Sereh % /,8 cmMetanol % /,< cm

2esimpulan % "ntibakteri yang paling efektif terhadap bakteri Escherichia coli adalah metanol, karena bagian yang tidak

ditumbuhi oleh bakteri memiliki diameter lebih besar

dibandingkan pada bagian sereh.

4.2 Pem'ahasan

4.2.1 Ma am8ma am met#$e uj% ant%m%kr#'a antara la%n se'aga% 'er%kut6

1. Met#$e Pen e'aran9D% us% (D% us%#n Meth#$s)

Prinsip metode difusi uji potensi berdasarkan pengamatan luas daerah

hambatan pertumbuhan bakteri karena berdifusinya antibakteri dari titik a!al

pemberian kedaerah difusi. Metode difusi-agar cakram kertas merupakan

teknik yang paling sering digunakan untuk menentukan kepekaan bahan

antimikroba sampai senya!a kemoterapi. Dalam metode ini, ada beberapa

cara yaitu cara 2irby 1auer, sumuran dan pour plate.

a. Met#$e "%r' :Bauer

Metode ini digunakan untuk menentukan aktivitas agen antimikroba.

Piringan yang berisi agen antimikroba diletakkan pada media agar yang telah

dit i ik g i g k b dif i d di g t b t "


19/46

jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh

agen antimikroba pada permukaan media agar.

#ara kerja pengujian antimikroba dengan metode 2irby-1auer %

). &anam mikroba dalam media agar padat yang sesuai. #elupkan cotton bud

cotton s!ab0 dalam biakan bakteri kemudian tekan kapas ke sisi tabung

agar air tiris. 1akteri ditumbuhkan pada media agar miring dan diinkubasi

pada suhu < / #. 2emudian pembuatan suspensi bakteri dengan

menumbuhkan bakteri pada media cair ?atrium 2lorida fisiologis dan

diinkubasi pada suhu < / #.

+. 6laskan pada seluruh permukaan ca!an Mueller-3inton "gar secara

merata. 1iarkan ca!an selama 8 menit.

. 2ertas cakram dicelupkan dalam larutan obat herbal dengan konsentrasi

tertentu. "ngkat, biarkan sejenak agar tiris, selanjutnya letakkan kertas

cakram pada permukaan agar. 2ertas cakram ditekan menggunakan pinset

supaya menempel sempurna di permukaan agar.

9. @nkubasi pada suhu A- < / # selama +9-9B jam.


20/46

E

8. "ktivitas antimikroba dilihat dengan mengukur daerah di sekitar cakram,

lubang, atau cangkir agar yang tidak ditumbuhi miroba.

A. 6kur diameter $ona hambat mm0 dengan jangka sorong, kemudian

bandingkan dengan tabel sensitivitas antibiotik. Makin besar diameter

hambatan pertumbuhan tersebut berarti aktivitas bahan yang diuji obat

herbal0 terhadap mikroba makin baik.

Metode 2irby-1auer tidak bisa digunakan untuk mengukur derajatantimikroba suatu $at sehingga metode ini tidak menjamin diidentifikasinya


21/46

bahan pembunuh antimikroba yang efektif untuk terapi bakterisida atau

fungisida0. 3al ini disebabkan adanya perbedaan kecepatan difusi dari

senya!a antimikroba yang dipengaruhi berat molekulnya. 6kuran $ona untuk

suatu $at dapat dibandingkan dengan standar, asal perbenihan, ukuran

inokulum, dan keadaan lain diatur secara seksama. 3al ini memungkinkan

ditetapkannya suatu diameter $ona penghambat minimum yang menunjukkan

kepekaan dari suatu $at antimikroba. Pada pengukuran standar seperti

konsentrasi antimikroba berkorelasi dengan diameter $ona hambat sehingga

bisa digunakan untuk menentukan tingkat kepekaan, yaitu peka sensitive,

susceptible0, cukup peka moderately sensitive, intermediate0, dan resisten

resistant.0 ?ilai kadar hambat minimum 23M0 berbanding terbalik secara

proporsional linear0 dengan diameter $ona hambat 1auer et al., )*AA0.

b. Met#$e E: test

1lack +//90 mengemukakan adanya versi terbaru metode difusi yang

disebut 5-test 5psilo &est0. Pada 5-test digunakan strip plastik yang

mengandung gradien konsentrasi antibiotik. Pada strip tercetak nilai

konsentrasi yang memungkinkan secara langsung membaca konsentrasi

minimum yang dibutuhkan untuk menghambat pertumbuhan. &itik dimanamulai terjadi hambatan pertumbuhan menunjukkan kadar hambat minimum

23M0 untuk obat herbal yang memliki potensi antibiotik yang diujikan.

7ambar ). #a!an Petri dan kertas reagan metode 5-&est

Jamur yang bertipe koloni ragi atau tidak berfilamen yeast-like

gro!th, non-mycelial gro!th0 biasanya ditanam secara usapan atau gores-

coret agar surface streak0. Penanaman jamur berfilamen yang tumbuh tidak

merata pada media menggunakan teknik gores silang.

c. Met#$e D%t h 8 *late te hn%;ue


22/46

Pada metode ini sampel uji berupa agen antmikroba obat herbal0 yang

diletakkan pada parit yang dibuat dengan cara memotong pada media agar

dalam ca!an petri pada bagian tengah secara membujur dan mikroba uji

maksimum A macam0 digoreskan kearah parit yang berisi agen antimikroba.

d. Met#$e ,u* 8 *late te hn%;ue (Met#$e sumuran)

Metode ini serupa dengan metode disc diffusion, di mana dibuat sumur

pada media agar yang telah ditanami dengan mikroorganisme dan pada sumur

tersebut diberi agen antimikroba obat herbal0 yang akan diuji.

e. Met#$e -ra$%ent 8 *late te hn%;ue

Pada metode ini kosentrasi agen antimikroba pada media agar secara

teoritis bervariasi dari / hingga maksimal. Media agar dicairkan dan larutan

uji ditambahkan. #ampuran kemudian dituang ke dalam ca!an petri dan di

letakkan dalam posisi miring. ?utrisi kedua selanjutnya ditung di atasnya.

Plate diinkubasi selama +9 jam untuk memungkinkan agen antimikroba

berdifusi dan permukaan media mengering. Mikroba uji maksimal A macam0

digoreskan pada arah mulai dari kosentrasi tinggi ke rendah.

2. Met#$e Pengen eran9D%lus% (D%lut%#n Meth#$s)

Metode pengenceran dilusi dapat digunakan untuk menguji beberapa $at

antimikroba secara simultan, tetapi memakan !aktu dan mahal. Metode ini

memungkinkan dilakukannya uji kedua untuk menilai daya antimikroba suatu $at.

2egunaan dari metode dilusi ini adalah untuk mencari 23M 2adar 3ambat

Minimum0 yaitu kadar obat terendah yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri.

2adar terkecil yang menunjukkan hambatan terhadap pertumbuhan bakteri ditandaioleh kejernihan media merupakan 23M. Data sifat kimia fisika dan data aktivitas

antibakteri 23M0 dianalisis secara statistik dengan uji regresi liner dan non

linier .6ji ini mampu dengan tepat mengukur konsentrasi antimikroba yang

diperlukan untuk menghambat pertumbuhan suatu inokulum terstandarisasi di

ba!ah kondisi yang ditentukan.

Metode dilusi dibedakan menjadi dua yaitu %

a. Met#$e $%lus% a%r ('r#th $%lut%#n) test (ser%al $%lut%#n)


23/46

Metode ini mengukur M@# minimum inhibitory concentration atau kadar

hambat minimum, 23M0 dan M1# minimum bactericidal concentration atau

kadar bunuh minimum, 21M0.

#ara kerja metode dilusi cair%

). Dibuat seri pengenceran agen antimikroba obat herbal0 pada medium cair

yang di tambahkan dengan mikroba uji. #ara pengenceran dilakukan dalam

tabung dengan mengencerkan bahan uji obat herbal0 dengan media cair

menjadi kelipatan dua secara bertahap sehingga didapatkan konsentrasi

dengan kelipatan setengahnya.

+. @nokulasi dengan suspensi bakteri dan diinkubasi selama +9 jam pada

temperatur A- < o# dan kemudian diamati hambatan pertumbuhan mikroba

dengan membandingkan kekeruhan atau pertumbuhannya dengan kontrol

yang mengandung media.

. =arutan uji agen antimikroba pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa

adanya pertumbuhan mikroba uji ditetapkan sebagai 23M.

9. =arutan yang ditetapkan sebagai 23M tersebut selanjutnya dikultur ulang

pada media cair tanpa penambahan pada mikroba uji ataupun agen

antimikroba, dan diinkubasi selama )BF+9 jam.8. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah inkubasi ditetapkan sebagai 21M

'. Met#$e $%lus% *a$at (s#l%$ $%lut%#n test)

Metode ini serupa dengan metode dilusi cair namun menggunakan

media padat solid0. 2euntungan metode ini adalah satu kosentrasi agen

antimikroba yang diuji dapat digunakan untuk menguji beberapa mikroba uji.

Pengujian terhadap jamur menggunakan media cair kurang bagus karenasebagian besar jamur tidak tumbuh dan terdispersi dengan baik kecuali beberapa

jamur dengan pertumbuhan seperti ragi yeast-like gro!th0. Jamur yang tumbuh

seperti ragi antara lain #andida spp. 1auer et al., )*AA0.

. Met#$e B%#aut#gra % (B%#aut#gra*h Meth#$s) (H#stettmann 1


24/46

ditempatkan pada permukaan agar yang telah diinokulasi dengan mikroba.

Setelah kira-kira / menit, lempeng dipindahkan, diinkubasi dan diamati,

senya!a antimikroba akan berdifusi ke dalam lapisan agar dan menghambat

pertumbuhan mikroba. Pada bioautografi langsung, $ona hambatan diamati

secara langsung pada lempeng kromatografi yang sebelumnya telah disemprot

dengan suatu suspensi mikroba dalam media agar cair dan diinkubasi pada

temperatur dan !aktu yang sesuai. Sedangkan metode bioautografi pencelupan

dilakukan dengan mencelupkan lempeng kromatografi ke dalam media dan

media dibiarkan mengeras. =empeng kromatografi kemudian diinkubasi dan

daerah hambatannya diamati.

$. Met#$e met#$e la%n Metode-metode lain yang dapat digunakan terutama untuk menentukan

efektivitas senya!a kemoterapi yaitu%a. Metode daya bunuh serum serum killing power method 0

Pada metode daya bunuh serum digunakan sampel darah pasien yang

sedang menerima terapi antibiotik. Suspensi mikroba bakteri0 kemudian

ditambahkan pada serum pasien. Pertumbuhan turbiditas0 dalam serum

setelah inkubasi mengartikan bah!a antibiotik yang diberikan tidak efektif. b. Metode otomatis automated method 0.

Metode otomatis menggunakan sistem otomatis instrumen0 yang dapat

mengidentifikasi mikroorganisme dan menentukan kepekaannya terhadap

berbagai senya!a antimikroba.e. Met#$e -#res !%lang (Uj% Ant% ung%)

Metode gores silang Cross Scratching Method 0 merupakan metode baku

untuk menguji aktivitas penghambatan suatu bahan uji terhadap jamur T.

mentagrophytes "nonim, )** 0.#ara kerja metode gores silang%

). Dicelupkan kertas saring ke dalam larutan yang diuji lalu diletakkan di ataslempeng agar yang telah digores dengan inokulum jamur.

+. Media agar kemudian diinkubasi selama -< hari pada +9-+8 o#.. Pertumbuhan jamur diamati, jarak yang tidak ditumbuhi jamur diukur sebagai

$ona hambat.9. #ara yang sama juga dilakukan pada !aktu yang bersamaan untuk antijamur

pembanding.4.2.2 "ele'%han $an "elemahan !et%a* Met#$e

a. Met#$e !umuran2elebihan %

• Mudah untuk dilakukan• &idak memerlukan peralatan khusus


25/46

• Celatif murah• apat diaplikasikan pada mikroorganisme yangpertumbuhannya lambat

dan mikroorganisme yang bersifat anaerob obliga

2ekurangan %

• Membutuhkan !aktu yang lama karena dilakukan inkubasi +9 jam• ukuran $ona bening yang terbentuk tergantung oleh kondisi inkubasi,

inokulum, predifusi dan preinkubasi serta ketebalan medium

'. Met#$e TL,2elebihan %

• Mudah dilakukan• 3anya membutuhkan peralatan Sederhana• @nterpretasi hasilnya relatif lebih mudah dan akurat• Dapat digunakan untuk mengetahui aktifitas biologi dan antibakteri

2ekurangan %

• Membutuhkan !aktu yang lama• 2urang efisien• 3arus digunakan pembanding deteksi seperti blank disc

. Met#$e Pa*er $%s Blank

2elebihan %

• Mudah untuk dilakukan• Celatif murah

2ekurangan %

• Celatif sulit untuk diinterpretasikan• Membutuhkan !aktu yang lama

4.2.3 Met#$e ang D%gunakan $alam Uj% Akt%&%tas Ant%m%kr#'aa. Metode lubang sumuran yaitu membuat lubang pada agar padat yang telah

diinokulasi dengan bakteri. Jumlah dan letak lubang disesuaikan dengan tujuan

penelitian, kemudian lubang diinjeksikan dengan ekstrak yang akan diuji.

Setelah dilakukan inkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada

tidaknya daerah hambatan di sekeliling lubang.


26/46

b. Metode difusi cakram paper disk 0 prinsip kerjanya adalah bahan uji

dijenuhkan ke dalam kertas cakram cakram kertas0. #akram kertas yang

mengandung bahan tertentu ditanam pada media perbenihan agar padat yang

telah dicampur dengan mikroba yang diuji, kemudian diinkubasikan


27/46

Prinsip dari metode ini adalah penghambatan terhadap pertumbuhan

mikroorganisme, yaitu $ona hambatan akan terlihat sebagai daerah jernih di

sekitar cakram kertas yang mengandung $at antibakteri. Diameter $ona

hambatan pertumbuhan bakteri menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap $at

antibakteri.Selanjutnya dikatakan bah!a semakin lebar diameter $ona hambatan

yang terbentuk bakteri tersebut semakin sensitif

Pada umumnya metode yang dipergunakan dalam uji sensitivitas

bakteri adalah metode Difusi "gar yaitu dengan cara mengamati daya hambat

pertumbuhan mikroorganisme oleh ekstrak yang diketahui dari daerah di sekitar

kertas cakram paper disk0 yang tidak ditumbuhi oleh mikroorganisme. ;ona

hambatan pertumbuhan inilah yang menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap

bahan anti bakteri

&ujuan dari proses uji sensisitivitas ini adalah untuk mengetahui obat-

obat yang paling cocok paling poten0 untuk kuman penyebab penyakit terutama

pada kasus-kasus penyakit yang kronis dan untuk mengetahui adanya resistensi

terhadap berbagai macam antibiotik. Penyebab kuman resisten terhadap

antibiotik yakni memang kuman tersebut resisten terhadap antibiotik yang

diberikan, akibat pemberian dosis diba!ah dosis pengobatan dan akibat penghentian obat sebelum kuman tersebut betul-betul terbunuh oleh antibiotic

"ntibiotik adalah $at-$at kimia yang dihasilkan oleh fungi dan bakteri yang

memiliki khasiat mematikan atau menghambat pertumbuhan kuman-kuman

sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil. Para peneliti diseluruh dunia

memperoleh banyak $at lain dengan khasiat antibiotik namun berhubung dengan

adanya sifat toksis bagi manusia, hanya sebagian kecil saja yang dapat

digunakan sebagai obat diantaranya adalah streptomycin vial injeksi, &etrasiklinkapsul, 2anamicin kapsul, 5rytromicin kapsul, #olistin tablet, #efadro'il tablet

dan Cifampisin kapsul .

2egiatan antibiotika untuk pertama kalinya ditemukan oleh sarjana

@nggris dr. "le'ander (lemming pada tahun )*+B penisilin0. Penemuan ini baru

dikembangkan dan dipergunakan dalam terapi di tahun )*9) oleh dr.(lorey

'ford0 yang kemudian banyak $at lain dengan khasiat antibiotik diisolir oleh

penyelidik-penyelidik di seluruh dunia, akan tetapi berhubung dengan sifat

toksisnya hanya beberapa saja yang dapat digunakan sebagai obat


28/46

"ntibiotik digunakan untuk membasmi mikroba penyebab terjadinya

infeksi.7ejala infeksi terjadi akibat gangguan langsung oleh mikroba dan

berbagai $at toksik yang dihasilkan mikroba.Pada dasarnya suatu infeksi dapat

ditangani oleh sistem pertahanan tubuh, namun adakalanya sistem ini perlu

ditunjang oleh penggunaan antibiotik."ntibiotik yang digunakan untuk

membasni mikroba penyebab infeksi pada manusia, harus memiliki sifat

toksisitas selektif."rtinya antibiotik harus bersifat toksik untuk mikroba, tetapi

relatif tidak toksik untuk hospes.&oksisitas selektif tergantung kepada struktur

yang dimiliki sel bakteri dan manusia misalnya dinding sel bakteri yang tidak

dimiliki oleh sel manusia, sehingga antibiotik dengan mekanisme kegiatan pada

dinding sel bakteri mempunyai toksisitas selektif relatif tinggi

Sensitivitas bakteri terhadap antibiotik tergantung kapada kemampuan

antibiotik tersebut untuk menembus dinding sel bakteri."ntibiotik lebih banyak

yang efektif bekerja terhadap bakteri 7ram positif karena permeabilitas dinding

selnya lebih tinggi dibandingkan bakteri 7ram negatif.Jadi suatu antibiotik

dikatakan mempunyai spektrum sempit apabila mampu menghambat

pertumbuhan bakteri 7ram positif, sedangkan antibiotik berspektrum luas jika

pertumbuhan bakteri 7ram positif dan bakteri 7ram negatif dapat dihambat olehantibiotik tersebut

1erdasarkan sasaran tindakan antibiotik terhadap mikroba maka

antibiotik dapat dikelompokkan menjadi lima golongan yaitu antibiotik

penghambat sintesis dinding sel mikroba, antibiotik yang termasuk kelompok ini

ialah penisilin, sefalosporin, basitrasin, dan vankomisin. :ang kedua yaitu

antibiotik penghambat sintesis protein sel mikroba, antibiotik yang termasuk

kelompok ini ialah golongan aminoglikosida, makrolida, kloramfenikol,linkomisin dan tetrasilin.:ang ketiga yaitu antibiotik penghambat sintesis asam

nukleat sel mikroba, antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah rifampisin dan

golongan kuinolon.2eempat yaitu antibiotik pengganggu fungsi membran sel

mikroba, antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah golongan polien.Dan yang

kelima yaitu antibiotik penghambat metabolisme mikroba, antibiotik yang

termasuk kelompok ini ialah sulfonamida, trimetoprin dan asam p-amino

salisilat


29/46

;ona 3ambat merupakan tempat dimana bakteri terhamabat

pertumbuhannya akibat antibakteri atau antimikroba.;ona hambat adalah daerah

untuk menghambat pertumbuhan mikroorrganisme pada media agar oleh

antibiotik. #ontohnya% tetracycline, erytromycin, dan streptomycin. &etracycline

merupakan antibiotik yang memiliki spektrum yang luas sehingga dapat

menghambat pertumbuhan bakteri secara luas Pelc$ar, )*BA0.#ara pengujian

resistensi mikroba terhadap suatu jenis antibiotik dapat dilakukan dengan uji

resistensi.&eknik ini menggunakan $at kimia untuk mengurangi dan membunuh

mikroorganisme, terutama mikroba yang patogen.Metode yang biasa dipakai

adalah metode Metode 2irby-1auer yang merupakan cara untuk menentukan

sensitifitas antibiotik untuk bakteri. Sensitifitas suatu bakteri terhadap antibiotik

ditentukan oleh diameter $ona hambat terbentuk.Semakin besar diameternya

maka semakin terhambat pertumbuhannya.

(aktor-faktor yang berpengaruh pada metode 2irby-1auer adalah%a. 2etebalan media agar

Dapat mempengaruhi penyebaran dan difusi antibiotik yang digunakan. b. 6mur bakteri

1akteri yang berumur tua fase stationer0 tidak efektif untuk diuji karena

mendekati kematian dan tidak terjadi pertumbuhan lagi sehingga yang

dipakai bekteri berumur sedang fase eksponential0 karena aktivitas

metabolitnya tinggi, pertumbuhan cepat sehingga lebih peka terhadapa daya

kerja obat dan hasilnya lebih akurat.c. Gaktu inkubasi

Gaktu yang cukup supaya bakteri dapat berkembang biak dengan optimal

dan cepat. Gaktunya minimal )A jam.d. p3, temperature

1akteri memiliki p3 dan temperature optimal untuk tumbuh yang berbeda-

beda sehingga sebaiknya dilakukan saat p3 dan temperature yang optimal.e. 2onsentrasi antibiotik

Semakin besar konsentrasinya semakin besar diameter hambatannya.. f. Jenis antibiotik

Setiap bakteri memiliki respon yang berbeda-beda terhadap

antibiotiknya, tergantung sifat antibiotik tersebut berspektrum

luas berspektrum sempit0.1akteri dapat membentuk ketahanan khusus terhadap suatu jenis

antibiotika tertentu, sehingga membahayakan orang yang terkena penyakit

tersebut.2esalahpahaman yang sering terjadi di masyarakat yaitu adanya

anggapan bah!a yang resisten terhadap obat tertentu ialah tubuh seseorang


30/46

padahal sebenarnya bakteri yang ada di dalam tubuh itulah yang menjadi

resisten terhadap pengobatan, bukan tubuhnya.Sedangkan antibiotic yang digunakan pada saat praktikum yaitu %

1. Ant%'%#t%k kl#ram en%k#l terha$a* akt% %tas ant%m%kr#'a 2loramfenikol adalah antibiotik yang mempunyai aktifitas

bakteriostatik, dan pada dosis tinggi bersifat bakterisid. "ktivitas

antibakterinya dengan menghambat sintesa protein dengan jalan

mengikat ribosom subunit 8/S, yang merupakan langkah penting dalam

pembentukan ikatan peptida. 2loramfenikol efektif terhadap bakteri

aerob gram-positif, termasuk Streptococcus pneumoniae, dan beberapa

bakteri aerob gram-negatif, termasuk 3aemophilus influen$ae, ?eisseriameningitidis, Salmonella, Proteus mirabilis, Pseudomonas mallei, Ps.

cepacia, Hibrio cholerae, (rancisella tularensis, :ersinia pestis, 1rucella

dan Shigella.

2loramfenikol bekerja dengan jalan menghambat sintesis protein

kuman. :ang dihambat adalah en$im peptidil transferase yang berperan

sebagai katalisator untuk membentuk ikatan-ikatan peptida pada proses

sintesis protein kuman.

Dengan memproduksi protein yang sangat penting untuk metabolisme,

mengganggu kemampuan sel untuk membuat protein bencana. bakteri

yang sangat rentan yang te!as langsung sementara yang lain hanya

diberikan tidak dapat membagi dan sistem kekebalan inang kemudian

menghancurkan mereka setelah diketahui. 2loramfenikol memiliki

spektrum luas terutama aktivitas terhadap bakteri aerobik banyak,

Mycoplasma, organisme klamidia, dan bakteri anaerob.

2loramfenikol dapat diberikan secara oral atau topikal, biasanya tiga

kali sehari. Puncak aktivitas terjadi sekitar / menit setelah dosis oral

kecuali dalam sistem saraf dimana beberapa jam diperlukan untuk

penetrasi darah penghalang otak.

2loramfenikol adalah bakteriostatik yaitu, berhenti pertumbuhan

bakteri0. @ni adalah sintesis protein inhibitor , menghambat transferase

peptidil aktivitas bakteri ribosom , mengikat dan residu "+98) "+98+ di

+ S rC?" dari subunit ribosom 8/S, mencegah pembentukan ikatan

peptida Sementara kloramfenikol dan macrolide kelas antibiotik baik


31/46

berinteraksi dengan ribosom, kloramfenikol tidak macrolide sebuah.

2loramfenikol langsung mengganggu pengikatan substrat, macrolides

hambatan sterik blok perkembangan dari peptida tumbuh

"da tiga mekanisme ketahanan terhadap kloramfenikol% permeabilitas

membran dikurangi, mutasi subunit ribosom 8/S dan elaborasi

asetiltransferase kloramfenikol. Sangat mudah untuk memilih untuk

permeabilitas membran dikurangi menjadi kloramfenikol in vitro dengan

bagian serial bakteri, dan ini adalah mekanisme yang paling umum

tingkat kloramfenikol perla!anan-rendah. &ingkat tinggi resistance

diberikan oleh gen-kucing> ini gen kode untuk sebuah en$im yang

disebut asetiltransferase kloramfenikol yang inactivates kloramfenikol

oleh kovalen menghubungkan satu atau dua asetil kelompok, yang

berasal dari-S-koen$im " asetil, ke hidroksil kelompok pada molekul

kloramfenikol . asetilasi ini mencegah kloramfenikol dari mengikat

ribosom. Perla!anan-berunding mutasi ribosom subunit 8/S jarang.

2. Ant%'%#t%k -entam%s%n terha$a* Akt% %tas Ant%m%kr#'a

7entamisin merupakan antibiotik turunan aminoglikosida yang

sangat berarti terutama karena peranannya terhadap mukosa gram-negatif. Senya!a ini digunakan pada pasien yang resisten terhadap

antibiotik lain. Mekanisme kerja gentamicin adalah dengan mengikat

secara ireversibel sub unit /S dari kuman, yaitu dengan menghambat

sintesis protein dan menyebabkan kesalahan translokasi kode genetik.

7entamicin bersifat bakterisidal. 7entamicin efektif terhadap berbagai

strain kuman.

7ramnegatiftermasukspesies Escherichia , Enterobacter , Klebsiella, rot eus dan seudomonas . &erhadap mikroorganisme 7ram-positif,

gentamicin efektif terhadap Staphylococcus aureus dan Staphylococcus

epidermis.

7entamisin tidak diserap pada pemberian oral, tetapi secara

cepat diserap setelah suntikan intramuskuler dengan kadar puncak yang

tercapai dalam !aktu /,8-) jam. Gaktu paruh plasmanya adalah )-9 jam

pada orang de!asa, +, - , jam pada neonatus, ),8-+,8 jam pada bayi

diatas +/ bulan, dan ) jam pada anak-anak yang lebih tua. Pada gangguan


32/46

fungsi ginjal yang lanjut, peningkatan ini dapat mencapai 8 jam.

Sejumlah kecil gentamicin diekskresi ke dalam empedu dan tidak ada

bukti adanya sirkulasi enterohepatik pada antibiotik ini. 7entamicin

menetap dalam jaringan untuk !aktu yang lama. 7entamicin mengalami

reabsorbsi pada lumen tubulus proksimal dan kadarnya dalam jaringan

kortikal ginjal kadang-kadang mencapai )// kali lebih tinggi ketimbang

kadarnya dalam serum. "nribiotika ini didistribus i secara luas keseluruh

tubuh, terutama ke dalam cairan ekstraseluler dengan volume distribusi

/,+ = kg. @katan proteinya rendah yaitu berkisar antara /-+8 I. @katan

protein serum gentamicin maupun aminoglikosida lain meningkat dengan

meurunnya kadar magnesium dan kalisum.

7entamicin yang masuk ke dalam cairan otak, kadarnya hanya

kecil sekali pada pasien dimana selaput otaknya tidak mengalami

peradangan, tetapi jika terjadi peradangan kadarnya dapat sedikit lebih

tinggi, meskipun demikian tidak cukup mencapai kadar terapi. Difusinya

kejaringan mata buruk 7entamisin disekresi ke dalam sekret bronkus

dengan kadar +8-8/ I kadarnya dalam serum. 7entamicin menembus

plasenta dan mencapai kadar puncak dalam serum maternal. )/ Igentamicin terikat dalam sel darah merah dan juga masuk ke dalam

leukosit polimorfonuklear dimana kadarnya dapat mencapai B/ I dari

kadar obat dalam cairan ekstraseluler. 2adar tertinggi ditemui dalam

jaringan ginjal.

2. M%n ak !erehSereh mengandung /,9 I minyak atsiri. Minyak atsiri dari

suatu tanaman secara umum mempunyai komposisi kimia tertentu yang

pada prinsipnya memberikan aktivitas antimikroba yang spesifik

khususnya untuk E. coli dan Staphylococcus aureus . 1erdasarkan hasil

pengamatan minyak sereh lebih efektif dalam menghambat pertumbuhan

bakteri Staphylococcus aureus dibandingkan dengan E. coli . Semakin

besar konsentrasi minyak serehnya, semakin sedikit bakteri yang tumbuh

karena daya hambatnya semakin meningkat.Minyak atsiri yang terdapat dalam batang serai dapat

menghambat pertumbuhan bakteri yaitu dengan cara merusak dindingsel bakteri, karena bakteri memiliki lapisan luar yang disebut dinding sel


33/46

yang dapat mempertahankan bentuk bakteri dan melindungi membran

protoplasma diba!ahnya. Selain itu, minyak atsiri juga memiliki

kemampuan mengubah molekul protein dan asam nukleat. Minyak atsiri

dapat mengubah keadaan ini dengan mendenaturasikan protein dan asam-

asam nukleat sehingga merusak sel tanpa dapat diperbaiki lagi. Selain itu,

minyak atsiri dalam sereh berperan sebagai penghambat kerja en$im.

Setiap en$im yang ada di dalam sel bakteri merupakan sasaran potensial

bagi bekerjanya suatu penghambat. Penghambatan ini dapat

mengakibatkan terganggunya metabolisme atau matinya sel.3. M%n ak ,engkeh

1erdasarkan hasil pengamatan, antibakteri yang paling efektif terhadap bakteri E. coli dan Staphylococcus aureus adalah minyak

cengkeh dibandingkan dengan minyak sereh. Semakin besar konsentrasi

minyak cengkehnya, semakin sedikit bakteri yang tumbuh karena daya

hambatnya semakin meningkat.

Minyak cengkeh mampu menghambat pertumbuhan bakteri

dengan merusak sistem pertahanan sel bakteri karena adanya aktivitas

antimikroba yang terkandung di dalam minyak cengkeh. Mekanisme

jenis kerusakan sel bakteri oleh senya!a eugenol yang terkandung dalam

minyak cengkeh belum diketahui dengan jelas apakah menyebabkan

kebocoran membrane dan kerusakan D?", seperti halnya nitrit. Proses

penghambatan nitrit terhadap pertumbuhan sel bakteri yaitu dengan cara

mengganggu proses respirasi bakteri. ?itrit pada konsentrasi yang rendah

menunjukkan aktivitas penghambatan dengan kerja mengikat komponen

dalam proses transfer elektron dalam respirasi. 2omponen yang dihambat

misalnya sitokorm. &idak adanya pertumbuhan bakteri pada media uji

menunjukkan bah!a minyak cengkeh dapat dikatakan bersifat

bakterisidal karena kemampuannya tidak hanya menghambat

pertumbuhan bakteri tetapi juga membunuh bakteri perusak makanan.

4.2.= Pr%ns%* Ter'entukn a >#na Ham'atPada umumnya metode yang dipergunakan dalam uji sensitivitas

bakteri adalah metode Difusi "gar yaitu dengan cara mengamati daya hambat

pertumbuhan mikroorganisme oleh ekstrak yang diketahui dari daerah di sekitar

k t k di k0 tid k dit b hi l h ik i


34/46

hambatan pertumbuhan inilah yang menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap

bahan anti bakteri.

&ujuan dari proses uji sensisitivitas ini adalah untuk mengetahui obat-

obat yang paling cocok paling poten0 untuk kuman penyebab penyakit terutama

pada kasus-kasus penyakit yang kronis dan untuk mengetahui adanya resistensi

terhadap berbagai macam antibiotik. Penyebab kuman resisten terhadap

antibiotik yakni memang kuman tersebut resisten terhadap antibiotik yang

diberikan, akibat pemberian dosis diba!ah dosis pengobatan dan akibat

penghentian obat sebelum kuman tersebut betul-betul terbunuh oleh

antibiotic.Metode difusi cakram prinsip kerjanya adalah bahan uji dijenuhkan ke

dalam kertas cakram cakram kertas0. #akram kertas yang mengandung bahan

tertentu ditanam pada media perbenihan agar padat yang telah dicampur dengan

mikroba yang diuji, kemudian diinkubasikan < / # selama +9 jam. "rea $ona0

jernih disekitar cakram kertas diamati untuk menunjukkan ada tidaknya

pertumbuhan mikroba. Selama inkubasi, bahan uji berdifusi dari kertas cakram

ke dalam agar-agar itu dan sebuah $ona inhibisi akan terbentuk. Sensitivitas

suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh diameter $ona hambat yang

terbentuk. Semakin besar diameternya maka semakin terhambat pertumbuhannya, Diameter $ona sebanding dengan jumlah bahan uji yang

ditambahkan ke kertas cakram. Saat inkubasi ca!an petri diletakkan dalam

keadaan terbalik dengan tujuan untuk menghindari menetesnya air yang

mungkin melekat pada dinding dalam pada tutup petri yang dapat

mengakibatkan kontaminasi.

Setelah diinkubasi selama +9 jam kemudian diamati apakah terbentuk daerah

$ona hambat atau tidak. Daerah $ona hambat yang terbentuk diukur diameternyadengan menggunakan penggaris. Semakin besar diameternya maka semakin

poten antibiotik yang terkandung dalam ekstrak tersebut.

2ebanyakan antibiotik yang efektif kerjanya menggangu sintesis, penyusuhan

atau fungsi komponen-komponen makromolekul sel. Seperti penghambtan

pembentukan dinding sel oleh pelimiskin, penghambatan sintesis protein oleh

kloramfenikol


35/46

4.2.? Pengaruh k#nsentras% $an jen%s 'akter% uj% terha$a* @#na ham'at ang

ter'entuk.Setiap bakteri memiliki respon yang berbeda-beda terhadap antibiotiknya,

tergantung sifat antibiotik tersebut berspektrum luas berspektrum sempit0."mpicillin merupakan salah satu antibiotik yang termasuk golongan penisilin

semi-sintetik yang berasal dari inti penisilin yaitu asam A-amino penisilat A-

"P"0 dan merupakan antibiotik spektrum luas yang bersifat bakterisid. Secara

klinis, ampicillin efektif terhadap bakteri gram-positif seperti S.

pneumonia,enterokokus dan stafilokokus yang tidak menghasilkan penisilinase,

sedangkan pada bakteri gram-negatif, diantaranya gonokokus, 3. influen$a,

beberapa jenis 5.coli , Shigella, Salmonella dan P. mirabilis. Seperti golongan penicillin lainnya, ampicillin bekerja dengan menghambat sintesis dinding sel

yaitu dengan menyerang peptidoglikan dan mampu melakukan penetrasi pada

bakteri gram positif dan gram negatif. 2eberadaan gugus amino pada

"mpicillin membuatnya mampu menembus membran terluar outer membran0

pada bakteri 1rander, et al., )**)0.


36/46

Sementara itu konsentrasi dari antibiotik juga sangat mempengaruhi

pertumbuhan bakteri dimana semakin tinggi konsentrasi dari antibiotika maka

akan semakin besar $ona jernih yang terbentuk D!idjoseputro., +// 0

4.2. E&aluas% akh%r uj% *#tens% ant%'%#t%k

6ji potensi antibiotika adalah suatu tekhnik untuk menetapkan suatu potensi antibiotika dengan mengukur efek senya!a tersebut terhadap

pertumbuhan mikrooganisme uji yang peka dan sesuai. 5fek yang ditimbulkan

pada senya!a uji dapat berupa hambatan pertumbuhan.

6ji potensi antibiotik dilakukan dalam + metode yaitu%

). Metode kertas saring 2irby and 1auer0Metode ini menghambatpertumbuhan miroorganisme dengan menggunakan $a-

$at kimia seperti fungisida, bakterisida, dan insektisida. Dengan perlakuan fisik

seperti dengan sinar 6H, pemanasan yang tinggi, serta dengan perlakuan biologi

seperti menggunakan mikrooganisme lain sebagai antagonis.+. Metode d "urbert

Metode d "ubert yaitu metode yang digunakan untuk memeriksa kadar

antibiotika dalam bahan makanan sebagai bahan penga!et Camona dkk., +//


37/46

menentukan apakah bakteri itu resisten atau peka terhadap suatu antibiotik.

&erbentuknya $ona bening atau $ona hambat dapat menandakan adanya potensi

dari antibiotik yang digunakan dalam menghambat dan membunuh bakteri.

2onsentrasi antibiotik juga dapat mempengaruhi potensi dari suatu

antibiotik. Semakin besar konsentrasi dari antibiotika maka kemampuan

antibiotik untuk menghambat atau membunuh bakteri akan semakin besar

efektifitas kerja antibiotik meningkat0.

6ntuk menghitung potensi dari antibiotik dapat dilakukan dengan

menggunakan metode garis lurus transformasi log dengan prosedur penyesuaian

kuadrat terkecil dan uji linieritas. 1ila sejumlah penetapan dari bahan uji yang

sama dilakukan menggunakan kurva baku yang sama, hitung koefisien variasi

dari hasil semua penetapan bahan uji. 1ila lebih dari satu penetapan dilakukan

untuk bahan uji yang sama dengan kurva baku yang berbeda, buat rata-rata dari

dua atau lebih nilai potensi.


38/46

BAB 7

PENUTUP

=.1 "E!IMPULAN

Dalam praktikum kali ini dilakukan pengujian aktivitas dari antibakteri.

2elompok kami melakukan percobaan tentang pengujian antibakteri minyak sereh, minyak

cengkeh, kloramfenikol, gentamian dan sebagai kontrol negatifnya adalah a uadest steril

terhadap bakteri E. coli sebagai bakteri gram negatif. Metode yang kami lakukan pada

percobaan tersebut adalah metode sumuran, metode paper filter disk dan metode &=#.Setelah dilakukan inkubasi < o# selama +9 jam, didapati bah!a area yang tidak

ditumbuhi bakeri E. coli yang berbentuk cincin hambat disekitar antibakteri dan kontrol

negatifnya yang paling besar adalah pada antibakteri kloramfenikol. 3al ini dikarenakankloramfenikol bekerja dengan jalan menghambat sintesis protein kuman. :ang dihambat

adalah en$im peptidil transferase yang berperan sebagai katalisator untuk membentuk

ikatan-ikatan peptida pada proses sintesis protein bakteri. Sehingga pada bagian ini hanya

ditemui sedikit bakteri yang dapat tumbuh.

=.2 !ARAN

"gar pada saat pembenihan bakteri dilakukan dengan lebih berhati-hati terutama

dalam mensterilkan alat-alat supaya tidak terjadi kontaminasi ataupun bakteri yang akan

dibiakan sesuai dengan jumlah yang dikehendaki. 2endala dalam praktikum ini yaitu pada

proses pemipetan, jumlah mikropipet yang hanya terdapat ) buah untuk digunakan oleh 9

kelompok sehingga tidak efisien !aktu.

38


39/46

DA+TAR PU!TA"A

1auer "G, 2irby GM, Sherris J#, &urck M. !ntibiotic susceptibility testing by a standardi"ed

single disk method. !m # Clin athol . )*AA "pr>98 90%9* -A.

#appuccino dan Sherman, +//.) aper $isk Clear %one . Prentice 3all

D!idjoseputro, D.+// . $asar&dasar Mikrobiologi . Jakarta% Djambatan

5ngle!ood #liff. (ardia$ S. )**+. Mikrobiologi engelolaan angan angan . Departemen

Pendidikan dan 2ebudayaan Direktorat Jendral Pendidikan &inggi Pusat "ntar 6niversitas

Pangan dan 7i$i. @nstitut Pertanian 1ogor. 1ogor

7anis!arna, S. 7. )**8. 'armakologi dan Terapi ed. ( . Jakarta % 6niversitas @ndonesia (akultas

2edokteran.

7una!an, S. 7. +//


40/46

LAMPIRAN

/. Memanaskan ose pada lampu spiritus

0. Memanaskan bibir tabung reaksi yang berisi bakteri

1. mengambil bakteri E.coli yang akan di letakkan pada media agar dengan ose

40


41/46

(. Meletakkan ose yang berisi bakteri ke dalam tabung yang berisi a uadest steril

2. Meletakkan di atas vorte' a ua steril yang terdapat bakteri

+. Membandingkan dengan sa ua steril yang tidak di beri bakteri

3. Panaskan bibir ca!an sebelum mengoleskan bakteri

41


42/46

4. Mencelupkan cotton s!ap ke dalam a uades steril yang telah berisi bakteri

5. =alu mengoleskan pada ca!an petri jangan sampai ada daerah yang tertinggal

/6. Diamkan selama )8 menit lalu panaskan cork borner untuk membuat sumuran

42


43/46

//. 1uatlah sumuran pada media agar dengan mencetak cork borner ke dalam petri

/0. "mbillah hasil dari cetakan cork borner dan buang pada tempat sampah

/1. 7unakan mikropipet untuk mengambil antibiotik

43


44/46

/(. 1uatlah sumuran dengan antibiotik yang berbeda yaitu serai, a ua steril dan mentapip

/2. Panaskan mulut ca!an setelah terisi semua antibiotic

/+. Masukkan dalam inkubator < ° # selama +9 jam

44


45/46

/3. 3asil pengamatan metode sumuran setelah +9 jam pada bakteri E coli

/4. 3asil pengamatan metode paper filter disk dan &=# bioautography setelah +9 jam pada bakteri E coli

45


46/46

Documents

antimikroba kelompok 2