5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 1/59

 

FARMASI ± FMIPA ± UHAMKA

2011

Priyo Wahyudi

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 2/59

 

Metode Difusi Agar 

Metode Dilusi

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 3/59

 

Potensi Antimikroba adalah kekuatan suatu antibiotika

dalam menghambat atau membunuh pertumbuhan

mikroba. Satuannya dalam IUmg (iu=international unit)

atau µg/mg

Prinsip ; membandingkan respon mikroba uji yang peka

terhadap percobaan dalam kondisi yang sama terhadap

zat baku pembanding (standar) atau zat uji

Baku standar ; zat/senyawa yg sudah diketahui

kemurnian dan kekuatan / potensinya Cara analisis ;

Metode difusi agar (lempeng)

Metode dilusi (Turbidimetri)

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 4/59

 

Penetapan potensi antibiotika secara mikrobiologi

merupakan metode penetapan hayati, sebagai jasad

renik digunakan mikroorganisme yang telah diketahui

kemurnian dan kekuatan / potensinya Respon yang diamati ; berupa efek hambatan

terhadap pertumbuhan mikroba uji yang ditentukan

oleh daerah bening (inhibition zone) di sekeliling zat uji

(cara difusi) atau kekeruhan (turbiditas) yg ditimbulkan

oleh pertumbuhan mikroba dalam medium cair (caraturbidimetri) menggunakan tabung reaksi dan

spektrofotometer 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 5/59

 

1. CARA DIFUSI AGAR

Prinsip ; zat yang akan diuji berdifusi dari

pecadang ke dalam medium agar yg telah

diinokulasi dengan mikroba uji.

Inkubasi selama waktu tt dan kemudian amati

adanya hambatan pertumbuhan mikroba uji dan

di ukur diameter hambatannya Diameter hambatan yang terbentuk

dibandingkan dengan diameter baku standar 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 6/59

 

2. CARA TURBIDIMETRI

Digunakan media cair, hambatan pertumbuhan

mikroba uji diukur dengan menentukan

kekeruhan (turbiditas) larutan dengan

spektrofotometer 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 7/59

Bahan-bahan yang diperlukan dalam uji potensi

antibiotik:

Mikroba uji

Baku pembanding biologis

Media pertumbuhan

Larutan dapar (penyangga)

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 8/59

Mikroba uji

Mikroba uji harus berasal dari galur murni, dapatmemberikan respon yg bertingkat antara peningkatan

konsentrasi dgn peningkatan daerah hambatannya.

Untuk cara difusi, daerah hambatan yg terbentuk harus

 jelas dan mudah diukur. Untuk penetapan cara tabung,

perbedaan kekeruhan pada tingkat dosis tertentu harusterlihat jelas

Baku pembanding biologis (biological reference) ;

Digunakan antibiotik yg telah diketahui kemurnian dan

potensinya secara pasti. Baku pembanding ini

direkomendasikan oleh WHO dan di Indonesia seperti

BPOM, SPI, SPN, SBL (S=standar, B=baku,

P=pembanding, L=lab, I=intern)

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 9/59

Media pembenihan

Media yang digunakan harus mendukung pertumbuhan

mikroba uji dgn baik, tidak boleh mengandung zat yg

bersifat antagonis ataupun yg mempengaruhi aktivitas

antimikroba dari antibiotik yg diperiksa

Larutan dapar 

Digunakan untuk melarutkan antibiotik yang akan

diperiksa baik baku pembanding maupun sampel uji.

Pemilihan larutan dapar yang digunakan disesuaikandengan sifat dan stabilitas bahan yabg akan diuji.

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 10/59

Biasanya digunakan 3 tingkatan dosis, baik untuk

sediaan uji (u) atau pembanding (s); u1, u2, u3 dan s1,

s2 , s3

Pengulangan dilakukan msg-msg 2-8x untuk cara difusidan 2-6x untuk cara turbidimetri

Tingkatan dosis harus tetap, misal kenaikan dosis dari

u1 ± u2 = 4/3. jika u1 = 5 µg/mg , u2 = 4/3 x 5 µg/mg =

6,67µg/mg. u3 = 4/3 x 6,67 = 8,89 µg/mg ; begitu juga dengan s1, s2 dan s3

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 11/59

Metode analisis potensi antibiotik secara difusi agar merupakan

cara yang sederhana dan hasil yg diperoleh cukup teliti.

Cara ini mrp cara terpilih dan direkomendasikan oleh

International Collabotrative Study di Swedia dan FDA di ASuntuk pengujian mutu antibiotik

Prinsip penetapannya yaitu mengukur luas hambatan

pertumbuhan mikroba uji yg disebabkan oleh zat baku standar 

dan zat yg di uji

Dlm range konsentrasi tt terdapat hub yg linear antarapeningkatan konsentarsi dgn luas daerah hambatan

pertumbuhan mikroba uji

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 12/59

Ingredien / komposisi medium pertumbuhan

Pemilihan medium pertumbuhan

Pengaruh pH

Ukuran inokulum

Stabilitas mikroba uji

 Aktivitas antibiotika

Waktu inkubasi

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 13/59

Komposisi ingredien yg umum tdp pada

komposisi pertumbuhan mo adalh ; pepton,

tripton, ekstrak ragi, agar, dan mineral (Ca, Mg,

Fe, NaCl, KH) NaCl mengurangi aktivitas antibiotik gol

aminoglikosida dan menahan aktivitas ferosidin

KH pada uji difusi dapat mempertinggi aktivitasnitrofurantoin atau ampisilin

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 14/59

Pemilihan medium pertumbuhan; dimana diperlukan

persiapan medium yg cocok bagi pertumbuhan mo demikian

pula ketebalan dan konstituen harus merata pada medium

agar 

Pengaruh pH terhadap luas daerah hambatan disebabkan

oleh aktivitas antibiotik yg tergantung pada pH medium.

Misalnya aktivitas aminoglikosida diperkuat dalam suasana

asam sedangkan tetrasiklin dalam suasana basa

Jika dalam melarutkan media ; pH yg tinggi diturunkan dgn

menambahkan HCl 0,1N, pH yg rendah dinaikkan dgn

penambahan NaOH 0,1N

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 15/59

Inokulum adalah campuran antara suspensi dan media.

Luas daerah hambatan akan semakin kecil jika inokulum

semakin besar kandungan mikroorganismenya.

Suatu inokulum dikatakan ideal apabila kandunganmikroorganismenya homogen, misal 1-10%

 Apabila pertumbuhan yg rapat, dapat menyebabkan

terjadinya penumpukan pada tempat tt

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 16/59

Resistensi mikroba uji terhadap suatu antibiotik dapat

terjadi dalam kondisi pertumbuhan tertentu. Oleh sebab itu

regenerasi mikroba perlu dilakukan secara periodik dan

sewaktu-waktu diuji kemurnian dan kepekaannya.

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 17/59

Untuk mendapatkan daerah hambatan yang baik pada

suatu penetapan, terlebih dahulu perlu ditentukan kadar 

hambat minimum (KHM) dari antibiotik yang diuji.

Pengaruh predifusi larutan antibiotik yangg terjadi sebelum

inkubasi harus dihilangkan atau dikurangi dengan cara

pengisian larutan antibiotik ke dalam medium agar 

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 18/59

Inkubasi inokulum dilakukan dalam waktu yang optimal,

sehingga keseimbangan antara aktivitas antibiotik dengan

daya tumbuh mikroba dapat menghasilkan daerah

hambatan yang baik untuk pengukuran zona bening yang

muncul sebagai daerah penghambatan pertumbuhan

mikroba, biasanya antara 18-24 jam

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 19/59

Resevoir pada Teknik difusi agar dapat berupa:

Silinder gelas / logam

Cakram kertas (paper disc)

Cetak lobang (punched holes)

Cakram : tempat meletakkan sampel antimikroba yang akan

diuji potensinya pada medium agar yang telah memadat

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 20/59

 Antimicrobial drugs are widely used for the

treatment of infectious diseases.

Pathogens should be tested for susceptibility to

individual antibiotics to ensure appropriatechemotherapy. This rigorous approach to

antimicrobial drug treatment is usually applied

only in health care settings.

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 21/59

The standard procedure that assesses antimicrobialactivity is called the Kirby±Bauer method (Figure 24.8).

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 22/59

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 23/59

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 24/59

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 25/59

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 26/59 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 27/59

 Agar media are inoculated by evenly spreading

a defined density of a suspension of the pure

culture on the agar surface. Filter paper disks

containing a defined quantity of the antimicrobialagents are then placed on the inoculated agar.

 After a specified period of incubation, the

diameter of the inhibition zone around each disk

is measured. Table 24.4 presents zone sizes for several antibiotics.

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 28/59 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 29/59

 Antibiograms are periodic reports that indicate

the susceptibility of clinically isolated organisms

to the antibiotics in current local use.

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 30/59 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 31/59

Explain how to implement current NCCLS

antimicrobial susceptibility testing (AST) and

reporting recommendations.

Describe reliable methods for detectingresistance among:

Enterobacteriaceae

Pseudomonas aeruginosa

Staphylococcus aureus

Enterococcus spp.

Streptococcus pneumoniae and Streptococcus spp.

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 32/59

Describe effective reporting of AST results.

List steps that can be taken to verify AST results

obtained on bacteria isolated from patients.

Discuss NCCLS-recommended QC procedures

and how to trouble-shoot out-of-control QC

results

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 33/59

Which organisms to test?

What methods to use?

What antibiotics to test? How to report results?

How to determine the clinical significance of results?

How to ensure accuracy of results?

Quality control / quality assurance When to call the MD, infection control, public health?

When to ask for help?

Where to go for help?

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 34/59 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 35/59

Disk diffusion (Kirby Bauer)

Broth micro-dilution MIC

NCCLS reference method

Etest

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 36/59

Disk Diffusion

Test

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 37/59

Select colonies

Prepare inoculum

suspension

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 38/59

Mix well

Standardize inoculum

suspension

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 39/59

Swab plate

Remove sample

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 40/59

 Add disks

Incubate overnight

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 41/59

Transmitted Light Reflected Light 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 42/59

Qualitative results

Susceptible

Intermediate ± may respond if infection is at body site

where drug concentrates (e.g. urine) or if higher thannormal dose can be safely given

Resistant

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 43/59

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 44/59

Endocarditis

Meningitis

Septicemia

Osteomyelitis

Immunosuppressed patients (HIV, cancer, etc.)

Prosthetic devices

Patients not responding despite ³S´

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 45/59

Minimal inhibitory concentration

The lowest concentration of antimicrobial agent

that inhibits the growth of a bacterium

Interpret:

Susceptible

Intermediate

Resistant

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 46/59

Standardize inoculum suspension

Final inoculum concentration

3 ± 5 x 105 CFU/ml

(3 ± 5 x 104 CFU/well)

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 47/59

Microdilution MIC tray

Prepare inoculum

suspension

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 48/59

Dilute & mix inoculum suspension

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 49/59

Pour inoculum into

reservoir and

inoculate MIC tray

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 50/59

Inoculatepurity plate

Incubate overnight

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 51/59

Reflected light Transmitted light

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 52/59

Sub final test suspension to non-selective

medium (after inoculating MIC test)

Streak for isolation (avoid several specimens per 

plate - may not reveal contaminants if noisolated colonies)

Examine before reading MIC (usually at 16-20 h)

Re-incubate if antibiogram questionable

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 53/59

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 54/59

- +

64

32

16

84

2

1

>64

0.5

>64

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 55/59

Staphylococci ± oxacillin, vancomycin, cefoxitin

Enterococci ± vancomycin

³Resistance may be reported any time growth is

observed after a minimum of 16 h incubation´

 After minimum of 16 h, read test:

if ³R´, report

If ³S´, re-incubate and read again at 24 h

 NCCLS M2 NCCLS M2--A8, M7A8, M7--A6A6

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 56/59

MIC on a stripMIC on a stripabbiodisk .comabbiodisk .com

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 57/59

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 58/59

S. pneumoniaeS. pneumoniae

Penicillin MICPenicillin MIC

=3 =

3 QQg/mlg/ml

 

5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 59/59

Viridans Streptococcus ± penicillin

S. pneumoniae ± penicillin,

cefotaxime/ceftriaxone (sterile sites)

Enterococcus ± vancomycin ³Int´ results

Staphylococcus ± vancomycin zone e14 mm