Análise do efeito antimicrobiano do tratamento em contínuo

Instituto de Higiene e AmbienteInstitut für Hygiene und Umwelt IHUInh. Dr. J. Prucha Steinstraße 10 35457 Lollar Tel. 06406-75032 Fax 06406-75033Relatório nº. G03-0102.DOC de 18.03.2003

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Análise do efeito antimicrobiano

do tratamento em contínuo com o “Wellan” –

sistema de tratamento de água, em alguns

microorganismos seleccionados

Ensaio II

pedido por:IAB, Klaus Wagner

Instituto de Bioenergética Aplicadaem Bietigheim-Bissingen

pedido a: 10.02.2003

Ensaio nº. G03-0102.docLollar, 18.03.2003


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Introdução

As primeiras experiências efectuadas para a análise do efeito antimicrobiano

do “Wellan” – sistema de tratamento da água, encontram-se descritas no

ensaio G03-0076.doc de 12.02.2003.

No presente ensaio, instalou-se um anel “Wellan” na canalização principal do

Institut für Hygiene und Umwelt (IHU) - Instituto de higiene e ambiente, em

Lollar na rua Steinstraße 10. Posteriormente, foram pesquisados na água,

microorganismos específicos e determinada a sua concentração ao longo do

tempo. Como ensaio de referência, recolheu-se água de um local bastante

distanciado do IHU em Lollar, água essa que foi igualmente submetida à

mesma análise ao longo do tempo.

Nesta primeira análise do efeito antimicrobiano do “Wellan” – sistema de

tratamento da água, verificou-se uma diminuição das concentrações dos

microorganismos E. coli e Estreptococos fecais ao longo do tempo. Nos

microorganismos Pseudonoma aerugirosa e Legionella pneumophilc, não foi

possível tirar conclusões do efeito “Wellan” – sistema de tratamento de água.

Por essa razão, efectuou-se outro ensaio, colocando-se o anel “Wellan” a

actuar na água contaminada pelos microorganismos. Os resultados destas

análises estão apresentados nas páginas seguintes.


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microorganismos testados

Para analisar o efeito antimicrobiano do anel “Wellan” foram pesquisados os

microorganismos.

- E.coli e

- Pseudonoma aerugirosa

Concentração dos microorganismos testadosOs microorganismos testados foram introduzidos nos ensaios em diferentes

concentrações, desde

- 100 UFC/100 ml até

- 1.000 UFC/100 ml.


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desenvolvimento das análises

Para as experiências com o tratamento contínuo do sistema “Wellan”, foi

enchido um crióstato no IHU, com 5 litros de água.

Como é demonstrado na fig. 1, o anel “Wellan” foi instalado numa pequena

tubagem à qual se encontram ligadas duas mangueiras em PVC, de entrada e

saída do crióstato. Após a contaminação da água canalizada com os

respectivos microorganismos, esta foi bombeada continuamente, mais de 24

horas, e analisada em intervalos de tempo de:

E.coli Pseudonoma aerugirosa

- 0 horas, - 0 horas,

- 1 hora, - 1 hora,





Em cada intervalo de tempo foi retirado 100ml amostra de água e efectuada a

quantificação destes microorganismos.

Para ensaio de referência, foi instalado um segundo crióstato numa firma a 2

km de distância do IHU (fig. 2). Nesta instalação não se colocou nenhum anel

“Wellan” entre a entrada e a saída do crióstato, igualmente enchido com 5 litros

de água canalizada e contaminada com microorganismos. A água, foi

bombeada em contínuo, à semelhança do ensaio montado no IHU e com os

mesmos intervalos de tempo do ensaio anterior foram utilizadas amostras e

efectuada a quantificação dos microorganismos.


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fig. 1: montagem com anel “Wellan” nas instalações do Institut für Hygiene und Umwelt em Lollar

fig. 2: montagem sem anel “Wellan” na outra firma, em Lollar, a 2 km do IHU.


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Adicionalmente, na outra firma, montou-se um outro ensaio de referência sem

bombeamento de água contaminada e, consequentemente sem acção do anel

“Wellan”. Além disso, encheu-se também uma garrafa de vidro com 5 litros de

água canalizada desse mesmo local. Contaminou-se a água com os

microorganismos e deixou-se ficar durante 24 horas. À semelhança das

experiências com água bombeada, também neste caso foram retiradas

amostras para a determinação da concentração de microorganismos.

Para determinar a concentração dos microorganismos nas diferentes amostras,

filtraram-se 100ml de amostra recolhida através de uma membrana estéril,

colocando-a, posteriormente, no meio de cultura específico.

Para a pesquisa de E. coli foi utilizado Endo-Agar e para Pseudonoma

aerugirosa utilizou-se Cetrimid-Agar. Depois de um tempo de incubação de 48

horas a 36ºC quantificou-se o número de colónias no meio de cultura. Na

pesquisa de Pseudonoma aerugirosa, efectuou-se adicionalmente inoculação

em Malachitgrün-Bouillon, introduziu-se 100 ml de amostra de cada ensaio em

100 ml de concentração dupla de Malachitgrün-Bouillon, incubando-se

igualmente 48 horas em 36ºC.

Os resultados das análises estão apresentados nas páginas seguintes.


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Resultados das análises

Tabela 1: - Número de colónias de E. coli em 100ml de amostra, nos ensaios

de bombeamento do crióstato, com e sem anel “Wellan”.

duração

do ensaio

[h]

concentração de

E. coli no ensaio

do crióstato com

anel “Wellan”

(IHU)

[UFC/100ml]

Ensaio de

referência:

concentração E.

coli no ensaio do

crióstato sem

anel “Wellan”

(na outra firma)

[UFC/100ml]

Ensaio de

referência:

concentração de

E. coli no teste

standart no

crióstato sem

anel “Wellan”

(na outra firma)

[UFC/100ml]

0 72 ca.1000 ca.10001 0 ca.1000 ca.10002 0 ca.1000 ca.10004 0 ca.1000 ca.10007 0 ca.1000 ca.100024 0 ca.1000 ca.1000

O número de colónias de E. coli em 100ml de amostra, ao longo do tempo,

estão representados graficamente na figua 3.

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fig.3: representação gráfica da variação da concentração de E. coli ao longo do

tempo, nos ensaios do crióstato, com e sem anel “Wellan”

vermelho(■): ensaio do crióstato com anel “Wellan” (realizado no IHU)

azul (▲): ensaio do crióstato sem anel “Wellan” (realizado na outra firma)

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IHU IHU

E. coli no início E. coli – 1 hora

fig. 4 determinação da concentração de E.coli no ensaio do crióstato com anel

“Wellan”

Filtraram-se 100 ml de amostra em membrana estéril. Esta foi depois colocada em Endo-Agar e

incubado 48 horas em 36 ºC.

esquerda: 72 UFC/100 ml concentração de E. coli no início do tratamento com o anel “Wellan”

direita: não eram visíveis colónias de E. coli após 1 hora de bombeamento

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Tabela 2: - Número de colónias de Pseudonoma aerugirosa em 100 ml de

amostra, nos ensaios de bombeamento do crióstato, com e sem anel “Wellan”

duração

do ensaio

[h]

concentração de

Ps. aerugirosa no

ensaio do

crióstato com

anel “Wellan”

(IHU)

[KBE/100ml]

Ensaio de

referência

Ps. aerugirosa no

ensaio do

crióstato sem

anel “Wellan”

(na outra firma)

[KBE/100ml]

0 78 971 28 952 4 874 0 886 0 11024 0 95

A variação da concentração de Pseudonoma aerugirosa ao longo do tempo

está representada graficamente na fig. 4

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fig.5: representação gráfica da variação da concentração de Pseudonoma

aerugirosa ao longo do tempo, nos ensaios com bombeamento do crióstato,

com e sem anel “Wellan” vermelho(■): ensaio do crióstato com anel “Wellan” (realizado no IHU)

azul (▲): ensaio do crióstato sem anel “Wellan” (realizado na outra firma)

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fig.4: determinação da concentração de Pseudonoma aerugirosa, nos ensaios

do crióstato, com e sem anel “Wellan”

Filtraram-se 100 ml de amostra em membrana estéril. Esta foi depois colocada em Cetrimid-

Agar e incubado 48 horas em 36 ºC

A cor amarelada demonstra Pseudonoma aerugirosa.

em cima: ensaio do crióstato sem anel “Wellan”, na outra firma em Lollar

em baixo: ensaio do crióstato com anel “Wellan”, no IHU, Lollar


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fig. 5: confirmação de Pseudonoma aerugirosa em Malachitgrün-Bouillon, nos

ensaios do crióstato, com e sem anel “Wellan”.

100 ml de amostra de cada ensaio foram inoculados em Malachitgrün-bouillon, incubando-se

48 horas em 36 ºC.

Turvação demonstra um indício de Pseudonoma aerugirosa

direita: ensaio do crióstato sem anel “Wellan”, após 24 horas de ensaio, na outra firma em

Lollar

esquerda: ensaio do crióstato com anel “Wellan”, após 24 horas de ensaio no IHU, Lollar


página 14Sumário

Nas experiências acima apresentadas foi analisado o efeito do “Wellan” nos

microorganismos E. coli e Pseudonoma aerugirosa. Foram efectuados testes

com concentrações entre 10 e 1000 UFC/100 ml.

Preparou-se num crióstato um banho-maria de água canalizada juntamente

com microorganismos que se pretendiam testar. Através de uma bomba,

bombeou-se água contaminada por uma tubagem em PVC. Na montagem no

Instituto foi aplicado na tubagem um pedaço de cano galvanizado, no qual foi

instalado o anel “Wellan” n.º2. Paralelamente, foi instalado como ensaio de

referência numa outra firma em Lollar (cerca de 2km distante), o mesmo

sistema, mas sem anel “Wellan”. A água para o ensaio foi igualmente recolhida

no local da experiência e os microorganismos igualmente adicionados.

Após 1, 2, 4, 7 e 24 horas recolheram-se amostras e analisaram-se

microbiologicamente, sendo nitidamente visível a ausência de E. coli após 1

hora de ensaio, na montagem com o anel “Wellan”, ou seja, os

microorganismos foram mortos. Pelo contrário, na outra firma, a concentração

de E. coli no ensaio de referência manteve-se continuamente inalterada, na

amostra Standhard de 24 horas. Os resultados foram registados

fotograficamente e os dados apresentados graficamente.

No segundo ensaio, foram introduzidos 100 UFC/100 ml de Pseudonoma

aerugirosa nos dois lugares mencionados. Foi claramente notório, que a

Pseudonoma revela uma maior resistência, atendendo que apenas ao fim de 4

horas foi comprovada a total destruição dos microorganismos. Ao fim de 2

averiguou-se uma destruição em mais de 90%. Na figura 4 estão apresentados

os resultados obtidos na filtração de 100 ml de amostra.

A inserção do tratamento “Wellan”, induz a diminuição da concentração de

Pseudonoma (na imagem, uma diminuição da cor típica amarelo – esverdeado

fluoreszierende), enquanto que no ensaio de referência fica largamente

inalterado.


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Após 2 horas, ainda se identificaram Pseudonomas e mesmo após 6 horas,

estas ainda se apresentavam em concentração elevada.

Analisaram-se também os resultados da pesquisa adicional à Pseudonoma

aerugirosa em Malachitgrün-Bouillon.

Após o ensaio de 24 horas, analisou-se a água com tratamento “Wellan” e a

amostra do ensaio de referência. O resultado destas análises mostra, que a

água com o “Wellan” 100% livre de Pseudonoma aerugirosa. Em contrapartida,

a água da amostra do ensaio de referência revela um crescimento de

Pseudonoma, uma vez que após a incubação, o frasco apresentava-se

colorado turvo. A restante identificação microbiana mostra, que no aumento

dos microorganismos, parte se trata de Pseudonoma aerugirosa.

Conclusão

No âmbito desta segunda série de experiências foi analisado o efeito do anel

“Wellan” sobre E. coli e Pseudonoma aerugirosa. Promoveu-se o contacto da

água com anel Wellan” através do seu bombeamento, isto é, submeteu-se os

microorganismos ao efeito do anel durante 24 horas.

E. coli foi destruída no espaço de uma hora, enquanto que a Pseudonoma

aerugirosa demonstra maior resistência. Estes microorganismos foram

totalmente destruídos após 6 horas.

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