Cariotipo fetal, FISH y QF-PCR: limitaciones y precisión de la

técnica

Diploma en Medicina Fetal. 8 de Mayo

Mª Elena Mansilla-INGEMM- Instituto de Genética Médica y Molecular

Hospital Universitario La Paz – Madrid - Spain

Instituto de Genética Médica y Molecular

“Intentaba estudiar los cromosomas humanos y de forma inesperada conté claramente que las células del tejido en mi microscopio tenían 46 cromosomas, no 48 como se había pensado durante tantos años”.

comienzo de la CITOGENETICA HUMANA

1956

El cromosoma humano fue observado por primera vez en 1879 por Arnold, a partir de células tumorales

Cariotipo

CITOGENETICA HUMANA: se refiere al estudio de los cromosomas a través

del microscopio tras la aplicación de unas técnicas de bandeo, permitiendo la

identificación de anomalías en el número, de pérdidas y ganancias de material

cromosómico y de cambios de posición

CARIOTIPO: La ordenación de los cromosomas humanos según su tamaño y

posición del centrómero en grupos que van desde A al G y en pares que van

desde el par 1 al 22 más los cromosomas sexuales.

BANDAS G : Resultando un patrón de bandas claras y oscuras. Se utiliza para

estudios convencionales del cariotipo. Cuanto mayor es el nivel de bandas

mayor calidad del estudio. Giemsa, Seabright, 1971

Cariotipo

Cariotipo

Cariotipo

5-10Mb

Cariotipo

EXISTE UN SISTEMA INTERNACIONAL DE NOMENCLATURA DE LOS CROMOSOMAS

ASI COMO DE TODAS LAS VARIANTES. 1978

Cariotipo

• Cariotipo convencional: “gold standard” nos da la información de todos los cromosomas.

• Alteraciones numéricas

• Alteraciones estructurales aparentemente equilibradas

• Alteraciones estructurales en desequilibrio (pérdidas y/o ganancias de material cromosómico)

Cariotipo

• Cariotipo convencional: “gold standard” nos da la información de todos los cromosomas.

• Alteraciones numéricas

• Alteraciones estructurales aparentemente equilibradas

• Alteraciones estructurales en desequilibrio (pérdidas y/o ganancias de material cromosómico)

Técnicas de Diagnóstico Prenatal: Cariotipo

47,XY,+21

• Cariotipo convencional: “gold standard” nos da la información de todos los cromosomas.

• Alteraciones numéricas

• Alteraciones estructurales aparentemente equilibradas

• Alteraciones estructurales en desequilibrio (pérdidas y/o ganancias de material cromosómico)

Cariotipo

46,XY,t(4;12)

• Cariotipo convencional: “gold standard” nos da la información de todos los cromosomas.

• Alteraciones numéricas

• Alteraciones estructurales aparentemente equilibradas

• Alteraciones estructurales en desequilibrio (pérdidas y/o ganancias de material cromosómico)

Cariotipo

47,XX,+mar

Cariotipo

Cariotipo

INCONVENIENTES:

Nivel de resolución limitado (5-10Mb).

No permite identificar el origen cromosómico (Técnicas adicionales FISH, MLPA, a-CGH)

Experiencia.

Tiempo que conlleva el cultivo celular (3-4s): desarrollo de técnicas rápidas de cribado de las aneuploidías más frecuentes (FISH, QF-PCR).

Cariotipo

LA TECNOLOGIA DE LA TECNOLOGIA DE ““HIBRIDACION IN SITU HIBRIDACION IN SITU FLUORESCENTEFLUORESCENTE: BASADA EN LA DETECCION DE : BASADA EN LA DETECCION DE SECUENCIAS ESPECIFICAS DE ADN TANTO EN SECUENCIAS ESPECIFICAS DE ADN TANTO EN CROMOSOMAS COMO EN NUCLEOS INTERFASICOSCROMOSOMAS COMO EN NUCLEOS INTERFASICOS

CITOGENETICA MOLECULARCITOGENETICA MOLECULAR (1977)(1977) : : TTÉÉCNICAS CNICAS IDENTIFICAR DEFECTOS SUBMICROSCOPICOS DEL IDENTIFICAR DEFECTOS SUBMICROSCOPICOS DEL ADNADN

FISH

FISH

•• SONDAS DE SECUENCIA UNICASONDAS DE SECUENCIA UNICA: : detectan regiones detectan regiones especificas (regiones subtelomespecificas (regiones subtelomééricas, ricas, microdelecciones)microdelecciones)

•• SONDAS CENTROMERICASSONDAS CENTROMERICAS: : son sondas alfa satson sondas alfa satéélite lite que permiten la deteccique permiten la deteccióón de secuencias altamente n de secuencias altamente repetitivas de las regiones centromrepetitivas de las regiones centromééricasricas

•• SONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMASSONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMASCOMPLETOS (WCPCOMPLETOS (WCP): ): detectan secuencias de detectan secuencias de eucromatina en determinados brazos o cromosomas eucromatina en determinados brazos o cromosomas completoscompletos

FISH

• FISH:

• Núcleos interfásicos: 13,18,21 y sexuales• Síndromes de

microdelección/microduplicación (22q11.2)

• Identificación y localización de material cromosómico.

FISH

T 18

T 21

50 núcleos:

13,18,21,15,16,X e Y

Método directo, no requiere cultivo celular.

• FISH:

• Núcleos interfásicos: 13,18,21 y sexuales• Síndromes de

microdelección/microduplicación (22q11.2)

• Identificación de material cromosómico

FISH

FISH

FISH

MICRODUPLICACIÓN 22q11.2

• FISH:

• Núcleos interfásicos: 13,18,21 y sexuales• Síndromes de

microdelección/microduplicación (22q11.2)

• Identificación de material cromosómico

FISH

FISH : Tetrasomia 15q11����q13

47,XX,+mar.ish(der15) (D15Z1++)(SNRPNx2)

15q11-13

INCONVENIENTES:

Número suficiente de núcleos (50)

Requiere metafases y por lo tanto un cultivo celular.

Regiones específicas, no todos los cromosomas

FISH

Quantitative fluorescent polymerase chain reactionDetección de aneuploidías (13, 18, 21, X e Y) CorionicidadMaternidad/PaternidadExtracción de ADN de líquido amniótico y biopsia corial sin cultivar

Hospital Universitario La Paz

Rapidez diagnóstica

QF-PCR

QF-PCR

QF-PCR: trisomía 21

Contaminación materna

Líquidos amnióticos hemáticos

Muestras de abortos tempranos

Reflejar siempre la contaminación

QF-PCR

Más robusta que el FISH para el diagnóstico de las aneuploidías más frecuentes.

No Requiere un cultivo celular.

Contaminación materna (torunda)/ mosaicismos

QF-PCR

Conclusiones

Cariotipo: “gold standard”, permite ver todos los cromosomas con resolución limitada, alteraciones estructurales equilibradas.

FISH: identificación y localización de regiones cromosómicas específicas.

QF-PCR: aneuploidías más frecuentes

Conclusiones