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INFORMACIÓN DEL CROMATOGRAMA
1. POSICIÓN DEL PICO – tR función de K(Termodinámica)
2. ANCHO DE PICO – N, H (Cinética) Responsable de ensanchamiento de banda
3. FORMA DEL PICO– Simétrica o asimétrica
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EL TIEMPO DE RETENCIÓN DEPENDE DIRECTAMENTE DEL COEFICIENTE DE
REPARTOtR = tM + t'R
tR = tM (1 + k')
Recuerda que K = k'
tR = tM (1 + K /)
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ENSANCHAMIENTO DE BANDA
1.
2.
3.
HETP H 2 / tR
N 16 tR / Wb 2 tR / 2
H L / N tR / tR / 2 2 / tR
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EFECTO MULTICANAL(Difusión de Eddy)
INICIAL CAMA EMPACADA FINAL
1
2
3
1
2
3
lento
rápido
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HPLC - ECUACIÓN VAN DEEMTER (Modificada)
HETP H A Bu CS CM u
4 fuentes independientes de ensanchamiento de banda
Minimiza cada término, Minimiza“H”, Maximiza Eficiencia
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HPLC – DIFUSIÓN de EDDY
A = 2dp
La clave son partículas pequeñas, empacadas eficientemente.
usualmente 10 y 5 micras
existen de 3 micras
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HPLC – DIFUSIÓN LONGITUDINAL
Un factor muy pequeño en HPLC
La difusión en líquidos despreciable
B / v 2D mobile
v
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HPLC – TRANSFERENCIA DE MASA –FASE ESTACIONARIA
Q = Factor de ConfiguraciónR = Constante; f (K )df = Espesor de fase estacionariaD stat = Coef. difusión en fase estacionariav = velocidad de flujo (cm / sec )
Clave: película delgada
Csv QRDf
2vD stat
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HPLC – TRANSFERENCIA DE MASA –FASE ESTACIONARIA
w = Coeficiente de Columnadp = Diámetro de partículav = Velocidad de flujo (cm / seg )D mov.= Coeficiente de difusión en
fase móvil
Clave: partículas pequeñas
Cmv wdp2vD mobile
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HET
P
60
40
20
00 2 4 6 8
FLUJO [ml/min]
22 °C : ter-Butil Benceno 10 m
5 m
3 m
ENSANCHAMIENTO DE BANDA vs FLUJOCOMO FUNCIÓN DEL DIÁMETRO DE PARTÍCULA
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0 5 10
ANÁLISIS POR HPLC RÁPIDA( PARTÍCULAS PEQUEÑAS, COLUMNAS CORTAS,
FLUJOS RÁPIDOS )
COLUMNA : 3 cm3M ODS
FLUJO : 3.5 ml / min
URACILO
FENOLNITROBENCENO
TIEMPO ( SEG )
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RELACIÓN ENTREdp, p, LARGO Y tR (1)
dp [mm] p (psi) Largo [cm] tR [min]10 1,000 25 105 4,000 25 10
Pero corte el largo para reducir presión y mantener:
N = 12,500
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RELACIÓN ENTREdp, p, LARGO Y tR(2)
dp [mm] p (psi) Largo [cm] tR [min]
10 1,000 25 105 2,000 12.5 52 5,000 5 2
Asume N = 12,500 ; H = 2.0;
Partículas pequeñas, más eficiente, pero mayor caída de presión
p 1
dp2 ; p L
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LARGO DE COLUMNA
N L; R (L)1/2
Los largos más comunes 15 cm y 25 cm,pero columnas de 5 cm y 10 cm con partículas de 3 m, son eficientes y rápidasDimensiones mayores, difícil debido a p
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DIÁMETRO DE COLUMNA
• 4 mm más popular; fácil de hacer, buenacapacidad
• 2 mm - HPLC rápida a flujos aceptables
• 1 mm - microboro – conexiones especiales, pero mejor sensibilidad, fácil acoplamiento
• tubos abiertos - investigación; N alto; muy lento
• capilares empacados – empleados en LC/MS
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DIÁMETRO DE PARTÍCULA
• Probablemente el factor más importante en HPLC• 10 m ~ 8-10K platos en 25 cm• 5 m ~ 8-12K platos en 15 cm• 3 m ~ 5K platos en 5 cm
Valores altos de # de platos (100K) requiere de instrumentación especial (inyector, detector, electrónica)
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FACTOR DE ASIMETRÍA DE PICO
Factor deAsimetría dePico = BC/BA
Tiempo
10% de altura de pico
A B C