Évaluation des performances analytiques du …...IgA1,IgA2, IgD,kappalibresetlambdalibres)àpartird’un volume minimal par tube ou godet de 150 L. Le rack de réaction dispose de

Journal Identification = ABC Article Identification = 0974 Date: August 6, 2014 Time: 11:48 am

doi:1

0.16

84/a

bc.2

014.

0974

Article original

Ann Biol Clin 2014 ; 72 (4) : 423-34

Évaluation des performances analytiquesdu turbidimètre SPAPLUS® pour le dosagedes immunoglobulines et de la bêta-2microglobuline dans le sérum

Analytical performances of SPAPLUS® turbidimeter for the dosageof immunoglobulins and beta-2 microglobulin in serum

Isabelle ThevenetClarisse Benata

Jasmine Chauzeixa

Antoine BlancherBénédicte Puissant-LubranoLaboratoire d’immunologie,CHU de Toulouse, France<[email protected]>aContribution à part égale.

Aa

Résumé. Les performances analytiques des réactifs fabriqués par la société TheBinding Site sur le turbidimètre SPAPLUS® ont été évaluées pour le dosage detreize paramètres sériques (IgG, IgA, IgM et IgD, sous-classes d’IgG et d’IgA,bêta-2 microglobuline, chaînes légères libres kappa et lambda). Les coefficientsde variation (CV) des essais de répétabilité et de reproductibilité sont inférieurs àceux préconisés par le fournisseur sauf pour la répétabilité des dosages d’IgG1pour un niveau de concentration (6,7 g/L). Les essais confirment la linéaritédes dosages et l’absence de contamination pour l’ensemble des paramètres tes-tés. Une concordance supérieure à 90 % (analyse de Bland et Altman) a étéobservée entre les résultats obtenus avec le SPAPLUS® et ceux obtenus avecl’immunonéphélémètre Immage® 800. Nous avons également évalué la prati-cabilité de l’automate en termes de maintenance, de fréquence des calibrationset de cadence des tests. Les performances analytiques des réactifs Binding Site

T

sur l’immunoturbidimètre SPAPLUS® répondent aux critères d’accréditation desméthodes de dosage concernées.

Mots clés : immuno-turbidimétrie, performances analytiques, immunoglobu-lines, immunologie

Abstract. We evaluated the analytical performances of the SPAPLUS® immu-noturbidimeter assays manufactured by The Binding Site® for the quantificationof thirteen immunological parameters in serum: IgG, IgA, IgM and IgDimmunoglobulins, IgG subclasses (1 to 4), IgA subclasses (1 and 2), beta-2microglobulin, free light chains kappa and lambda. The within-day precision(repeatability) and the between-day precision (reproducibility) were obtainedfor two or three concentration levels depending of the parameter and werebelow the recommendations of the manufacturer, except for the repeatabilityof IgG1 (at a level of concentration of 6.7 g/L). An agreement above 90%

423Pour citer cet article : Thevenet I, Benat C, Chauzeix J, Blancher A, Puissant-Lubrano B. Évaluation des performances analytiques du turbidimètre SPAPLUS® pour ledosage des immunoglobulines et de la bêta-2 microglobuline dans le sérum. Ann Biol Clin 2014 ; 72(4) : 423-34 doi:10.1684/abc.2014.0974

rticle recu le 18 décembre 2013,ccepte le 08 avril 2014

(with Bland and Altman analysis) was observed between the results obtainedwith SPAPLUS® and those obtained with the nephelometer IMMAGE® 800 orradial immunodiffusion. The evaluation confirmed the linearity of the assaysand the absence of contamination for all the parameters tested. We also asses-sed the practicability of the SPAPLUS® in terms of maintenance, frequencyof calibration and cadence tests. The SPAPLUS® immunoturbidimeter displaysgood analytical performances for the immunological parameters evaluated inthe present work.

Key words: turbidimetry, analytical performances, immunoglobulins, immuno-logy

irés à part : B. Puissant-Lubrano

dx.doi.org/10.1684/abc.2014.0974

mailto:[email protected]


4

A

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rticle original

a néphélémétrie constitue la méthode de référenceour le dosage des protéines spécifiques au laboratoire’analyses médicales. Des techniques alternatives comme’immunoturbidimétrie ont été développées plus récem-

ent sur de nombreux analyseurs commercialisés parifférentes sociétés [1-3].e SPAPLUS® est un automate d’immunoturbidimétrieistribué par la société « The Binding Site » qui produitt commercialise une gamme de réactifs permettant leosage sur cet appareil de nombreux paramètres d’intérêtiologique. Nous avons évalué les performances analy-iques du SPAPLUS® pour le dosage de treize protéines : lesmmunoglobulines IgG, IgA, IgM, IgD, les sous-classes’IgG et d’IgA, les chaînes légères libres (CLL) sériquesappa et lambda et la bêta-2 microglobuline (�2m). Cesaramètres sont utiles dans l’exploration des déficitsmmunitaires acquis ou congénitaux [4], des anomalies

onoclonales [5-7], et dans le suivi de certaines thérapeu-iques de substitution (immunoglobulines polyvalentes) oummunosuppressives [8, 9].our chacun de ces paramètres sériques, nous avons évalué

a répétabilité, la reproductibilité, la linéarité, la contami-ation et la concordance entre les résultats obtenus sur lePAPLUS® et les résultats obtenus par la technique utiliséen routine au laboratoire. Nous avons également évalué laerformance de l’appareil et des réactifs pour la détectiones excès d’antigène.

atériels et méthodes

chantillons et contrôles de qualité interne

es sérums étudiés proviennent des résidus d’analysesratiquées en routine au laboratoire d’immunologie.uivant les paramètres, il s’agissait de patients porteurs’une anomalie monoclonale (myélome, lymphome),e déficits immunitaires acquis ou constitutionnels, ou’autres pathologies. Le sang a été prélevé sur tube secvec séparateur (BD Vacutainer®, BD Biosciences, le Ponte Claix, France) puis centrifugé à 1 700 g à températurembiante. Les échantillons testés ont été sélectionnés enonction des concentrations obtenues sur l’Immage® 800u laboratoire ou par immuno-diffusion radiale, de manièrecouvrir les variations physiologiques et pathologiques

es différents paramètres.

24

our l’évaluation de la répétabilité, trois sérums de patientsnt été utilisés : un sérum avec une valeur inférieure àa normale ou dans la limite basse de la normale (�2m),n sérum avec une valeur normale, et un sérum avec unealeur supérieure à la normale ou dans la limite haute dea normale (IgD). Deux niveaux ont été évalués pour lesous-classes d’IgA.

La linéarité a été évaluée sur des sérums de patients présen-tant une concentration (mesurée par la technique utiliséeen routine, Immage® 800 ou immunodiffusion radiale)proche de la valeur supérieure de la zone de mesureindiquée par le fournisseur pour le paramètre d’intérêt.Les sérums très fortement dosés en IgG contiennent desanomalies monoclonales qui sont susceptibles de compor-tements singuliers en termes de linéarité. Pour l’évaluationde la linéarité du dosage des IgG, nous avons préféréutiliser un mélange d’albumine (Vialebex®, LFB, Cour-taboeuf, France) et d’immunoglobulines thérapeutiques(Tégéline®, LFB) dilué en PBS (DPBS, Gibco Life techno-logies, Saint Aubin, France). Les échantillons ont été diluésà l’aide de pipettes conformes en termes de justesse et deprécision, dans du diluant échantillon de facon à ce quela dernière dilution corresponde à une valeur proche de lalimite inférieure de la zone de mesure indiquée par le four-nisseur. Des gammes de 5 à 7 points ont ainsi été réaliséespuis dosées sur le SPAPLUS®.Pour l’évaluation de la reproductibilité, les deux contrô-les de qualité internes fournis dans le coffret de réactifs(contrôle bas CQb et contrôle haut CQh) ont été utili-sés. Un troisième niveau de concentration a été utilisépour l’évaluation de la reproductibilité soit sur un sérumde patient présentant une valeur supérieure à la normale(IgG, IgA, IgM, chaînes légères libres, IgD afin de véri-fier les valeurs hautes observées dans les gammapathiesmonoclonales), soit sur un sérum de patient présentantune valeur inférieure à la normale (sous-classes d’IgG etsous classes d’IgA afin de vérifier les valeurs basses).Les sérums de patients ont été aliquotés et conservés à-20 ◦C.Pour l’ensemble des paramètres évalués, une seule calibra-tion a été effectuée, à l’exception du dosage des IgM pourlequel une 2e calibration a été réalisée en raison d’une dérivedu CIQ.

Descriptif de l’automate

Le SPAPLUS® distribué par la société The Binding Site(Saint-Egrève, France) est un turbidimètre compact depaillasse, optimisé pour le dosage de 42 protéines spéci-fiques dans le sérum, le plasma, les urines ou le liquidecéphalo-rachidien (LCR). La gamme des réactifs distri-bués par Binding site est orientée principalement versl’immunologie. Sa cadence est de 120 tests à l’heure, le

Ann Biol Clin, vol. 72, n◦ 4, juillet-août 2014

premier résultat est obtenu en 15 minutes puis les autresrésultats toutes les trente secondes.Le SPAPLUS® dispose de 4 modules : un module réactifs,un module échantillons, un module réaction et un moduleoptique.Le module réactifs est réfrigéré à 10 ◦C ± 2 ◦C etest muni d’un couvercle anti-évaporation permettant un


A

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tockage des réactifs ouverts à bord pendant 30 jours. Lesodes à barres des cartouches permettent leur identificationt la gestion permanente du nombre de tests disponiblesar le logiciel ainsi que le suivi des lots de réactifs. LePAPLUS® ne dispose pas d’un logiciel bloquant les ana-

yses en cas de péremption des réactifs.e module échantillons dispose de 45 positions dont 30ositions sur la couronne externe qui sont identifiées grâceun lecteur de code à barres intégré. Diverses tailles de

ubes primaires ou secondaires (de 5, 7 ou 10 mL ainsi quees godets pour les faibles volumes d’échantillon) peuventtre utilisés. Selon les analyses, le volume d’échantillonrélevé varie de 17 à 30 �L (17 �L pour les IgM et la2m, et 30 �L pour les IgG, IgA, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4,

gA1, IgA2, IgD, kappa libres et lambda libres) à partir d’unolume minimal par tube ou godet de 150 �L.e rack de réaction dispose de 60 cuvettes acryliques indi-iduelles lavables utilisées pour la dilution des échantillonst/ou pour la réaction.our le dosage de certaines protéines, la vérification d’excès’antigène est automatiquement programmée et s’effectuear la mesure de la cinétique de la réaction. Lorsqu’un excès’antigène est suspecté, le résultat est étiqueté d’un ‘P’ pourisque de ‘Prozone’.

éactifs

reize paramètres ont été évalués au laboratoire’immunologie du CHU de Toulouse pendant la périodee mars à juin 2010 et pendant la période de novembre012 à avril 2013. Les réactifs ont été fournis par laociété Binding Site. Pour chaque paramètre, les coffretsomprennent un antisérum spécifique et un tampon deéaction, six calibrateurs et deux niveaux de contrôle deualité interne. Les calibrateurs consistent en des mélangese sérums humains, les dosages des IgG, IgA et IgM sontalibrés vis-à-vis du matériel de référence internationalRM470, les IgD vis-à-vis du Standard de rechercheritannique pour l’immunoglobuline humaine D NIBSC7/037, la bêta-2 microglobuline vis-à-vis du 1er Standardnternational pour la bêta-2 microglobuline du Nationalnstitute for biological standards and control. Les dosageses sous-classes d’IgG et d’IgA sont calibrés vis-à-vis duRM470 (voir le détail dans [10] pour les sous-classes’IgG). Pour les sous-classes d’IgA, le fabricant a vérifiéue la somme des sous-classes d’IgA obtenues après

nn Biol Clin, vol. 72, n◦ 4, juillet-août 2014

osage correspondait aux IgA totales du CRM470, puisvérifié que les proportions d’IgA1 et d’IgA2 obtenues

hez des sujets sains et des patients étaient similaires auxroportions en sous-classes d’IgA habituellement publiées11]). D’autres réactifs non inclus dans les coffrets sontgalement nécessaires : de l’eau osmosée (pour cette étude,ystème Elix® Advantage, Millipore, Molsheim, France),

Performances analytiques du turbidimètre SPAPLUS®

le diluant échantillon, une solution de lavage utilisée defacon hebdomadaire, deux solutions (acide et alcaline)pour le lavage en continu de l’appareil.

Techniques utilisées pour l’analysede la concordance

L’immunodiffusion radiale (coffret Bindarid® IgD de lasociété The Binding Site incluant trois plaques, un contrôleinterne et un calibrateur) est utilisée en routine dans notrelaboratoire pour le dosage des IgD. Le test est étalonnévis-à-vis du standard NIBSC 67/037. Le néphélémètreImmage® 800 ainsi que les réactifs (anti-sérums, contrô-les de qualité interne, calibrateurs) de la société BeckmanCoulter (Villepinte, France) sont utilisés au laboratoire pourle dosage des IgG, IgA, IgM et de la bêta-2 microglobuline.Les dosages sériques des IgG, IgA et IgM sont calibrésvis-à-vis du matériel de référence international CRM470,le dosage de la �2m est calibré vis-à-vis d’une référenceinterne [12]. Les réactifs de The Binding Site sont utiliséssur l’Immage 800® pour le dosage des sous-classes d’IgGet des chaînes légères libres kappa et lambda (Freelite®).

Critères d’acceptabilité

Les résultats ont été analysés au regard des critèresd’acceptabilité du fournisseur et de la Société francaise debiologie clinique (SFBC) [13].

Résultats et commentaires

Répétabilité

Des sérums de patients ont été dosés 15 fois le même jourdans une même série.L’étude de la répétabilité donne des résultats satisfaisantsavec le SPAPLUS® (tableau 1) avec une majorité de para-mètres présentant un CV inférieur à 5 % et qui répond auxcritères d’acceptabilité du fournisseur et de la SFBC [13].Pour les chaînes légères libres lambda (concentration de234,6 mg/L), le CV de répétabilité est de 9 % et reste dansles critères d’acceptabilité du fournisseur. Par contre, pourles IgG1, les résultats de répétabilité (CV = 6,7 %) obtenussur un sérum présentant une concentration moyenne d’IgG1(6,7 g/L) ne satisfont pas les critères d’acceptabilité du four-nisseur. Les répétabilités obtenues avec l’Immage® 800pendant la même période sont présentées dans le tableau 3.

425

Reproductibilité

L’évaluation de la reproductibilité a été réalisée sur troisniveaux de concentration différents (deux niveaux pour la�2m) à raison d’un dosage par jour, au minimum 15 joursouvrés successifs. L’évaluation de la reproductibilité sur le


426 Ann Biol Clin, vol. 72, n◦ 4, juillet-août 2014

Article original

Tableau 1. Évaluation de la répétabilité.

AnalytesNdosages

Moyenne Écarttype

CV(%)


Fournisseur SFBC

15 4,61 0,06 1,3 < 5 4,5

IgG (g/L) 15 8,14 0,17 2,1 < 5 3,8

15 27,4 0,69 2,5 < 5 3

15 0,33 0,005 1,5 < 5 4,5

IgA (g/L) 15 1,82 0,02 1,1 < 5 3,8

15 4,44 0,07 1,5 < 5 3

15 0,18 0,01 4,8 < 5 4,5

IgM (g/L) 15 1,25 0,04 3,1 < 5 3,8

15 2,52 0,04 1,6 < 5 3,8

15 7,67 0,29 3,8 < 5

IgD (mg/L) 15 24,3 0,46 1,9 < 5

15 116,65 3,07 2,6 < 5

Kappa libres(mg/L)

15 5,67 0,1 1,7 < 10

15 15,14 0,21 1,4 < 10

15 146,81 2,75 1,9 < 10

Lambdalibres (mg/L)

15 1,73 0,07 3,9 < 10

15 14,91 0,34 2,3 < 10

15 234,56 21,03 9,0 < 10

15 2,22 0,06 2,6 < 5

IgG1 (g/L) 15 6,66 0,44 6,7 < 5

15 10,01 0,24 2,4 < 5

15 0,99 0,01 1,4 < 5

IgG2 (g/L) 15 5,37 0,07 1,4 < 5

15 13,92 0,4 2,9 < 5

15 0,13 0,004 2,7 < 5

IgG3 (g/L) 15 0,87 0,02 2,5 < 5

15 2,52 0,03 1,3 < 5

15 0,03 0,001 4 < 7

IgG4 (g/L) 15 0,53 0,01 2 < 7

15 1,34 0,03 2,4 < 7

IgA1 (mg/L)15 182,4 2,37 1,3 < 5

15 2481 29,29 1,2 < 5

IgA2 (mg/L)15 16,02 0,33 2,1 < 7

15 30,17 0,78 2,6 < 7

15 1,53 0,03 1,7 < 6 6

�2m sérique (mg/L) 15 1,93 0,02 1,3 < 6 6

15 9,21 0,14 1.6 < 6 5,3

Pour chaque analyte, le nombre de dosages, la moyenne des valeurs obtenues, l’écart type et le CV sont précisés, ainsi que les critères d’acceptabilité du

fournisseur et de la littérature [13].


A


Tableau 2. Évaluation de la reproductibilité.

Analytes Échantillon(valeur cible)

Ndosages Moyenne Écart

typeCV(%)


Fournisseur SFBCCQb (7,752) 20 7,71 0,21 2,7 < 10 < 5

IgG (g/L) CQh (14,02) 20 13,96 0,21 1,5 < 10 < 5

Haute 10 26,7 1,6 4,9 < 10 < 4

IgA (g/L)

CQb (1,18) 20 1,18 0,02 1,7 < 7 < 6

CQh (2,82) 20 2,72 0,07 2,4 < 7 < 5

Haute 11 9,38 0,33 3,5 < 7 < 4

IgM (g/L)

CQb (0,633) 30 0,586 0,03 4,5 < 7

CQh (1,075) 20 1,09 0,06 5,5 < 7 < 6

Haute 8 3,61 0,08 2,4 < 7 < 4

IgD (mg/L)

CQb (24,998) 17 25,1 0,9 3,6 < 11

CQh (98,0.4) 17 98,5 2,76 2,8 < 11

Haute (230,1) 15 205,3 4,99 2,4 < 11

Kappa libres(mg/L)

CQb (14,1) 13 14,2 0,48 3,4 < 15

CQh (29,2) 13 30,8 1,06 3,4 < 15

Haute 11 245,8 8,1 3,3 < 15

Lambda libres(mg/L)

CQb (26) 20 27,6 0,82 3,0 < 15

CQh (51,5) 20 55,4 2,14 3,9 < 15

Haute 11 108,2 4,66 4,3 < 15

IgG1 (g/L)

Faible (2,24) 16 1,87 0,1 5,6 < 11

CQb (3,746) 18 4,02 0,16 3,9 < 11

CQh (6,999) 18 7,19 0,34 4,7 < 11

IgG2 (g/L)

Faible (2,21) 16 1,98 0,06 2,8 < 9

CQb (2,337) 16 2,42 0,03 1,3 < 9

CQh (4,364) 16 4,51 0,07 1,6 < 9

IgG3 (g/L)

Faible (0,1) 16 0,13 0,01 6,9 < 10

CQb (0,402) 19 0,39 0,02 5,6 < 10

CQh (0,648) 19 0,64 0,04 5,9 < 10

IgG4 (g/L)

Faible (0,03) 16 0,04 0,002 6,8 < 10

CQb (0,27) 18 0,28 0,02 6,2 < 10

CQh (0,494) 18 0,5 0,04 7,9 < 10

IgA1 (mg/L)

Faible 15 244,4 6,1 2,5 < 8

CQb (929,8) 15 971,8 32,09 3,3 < 8

CQh (2 198,5) 15 2303,3 60,04 2,6 < 8

IgA2 (mg/L)

Faible 15 59 3,15 5,3 < 10

CQb (261,5) 15 272,0 16,49 6,1 < 10

36,5,4

0,9

P

t

nlpt

CQh (634,9) 15 6

�2m sérique(mg/L)

CQb (2,22) 18 2

CQh (10,72) 18 1


our chaque niveau d’analyte, les valeurs cibles des deux niveaux de CIQ sont préc

enues, l’écart type et le CV sont également présentés, ainsi que les critères d’acc

iveau haut pour le dosage des IgG, IgA, IgM, des chaîneségères libres kappa et lambda a été réalisée sur un nombrelus faible de dosages (entre 8 et 11). En effet, les échan-illons utilisés correspondaient à des sérums de patients,

35,76 5,6 < 100,12 4,8 < 9 < 8

0,46 4,3 < 9 < 7

427

isées entre parenthèses. Le nombre de dosages, la moyenne des valeurs ob-

eptabilité du fournisseur et de la littérature quand elles sont disponibles [13].

donc disponibles en quantité limitée, que nous avons aliquo-tés et congelés. Nous n’avons en effet pas souhaité faire despools de sérum pour limiter les problèmes d’interférence etd’effet matrice.


4

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C

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rticle original

es résultats de l’ensemble des paramètres dosés sontonformes aux spécifications du fournisseur, et ce à touses niveaux de concentration étudiés (tableau 2).ependant, la reproductibilité pour les fortes concentra-

ions d’IgG (26,7 g/L, CV = 4,9 %) ne satisfait pas lesritères d’acceptation de la SFBC [13], bien qu’elle satis-asse celles du fournisseur. Les résultats de reproductibilitéour les autres paramètres sont conformes aux critères de laFBC. Les reproductibilités obtenues avec l’Immage® 800endant la même période sont présentées dans le tableau 3.n résumé, en dehors des IgG pour des concentrationslevées, tous les paramètres à tous les niveaux testésépondent aux critères d’acceptabilité du fournisseur et de laFBC.

inéarité

es dosages obtenus avec des dilutions sériées’échantillons de sérum correspondent aux valeurshéoriques déduites du facteur de dilution (tableau 4)vec d’excellents coefficients de corrélation (> 0,99) etes droites de régression présentant des pentes prochese 1 et des ordonnées à l’origine proches de zéro, saufour la sous-classe IgA1. Cette linéarité a été caractériséeur la totalité de la gamme de mesure annoncée par leournisseur.

ontamination

a contamination a été évaluée en dosant à trois reprisesn échantillon présentant un taux élevé pour un para-ètre (valeurs obtenues : H1, H2, H3) puis en dosanttrois reprises un échantillon présentant un taux faible

our ce paramètre (valeurs obtenues : B1, B2, B3). Lealcul de la contamination est réalisé comme suit : (B1-3)*100/(moyenne H-B3).’alternance de dosage d’échantillons de concentrationslevées avec des échantillons de concentrations faibles n’aas mis en évidence de contamination (tableau 5).

oncordance

nviron quarante échantillons de patients ont été dosés enarallèle, le jour de leur décantation, sur le SPAPLUS® etar la technique utilisée en routine dans notre laboratoire.a concordance a été déterminée en comparant les résultatsbtenus sur le SPAPLUS® et sur l’Immage® 800 de Beck-

28

an Coulter (automate utilisé en routine au laboratoire), à’exception : i) des IgD dosées par immunodiffusion radialeThe Binding Site) et ii) des sous-classes d’IgA qui ne sontas dosées actuellement en routine dans notre laboratoire.a comparaison des deux techniques a été évaluée par

égression linéaire et par la méthode de concordance deland et Altman [14].

La figure 1 présente les résultats de la régression linéaire(R2) : pour l’ensemble des paramètres testés, les coefficientsde corrélation sont supérieurs ou égaux à 0,95.La concordance entre les dosages obtenus sur les deux auto-mates est supérieure à 90 % pour l’ensemble des paramètresévalués, elle est supérieure à 95 % pour les IgG, IgA, kappalibres, lambda libres, �2m et les IgG4 (figure 2).À noter qu’en plus des dosages présentés dans la figure 2,plusieurs échantillons présentant des valeurs inférieures àla gamme de mesure de l’Immage® (résultats rendus infé-rieurs au dernier point de calibration), ont été dosés sur leSPAPLUS® donnant des résultats également inférieurs à lagamme de mesure du SPAPLUS®. Ces résultats peuvent êtreconsidérés comme concordants mais n’ont pas été intégrésà l’analyse de concordance entre les deux techniques carles concentrations précises n’ont pas pu être déterminées(N = 1 pour les IgG1, IgG2 et IgG3, N = 3 pour IgA, IgMet IgG4, N = 7 pour kappa libres).Pour la majorité des paramètres testés (IgA, IgM, IgD,chaînes légères libres kappa et lambda, �2m et sous-classesIgG1), les échantillons hors de l’IC95% présentent desdosages supérieurs à la normale (tableau 6). Pour les IgG etpour les sous-classes IgG2, IgG3, IgG4, les échantillons horsde l’IC95% présentent des valeurs proches ou supérieuresà la limite haute de l’intervalle de référence.Il faut noter que les plus fortes différences entre les deuxtechniques sont observées pour le dosage des CLL kappa etlambda (figure 1). Pour les CLL de type lambda, les diffé-rences importantes entre les deux techniques sont observéesessentiellement sur les valeurs élevées (> 100 mg/L), cequi n’est pas forcément le cas pour les CLL de typekappa.

Gestion des redosages automatiquespar le SPAPLUS®

Plusieurs échantillons ont présenté des valeurs supérieuresà la gamme de mesure pour les paramètres testés :ces échantillons ont été redosés automatiquement par leSPAPLUS® à une dilution supérieure. Les résultats des redo-sages étaient proches de ceux obtenus avec l’Immage®

800 (voir les résultats de la concordance entre les deuxtechniques).

Détection de l’effet de zone par excès d’antigène

Un sérum présentant un taux élevé en chaînes légères libres®


lambda a présenté un effet de zone sur l’Immage 800,donnant une valeur faible erronée, alors que le SPAPLUS®

le détectait supérieur à la gamme de mesure et relancaitspontanément une vérification avec une dilution supérieurede l’échantillon de sérum.À l’inverse, un échantillon avec un taux élevé en IgD (éva-lué par immunodiffusion radiale) a présenté un effet de


A


Tableau 3. Répétabilité et reproductibilité sur Immage® 800.

Répétabilité Reproductibilité

Analytes N dosages Moyenne Écart type CV (%) N dosages Moyenne Écart type CV (%)

10 4,03 0,05 1,2 20 6,61 0,31 4,7

IgG (g/L) 10 34,48 0,94 2,7 20 12,22 0,39 3,2

20 17,39 0,63 3,6

10 0,10 0,002 1,7 20 1,33 0,03 2,3

IgA (g/L) 10 3,08 0,08 2,6 20 2,27 0,05 2,2

20 3,15 0,09 2,7

10 0,28 0,02 6,6 20 0,51 0,04 7,0

IgM (g/L) 10 0,95 0,01 0,9 20 0,88 0,05 5,7

20 1,23 0,1 7,9

IgD (mg/L) non fait 20 61,60 3,33 5,4

Kappa libres(mg/L)

10 23.62 0.60 2.5 20 15,15 0,93 6,1

20 30,79 2,87 9,3

Lambdalibres (mg/L)

10 24.67 1.43 5.8 20 26,11 1,45 5,6

20 53,26 4,29 8,1

10 0,13 0,00 3,1 20 4,06 0,21 5,2IgG1 (g/L)

20 7,64 0,32 4,2

10 2,28 0,02 1.1 20 2,57 0,16 6,3IgG2 (g/L)

20 4,45 0,24 5,3

10 0,13 0,01 10,9 20 0,40 0,02 6,2IgG3 (g/L)

20 0,67 0,04 5,38,1

4,7

1,1

zfmcII«mqzan(Shrd

10 0,08 0,01IgG4 (g/L)


10 1,87 0,09

10 6,55 0,07

one non détecté par le SPAPLUS® qui a rendu une valeuraible erronée sans alerter le manipulateur. Après dilutionanuelle et redosage sur le SPAPLUS®, les résultats étaient

omparables à ceux obtenus en immunodiffusion radiale.l faut noter que pour un 2e échantillon également élevé engD, le SPAPLUS® a rendu une valeur faible mais l’alarmeProzone » a été donnée par l’automate. Depuis notre pre-ière évaluation qui date de 2010, nous avons pu vérifier

ue le fournisseur avait amélioré la détection des effets deone pour les fortes concentrations sériques d’IgD. Nousvons en effet dosé sur le SPAPLUS® 10 sérums conte-


ant des IgD à une concentration supérieure à 300 mg/Len immunodiffusion radiale) :tous ont été détectés par lePAPLUS® comme ayant une valeur supérieure à la valeuraute de la gamme de mesure (> 221 mg/L) et ont donné desésultats concordants avec l’immunodiffusion radiale aprèsilution manuelle au 1/20 et redosage par le SPAPLUS®.

20 0,28 0,01 4,6

20 0,45 0,01 3,020 1,93 0,19 9,7

20 9,99 0,29 2,9

Discussion

L’évaluation de treize paramètres d’intérêt biologique amontré des résultats satisfaisants en termes de répétabi-lité et de reproductibilité. Les essais montrent égalementune bonne linéarité et l’absence de contamination pourl’ensemble des paramètres testés. La concordance avec lesrésultats obtenus avec la technique utilisée actuellement enroutine au CHU de Toulouse (néphélémétrie Immage® 800ou immunodiffusion radiale) est bonne. La concordance esten particulier très bonne entre les deux automates pour le

429

dosage des IgG, des IgA, des IgM et de la �2m alors queles réactifs et les calibrateurs utilisés sur les deux automatessont différents. La concordance est moins bonne pour lesdosages des chaînes légères libres kappa et lambda bienque les mêmes réactifs et le même calibrateur soient uti-lisés sur les deux automates. De telles différences entre


4

Article original

Tableau 4. Évaluation de la linéarité.

Analytes Zone de mesureImmage® 800 ou IDR

Zone de mesureSPAPLUS®

Équation de la droitede régression

Coefficient decorrélation R2

Nombrede points

IgG (g/L) 2-360,33-216

1,65-350,165-140

y = 0,9888x - 0,8567 0,995 7

IgA (g/L) 0,4-70,067-252

0,2-70,02-28

y = 0,9957x - 0,1688 0,997 7

IgM (g/L) 0,25-40,042-144

0,2-7,50,1-15

y = 0,9985x - 0,04 0,999 5

IgD (mg/L) 4,06-152 7-210 y = 0,9924x - 5,4407 0,995 6Kappa libres(mg/L)

6-180 4-1800,4-1 800

y = 1,0076x + 1,8468 0,997 6

Lambda libres(mg/L)

4,8-162 4,5-1650,45-1 650

y = 1,0234x - 4,3203 0,994 7

IgG1 (g/L) 0,75-20 1,5-360,15-144

y = 1,0037x + 0,0461 0,999 6

IgG2 (g/L) 4,86-13,12 0,2-70,02-28

y = 0,9899x + 0,1954 0,997 6

IgG3 (g/L) 0,1-2 0,055-10,0055-4

y = 0,9978x - 0,0275 0,996 6

IgG4 (g/L) 0,07-1,5 0,03-0,850,003-3,4

y = 0,9957x + 0,0031 0,999 6

IgA1 (mg/L) NA 300-6 00030-6 000

y = 0,9852x + 100,58 1 5

IgA2 (mg/L) NA 50-1 2505-1 250

y = 0,9884x + 6,7958 0,999 5

�2m sérique (mg/L) 0,5-20 0,6-200,3-40

y = 0,9859x - 0,0092 0,998 5

D me d

L entre

a le no

m .

aldqcddoqBddvllrmmLrt

es échantillons présentant des valeurs proches de la valeur haute de la gam

e tableau présente les paramètres de la droite de régression linéaire obtenue

vec x = valeur attendue, y= valeur trouvée, le coefficient de corrélation et

esure à la dilution initiale et après redosage pris en charge par l’automate

nalyseurs ont déjà été rapportées [15, 16], y compris entree SPAPLUS® et ’immunonéphélémètre BNII® [17]. Cesifférences pourraient être dues aux lots de réactifs, au faitue le dosage de certaines chaînes légères libres mono-lonales n’est pas linéaire quand on les dilue [18], à laifférence de technique utilisée et/ou à la différence deilution de travail entre automate. Ces différences sontbjectivées dans les résultats des contrôles externes de laualité (Paraprotein QA scheme The Binding Site et EEQiochimie sérique hebdomadaire Probioqual) où malgrées CV de l’ordre de 15 %, l’étendue des résultats ren-us par les différents laboratoires participants couvre desaleurs allant du simple au double. Le dosage des chaîneségères libres sériques étant indiqué dans le suivi du myé-ome et dans la définition de la réponse partielle et de la

30

éponse complète stringente au traitement, il est recom-andé de suivre un patient avec la même technique et leême automate dans le même laboratoire [17, 19].e SPAPLUS® présente plusieurs points forts en compa-

aison à l’Immage® 800. Sa capacité à redoser automa-iquement des échantillons à des dilutions supérieures ou

e mesure indiquée par le fournisseur sont dilués puis dosés sur le SPAPLUS®.

la valeur théorique attendue et la valeur mesurée sur le SPAPLUS® (équation

mbre de points de la droite). Le tableau présente également les zones de

inférieures à la dilution de travail préconisée est particu-lièrement appréciable pour le dosage des chaînes légèreslibres sériques qui sont fréquemment supérieures à lagamme de mesure, ainsi que pour les sous-classes d’IgG(IgG4) fréquemment inférieures à la gamme de mesure.De plus, le SPAPLUS® présente un système de détec-tion d’excès d’antigène automatique pour les dosages deschaînes légères libres Freelite®, des IgD, de la bêta-2 micro-globuline sérique ainsi que des IgG4. L’automate Immage®800 présente un système de détection d’excès d’antigènepour le dosage des IgG, IgA et IgM. L’Immage® 800redose automatiquement les échantillons pour les IgG, IgA,IgM mais pas pour les paramètres dont les réactifs ne sontpas fabriqués par Beckman (chaînes légères libres sériqueskappa et lambda, sous-classes d’IgG).


Nous avons testé le SPAPLUS® non connecté à notre infor-matique de laboratoire. En conséquence la praticabilité del’automate n’a pas été évaluée dans la version connectée.Nous avons évalué la rapidité de mise en œuvre et de clô-ture de session qui est satisfaisante : les maintenances dedébut (amorcage des tubulures) et de fin de journée (rincage


A


20

IgG (N = 40)

IgD (N = 32) Kappa libre (N = 40) Lambda libre (N = 47)

IgA (N = 38) IgM (N = 39)

15

10

5

0

250 1200 3000

2500

2000

1500

1000

500

0

1000

800

600

400

200

0

200

150

50

100

00 50 100 150 200 250 0 200 400 600 800 12001000 0 500 1000 1500 2000 30002500

0 0

1

2

3

4

5

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

0 0 2 4 6 8 10 10 2 3 4 55 10 15 20

IgG (g/L) - Immage® 800

IgG

(g

/L)

- S

PAP

LU

S®

IgD

(m

g/L

) -

SPA

PL

US

®

Kap

pa

libre

(m

g/L

) -

SPA

PL

US

®

Lam

bd

a lib

re (

mg

/L)

- S

PAP

LU

S®

IgA

(g

/L)

- S

PAP

LU

S®

IgM

(g

/L)

- S

PAP

LU

S®

IgA (g/L) - Immage® 800 IgM (g/L) - Immage® 800

40

35

30

25

20

15

10

5

0

18

16

14

12

10

8

6

2

4

0

16

14

12

10

8

6

2

4

00 5 10 15 20 25 30 35 40 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 0 2 4 6 8 10 12 14 16

B2M sérique (N = 41) IgG1 (N = 35) IgG2 (N = 37)

IgG1 (g/L) - Immage® 800

IgG

1 (g

/L)

- S

PAP

LU

S®

IgG

2 (g

/L)

- S

PAP

LU

S®

IgG2 (g/L) - Immage® 800B2M (mg/L) - Immage® 800

B2M

(m

g/L

) -

SPA

PL

US

®

IgD (mg/L) Immunodiffusion radiale Kappa libre (mg/L) - Immage® 800 Lambda libre (mg/L) - Immage® 800

2,5

2,0

1,5

1,0

0,5

00 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 0 0,5 1,0 1,5 2,0

2,0

1,5

1,0

0,5

0

IgG3 (N = 35)

IgG3 (g/L) - Immage® 800 IgG4 (g/L) - Immage® 800

IgG

4 (g

/L)

- S

PAP

LU

S®

IgG

3 (g

/L)

- S

PAP

LU

S®

IgG4 (N = 38)

FlId


igure 1. Corrélation entre les résultats du SPAPLUS® et ceux de l’Immaa figure présente la droite de corrélation (ligne pleine) entre le dosage ommage® 800 ou immunodiffusion radiale pour les IgD) et le dosage sueux techniques. Le nombre de sérums analysés est précisé après le n

431

ge® 800 ou de l’immunodiffusion radiale. Pour chaque paramètre,btenu par la technique de référence du laboratoire (néphélémètre

r SPAPLUS®, ainsi que la droite d’identité (ligne pointillée) entre lesom de l’analyte.


432 Ann Biol Clin, vol. 72, n◦ 4, juillet-août 2014

Article original

IgG IgA IgM

IgD

Dif

fére

nce

(Ig

M S

PA-I

gM

Bec

kman

)

Dif

fére

nce

(Ig

A S

PA-I

gA

Bec

kman

)

Dif

fére

nce

(Ig

G S

PA-I

gG

Bec

kman

)D

iffé

ren

ce (

IgD

SPA

-Ig

D T

BS

RID

)

Dif

fére

nce

(F

LC

K S

PA-F

LC

K B

eckm

an)

Dif

fére

nce

(F

LC

L S

PA-F

LC

L B

eckm

an)

Kappa libre Lambda libre

Moyenne SPA et Immage® 800 Moyenne SPA et Immage® 800 Moyenne SPA et Immage® 800

Moyenne SPA et Immunodiffusion radiale Moyenne SPA et Immage® 800 Moyenne SPA et Immage® 800

1,3378

3

40

30

20

10

0

-10

-20

-30

-40

0,3 0,3

0,1

0

-0,1

-0,2

-0,3

-0,4

-0,5

1600

1400

1200

1000

800

600

400

200

0

-200

-400

-0,6

-0,7

0,1

-0,1

-0,3

400

300

200

100

0

-100

-200

-0,5

-0,7

2

1

0

0

0 0 0 500 1000 1500 2000 2500 3000200 400 600 800 1000 120050 100 150 200 250

0 0 1 2 3 4 52 4 6 8 105 10 15 20

-1

-2

-3

12,495

-4,007

-20,5

173,1603

28,4424

-116,2755

514,143

70,627

-372,890

0,3271

-0,683

0,2125

-0,0946

-0,4017

0,1970

-0,1118

-0,4207

Dif

fére

nce

(S

PA-I

mm

age

800)

(g

/L)

Dif

fére

nce

(S

PA-I

mm

age

800)

(g

/L)

Moyenne SPA et Immage® 800

0,2 0,2

0,15

0,1

0,05

-0,05

-0,1

-0,15

-0,2

0

0,1

-0,1

-0,2

-0,3

0

0 0,5 1 1,5 2 2,5 0 0,5 1 1,5 2

0,1228

0,078

-0,002

-0,082

-0,0356

-0,1940


IgG3 IgG4

Dif

fére

nce

(S

PA-I

mm

age

800)

(m

g/L

)

Dif

fére

nce

(S

PA-I

mm

age

800)

(g

/L)

Dif

fére

nce

(S

PA-I

mm

age

800)

(g

/L)

B2M sérique


6

5

4

3

2

1

0

3

2

1

-1

-2

-3

0

-1

-2

1

0,8

0,6

0,4

0,2

0

-0,2

-0,4

-0,60 5 10 15 20 25 30 35 40 0 0 2 4 6 8 10 12 14 165 10 15 20

2,215

1,0990,5800

0,0956

-0,3888

-0.227

-1,554

0,158

-1,899

Moyenne SPA et Immage® 800 Moyenne SPA et Immage® 800

IgG1 IgG2

Identité Biais Limites d’agrément 95% Préconisations SFBC

Figure 2. Concordance entre le SPAPLUS® et l’Immage® 800 ou l’immunodiffusion radiale. La figure présente les graphes des différences (test de Bland etAltman) : chaque point représente la différence entre les dosages obtenus par les deux techniques en fonction de la moyenne des dosages obtenus par les deuxtechniques. La ligne noire correspond à la différence idéale de 0 entre les deux techniques. La ligne bleue présente la moyenne des différences réellement obte-nues et correspond au biais entre les deux techniques. Les lignes bleues en pointillés correspondent aux limites inférieures et supérieures de l’intervalle de confi-ance à 95 % des différences entre les deux techniques. Les lignes noires en pointillés correspondent aux recommandations de la SFBC, quand elles existent.


A


Tableau 5. Évaluation de la contamination.

Analytes Valeurforte (H)

Valeurbasse (B)

Contamination(%)

IgG (g/L)

16,345 4,096

1,01916,598 3,982

16,631 3,968

IgA (g/L)

5,293 0,121

-0,0195,352 0,122

5,322 0,122

IgM (g/L)

11,567 0,553

-0,00911,574 0,58

11,57 0,554

IgD (mg/L)

107,66 7,29

-0,028108,49 6,96

107,52 7,32Kappa libres(mg/L)

nf nf nf

Lambda libres(mg/L)

264,6 18,63

0,086262,71 19,06

263,66 18,42

IgG1 (g/L)

10,56 2,24

0,23510,84 2,14

10,81 2,22

IgG2 (g/L)

6,738 0,58

0,0656,797 0,57

6,768 0,58

IgG3 (g/L)

0,782 0,18

0,1660,774 0,17

0,778 0,18

IgG4 (g/L)

0,559 0,077

0,000,531 0,077

0,535 0,077

IgA1 (mg/L)

6 024,8 435,9

0,0375 650,7 431,9

5 936,2 433,9

IgA2 (mg/L)

> 1 225 23,4

-0,100> 1 225 24,9

> 1 225 24,6


39,26 1,82

0,0038,98 1,82

39,12 1,82

Pour chaque analyte, les 3 dosages obtenus avec l’échantillon présentant

u

s

d

Tableau 6. Détail des échantillons pour lesquels la différence entreles deux techniques est en dehors de l’intervalle de confiance à95 %.

Analytes RésultatImmage® 800

RésultatSPAPLUS®

IgG (g/L)12,5 13,9

11,4 13,1

IgA (g/L)7,14 6,5

3,24 2,8

IgM (g/L)

4,42 3,8

3,18 2,6

2,86 2,34

IgD (mg/L)230 198

145 112

Kappa libres(mg/L)

696 1 088,5

90,8 328,4Lambda libres(mg/L)

1 310 2 714

RatioKappa/Lambda

114,7 632,6

124,5 602

�2m (mg/L)12,3 10,3

34,2 39,9

IgG1 (g/L)10.4 8.8

13.3 10.8

IgG2 (g/L)

5,6 5,1

5,56 5,2

13.6 14.6

L’ensemble des performances du SPAPLUS®, évaluées dans


ne concentration élevée en analyte et ceux obtenus avec l’échantillon pré-

entant une concentration faible en analyte sont présentés, ainsi que le calcul

e la contamination.

IgG3 (g/L)

1,7 1,5

1,28 1

1,97 2,16IgG4 (g/L) 0,4 0,6

des cuvettes) durent environ dix minutes. Les fluides utilisésquotidiennement sont de l’eau osmosée et deux solutions delavage. Nous avons vérifié et confirmé la cadence annoncéepar le fournisseur qui est de 120 tests à l’heure. La fré-quence de réalisation des calibrations n’est pas précisée parle fournisseur qui recommande de calibrer en cas de dérivedu contrôle interne de qualité. Nous avons vérifié pour lesimmunoglobulines et les sous-classes d’IgG que deux cali-brations réalisées à quatre mois d’intervalle donnaient desrésultats superposables en termes de DO et de courbe decalibration.

433

ce travail en font un automate tout à fait adapté aux besoinsdes laboratoires spécialisés en immunologie.

Liens d’intérêts : Les auteurs déclarent ne pas avoir delien d’intérêt en rapport avec cet article.


4

A

R

1EAc

2mC

3nC

4l

5mW

6eapa

7Ll

8p2

9g

1e

rticle original

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Évaluation des performances analytiques du …...IgA1,IgA2, IgD,kappalibresetlambdalibres)àpartird’un volume minimal par tube ou godet de 150 L. Le rack de réaction dispose de