Validasi_Metode_Analisis_Senyawa_Cepotaxime.doc

8/10/2019 Validasi_Metode_Analisis_Senyawa_Cepotaxime.doc

1/11

VALIDASI METODE ANALISIS SENYAWA CEFOTAXIME DENGAN STANDAR INTERNAL

CEFADROXIL SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

Iyan Sopyan, Rijal Syahril Maulana, Driyanti RahayuFakultas Farmasi Universitas Padjadjaran, Jatinangor, Sumedang

ABSTRAK

Sampai saat ini penelitian validasi metode analisis ceota!ime dalam pelarutnya menggunakan "#"$ detektorU% &elum dilaporkan' Penelitian ini &ertujuan untuk mengetahui validitas metode analisis ceota!ime dalampelarutnya menggunakan "#"$ detektor U%' Sampel dilarutkan dengan asa gerak dianalisis menggunakan

kolom #()*octadecyl silane+ -. ! /,0 mm, ukuran partikel (. 1m, ase gerak ).2. v3v dapar osat .,.( M *p4/,0+ dan metanol dengan kecepatan alir .,) ml3menit, deteksi dilakukan pada 5- nm dengan standar internalceadro!il' Metode analisis divalidasi &erdasarkan parameter2 selektivitas, akurasi, presisi, keterulangan,linieritas, 67D, 678, dan kesesuaian sistem' %alidasi metode analisis menunjukkan hasil uji selektivitas Rs 9(,-, uji keterulangan dengan "%*:+ ; :, linieritas diperoleh pada rentang -


2/11

yang dilakukan mendapatkan hasil yang

diinginkan'

Suatu metode analisis &aru dapatdigunakan apa&ila telah dilakukan validasi' 4al ini

karena adanya per&edaan alat, keter&atasan alat,&ahan kimia atau kondisi lain yang menye&a&kanmetode terse&ut tidak dapat diterapkan secarakeseluruhan' Sehingga sering dilakukanmodiikasi, penyederhanaan maupun per&aikanmetode, aki&atnya metode terse&ut harus

divalidasi dengan cara yang &enar' Apa&ila metodeini dapat dipertanggungja@a&kan secarakeseluruhan *presisi, akurasi, selektivitas, &atasdeteksi, &atas kuantitasi, sta&ilitas dan lain


3/11

O3ti&a(i K$n%i(i KCKT

Sistem "#"$ yang akan digunakanadalah se&agai &erikut 2"olom 2 7DS3#() *octadecyl

silane+, panjang -. mm,

diameter dalam /,0 mm, danukuran partikel (. 1m

Fase gerak 2 Metanol 2 Ca4P7/ *p4,+ *?- 2 -, ?) 2 , ). 2 . +*akan dioptimasi+

6aju alir 2 .,) ml3menitStandar internal 2 #eadro!ilDetektor 2 U% 5- nm

Attenuation 2 5,inimum

Area


4/11

menetapkan #eota!ime dalam sampel' Persen

akurasi diperoleh dengan cara melihat kedekatanhasil dari sampel terhadap nilai nominal dan presisidilihat dari nilai "% *:+,

Presisi dinyatakan dengan "% *:+, dengan

persamaan 2

:(..:

=

#erdasarkan $inggiPuncak "romatogram *n H 0+

"eterangan 2 Uji dilakukan dalam asa gerak dengan standar

internal ceadro!il - 1g3ml

Pada &e&erapa literatur, kriteria seksamadi&erikan jika metode mem&erikan simpangan &akurelati atau koeisien variasi : atau kurang' $etapinilai ini sangat leksi&el &ergantung padakonsentrasi analit yang dianalisis, jumlah sampel,dan kondisi la&oratorium' "oeisien variasi akan

meningkat dengan menurunnya kadar analit yangdianalisis *4armita, ../+'

Ha(i! 5i Lini")ita(

Uji linieritas dilakukan untuk melihatkemampuan metode analisis dalam mem&erikan

respon yang &aik pada &er&agai macam konsentrasianalit pada suatu kurva kali&rasi untukmenghasilkan garis lurus' Parameter adanyahu&ungan linier dinyatakan dengan koeisien

ppm

ceota!ime*1g3ml+

Kaktu retensi*menit+

ceadro!il #eota!ime Rasio

(.

(.(.

(.(.(.

/,(/

/,.=/,.)5

/,.=/,.)5/,(..

=,5)5

=,5-.=,/(?

=,/-=,/)5=,-?-

,0-55(

,)/=/0,5.05=

,5.=5)/,5--?,55-500

A /,.== =,//5 ,5.5==0

"% : .,-/( .,)/? (,(.(0-/

Donse n

tr

as

i

ceota!ime*1g3ml+

6uas area kromatogram

#eadro!il #eota!ime Rasio

(.(.(.(.

(.(.

).0(/?=.)??./(?0()-

0-=?5?-/?

-5?(-5()(0-5-./5-=0-0

-?(=--/?.

(,=(///)(,=./?5((,=5(??(,=(??-)

(,=))(,=.?-0

A ?-?/),) -5(.?.,) (,=05)

"% : (,)? .,)- (,-.

Donsentras

i

#eota!ime*1g3ml+

$inggi puncak kromatogram

#eadro!il #eota!ime Rasio

(.(.(.(.(.

(.

((.=0((5(0((.)=((/.=((5(

((())

=?)/=)(-(..=-(.()(..?)

==0-

.,))(?-=

.,)0?5-0

.,=(.50

.,))??.

.,)=.=(

.,)=.0)0

A ((5- ==??,- .,)))(55

"% : (,(0 (,/= (,-)

0


7/11

korelasi, dan suatu metode analisi yang valid

mempunyai harga koeisien korelasi le&ih dari.,=== *6'R' Snyderet al, (==?+'

Untuk mengetahui hu&ungan linieritasantara konsentrasi ceota!ime dengan rasio luas

area kromatogram dan rasio tinggi puncakkromatogram, di&uat kurva kali&rasi dari

ceota!ime' "urva kali&rasi di&uat dengan caramem&uat larutan ceota!ime dalam asa geraksehingga diperoleh konsentrasi akhir -, (., (-, .,dan - 1g3ml yang mengandung standar internalceadro!il dengan konsentrasi akhir - 1g3mlkemudian setiap konsentrasi ceota!ime diukur

dengan "#"$' Masingerdasarkan Rasio 6uas Area

"romatogram *Replikasi H 5+

Replikasi Eilai

a & r

( .,(??= .,(?)5 .,===--. .,()5 .,(0. .,==)/==

5 .,()0 .,(5 .,==)===

"eterangan 2 Uji dilakukan dalam asa gerak dengan konsentrasi

ceota!ime -, (., (-, ., dan - 1g3ml denganstandar internal ceadro!il - 1g3ml

Untuk menetapkan kadar sampel,digunakan persamaan kurva kali&rasi yang

mempunyai koeisien korelasi 9 .,===, dimana nilaiini merupakan kriteria suatu metode analisis yangvalid *6'R' Snyder et al, (==?+' Persamaan garis

regresi linier &erdasarkan rasio luas area pada $a&el/') *perhitungan dapat dilihat pada 6ampiran+ yangdigunakan untuk menetapkan kadar ceota!ime

adalah y H .,(??= ! .,(?)5 dengan r H .,===--.'

$a&el /'? 4asil Uji 6inieritas #eota!ime

dengan >erdasarkan Rasio $inggiPuncak "romatogram *replikasi H 5+

Replikasi Eilai

a & r

( .,.)0 .,..) .,==)/=)

.,.)/ .,.?5 .,===-==5 .,.)0 .,./- .,==)===

"eterangan 2 Uji dilakukan dalam asa gerak dengan konsentrasiceota!ime -, (., (-, ., dan - 1g3ml

dengan standar internal ceadro!il - 1g3ml

Persamaan garis regresi linier &erdasarkan rasiotinggi puncak pada $a&el /'? *perhitungan dapat

dilihat pada 6ampiran yang digunakan untukmenetapkan kadar ceota!ime adalah y H .,.)/ ! .,.?5 dengan r H .,===-=='

Cilai koeisien korelasi yang diperoleh&erdasarkan rasio luas area kromatogram dan rasiotinggi puncak kromatogram menunjukkan nilai 9

.,===, hal ini mem&uktikan &ah@a metode analisisyang digunakan sudah memenuhi kriteria linieritaspada rentang -


8/11

&iologis *' Indrayanto, (==/+' 4asil uji 67D

dihitung &erdasarkan kurva kali&rasi ceota!imedari persamaan yang mempunyai koeisien korelasi*r+ ter&aik' Cilai 67D ditetapkan dari kurvakali&rasi ceota!ime terhadap rasio luas area

kromatogram dan rasio tinggi puncakkromatogram' Cilai 67D dari rasio luas area

kromatogram adalah .,.-.) 1g3ml dan&erdasarkan rasio tinggi puncak kromatogramadalah .,.-)=0 1g3ml'

Ha(i! 5iLimit of Quantitation +LO:/

Limit of uantitation *678+ mutlakditentukan jika analit yang dianalisiskonsentrasinya relati kecil seperti dalam matrik&iologis *' Indrayanto, (==/+' 4asil uji 678dihitung &erdasarkan kurva kali&rasi ceota!ime

dari persamaan yang mempunyai koeisien korelasi

*r+ yang paling &aik' Cilai 678 ditetapkan darikurva kali&rasi ceota!ime terhadap rasio luas areakromatogram dan rasio tinggi puncakkromatogram' Cilai 678 dari rasio luas area

kromatogram adalah .,(0=/ 1g3ml dan &erdasarkanrasio tinggi puncak kromatogram adalah .,(=0-1g3ml' Cilai 678 sangat tergantung pada galatsistemik yang dapat dilihat se&agai intercept atautitik potong pada sum&u y dari persamaan gariskurva kali&rasi'

Ha(i! P"n"ntuan K"t"!itian +Precision/ %an

K"t"3atan +Accuracy/

Untuk mengetahui presisi dan akurasi,di&uat 5 macam konsentrasi sampel ceota!imeyang kadarnya ditetapkan &erdasarkan kurva

kali&rasi ceota!ime' "onsentrasi sampelceota!ime dalam asa gerak di&uat sekitar nilaikosentrasi pada kurva kali&rasi, &erturut


9/11

perhitungan dari persamaan kurva &aku y H

.,.)/! .,.?5, r H .,===-

Ha(i! 5i K"("(uaian Si(t"& +System Suitability

Test/

Untuk memastikan &ah@a sistem yangdigunakan &erjalan secara eekti maka perludilakukan uji kesesuaian sistem' Suatu parameteryang &erguna adalah keterulangan penyuntikanyang ditentukan dengan menghitung koeisienvariasi *"%+ dari @aktu retensi, rasio luas area,rasio tinggi puncak, tailing factor, dan asimetri

puncak kromatogram'Dilakukan enam kali penyuntikan terhadap

sampel ceota!ime dengan konsentrasi (. 1g3ml,yang mengandung standar internal ceadro!il -1g3ml, kemudian diamati @aktu retensi, rasio luasarea, dan rasio tinggi puncak kromatogram'

"onsentrasi terse&ut dipilih untuk me@akilikonsentrasi rendah, diasumsikan jika hasilkonsentrasi rendah sudah dapat mem&erikan nilaiyang &aik, maka diharapkan konsentrasi tinggimem&erikan nilai yang &aik pula' Pada $a&el /'(.dapat diketahui "% dari @aktu retensi, rasio luas

area kromatogram, dan rasio tinggi puncakkromatogram ; /:, nilai ini menunjukkan &ah@ametode analisis yang digunakan telah memenuhikriteria kesesuaian sistem yaitu "% ; (.:'

"esesuaian sistem juga digunakan untukmengetahui aktor asimetri dan aktor ikutan

*tailing factor+ dari puncak' Asimetri dan aktor

ikutan digunakan untuk mengetahui kondisi kolomdan kondisi perco&aan' Asimetri puncak ceota!imedengan konsentrasi(. 1g3ml dan ceadro!il adalah. *terdapat pada hasil kromatogram+, dapat dilihatpada kromatogram kesesuaian sistem *pada

lampiran + &ah@a kedua puncak terlihat cukupsimetris' Cilai terse&ut telah memenuhi kriterianilai asimetri yakni ; *6'R' Snyderet al, (==?+'Cilai aktor ikutan untuk puncak ceota!ime danceadro!il adalah . *terdapat pada hasilkromatogram+, dapat dilihat pada kromatogram

keseuaian system *pada lampiran + &ah@a keduapuncak tidak memiliki actor ikutan' Faktor ikutan

yang diperoleh telah memenuhi nilai persyaratan,yaitu ; *Snyderet al, (==?+'

$a&el /'( 4asil Uji "esesuaian Sistem#eota!ime *n H 0+

Cilai "% atas

@aktu retensi, luas areakromatogram, tinggi

puncak kromatogram,

asimetri, dan aktor ikutan

"onsentrasiceota!ime.,- 1g3ml

Cilai

koeisienvariasi *"%+

Kakturetensi

#eadro!ilceota!ime

.,-/((

.,)/?

Rasio (,(.(0

6uas areakromatogram

#eadro!ilceota!ime

(,)?(5.,)-.

Rasio (,-.(0

$inggipuncak

kromatogram

#eadro!il

ceota!ime

(,(0/?

(,/=./

Rasio (,-??.

"eterangan 2 Uji kesesuaian sistem dilakukan pada ceota!ime

(. 1g3ml dalam asa gerak dengan standar internalceadro!il - 1g3ml

Minutes

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 1 12 13

Volts

0.0

00

0.0

02

0.0

04

0.0

06

0.0

08

0.0

10

0.0

12

Volts

0.000

0.002

0.004

0.006

0.008

0.010

0.012

(9

.(

(&1(

+2+

.+

.(

(%&/+.

++&9/

//

%2

(.&1

9%

?+

1%

29

+2

92

%2

12?((+

9?%.

Detector A- 1(235nm)cefocefaijal fg 10 ppm 80PO4pH4.4-20!eOH 20 "# 0.8 m#menit0-08-2008-002

3etention !ime

Area

Height

am&ar /'- "romatogram overlay ujikesesuaian sistem ceota!ime (.1g3ml dengan standar internalceodro!il - 1g3ml dalam asagerak *n H 0+

SIMPLAN DAN SARAN

Si&3u!an

Dari hasil penelitian dapat disimpulkanhal


10/11

ekstraksi *+ Menggunakan rela@an *volunteer+

agar hasil yang diperoleh dapat langsung digunakanuntuk uji ketersediaan hayati *&ioavaila&ilitas+ danuji kesetaraan hayati *&ioekivalensi+'

DAFTAR PSTAKA

American Society o 4ealth


11/11

Documents

Validasi_Metode_Analisis_Senyawa_Cepotaxime.doc