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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
“Efecto inhibitorio del arrayán (myrtus communis) en infusión y la
hexetidina frente a la prevotella melaninogenica. Estudio in Vitro”.
Proyecto de investigación presentado como requisito previo a la obtención del
título de Odontólogo
Autor: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Tutora: Dra. Marina Antonia Dona Vidale
Quito, mayo 2019
ii
DERECHOS DE AUTOR
Yo, Christian Alejandro Díaz Pilaluisa en calidad de autor y titular de los derechos
morales y patrimoniales del trabajo “Efecto inhibitorio del arrayán
(myrtus communis) en infusión y la hexetidina frente a la prevotella
melaninogenica. Estudio in Vitro”, modalidad Proyecto de Investigación,
de conformidad con el Art. 114 del CÓDIGO ORGÁNICO DE LA ECONOMÍA
SOCIAL, CREATIVIDAD E INNOVACIÓN, concedo a favor de la Universidad
Central del Ecuador una licencia gratuita, intransferible y no exclusiva para el uso
no comercial de la obra, con fines estrictamente académicos. Conservo a mi favor
todos los derechos de autor sobre la obra, establecidos en la normativa citada.
Así mismo, autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la
digitalización y publicación de este trabajo de titulación en el repositorio virtual, de
conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación
Superior.
El autor declara que la obra objeto de la presente autorización es original en su
forma de expresión y no infringe el derecho de autor de terceros, asumiendo la
responsabilidad por cualquier reclamación que pudiera presentarse por esta causa y
liberando a la Universidad de toda responsabilidad.
Firma: _________________________________________
Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
CC 1719530808
Dirección electrónica:
iii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo, Marina Antonia Dona Vidale, en mi calidad de tutora del trabajo de titulación,
modalidad Proyecto de Investigación, elaborado por Christian Alejandro Díaz
Pilaluisa, cuyo título es: EFECTO INHIBITORIO DEL ARRAYAN
(MYRTUSCOMMUNIS) EN INFUSIÓN Y LA HEXETIDINA FRENTE A LA
PREVOTELLA MELANINOGENICA. ESTUDIO IN VITRO, de conformidad
con el Art. 144 del CÓDIGO ORGÁNICO DE LA ECONOMÍA SOCIAL DE LOS
CONOCIMIENTOS, CREATIVIDAD E INNOVACIÓN, previo a la obtención del
Grado de Odontólogo: considero que el mismo reúne los requisitos y méritos
necesarios en el campo metodológico y epistemológico, para ser sometido a la
evaluación por parte del tribunal examinador que se designe, por lo que lo
APRUEBO, a fin de que el trabajo sea habilitado para continuar con el proceso de
titulación determinado por la Universidad Central del Ecuador.
En la ciudad de Quito, a los 15 del mes de marzo de 2019.
iv
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El Tribunal constituido por: Dra. Mariela Balseca, Dr. Jorge Muñoz. Luego de
receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del título
de Odontólogo presentado por el señor Christian Alejandro Díaz Pilaluisa,
Con el título:
“Efecto inhibitorio del arrayán (myrtus communis) en infusión y la
hexetidina frente a la prevotella melaninogenica. Estudio in Vitro”.
Emite el siguiente veredicto:
Fecha:2019/05/31
Para constancia de lo actuado firman:
Nombre y Apellido Calificación Firma
Presidente Dra. Mariela Balseca __________________________________
Vocal 1 Dr. Jorge Muñoz __________________________________
v
DEDICATORIA
La presente investigación va dedicada a mis padres, Fernando y Lourdes, quienes
nunca perdieron las esperanzas y me dieron toda su confianza.
Para mi familia, pero en especial a mis abuelos, ya que fueron como mis segundos
padres y su cariño siempre estuvo presente. (+)
Para mi hermano Edison y su familia quienes me apoyaron todo este transcurso, en
la elaboración de la presente investigación.
A mis profesores quienes durante mi vida universitaria supieron brindarme su
conocimiento, siendo de gran ayuda en mi desarrollo profesional.
vi
AGRADECIMIENTOS
A Dios, a mis padres a mi familia y amigos por siempre estar cuando los necesite.
A la Universidad Central del Ecuador por haberme acogido en sus aulas y
desarrollar actitudes y aptitudes que me ayudaran en el desempeño profesional.
A la Dra. Marina Dona por su interés y dedicación a cada uno de sus alumnos, y
mas aún en la tutoría de la presente investigación.
A todas las personas que a lo largo de la carrera universitaria hicieron lo posible
por que no llegue este día, ya que lo único que lograron es darme fuerzas y asi poder
continuar.
vii
ÍNDICE DE CONTENIDOS
DERECHOS DE AUTOR ...................................................................................... ii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN ................... iii
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL ......................... iv
DEDICATORIA ..................................................................................................... v
AGRADECIMIENTOS ......................................................................................... vi
ÍNDICE DE CONTENIDOS ................................................................................ vii
LISTA DE TABLAS .............................................................................................. x
LISTA DE FIGURAS ............................................................................................ xi
LISTA DE GRÁFICOS ........................................................................................ xii
LISTA DE ANEXOS ........................................................................................... xiii
RESUMEN ........................................................................................................... xiv
ABSTRACT .......................................................................................................... xv
INTRODUCCIÓN .................................................................................................. 1
CAPÍTULO I ........................................................................................................... 3
1. MARCO TEÓRICO ........................................................................................ 3
1.1. Prevotella melaninogenica........................................................................ 3
1.1.1. Definición .......................................................................................... 3
1.1.2. Estructura Prevotella melaninogenica ............................................... 3
1.1.3. Factores de virulencia ....................................................................... 4
1.2. Fisioterapia ............................................................................................... 4
1.3. Myrtus communis (Arrayán) .................................................................... 5
1.3.1. Descripción ....................................................................................... 5
1.3.2. Taxonomía......................................................................................... 6
viii
1.3.3. Composición química ....................................................................... 6
1.3.4. Propiedades medicinales ................................................................... 7
1.3.5. Aplicación del Myrtus communis en odontología ............................. 7
1.4. Antisépticos bucales ................................................................................. 8
1.4.1. Definición .......................................................................................... 8
1.4.2. Propiedades específicas del antiséptico ............................................ 9
1.4.3. Tipos de antisépticos ....................................................................... 10
1.4.3.1. Hexetidina ................................................................................ 10
CAPÍTULO II ....................................................................................................... 11
2. EL PROBLEMA ........................................................................................... 11
2.1. Planteamiento del problema ................................................................... 11
2.2. Formulación del problema ...................................................................... 12
2.3. Objetivos ................................................................................................ 12
2.3.1. Objetivo general .............................................................................. 12
2.3.2. Objetivos específicos ...................................................................... 12
2.4. Hipótesis ................................................................................................. 12
2.5. Conceptualización de variables .............................................................. 13
2.5.1. Variables independientes ................................................................ 13
2.5.2. Variables dependientes.................................................................... 14
2.6. Justificación ............................................................................................ 14
CAPÍTULO III ...................................................................................................... 16
3. METODOLOGÍA ......................................................................................... 16
3.1. Tipo de investigación ............................................................................. 16
3.2. Población de estudio y muestra .............................................................. 16
3.3. Criterios de inclusión y exclusión .......................................................... 17
3.4. Operacionalización de las variables ....................................................... 18
ix
3.5. Estandarización ...................................................................................... 19
3.6. Manejo y recolección de datos ............................................................... 20
3.7. Análisis estadístico ................................................................................. 32
3.8. Aspectos bioéticos .................................................................................. 32
CAPÍTULO IV ...................................................................................................... 34
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS ................................................................... 34
4.1. Resultados .............................................................................................. 34
4.1.1. Información descriptiva .................................................................. 35
4.1.2. Estudio estadístico ........................................................................... 36
4.1.2.1. Prueba Wilcoxon para muestras relacionadas ......................... 39
4.1.2.2. Prueba Mann Whitney para muestras independientes ............. 40
4.2. Discusión ................................................................................................ 42
CAPÍTULO V ....................................................................................................... 46
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ............................................ 46
5.1. Conclusiones .......................................................................................... 46
5.2. Recomendaciones ................................................................................... 47
BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................. 48
ANEXOS .............................................................................................................. 52
x
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Clasificación taxonómica de Myrtus communis ....................................... 6
Tabla 2. Resultados de la infusión de arrayán, hexetidina y suero fisiológico ..... 34
Tabla 3. Resultados descriptivos ........................................................................... 35
Tabla 4Prueba de normalidad................................................................................ 36
Tabla 5Datos comparativos de la Prueba Krusk Wallis ........................................ 38
Tabla 6. Comparación de la infusión de 48 a 72 horas (Prueba de Wilcoxon) ..... 39
Tabla 7. Comparación infusión de arrayán al 50% de 48 y 72 horas con Hexetidina
al 0,12% (Prueba de Mannn Whitney) .................................................................. 40
Tabla 8. Comparación de la infusión de arrayán 50%-100% y hexetedina 0,12%de
48 y 72 horas con suero fisiológico....................................................................... 41
xi
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Materiales utilizados ............................................................................... 19
Figura 2: Obtenciones de concentraciones de Planta de arrayan (myrtus communis)
50% y 100% a) Planta de arrayan b) material triturado, c) Maceracion por 24 horas,
d) Obtencion de concentraciones a travez de filtros ............................................. 21
Figura 3: Obtención de Prevotella Melaninogénica ATCC ®25845 .................... 22
Figura 4 : a) Activación de la cepa de Prevotella Melaninogénica ATCC ®25845,
caja petri con medio de cultivo agar sangre, b) Medio de cultivo liquido TBS, c)
Apertura de cepa de Prevotella Melaninogénica ATCC ®25845, d ) y e) Toma de
Prevotella por medio de isopo para su siembra, f) Siembra en caja petri. ............ 24
Figura 5: a) siembra en medio sólido y líquido, b) Colocacion en jarra de
anaerobios (Gaspack), c) colocación en medio aislado d) temperatura ambiente 25
Figura 6: Rotulación de las 20 cajas petri ............................................................. 26
Figura 7: Siembra de bacteria Prevotella melaninogenica .................................... 26
Figura 8: Fórmula Mac Farland ............................................................................ 27
Figura 9: Materiales a usar en procedimiento experimental ................................. 28
Figura 10: Separación de discos estériles con pinzas para colocar en cajas petri. 28
Figura 11. Discos impregnados:1) Infusión de arrayán 50%, 2) Infusión de arrayán
al 100%, 3) Hexetidina, 4) Suero fisiológico. ..................................................... 29
Figura 12. Incubación de bacteria Prevotella melaninogenica en jarra de anaerobios
y puesto a incubación. ........................................................................................... 30
Figura 13. Halos de inhibición a las 48 horas ....................................................... 31
Figura 14. Medición halos de inhibición a las 72 horas ........................................ 31
xii
LISTA DE GRÁFICOS
Gráfico 1. Medias de halo de inhibición ............................................................... 35
Gráfico 2: Efecto de los halos de inhibición ......................................................... 36
Gráfico 3: Prueba Krusk Wallis ............................................................................ 37
Gráfico 4: Comparación infusión de arrayán al 50% de 48 y 72 horas con Hexetidina
al 0,12% (Prueba de Mannn Whitney) .................................................................. 40
xiii
LISTA DE ANEXOS
Anexo A Solicitud de permisos para realizar la investigación ............................. 52
Anexo B Certificado autenticidad cepas de Prevotellamelaninogenica ............... 53
Anexo C Hoja de recolección de datos ................................................................. 54
Anexo D Declaración de confidencialidad ........................................................... 55
Anexo E Normas Generales de Bioseguridad de la Facultad de Odontología de la
Universidad Central de Ecuador ........................................................................... 56
Anexo F Protocolo de manejo de los desechos infecciosos .................................. 58
Anexo G Certificado de idoneidad ética y experticia del estudio del investigador
............................................................................................................................... 59
Anexo H Certificado de idoneidad ética y experticia del estudio del tutor .......... 60
Anexo I Certificado de conflicto de intereses del investigador ............................ 61
Anexo J Certificado de conflicto de intereses del tutor ........................................ 62
xiv
Tema: “Efecto inhibitorio del arrayán (myrtus communis) en infusión y la
hexetidina frente a la prevotella melaninogenica. Estudio in Vitro”.
Autor: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Tutora: Dra. Marina Antonia Dona Vidale
RESUMEN
Las enfermedades periodontales son consecuencia del crecimiento sin control de la población de microorganismos alojados en la cavidad bucal, los cuales conforman el biofilm bucal. Entre la gran cantidad de microorganismos que lo componen se encuentra la Prevotella melaninogenica, bacteria causante de la gingivitis, periodontitis, infecciones de los conductos radiculares, abscesos de origen dentario y responsable de la halitosis. Objetivo: Establecer el efecto inhibitorio in vitro de la infusión del arrayán (Myrtus communis) en diferentes concentraciones y hexetidina sobre cepas de Prevotella melaninogenica. Metodología: Estudio de tipo experimental, in vitro, transversal y comparativo aplicado a una población de 20 caja Petri con cepas Prevotella melaninogénica a los cuales se les agregarán discos impregnados con infusión de arrayan (Myrtus communis) a concentraciones del 50% y 100%, así como de hexetidina como control positivo y suero fisiológico como control negativo, llevadas a incubación en campana de anaerobios a una temperatura de 37ºC por 48 horas. Para determinar el efecto antimicrobiano, se medirá con una regla milimetrada el halo que se formó alrededor del disco, utilizando la escala de referencias de la clasificación establecida por Duraffourd, finalmente los datos obtenidos se registrarán en una hoja de recolección de datos, utilizando el programa SPSS, verificando si los datos provienen de una población normal, para lo cual se realizará una prueba de Shapiro Will (<50 muestras), de proceder de datos normales se realizará una prueba ANOVA y Tukey, en caso de ser resultados de población de no normalidad se efectuará un test de Kruskall Wallis o Man Whitney con un nivel de confianza del 95% y 5% de error. Resultados:
Responder los objetivos planteados, esperando identificar que concentración de arrayán (Myrtus communis) es más efectiva como inhibidor del microorganismo Prevotella melaninogénica, además de compararlos entre sí y con la hexetidina como agente químico antimicrobiano.
Palabras claves: EFECTO INHIBITORIO / INFUSIÓN DE ARRAYÁN
(MYRTUS COMMUNIS) / HEXETIDINA /PREVOTELLA MELANINOGENICA
xv
Topic: “Inhibitory effect of arrayan (myrtus communis) in infusion and hexetidine
in front of the prevotella melaninogenica. In vitro studio”
Author: Christian Alejandro Diaz Pilaluisa
Tutor: Dra. Marina Antonia Dona Vidale
ABSTRACT
Periodontal diseases are the result of uncontrolled growth of the population of microorganisms housed in the oral cavity, which make up the buccal biofilm. Among the large number of microorganisms that compose it is the melaningenic
prevotella, bacterium that causes gingivitis, periodontitis, infections of the root canals, abscesses of dental origin and responsible for halitosis. Objective: To establish the inhibitory effect in vitro of the infusion of myrtle (Myrtus communis) in different concentrations and hexetidine on strains of melanothogenic prevotella. Methodology: Experimental, in vitro, cross-sectional and comparative study applied to a population of 20 box preti with melanotonogenic prevotella strains to which disks impregnated with arrayan infusion (Myrtus communis) at concentrations of 50% and 100% will be added, as well as hexetidine as a positive control and physiological saline as a negative control, taken to incubation in an anaerobic hood at a temperature of 37ºC for 48 hours. To determine the antimicrobial effect, the halo that formed around the disk will be measured with a millimeter rule, using the reference scale of the classification established by Duraffourd, finally the data obtained will be recorded in a data collection sheet, using the program SPSS, verifying if the data come from a normal population, for which a test of Shapiro Will will be carried out (<50 samples), of proceeding from normal data, an ANOVA and Tukey test will be performed, in case of results of non-population. Normally a Kruskall Wallis or Man Whitney test will be performed with a confidence level of 95% and 5% error. Expected results: Responding to the proposed objectives, hoping to identify which concentration of myrtle (Myrtus
communis) is more effective as an inhibitor of the melanothogenic prevotella microorganism, in addition to comparing them with each other and with hexetidine as an antimicrobial chemical agent.
Key Words: INHIBITORY EFFECT / MYRTLE ARRAY INFUSION
(MYRTUSCOMMUNIS) / HEXETIDINE / MELANINOGENIC PREVOTELLA
1
INTRODUCCIÓN
Entre la gran cantidad de microorganismos que componen el biofilm se encuentra
la Prevotella melaninogenica, la cual es una de las bacterias causantes de la
gingivitis, periodontitis, infecciones de los conductos radiculares, abscesos de
origen dentario y responsable de la halitosis, que por lo general son consecuencia
del crecimiento descontrolado de la población de microorganismos alojados en la
cavidad bucal(1).
La Prevotella melaninogenica es una bacteria perteneciente al género Prevotella,
parte de la familia Bacteroidaceae, caracterizada por ser un microorganismo
bacteriano con forma de bacilos anaerobios estrictos, inmóviles y no esporulados,
productores de pigmento negro o marrón, característica que sirve para clasificarlos
como pigmentadas o no pigmentadas. En el caso de la Prevotella melaninogenica
residente en la cavidad bucal es considerado un microorganismo patógeno del
periodonto(2).
Para eliminar o disminuir este tipo de bacterias patógenas es fundamental el
tratamiento periodontal, aplicando métodos mecánicos y químicos como requisito
para el control de la infección y la mejora clínica, tales como la hexetidina, que es
una sustancia a la que se le atribuyen propiedades antisépticas, así como la de
acelerar la cicatrización post-cirugía periodontal con acción inhibitoria limitada de
la placa(3).
No obstante, estos tratamientos no eliminan todas las bacterias periodonto-
patógenas, por lo que han surgido alternativas menos costosas a través de
compuestos naturales obtenidas de plantas que sirven de mecanismo preventivo por
el efecto desinfectante y antiséptico que poseen, entre las cuales se encuentra el
arrayán (Myrtus communis), planta muy utilizada en la medicina tradicional por la
comprobada acción antiséptica, astringente, hipoglucemiante, antioxidante y
antimicrobiana(4).
2
Es por ello que se planteó la presente investigación, con la finalidad de determinar
el efecto inhibitorio de la infusión de arrayán (Myrtus communis) en diferentes
concentraciones sobre cepas de Prevotella melaninogenica y compararlo con la
hexetidina, mediante un estudio in vitro a las 48 y 72 horas.
3
CAPÍTULO I
1. MARCO TEÓRICO
1.1. Prevotella melaninogenica
El género Prevotella es un componente principal de la microflora humana en una
variedad de sitios del cuerpo, incluyendo la boca, el tracto gastrointestinal y la
vagina. Además, varias especies de Prevotella han sido implicadas en las
infecciones purulentas. La infección dentoalveolar es quizás la infección purulenta
más común tratada en clínicas de cirugía oral y se ha evidenciado que este tipo de
infecciones están asociadas con una variedad de especies de Prevotella, que pueden
aislarse del sitio de infección(10).
1.1.1. Definición
La Prevotella melaninogenica es una bacteria perteneciente al género Prevotella,
que forma parte de la familia Bacteroidaceae, caracterizadas por ser
microorganismos bacterianos con forma de bacilos anaerobios estrictos, inmóviles
y no esporulados, productores de pigmento negro o marrón, característica que sirve
para clasificarlos como pigmentadas o no pigmentadas. Generalmente se encuentra
relacionada con el desarrollo de abscesos pulmonares y cerebrales, empiema
(infección diseminada desde el pulmón), patología inflamatoria pélvica y abscesos
tubo ovarios. En el caso de las especies residentes en la cavidad bucal mayormente
son considerados microorganismos patógenos del periodonto(2).
1.1.2. Estructura Prevotella melaninogenica
La Prevotella melaninogenica es una bacteria gramnegativa. Entre la pared celular
externa e interna, las proteínas de la membrana están presentes para descomponer
e hidrolizar los nutrientes. La bacteria Gram-negativa tiene un periplasma grande
en el que tiene lugar la degradación de las enzimas, la unión a las proteínas y la
4
impresión del entorno, estudios recientes han encontrado que la enzima que procede
de la actividad de precinasa se encuentra en la superficie y dentro de esta bacteria(11).
1.1.3. Factores de virulencia
La Prevotella melaninogenica juega un papel importante en las infecciones
subcutáneas transmisibles producidas por mezclas complejas de bacterias orales
nativas. Tiende a producir sulfuro de hidrógeno, amoníaco y sustancias citotóxicas,
inhibiendo la fagocitosis y la muerte de otras bacterias, también estimula el sistema
inmune del huésped para producir sustancias con potencial de eliminación de tejido
y se asocia con la capacidad para convertirse en hemolisina, por lo tanto, es capaz
de lisar los eritrocitos como los glóbulos rojos(12).
Se ha comprobado que la Prevotella melaninogenica actúa como factor de
virulencia en muchos microorganismos patógenos médicamente relevantes, junto
con la capacidad para lisar glóbulos rojos, también puede lisar otras células, como
células cebadas, neutrófilos y células polimorfonucleares. Esta bacteria daña
directamente los tejidos del huésped e induce una respuesta inflamatoria. Sin
embargo, la producción de hemolisina se produce sólo en condiciones limitantes de
hierro; se encontró que el magnesio y el calcio inhiben la reacción. Esta actividad
también se puede encontrar en fracciones subcelulares tales como citoplasma,
membrana externa y fracciones vesiculares (Prevotella melaninogenica), afectando
a la neuraminidasa, la colagenasa, las inmunoglobulinas G e IgA específicas(10).
1.2. Fisioterapia
La fitoterapia es un campo de la medicina que utiliza las plantas para tratar
enfermedades o como agentes promotores de la salud. El uso tradicional con
fitoterapias generalmente conserva la composición original y la integridad de la
planta de origen, de modo que la planta completa o un porcentaje representativo de
los componentes mínimamente adulterados son utilizados con fines medicinales.
5
Varias tradiciones médicas utilizan terapias basadas en plantas, que incluyen
medicina antroposófica, medicina naturista, medicina tradicional china, medicina
ayurvédica y medicina alopática(13).
Los médicos y proveedores pueden usar tratamientos de una sola hierba, hierbas
múltiples que se cree que tienen propiedades complementarias, o mezclas con
sustancias no herbarias, como minerales y vitaminas. El uso más tradicional de la
fitoterapia a menudo incluye toda la parte de la planta, tales como las infusiones o
té, mientras que la medicina natural occidental es más común el uso de hierbas
estandarizados individuales a un componente del extracto(14).
En contraste, las medicinas farmacéuticas derivadas de plantas son típicamente
compuestos aislados a través de la separación industrial y la extracción de
componentes identificados con propiedades terapéuticas(13).
1.3. Myrtus communis (Arrayán)
El arrayán (Myrtus communis), también conocido como mirto, es una conocida
planta medicinal que se ha utilizado en todo el mundo en la medicina tradicional.
La familia de las mirtáceas incluye 100 géneros y 3000 especies. El género Myrtus
pertenece a esta familia de arbustos perennes o árboles pequeños, que crecen
espontáneamente de hasta 5 m de alto. Es nativa del sur de Europa, el norte de
África y Asia occidental y también se distribuye en América del Sur, el noroeste
del Himalaya y Australia(15).
1.3.1. Descripción
La planta de arrayán tiene entre 2,4 y 3 m de altura y las ramas forman una cabeza
completa, cubierta densamente de hojas, las cuales son pequeñas y verdes y las
frutas son pequeñas y oscuras(16). Las hojas perennes tienen entre 2 y 5 cm de largo
y aromático después de la trituración, como en el caso de la mirra o el eucalipto. El
sabor es amargo e intenso, debido principalmente a la astringencia(17)
6
Las flores son como estrellas, blancas o rosadas y muy fragantes. La baya azul-
negra redonda contiene varias semillas. La polinización es hecha por insectos y las
semillas son dispersadas por aves que comen las bayas. (18)
1.3.2. Taxonomía
Tabla 1. Clasificación taxonómica de Myrtus communis
Reino Plantae División Magnoliophyta Clase Magnoliopsida Subclase Rosidae Orden Myrtales Familia Myrtaceae Subfamilia Myrtoideae Tribu Myrteae Género Myrtus
Especie M. communis L. Fuente: Serce et al. 2010. (19)Actividades antioxidantes y composición de ácidos grasos de frutos de mirto silvestre (Myrtus communis L.)
1.3.3. Composición química
La planta contiene fibras, azúcares y antioxidantes y muchos compuestos
biológicamente activos. Los compuestos fenólicos, flavonoides y antocianinas son
los principales fitoquímicos en las bayas. Las semillas rinden 12-15% de un aceite
graso (aceite fijo) que consiste en glicéridos de ácido oleico, linoleico, mirístico,
palmítico, linolénico y ácido láurico. Los estudios sobre el análisis de ácidos grasos
de mirtos mostraron que contiene 14 ácidos grasos, siendo el ácido oleico el ácido
graso dominante (67.07%) seguido por ácido palmítico (10.24%) y ácido esteárico
(8.19%)(19).
El aceite de mirto es el aceite esencial de Myrtus communis, que se extrae de las
hojas, ramas, frutos y flores a través de la destilación al vapor. Es de color amarillo
o amarillo verdoso con un característico olor refrescante. El rendimiento y la
calidad del aceite dependen de la región de producción, la temporada de cosecha y
la duración de la destilación. Los rendimientos de aceite (p/p) de diferentes partes
de la planta son diferentes. Los rendimientos de los aceites hidrodestilados son:
7
hojas, 0.4-0.5; flor, 0.4; frutos verdes, 0.5; y frutas maduras, 0.02%. Los terpenos y
los alcoholes terpénicos constituyen casi la totalidad de los compuestos volátiles
del aceite esencial. Los cinco compuestos terpenoides (acetato de mirtenilo, 1, 8-
cineol, limoneno, linalool) están presentes en el aceite de la hoja (0.19-0.37%),
frutas (0.03-0.13%) y flores (0.21-0.26%) pero en diferentes proporciones(20).
1.3.4. Propiedades medicinales
Las bayas se usan como antiséptico, astringente, carminativo, emenagogo,
demulcente, desecante, analgésico, tónico capilar, hemostático, antiemético,
litotripsico, cardiotónico, diurético, antiinflamatorio, estomacal, tónico cerebral,
hemostático, nefroprotector, antídoto, antidiapofórico y antidiabético. Diversas
acciones farmacológicas de las hojas son astringentes, antisépticas,
hipoglucemiantes, laxantes, analgésicas, hemostáticas, tónicas capilares y
estimulantes. Se informa que la raíz tiene propiedades antibacterianas. En medicina
popular, se usa una decocción de hojas y frutas como enfermedades estomacales,
hipoglucemiantes, antimicrobianas, de la tos y bucales, para el estreñimiento,
apetitoso, antihemorrágico y externamente para la curación de heridas(16).
1.3.5. Aplicación del Myrtus communis en odontología
Mohammadreza et al. 2014 (21), en estudio realizado con la finalidad de evaluar la
actividad antimicrobiana de Myrtus communis, en pacientes con contaminación a
nivel de conductos radiculares y, Salvagnini et al. 2008 (22)que realizo su
investigación de reacción o inhibición en cultivos frente a otras bacterias utilizaron
aceite esencial crudo y el extracto de etanol crudo con las hojas de Myrtus
communis y verificaron que presentaban una actividad antimicrobiana discreta
contra bacterias patógenas, los halos de inhibición del crecimiento se evaluaron
mediante las técnicas de "molde" y de difusión en disco a las cepas Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichiacoli, Bacillus subtilis y Serratia
marcescens. Los resultados demostraron que el aceite de M. communis presentó una
actividad antibacteriana superior para todas las cepas.(21)(22)
8
Asimismo, Rasaide et al. 2017(23), desarrollaron una investigación con la finalidad
de evaluar los efectos antimicrobianos de aceites esenciales aislados de Myrtus
communis contra Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis y Streptococcus
salivarius a través de experimentos in vitro.
Utilizaron el método de difusión del disco para evaluar la zona de inhibición del
crecimiento microbiano por diferentes concentraciones, resultando que las hojas de
mirto tenían actividad antimicrobiana en las placas de difusión de disco contra todas
las cepas de Streptococcus, que se analizaron; sin embargo, S. mutants mostraron
una mayor susceptibilidad que otros. El aceite esencial de hojas de mirto podría ser
recomendado como un remedio potencial para la prevención de la colonización de
los dientes por Streptococcus mutants y obstaculizan el desarrollo de caries
dental.(23)
1.4. Antisépticos bucales
Los antisépticos son los fármacos más empleados para el control de placa
bacteriana, considerado el principal método en la prevención y tratamiento de las
enfermedades periodontales, estando cada vez está más extendido el denominado
control químico de la placa de manera complementaria a un control mecánico
ineficaz(3).
1.4.1. Definición
Los antisépticos bucales son sustancias empleadas para complementar la
eliminación mecánica de la placa produciendo un efecto antimicrobiano en toda la
boca. Los agentes químicos presentes en el enjuague bucal deben ser efectivos para
modificar la microbiota eliminando selectivamente los patógenos sin afectar
9
negativamente la flora normal que puede resultar en un sobrecrecimiento de
organismos patógenos(24).
1.4.2. Propiedades específicas del antiséptico
Los antisépticos bucales deben cumplir con requisitos básicos para lograr un
eficiente control de la placa dental, entre los cuales se puede mencionar(3):
i. Especificidad: El control de placa no debe fundamentarse en antibióticos,
estos deben ser reservados para uso sistémico en infecciones dentales o
enfermedades sistémicas específicas.
ii. Eficacia: Las dosis involucradas en la terapiase encuentra determinada por la
concentración mínima inhibitoria para las bacterias asociadas a patologías
dentales. Por tanto, debido a la naturaleza no específica de la placa dental, las
características antimicrobianas de los antisépticos bucales los convierten en
los fármacos de elección.
iii. Sustantividad: Para el tratamiento de infecciones dentales ésta es una
cualidad muy importante, ya que el agente antimicrobiano necesita cierto
tiempo de contacto con el microorganismo para inhibirlo o eliminarlo, a
diferencia de las infecciones sistémicas en las que el tiempo de contacto
deseado puede obtenerse mediante aplicaciones periódicas parenterales o
enterales del fármaco.
iv. Seguridad: Los agentes antimicrobianos se han ensayado extensamente con
lo que el uso está avalado científicamente. La seguridad de un fármaco viene
condicionada por su permeabilidad y el potencial de toxicidad.
v. Eficacia intrínseca: Porcentaje de efecto máximo que puede conseguirse con
las limitaciones de solubilidad del agente. No todos los agentes utilizados,
10
son capaces de conseguir por enjuagues una supresión completa del
crecimiento bacteriano.(3)
1.4.3. Tipos de antisépticos
De acuerdo a la estructura química los antisépticos se clasifican en: componentes
fenólicos, componentes de amonio cuaternario, agentes oxigenantes, extractos de
hierbas, biguanidas, bipiridinas, pirimidinas, halógenos y sales de metales
pesados(3).
1.4.3.1. Hexetidina
Roberts & Addy 1981, Ashley 1984, Wile et al. 1986 determinan que la hexetidina
es un antiséptico de amplio espectro, activo in vitro e in vivo contra de
las bacterias grampositivas y gramnegativas, así como las levaduras (Candida
albicans).
Presenta inhibición y reducción significativas al ser utilizadas en pacientes que
presentan placa supragingival, asi como la reducción en la inflamación que se
puede presentar en encías, teniendo sustantividad para gingivitis, placa y sangrado
gingival, respectivamente. (26)
Derivado de pirimidina al que se le atribuyen propiedades antisépticas así como la
de acelerar la cicatrización postcirugía periodontal, además, posee acción
inhibitoria limitada de la placa, acción que es reforzada con las sales de Zinc(25).
La sustantividad es de 1-3 horas, por tal motivo se lo clasifica como antiséptico de
primera generación, al estudiar la efectividad en la curación de úlceras aftosas,
encontraron beneficio sobre una higiene oral convencional concentración del 0,1% (26).
11
CAPÍTULO II
2. EL PROBLEMA
2.1. Planteamiento del problema
De acuerdo a la evidencia científica la Prevotella melaninogenica es una de las
bacterias causantes de la gingivitis, periodontitis, infecciones de los conductos
radiculares, abscesos de origen dentario y responsable de la halitosis(1). Para
disminuir estas bacterias patógenas han surgido alternativas menos costosas usando
diversas sustancias naturales obtenidas de plantas que sirven de mecanismos
preventivos por el efecto desinfectante y antiséptico que alcanzan, entre los cuales
se encuentra el arrayán (Myrtus communis), muy utilizada con la medicina
milenaria tradicional por la comprobada acción antiséptica, astringente,
hipoglucemiante, antioxidante y antimicrobiana(4).
Los investigadores Hashemipour et al.(5) realizaron un estudio donde evaluaron la
eficacia de varias plantas entre las cuales se encontraba el Myrtus communis en el
proceso de recuperación de la úlcera bucal, encontrando que la mayor reducción
registrada en el tamaño de la úlcera fue con esta planta, además de detectar un
mayor grosor del epitelio.
También en 2012,Messaoud et al. (4)desarrollaron un estudio con el objetivo de
investigar la actividad antibacteriana de la hoja de Myrtus communis en infusiones
preparadas durante tiempos diferentes, obteniendo como resultado que se evidenció
una actividad antimicrobiana sustancial contra E. coli, P. mirabalis, K. pneumoniae,
S. typhi y S. flexneri. Sn embargo, en el caso de patógenos bucales no hay evidencias
de haber sido probado la infusión de arrayán como factor antimicrobiano.
Por lo tanto, se planteó la presente investigación con el objetivo de establecer el
efecto inhibitorio de la infusión de arrayán (Myrtus communis) en diferentes
concentraciones y hexetidina sobre cepas de Prevotella melaninogenica, mediante
un estudio in vitro.
12
2.2. Formulación del problema
¿Cuál fue el efecto inhibitorio de la infusión natural de arrayán (Myrtus communis)
a las concentraciones de 50% y 100% con respecto al agente químico antiséptico
hexetidina sobre cepas de Prevotella melaninogenica?
2.3. Objetivos
2.3.1. Objetivo general
Establecer el efecto inhibitorio in vitro de la infusión de arrayán (Myrtus communis)
en diferentes concentraciones (50 y 100%) y hexetidina sobre cepas de Prevotella
melaninogenica.
2.3.2. Objetivos específicos
i. Identificar el efecto inhibitorio de la infusión de arrayán (Myrtus communis)
a la concentración de 50% sobre cepas de Prevotella melaninogenica a las
48 y 72 horas.
ii. Identificar el efecto inhibitorio de la infusión de arrayán (Myrtus communis)
a la concentración de 100% sobre cepas de Prevotella melaninogenica a las
48 y 72 horas.
iii. Determinar la acción inhibitoria de la hexetidina al 0,12% sobre cepas de
Prevotella melaninogenica a las 48 y 72 horas.
iv. Comparar el efecto inhibitorio de la infusión de arrayán (Myrtus communis)
a las concentraciones de 50 y 100%.
2.4. Hipótesis
Hipótesis de investigación (H1)
13
a. El efecto inhibitorio de la infusión de arrayán (Myrtus communis) a la
concentración del 100% fue mayor o igual que el efecto inhibitorio de la
infusión de arrayán (Myrtus communis) al 50%.
b. La infusión de arrayán (Myrtus communis) a las concentraciones de 50% y
100% tuvo mayor efecto inhibitorio que la hexetidina al 0,12%.
Hipótesis nula (H0)
a. El efecto inhibitorio de la infusión de arrayán (Myrtus communis) a la
concentración del 100% fue menor que el efecto inhibitorio de la infusión de
arrayán (Myrtus communis) al 50%.
b. La infusión de arrayán (Myrtus communis) a las concentraciones de 50% y
100% NO tuvo mayor efecto inhibitorio que la hexetidina al 0,12%.
2.5. Conceptualización de variables
2.5.1. Variables independientes
i Infusión de arrayán (Myrtus communis): Sustancia que se obtiene de
diversas partes del arrayán, a las cuales se les vierte o se los introduce en
agua a una temperatura mayor a la ambiental, pero sin llegar a hervir(28).
ii Hexetidina: Fármaco antiséptico con efecto bacteriostático y de uso tópico
sobre la mucosa oral(3).
iii Suero fisiológico: Solución estéril de cloruro de sodio al 0,9% (p/v) en
agua(29).
14
2.5.2. Variables dependientes
i. Efecto inhibitorio sobre Prevotella melaninogenica: Capacidad que
poseen ciertas sustancias y elementos de inhibir el desarrollo y crecimiento
de Prevotella melaninogenica(2).
2.6. Justificación
Los microorganismos que forman parte del ecosistema de la cavidad bucal no
ocasionan ningún tipo de daño cuando mientras se mantengan en condiciones
normales, sin embargo, cuando se presentan desequilibrios comienzan a
desarrollarse diversas afecciones(6)
Entre las cuales se encuentra la enfermedad periodontal en las diversas etapas y
tipos de manifestaciones en el periodonto, que tienen un origen polimicrobiano(7)
Lográndose identificar los agentes patógenos que intervienen en enfermedades
como gingivitis y periodontitis, entre las cuales están las del género Prevotella,
implicadas y de alta relevancia en el desarrollo de las patologías periodontales(2).
El género Prevotella es fermentativo y sensible a la bilis, incluyendo especies
pigmentadas, es decir, que producen colonias negras en los cultivos, y no
pigmentadas; encontrando entre las pigmentadas la Prevotella melaninogenica con
gran interés clínico por predominar en la boca y ser causante de infecciones
periodontales, abscesos peribucales y afecciones respiratorias(8,9).
Como un método alternativo y de bajo costo con respecto a agentes antisépticos
químicos existentes en el mercado para aliviar este tipo de afecciones en el área
odontológica se aplica la fitoterapia, encontrando el arrayán (Myrtus communis), el
cual es conocido como una planta medicinal y aromática perteneciente a la familia
Myrtaceae, muy extendida en las regiones mediterráneas, utilizada desde la
15
antigüedad con fines alimenticios y medicinales, siendo frecuentemente consumido
como una infusión y decocción en la medicina tradicional, debido al efecto
estimulante, antiséptico, astringente, hipoglucemiante, antioxidante y
antimicrobiano(4).
En el Ecuador esta planta se cultiva como ornamental, usando las hojas, flores y
frutos para la obtención de aceites aromáticos, usándose también como antigripal y
antiséptico en forma de infusión, quedando evidenciado el efecto antimicrobiano
en investigaciones como las de Hashemipour et al.(5)y Messaoud et al.(4).
Por tanto, el presente estudio permitió establecer el efecto inhibitorio de la infusión
de arrayán (Myrtus communis) en diferentes concentraciones y compararlo con la
hexetidina, que es el agente antiséptico usado para el tratamiento de procesos
infecciosos orales y halitosis, sobre cepas de Prevotella melaninogenica.
La finalidad es el identificar cuál de los dos productos es más efectivo para controlar
la proliferación del microorganismo dentro de la cavidad bucal, planteando de
acuerdo a los resultados obtenidos una alternativa natural que minimice las
patologías orales infecciosas, permitiendo incorporar compuestos derivados de esta
planta como tratamientos alternativos de bajo costo dentro de los tratamientos
clínicos y políticas públicas de prevención y control de enfermedades bucales para
beneficio de la salud oral de la comunidad en general.
16
CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA
3.1. Tipo de investigación
El estudio planteado fue de tipo experimental, in vitro, transversal y comparativo.
i. Experimental: se usó este tipo de diseño, donde el investigador modificó
el factor de la concentración de la infusión de arrayán (Myrtus communis)
al 50% y 100%, para verificar el efecto inhibitorio sobre el microorganismo
Prevotella melaninogenica posterior a las 48 y 72 horas.
ii. In vitro: El procedimiento se desarrolló dentro de un ambiente controlado
de laboratorio, siguiendo de manera estricta las normas de bioseguridad
establecidas. Se recolectaron las muestras obtenidas de inocular infusión de
arrayán (Myrtus communis) a distintas concentraciones en cápsulas Petri
con cepas de Prevotella melaninogenica.
iii. Transversal: Los datos se obtuvieron una sola vez, durante el proceso
experimental.
iv. Comparativo: Se realizó un análisis de la diferencia en el efecto inhibitorio
sobre el microorganismo Prevotella melaninogenica que posee la infusión
de arrayán (Myrtus communis) a distintas concentraciones y la hexetidina
3.2. Población de estudio y muestra
La población estuvo constituida por un número infinito de cepas microbianas de
Prevotella melaninogenica que fueron adquiridas en MEDIBAC, proveedor
integral para laboratorios.
17
La muestra fue no probabilística, por tanto la selección se realizó a través de
muestreo por conveniencia, utilizando 20 cajas Petri con cepas Prevotella
melaninogenica necesarias para investigar la actividad de las distintas
concentraciones de la infusión de arrayán (Myrtus communis), así como de los
controles positivo y negativo, todo de acuerdo a los lineamientos de la investigación
que se realizó en el artículo base de Galarza et al.(27)
3.3. Criterios de inclusión y exclusión
Criterios de inclusión
i. Cajas Petri con cepas de Prevotella melaninogenica no contaminadas.
ii. Hojas de la planta arrayán (Myrtus communis) en buen estado.
iii. Infusión de arrayán (Myrtus communis) a concentraciones de 50% y 100%.
Criterios de exclusión
i. Cajas Petri con cepas de Prevotella melaninogenica que se contaminen
durante el procedimiento.
ii. Cajas Petri con cepas de Prevotella de especies diferentes a la
melaninogenica.
iii. Hojas de la planta arrayán (Myrtus communis) putrefactas o con presencia
de plagas.
iv. Infusión de arrayán (Myrtus communis) a concentraciones diferentes a las
preestablecidas para la investigación.
18
3.4. Operacionalización de las variables
Variable Definición Operacional Tipo Clasificación Indicador Categórico Escala de
Medición
Infusión de arrayán
(Myrtus communis)
Sustancia obtenida de diferentes partes del arrayán, a las cuales se les vierte o se les introduce en agua a una temperatura mayor a la ambiental, sin que llegue a hervir(28).
Independiente Cuantitativa Nominal
Concentración 50% 100%
1 2
Hexetidina
Antiséptico con efecto bacteriostático usado de manera tópica sobre la mucosa oral(3).
Independiente Cuantitativa Nominal
Concentración 0,12%
1
Suero fisiológico Solución estéril de cloruro de sodio al 0,9% (p/v) en agua(29). Independiente Cuantitativa
Nominal Microlitros utilizados en la
prueba 1
Efecto inhibitorio sobre
Prevotella
melaninogenica
Capacidad de ciertas sustancias de inhibir el desarrollo y crecimiento de Prevotella melaninogenica(2).
Dependiente Cuantitativa Nominal
Diámetro de halo de inhibición en milímetros (mm), según Mariani
et al.(30):
Leve = ≤ 6 mm Moderada = Entre 7 mm y 8 mm
Alta = ˃ 8 mm
1 2 3
19
3.5. Estandarización
Antes de iniciar el procedimiento se solicitó los permisos correspondientes a la
Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador para
desarrollar la parte experimental del estudio en el Laboratorio de Análisis Clínico
de esta dependencia. (Anexo A).
Para el estudio planteado se empleó la planta de arrayán (Myrtus communis),
disponible comercialmente en la ciudad de Quito, para obtener infusión en las
concentraciones del 50% y 100%. Por otra parte, la cepa bacteriana de Prevotella
melaninogenica, fueron adquiridas en el laboratorio MEDIBAC, el cual entregó un
certificado de autenticidad de la misma (Anexo B), cultivadas en cápsulas Petri en
incubadora a 37ºC por 48 horas. La turbidez se ajustó al estándar Mc Farland 0,5
para hacer una dilución de 1,5 x 108 UFC/ml, siguiendo el procedimiento
establecido por el Manual de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana(31). En
cuanto a la medición del halo de inhibición se utilizó una regla milimetrada, la cual
estuvo calibrada por el fabricante.
Figura 1 Materiales utilizados
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
20
3.6. Manejo y recolección de datos
El procedimiento experimental se dividió en los siguientes pasos:
1.- Elaboración de la infusión de arrayán (Myrtus communis)
Se realizó la recolección del fruto de arrayán (Myrtus communis) y se extrajo el
material seco y molido mediante el uso de agua destilada hervida, manteniendo el
proceso de maceración por 24 horas en sitio oscuro, para posteriormente ser filtrado
con el objetivo de eliminar sólidos remanentes. Este líquido filtrado fue sometido a
centrifugación a 1000 rpm por una hora (60 minutos) e inmediatamente cumplido
el tiempo fue esterilizado por medio de microfiltros de 0,45 µm. Finalmente el
producto obtenido fue conservado en refrigeración a 4º hasta la experimentación(32).
a b
21
Figura 2: Obtenciones de concentraciones de Planta de arrayan (myrtus communis) 50% y
100% a) Planta de arrayan b) material triturado, c) Maceracion por 24 horas, d) Obtencion
de concentraciones a travez de filtros
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
2.- Obtención de la cepa de Prevotella melaninogenica
La cepa de Prevotella melaninogenica fue adquirida en la empresa MEDIBAC que
importa dichos microorganismos e insumos propios de estudio, localizado en la
ciudad de Quito.
c d
22
Figura 3: Obtención de Prevotella Melaninogénica ATCC ®25845
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
3.- Activación y siembra de la cepa de Prevotella melaninogenica
Para la activación se siguió las instrucciones del fabricante apoyado con la asesoría
de personal encargado del laboratorio Microbiológico de la Facultad de Ingeniería
Ciencias Química de la Universidad Central del Ecuador. Se utilizó un aza
desechable para sembrar la cepa en el medio de cultivo, utilizamos TSB (Caldo de
Tripticasa Soya), este procedimiento se realizó en la cama de flujo laminar para
evitar la contaminación, después se colocó el medio con la cepa sembrada en la
jarra Gaspack y se llevó a incubadora por 24 horas a 36ºC.
23
a b
c d
24
Figura 4 : a) Activación de la cepa de Prevotella Melaninogénica ATCC ®25845, caja petri
con medio de cultivo agar sangre, b) Medio de cultivo liquido TBS, c) Apertura de cepa de
Prevotella Melaninogénica ATCC ®25845, d ) y e) Toma de Prevotella por medio de isopo
para su siembra, f) Siembra en caja petri.
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
e f
6
a b
25
Figura 5: a) siembra en medio sólido y líquido, b) Colocacion en jarra de anaerobios
(Gaspack), c) colocación en medio aislado d) temperatura ambiente
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
4.- Inoculación de Prevotella melaninogenica
Se prepararon 20 cajas Petri con Agar Muller Hinton suplementado con 5% de
sangre, donde se realizó la siembra de la cepa activada de Prevotella
melaninogenica, utilizando un hisopo estéril frotándolo sobre la superficie del agar
y rotando la posición de 60º de ida y vuelta, repitiendo este paso tres veces, con el
objetivo de garantizar la distribución del inóculo de manera homogénea.
c d
26
Figura 6: Rotulación de las 20 cajas petri
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
Tomamos un hisopo estéril con la cantidad suficiente de bacterias y llevamos la muestra al medio de cultivo agar sangre y realizamos la siembra en las 20 cajas Petri.
Figura 7: Siembra de bacteria Prevotella melaninogenica
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
27
5.- Fórmula Mac Farland y Siembra de discos en cápsulas Petri
Se trabajó dentro de la cámara de flujo laminar, utilizamos 10 ml de Cloruro de
sodio en un tubo de ensayo, se tomó una muestra del cultivo de Prevotella
melaninogenica con un asa estéril llevamos una cantidad de bacteria hacia el tubo
de ensayo, se mezcla bien y medimos la concentración del tubo con una turbidez a
la escala 0.5 Mc. Farland.
Figura 8: Fórmula Mac Farland
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
Con la ayuda de una pinza estéril se colocó sobre cada placa de agar inoculado con
Prevotella melaninogenica cuatro discos de papel de aproximadamente 6 mm, a
una distancia no menor de 15 mm entre cada disco y 1,5 cm del borde de la caja.
28
Figura 9: Materiales a usar en procedimiento experimental
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
Figura 10: Separación de discos estériles con pinzas para colocar en cajas petri.
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
Cada uno de estos discos fueron impregnados con infusión de arrayán (Myrtus
communis) al 50%, infusión de arrayán (Myrtus communis) al 100%, hexetidina al
0,12% como control positivo y suero fisiológico como control negativo, llevándose
a incubación en campana de anaerobios a una temperatura de 37ºC por 48 horas y
72 horas para determinar su efecto.
29
Figura 11. Discos impregnados:1) Infusión de arrayán 50%, 2) Infusión de arrayán al
100%, 3) Hexetidina, 4) Suero fisiológico.
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
1
3
2
4
30
Figura 12. Incubación de bacteria Prevotella melaninogenica en jarra de anaerobios y puesto
a incubación.
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
6.- Evaluación del efecto inhibitorio
Para determinar el efecto antimicrobiano, se medió con una regla milimetrada el
halo que se formó alrededor del disco, utilizando la escala de referencias de la
clasificación establecida por Mariani et al(30):
31
i. Leve = ≤ 6 mm
ii. Moderada = Entre 7 mm y 8 mm
iii. Alta = ˃ 8 mm
Cabe recalcar que la medición se realizó a las 48 y 72 horas.
Figura 13. Halos de inhibición a las 48 horas
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
Figura 14. Medición halos de inhibición a las 72 horas
Fuente: Investigador
Elaboración: autor
32
3.7. Análisis estadístico
Los datos obtenidos se registraron en una hoja de recolección de datos (Anexo C),
para posteriormente realizar tablas y gráficas de los valores descriptivos (media,
frecuencia, porcentaje) para la correcta interpretación, utilizando el programa
SPSS, verificando si los datos provienen de una población normal, para lo cual se
realizó un prueba de Shapiro Will (< 50 muestras), de proceder de datos normales
se realizó una prueba ANOVA y Tukey, en caso de ser resultados de población de
no normalidad se efectuó un Test de Kruskall Wallis o Mann Whitney, con un nivel
de confianza del 95% y 5% de error.
3.8. Aspectos bioéticos
Beneficencia
La información obtenida con la investigación aportó información actualizada que
puede ser utilizada como material de referencia, tanto para los profesionales en el
área odontológica como a los estudiantes de odontología; asimismo, estableció
bases para desarrollar futuros estudios con los resultados y recomendaciones que se
alcancen. También fue de gran utilidad para los profesionales de salud bucal por
cuanto obtuvieron nuevos conocimientos concernientes a la prevención de
patologías orales causadas por Prevotellamelaninogenica,
Riesgos potenciales del estudio
No existieron riesgos en la investigación, debido que la metodología empleada no
comprometió la salud o integridad física del investigador. Sin embargo, siempre
existen riesgos de contaminación durante el análisis microbiológico, consecuencia
del manejo de las muestras, lo cual se controló haciendo uso de las Normas
Generales de Bioseguridad de la Facultad de Odontología de la Universidad Central
de Ecuador (Anexo E), las cuales se basaron en los lineamientos sugeridos por el
33
Ministerio de Salud sobre el Manejo de desechos infeccioso, en el Art 9. Además,
se utilizó el equipo de protección personal (guantes, mascarillas, batas) adecuado
para el ensayo microbiológico y se realizó un correcto manejo de los desechos
infecciosos una vez finalizados los procedimientos, recolectándolos y rotulando en
una funda plástica infectocontagiosa que fueron almacenados en el contenedor de
desechos infecciosos del Laboratorio de la Facultad para finalmente ser enviados a
la empresa encargada. (Anexo F)
Beneficios potenciales del estudio
Beneficio directo: Fue de apoyo para el investigador por cuanto le permitió adquirir
nuevos conocimiento que pondrá en práctica durante la vida profesional.
Beneficio indirecto: Dirigido a los especialistas del área de odontología y los
pacientes, debido a que el resultado de la investigación fue fundamentado en un
producto natural que permita evitar infecciones y patologías orales como
consecuencia de Prevotella melaninogenica, optimizando de esta manera la
atención recibida.
Idoneidad ética y experticia del estudio - Conflicto de intereses
Establecido por un certificado reflejado en los Anexos G y H.
La declaración de conflicto de intereses se encuentra señalado en los Anexos I y J.
34
CAPÍTULO IV
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS
4.1. Resultados
El estudio está compuesto por 20 muestras que contienen la infusión de arrayán de
50 y 100%, Hexetidina y suero fisiológico entre 48 y 72 horas.
Tabla 2. Resultados de la infusión de arrayán, hexetidina y suero fisiológico
MUESTRAS
INFUSIÓN DE ARRAYÁN HEXETIDINA
0,12% SUERO
FISIOLÓGICO 50% 100%
48H 72H 48H 72H 48H 72H
HALOS DE INHIBICIÓN (mm)*
1 8 8 12 12 17 17 6 2 7 7 11 11 15 15 6 3 8 8 13 13 15 15 6 4 9 9 12 12 15 15 6 5 7 7 13 13 16 16 6 6 8 8 13 13 16 16 6 7 9 9 11 11 15 15 6 8 8 8 13 13 14 14 6 9 9 9 12 12 15 15 6 10 8 8 13 13 16 16 6 11 8 8 11 11 15 15 6 12 8 8 12 12 16 16 6 13 9 9 13 13 14 14 6 14 9 9 13 13 16 16 6 15 8 8 12 12 14 14 6 16 8 8 12 12 16 16 6 17 9 9 12 12 16 16 6 18 7 7 11 11 16 16 6 19 8 8 13 13 17 17 6 20 7 7 12 12 15 15 6
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
En la tabla 2 se evidencian los resultados finales de la infusión de arrayán (50% y
100%), hexetidina y suero fisiológico.
35
4.1.1. Información descriptiva
En la tabla 3 se presentanlas 20 muestras dónde se describe las medias y desviación
estándar.
Tabla 3. Resultados descriptivos
Estadísticos descriptivos
N Mínimo Máximo Media Desv.
Desviación
Infusión de Arrayán 50% - 48 h 20 7,00 9,00 8,1000 ,71818 Infusión de Arrayán 50% - 72 h 20 7,00 9,00 8,1000 ,71818 Infusión de Arrayán 100% - 48 h 20 11,00 13,00 12,2000 ,76777 Infusión de Arrayán 100% - 72 h 20 11,00 13,00 12,2000 ,76777 Hexetidina 0,1 2% - 48 h 20 14,00 17,00 15,4500 ,88704 Hexetidina 0,1 2% - 72 h 20 14,00 17,00 15,4500 ,88704 Suero Fisiológco 20 6,00 6,00 6,0000 ,00000 N válido (por lista) 20
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Gráfico 1. Medias de halo de inhibición
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Se observa que la infusión de arrayán a 48 y 72 horas tiene una media de 8,1 mm
en concentración del 50% . Similares resultados se presentan con la concentración
al 100% que presentaron una media de 12,2 mm a las 48 y 72 horas, mismo caso
para la hexetidina al 0,12% que tiene una media de 17 mm y el suero fisiológico
tiene una media de 6 mm.
8 8
12 12
17 17
6
48H 72H 48H 72H 48H 72H H
Infusión de arrayán 50% Infusión de arrayán 100% Hexetidina 0,1 2% SueroFisiológico
Medias de halos de inhibición mm
36
Gráfico 2: Efecto de los halos de inhibición
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
De acuerdo a los resultados la infusión de arrayán al 50% tanto a 48 y 72 horas tiene
una situación moderada y alta; mientras la infusión al 100% y hexetidina 0,12%
tiene una situación alta y suero fisiológico es leve.
4.1.2. Estudio estadístico
Para aplicar las pruebas se basa en un nivel de confianza del 95% y 5%. Pero antes
se debe calcular la prueba de normalidad para determinar si los datos provienen de
una distribución normal o no. A continuación se aplica esta prueba.
H0: Los datos provienen de una distribución normal
H1: Los datos no provienen de una distribución normal
Tabla 4Prueba de normalidad
Estadístico gl Sig.
Infusión de Arrayán 50% - 48 h ,812 20 ,001 Infusión de Arrayán 50% - 72 h ,812 20 ,001 Infusión de Arrayán 100% - 48 h ,800 20 ,001 Infusión de Arrayán 100% - 72 h ,800 20 ,001 Hexetidina 0,1 2% - 48 h ,884 20 ,021 Hexetidina 0,1 2% - 72 h ,884 20 ,021 Suero Fisiológico . 20 .
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Infusión dearrayán
50% 48H
Infusión dearrayán
50% 72H
Infusión dearrayán
100% 48H
Infusión dearrayán
100%72H
Hexetidina0,1 2% 48H
Hexetidina0,1 2% 72H
SueroFisiológico
Leve 0% 0% 0% 0% 0% 0% 100%Moderado 68,42% 68,42% 0% 0% 0% 0% 0%Alto 31,58% 31,58% 100% 100% 1005 100% 0%
0%20000%40000%60000%80000%
100000%120000%
Efecto de los halos de inhibición
37
De acuerdo a los resultados de la prueba de normalidad se observa que los datos no
provienen de una distribución normal al considerar que el valor de significancia o
valor p<0,05. Al rechazar la hipótesis nula y aceptar la alternativa.
Considerando esta prueba se debe utilizar las pruebas no paramétricas como el
Krusk Wallis, Mann Whitney y Wilcoxon.
Gráfico 31: Prueba Krusk Wallis
38
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Al comparar entre grupos con esta prueba tanto a 48 y 72 horas entre la infusión de
arrayán, hexetidina 0,12% y suero fisiológico, se evidencia que existe una variación
al comparar en grupos.
Tabla 5Datos comparativos de la Prueba Krusk Wallis
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Mientras la comparación entre variables identifica que existe un efecto inhibitorio
de la infusión de arrayán (Myrtus communis) a la concentración del 100% fue mayor
o igual que el efecto inhibitorio de la infusión de arrayán (Myrtus communis) al
50%. Pero la infusión de arrayán (Myrtus communis) a las concentraciones de 50%
y 100% no tuvo mayor efecto inhibitorio que la hexetidina al 0,12%.
39
4.1.2.1. Prueba Wilcoxon para muestras relacionadas
Después de comparar entre grupos se procede a la comparación entre cada una de
las variables tanto a 48 y 72 horas.
Tabla 6. Comparación de la infusión de 48 a 72 horas (Prueba de Wilcoxon)
Comparación de la infusión de 48 a 72 horas
Prueba
de
Wilcoxon
Z Sig. asintótica(bilateral)
Infusión de Arrayán 50% de 48 a 72 h ,000 1
Infusión de Arrayán 100% de 48 a 72 h ,000 1
Hexetidina 0,1 2% de 48 a 72 h ,000 1 Comparación de la infusión de arrayán de 50 al 100% de 48 a 72 horas
Prueba
de
Wilcoxon
Z Sig. Asintótica(bilateral)
Infusión de Arrayán 50% de 48 a 100% de 48 h -3,965 0,000
Infusión de Arrayán 50% de 72 a 100% de 48 h -3,965 0,000
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Como se evidencia en la tabla 6 al comparar tanto la infusión de arrayán al 50% y
100% como la Hexetidina al 0,12% de 48 a 72 horas, se evidencia que no existe
variación porque son iguales a 1.
Al comparar entre concentraciones de la infusión de arrayan se evidencia que el
100% es mayor que el 50% tanto en 48 y 72 horas.
40
4.1.2.2. Prueba Mann Whitney para muestras independientes
Tabla 7. Comparación infusión de arrayán al 50% de 48 y 72 horas con Hexetidina al 0,12%
(Prueba de Mannn Whitney) Comparación de la infusión de arrayán al 50% de 48 y 72 horas con Hexetidina al 0,12%
U de Mann-Whitney
Concentraciones Z Sig. asintótica(bilateral)
Infusión de Arrayán 50% de 48 con Hexetidina 0,12% 48 horas 400,00 0,000
Infusión de Arrayán 50% de 72 con Hexetidina 0,12% 72 horas 400,00 0,00
Comparación de la infusión de arrayán 100% de 48 y 72 horas con Hexetidina 0,12 48 y 72 horas
U de Mann-Whitney
Concentraciones Z Sig. asintótica(bilateral)
Infusión de Arrayán 100% de 48 con Hexetidina 0,12% 48 horas 400,00 0,000
Infusión de Arrayán 100% de 72 con Hexetidina 0,12% 72 horas 400,00 0,00
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
Gráfico 4: Comparación infusión de arrayán al 50% de 48 y 72 horas con Hexetidina al 0,12%
(Prueba de Mannn Whitney)
Fuente y elaboración: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa
41
Al comparar la infusión de arrayán de 50% y 100% de concentración con la
hexetidina 0,12% a 48 y 72 horas se existe una diferencia, dónde el segundo grupo
es mayor que la primera.
Tabla 8. Comparación de la infusión de arrayán 50%-100% y hexetedina 0,12%de 48 y 72
horas con suero fisiológico
Comparación de la infusión de arrayán 50% de 48 y 72 horas con suero fisiológico
U de Mann-
Whitney
Concentraciones Z Sig. Asintótica(bilateral)
Infusión de Arrayán 50% de 48 horas con suero fisiológico 0,00 0,00
Infusión de Arrayán 50% de 72 horas con suero fisiológico 0,00 0,00
Comparación de la infusión de arrayán 100% de 48 y 72 horas con suero fisiológico
U de Mann-
Whitney
Concentraciones Z Sig. Asintótica(bilateral)
Infusión de Arrayán 100% de 48 horas con suero fisiológico 400,00 0,000
Infusión de Arrayán 100% de 72 horas con suero fisiológico 400,00 0,00
Comparación de la hexetidina 0,12% de 48 y 72 horas con suero fisiológico
U de Mann-
Whitney
Concentraciones Z Sig. Asintótica(bilateral)
Hexetedina 0,12% de 48 horas con suero fisiológico 0,00 0,00
Hexetedina 0,12% de 72 horas con suero fisiológico 0,00 0,00
No existe diferencia en la comparación de la infusión de arrayán al 50%-100% y hexetedina al 0,12% de 48 y 72 horas con el suero fisiológico.
42
4.2. Discusión
La Prevotella melaninogenica es de gran interés clínico por predominar en la boca
y ser causante de infecciones periodontales, abscesos peribucales y afecciones
respiratorias(8,9),
Carroll et al. (8) y Borsanelli et al.(9) han tratado de buscar alternativas naturales para
contrarrestar el efecto de proliferación a nivel de cavidad bucal que produce esta
bacteria gram negativa.
Existe similitud con el estudio de Al-Saimary y cols (33) ya que estudiaron la
actividad antibacterial de algunos extractos de plantas (extractos acuosos de hojas
de Myrtus communis y Eucaliptus) y la prueba en comparación con los antibióticos
estándar, a la concentración de 100% (1000mcg/ml) del extracto acuoso reporto un
promedio de halo de inhibición de 14 mm, mientras que en mi investigación
presento un efecto inhibitorio sobre Prevotella melaninogenica de 12,2 mm según
la clasificación de Mariani y cols.(30)
Los autores manifiestan que es un excelente efecto sobre el crecimiento de a
bacteria gran negativa, atribuyen este comportamiento a la combinación de los
compuestos fenolicos del extracto de la planta que causan un efecto negativo a las
membranas celulares de la bacteria, causando filtración de materiales celures y, en
ultima instancia, la erradicación del microorganismo (34).
De igual manera la investigación de Messaoud y cols. (4), coincide con mi
investigación, donde determinaron la actividad antibacteriana de la infusión de la
hoja de arrayán (Myrtus communis) y la composición fenólica, con respecto a cinco
bacterias (Salmonella typhi, Proteus mirabilis, E. coli, Klebsiella pneumoniae, and
Shigella flexner), identificando que existe una inhibición de la infusiones
contrabacterias gram negativas, específicamente la Proteus mirabilisy Shigella
flexner(halos de inhibición mayores a 20 mm), aducen que este comportamiento
posiblemente se debe a las propiedades antimicrobianas de las infusiones deMyrtus
43
communis están asociadas con los altos contenidos de polifenoles y monoterpenos
oxigenados, de los cuales los terpenos oxigenados, como el 1,8-cineol, linalool y α-
terpineol, muestran una potente actividad antibacteriana contra bacterias gram
negativos.
Sin embargo, Mert y cols(35), difieren con respecto a mi investigación ya que ellos
investigaron sobre las actividades antimicrobianas y citotóxicas del extracto con n-
hexano, metanol, etanol, acetato de etilo y la infusión de hojas de Myrtus communis
sobre siete microorganismos, esto fue realizado en Turquía, manifestando que el
efecto antimicrobiano de la infusión con la bacteria Gram negativa Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853 fue de 8 mm.
Este mismo comportamiento se evidenció en los otro métodos de extracción,
demostrando mayor efecto en las bacterias Gram positivas (Staphylococcus aureusy
Staphylococcus epidermidis), sobre esto Aleksic y cols. 2014,(36)expresan que
generalmente las bacterias Gram negativas son más resistentes a los extractos de
plantas y aceites esenciales que los Gram positivos.
Este diferimiento con los resultados de mi estudio se puede atribuir a las diferentes
condiciones de crecimiento ambiental de la planta utilizada, también el tiempo y
forma de elaboración de la infusión, estos factores pueden impactar los resultados
y dificultar las comparaciones entre las investigaciones(37).
Revisando los resultados obtenidos en mi investigación se puede constatar que con
una infusión de 50% de arrayan con un halo inhibitorio de 8,1 mm a las 48 y 72
horas (efecto moderado), lo cual coincide con el estudio realizado por Guasgua, J.
2017,(38) quien con un extracto etanólico de 50% obtuvo un halo promedio de 7,00
mm frente a la bacteria Porphyromonas gingivalis; aunque en la actual
investigación se estudió con respecto a la Prevotella melaninogenica, ambas son
bacteriasGram negativa, anaerobia facultativa y forman parte de la microbiota de la
cavidad oral.
44
Con respecto al acción de la hexetidina al 0,12% muestra concordancia con el
estudio de Parčina y cols. 2017 (39), la capacidad antimicrobiana de pastas dentales
con probióticos y enjuague dentales (uno a base de hexetidina), frente a las
microorganismos Candida albicans, Candida tropicalis, Enterococcus faecalis,
Streptococcus salivarius y Staphylococcus aureus, demostraron un halo de
inhibición entre 11 a 28 mm, dependiendo del microorganismo,mientras que mi
estudio determinó una media del halo de inhibición de 15,45 mm (efecto inhibitorio
alto)
Se evidenció en mi investigación que existió diferencia significativa entre el halo
de inhibición con la infusión de Myrtus communis a las concentraciones de 50% y
100% con respecto a la hexetidina al 0,12% (15,45 mm), sin embargo la hexetidina
presenta el mismo efecto inhibitorio que la concentración de la infusión de la planta
al 100% (alto efecto inhibitorio).
Existióconcordancia parcial con la investigación de Alvarado y Moromi. 2010(41),
y mi investigación, el halo de inhibición de los extractos hidroalcohólico de las tres
plantas estudiadas (Plantago major L. (llantén), Erythroxylum novograntense
vartruxillense (coca trujillo) y Camellia sinensis (té verde) frente a la Prevotella
melaninogenicaestuvo en el rango de 10,4 a 15,2 mm (efecto inhibitorio alto) y al
compararlo con la clorhexidina al 0,12% (17 mm), reportó una diferencia
significativa, no obstante el efecto inhibitorio de las plantas y de la clorhexidina es
alto en función de la escala de Mariani y cols. (30) (Alta = ˃ 8 mm), la cual fue la
utilizada en la actual investigación.
Los hallazgos de mi investigación difieren del estudio de Taheri y cols (41), el
extracto hidroalcohólico de las hojas de Myrtus communis se evaluó en 4
concentraciones, incluidas 10-80 m/ml en cuatro cepas de bacterias patógenas y
comparadas con cuatros antibióticos, evidenciando que el extracto en ninguna de
las concentraciones demostró efecto antibacteriano sobre la Pseudomonas
aeruginosa, solo con la gentamicina reportó un halo de inhibición de 11,29 mm,
45
con esto se evidencia que dependiendo del método de extracción y el
microorganismo, la Myrtus communis. pueden surtir efecto inhibitorio.
Mediante los resultados de mi investigación se determinó que no existió diferencia
significativa entre el halo de inhibición de la infusión de Myrtus communis al 50%
y 100%, lo mismo ocurrió con la hexetidina 0,12% a las 48 y 72 horas de tiempo
de inoculación sobre Prevotella melaninogenica. De acuerdo a Alcalá y cols. 2004,
(41) en el Manual de Procedimiento en Microbiología Clínica, que el crecimiento
visible de las bacterias en las placas Petri conjuntamente con la acción de un
producto antimicrobiano es de 24 a 48 horas (31), sin embargo existen algunas
especies como la Prevotella spp. yPorphyromonas spp, se necesitan de más tiempo
para crecer, con respecto a los datos del actual estudio con 48 horas fue suficiente
para identificar el efecto inhibitorio de los productos utilizados en la presente
investigación.
46
CAPÍTULO V
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1. Conclusiones
En este estudio se identificó el Efecto Inhibitorio de la infusión de arrayan
(myrtus communis) a la concentración de 50% sobre cepas de Prevotella
melaninogenica a las 48 y 72 horas obteniendo una media de 8.1 mm en la
concentración del 50%
Se logró identificar el Efecto Inhibitorio de la infusión de arrayan (Myrtus
communis) en una concentración de 100% sobre cepas de prevotella
melaninogenica a las 48 y 72 horas obteniendo una media de 12.2 mm.
Ante la acción inhibitoria de la hexetidina al 0.12% sobre cepas de
prevotella melaninogenica a las 48 y 72 horas se determinó una media de
17 mm.
Se concluyó, por lo tanto que el Efecto Inhibitorio de la infusión del arrayan
(myrtus communis) a las concentraciones de 50 y 100% se obtuvo: al 50%
en las 48 y 72 horas de la infusión de arrayan obtuvo una situación moderada
y alta; mientras que la infusión de arrayan al 100% tuvo una situación alta.
47
5.2. Recomendaciones
Se recomienda mejorar las características de la infusión, aumentar aditivos
y preservantes que permitan su comercialización.
Utilizar los resultados obtenidos en este estudio para la aplicación en
pacientes que presenten enfermedades periodontales como una terapia
alternativa y natural propuesta por el odontólogo.
Se recomienda realizar estudios in vivo verificando la acción del arrayan
como colutorio ante enfermedad periodontal.
Continuar con investigaciones permitiendo realizar ensayos donde
intervenga la infusión de arrayan sobre otras bacterias periodonto patógenas
demostrando su efecto inhibitorio.
48
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52
ANEXOS
Anexo A Solicitud de permisos para realizar la investigación
53
Anexo B Certificado autenticidad cepas de Prevotella melaninogenica
54
Anexo C Hoja de recolección de datos
Muestra
s
HALOS DE INHIBICIÓN EN mm
Infusión de arrayán
(Myrtuscommunis) Hexetidina al
0,12% Suero
fisiológico Al 50% Al 100%
1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
55
Anexo D Declaración de confidencialidad
56
Anexo E Normas Generales de Bioseguridad de la Facultad de Odontología de la Universidad
Central de Ecuador
57
58
Anexo F Protocolo de manejo de los desechos infecciosos
59
Anexo G Certificado de idoneidad ética y experticia del estudio del investigador
60
Anexo H Certificado de idoneidad ética y experticia del estudio del tutor
61
Anexo I Certificado de conflicto de intereses del investigador
62
Anexo J Certificado de conflicto de intereses del tutor
63
FORMATO PARA EXPEDIENTE DEL ESTUDIANTE
AUTORIZACIÓN DE PUBLICACIÓN EN EL REPOSITORIO INSTITUCIONAL
La información de este recuadro es para el control del registro. Favor no modificarla
CODIGO: sib-uce.
Fecha de entrega: Día: 27 Mes: 05 Año: 2019
INFORMACIÓN DE AUTOR (ES)
Nombres y apellidos: Christian Alejandro Díaz Pilaluisa C.I. o pasaporte: 1719530808
Email: [email protected] Año Nacimiento: 12/03/1984
INFORMACIÓN INSTITUCIONAL
Nombre de la Facultad: Odontología
Carrera: Odontología
Título a optar: Odontólogo
Pregrado: x Especialización: Maestría: Doctorado: Institucional: Otro:
Tutor (es): Dra Marina Antonia Dona Vidale
INFORMACIÓN Y CATEGORÍA DEL DOCUMENTO. Marque con X (uno o varios) Artículo de Revista Revista Académica / Científica
Capítulo de Libro Tesis (Maestría y Doctorado)
Libro Trabajo de grado (Pregrado y Especialización) x
Memoria de Evento Otro
Ponencia Cual?
Producción Docente
Título y subtítulo del documento:
DINÁMICA DE INVESTIGACIÓN (Definida por cada Facultad. Consultar con su Tutor)
Grupo de Investigación:
Línea de Investigación: Biología Estomatológica
Área: Ciencias Odontológicas Básicas
Tema: “Efecto inhibitorio del arrayán (myrtus communis) en infusión y la hexetidina
frente a la prevotella melaninogenica. Estudio in Vitro”.
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AUTORIZACIÓN DE PUBLICACIÓN EN EL REPOSITORIO DIGITAL
Por medio de este formato manifiesto (manifestamos) mi (nuestra) voluntad de autorizar a la Universidad Central del Ecuador, la publicación en texto completo, de manera gratuita y por tiempo indefinido en el Repositorio Digital de la Universidad Central del Ecuador, así como en índices, buscadores, redes de repositorios y Biblioteca Digital su difusión, el documento académico-investigativo objeto de la presente autorización, con fines estrictamente educativos, científicos y culturales, en los términos establecidos. En virtud del reconocimiento y protección a los Derechos de Autor consagrados en la Ley de Propiedad Intelectual en el Ecuador, de lo señalado en la Declaración de Berlín sobre el Acceso Abierto al Conocimiento en las Ciencias y Humanidades, así como del uso de Licencias de Creative Cammons, indico mi decisión respecto a publicar mi (nuestro) trabajo en el Repositorio Institucional de Acceso Libre Nacional e Internacional, de la Universidad Central del Ecuador. Como autor (autores) manifiesto (manifestamos) que el presente documento académico-investigativo es original y se realizó sin violar o usurpar derechos de autor de terceros, por lo tanto, la obra es de mi (nuestra) exclusiva autoría y poseo (poseemos) la titularidad sobre la misma. La Universidad de Central del Ecuador, no será responsable de ninguna utilización indebida del documento por parte de terceros, será exclusivamente mi (nuestra) responsabilidad atender personalmente cualquier reclamación que pueda presentarse a la Universidad. Autorizo (autorizamos) al Repositorio Institucional de la Universidad Central del Ecuador, convertir el documento al formato que el repositorio lo requiera (impreso, digital, electrónico o cualquier otro conocido o por conocer) con fines de preservación documental; académico y de investigación. Esta autorización no implica renuncia a la facultad que tengo (tenemos) de publicar posteriormente la obra, en forma total o parcial, por lo cual podré (mos), dando aviso por escrito a la Biblioteca de la Universidad Central del Ecuador, con no menos de un mes de antelación, solicitar que el documento deje de estar disponible para el público en el Repositorio Institucional de la Universidad de Central del Ecuador, así mismo, cuando se requiera por razones legales y/o reglas del editor de una revista.
AUTORIZACIÓN DE PUBLICACIÓN
Firma autor*
Cédula:
1719530808
ESPACIO EXCLUSIVO PARA EL ASESOR O REPRESENTANTE COMITÉ EVALUADOR DE FACULTAD
Entiendo los términos en los que el autor acepta la publicación en texto completo, en especial aquellos en los que asume la autoría del
documento y que excluye a la Universidad Central del Ecuador o a mi persona por cualquier reclamo o litigio de terceros, haciéndose
responsable de los efectos que ello conlleva. He leído íntegramente el texto completo y evaluado este documento en su componente
académico e investigativo; utilicé mecanismos de detección antiplagio y/o buscadores comerciales en línea que permiten detectar indicios de
fraude académico; según los conocimientos adquiridos en mi área de especialidad profesional certifico un alto nivel de confiabilidad de
autoridad, que cumple con los requisitos de calidad exigidos por la Universidad Central del Ecuador para efectos de visibilidad y prestigio
nacional e internacional y por lo tanto avalo la calidad de este trabajo y su inclusión en texto completo y referencial en la Colección de Trabajos
de Titulación.
AVAL DE PUBLICACIÓN EN EL REPOSITORIO DIGITAL
Nombre tutor* Dra. Marina Antonia Dona Vidale Email [email protected]
*Se aceptan firmas originales y/o digitales, tanto para autor(es) como para tutor (es), las cuales son requisitos indispensables para la entrega en Biblioteca