UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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HPV andCERVICALCANCERCURRICULUM


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01 Capítulo 2.d.

Detección y diagnóstico -- análisis y tipificación del VPH

Prof. Suzanne Garland MDDirectora de Investigación Microbiólogica, Jefe de Microbiología Clínica y Enfermedades Infecciosas The Royal Women's HospitalMelbourne, Australia

Associate Prof. Sepehr TabriziInvestigador Principal, Departamento de MicrobiologíaThe Royal Women's HospitalMelbourne, Australia


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02 Partículas similares al virus (VLPs)

• Ánalogos no infecciosos de un virus patógeno

• VLP-L1 se ensambla in vitro en cápsides vacías o ‘VLPs’

• La producción de VLP no es estandarizada

- Sistemas de expresión diferentes, métodos de preparación, métodos de control de calidad

- Formatos de identificación varían (directa e indirecta)

- No hay estándar de oro para establecer el umbral de resultado positivo

- Pocas comparaciones entre laboratorios


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03 Partículas similares al virus (VLPs)

• VLPs pueden ser analizadas mediante técnicas de microscopía electrónica


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04 Detección de anticuerpos VPH

• Anticuerpos

- Su presencia representa una infección en el pasado o presente

- Se puede generar contra las proteínas del VPH tempranas (early/E) o tardías (late/L)

- Presencia de anticuerpos neutralizantes L1 correlacionan con protección antiviral iniciada por la vacuna


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05 Detección de anticuerpos VPH

• Se han desarollado diversos métodos de análisis para detectar anticuerpos en el suero/mucosa:

- Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA): mide las inmunoglobinas (Ig) en su totalidad, tanto neutralizantes como no neutralizantes.

- Ensayos de unión competitiva, por ejemplo, el ensayo competitivo Luminex (cLIA): mide las Ig neutralizantes a un epítopo solamente, pero todas las diferentes clases de Ig

- Ensayo pseudovirión: mide el total de Ig neutralizantes, de todas las subclases

- Western blot

- Radio-inmunoprecipitación


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06 Detección de AND del VPH en el tejido por microscopio

• Inmunohistoquímica (antígeno especifico de grupo)

• Citología Pap: detecta células precancerosas


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07 Técnicas de detección molecular de ADN del VPH

Métodos de amplificación

• Amplificación de la señal

- Captura de híbridos/Hybrid Capture (HC2)

• Amplificación del objetivo

- Reacción en cadena de la polimerasa – PCR de ADN del VPH

- ARNm del VPH


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08 Análisis Hybrid Capture 2 • Prueba actualmente aprobada por la FDA

- 1995 formato de tubo; 1999 formato micro-placa

• Diseñado para trabajar con una muestra de células cervicales exfoliadas

• Kit recomendado incluye cepillo y medio de transporte de la muestra

- Recoge células endo- y exocervicales


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09 Análisis Hybrid Capture 2• Sensibilidad de 5000 genomes/muestra

• Mezcla de bajo riesgo

- VPH tipo 6, 11, 42, 43, 44

• Mezcla de tipo de alto riesgo

- VPH tipo 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 and 68

• Los resultados no son específicos del tipo

• No hay control de número de entrada de las células

• Buena comparación entra laboratorios


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10 Reacción en cadena de polimerasa• Muy sensible; cerca de 1-10 copias /100,000 células

• Permite realizar pruebas de diferentes tipos de muestras

• Permite el análisis de muestras de archivo con AND de baja calidad

• Ensayos de consenso: objetivo general: región L1

- Conservado

- Primers varían:MY09/MY11SPF1/SPF2PGMY09/PGMY11 GP5+/GP6+

- Sistemas de detección:ELISAdot blot


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11 Diferentes metodologías de PCR

• Test AMPLICOR ® HPV

• Test LINEAR ARRAY® HPV

• Test genotipo INNO-LiPA ®

- Genotipado de VPH en tejido preparado en parafina

- Las secciones de tejido pueden ser muy viejas y están sujetas a la degradación del ADN (incluso durante la extracción)


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12 Diferentes metodologías de PCR

• Formato de Chip de ADN de VPH

• HPV Microarray

• Citometría de flujo


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13 Otras metodologías para detectar los tipos de VPH

• Luminex’s xMAP® Technology

• Norchip - HPV Proofer


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14 Limitaciones y Desafíos

• Ensayos de diversa gama

• Diferente sensibilidad y especificidad

• Falta de controles fácilmente disponibles, la garantía de calidad y el control de calidad


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15 Uso práctio de los métodos de prueba de ADN del VPH

Clínico

• Tamizaje

• Triage de las pruebas de Papanicolau equívocas

• Sequimiento de displasia post-tratamiento

Epidemiología

• Vigilancia en zonas geográficas- Prevalencia de VPH- Prevalencia de genotipo de VPH

Vacuna

• Antes y después de la implementación de un programa de vacunación- Estudios de eficacidad de la vacuna - Diferent regiones del mundo


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Gracias

Esta presentación está disponible en www.uicc.org/curriculum

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