5
SHORT COMMUNICATION Two APETALA2-like genes of Picea abies are differentially expressed during development 1 Tiina Vahala 2,4 , Bengt Oxelman 3 and Sara von Arnold 2 2 Department of Forest Genetics, Uppsala Genetic Center, SLU, Box 7027, SE-75007 Uppsala, Sweden 3 Department of Systematic Botany, Evolutionary Biology Center, Uppsala University, Norbyva È gen 18D, SE-752 36 Uppsala, Sweden Received 8 May 2000; Accepted 5 November 2000 Abstract The EREBPuAP2 gene family codes for plant specific transcription factors. The first two gymnosperm genes of this family were isolated from Picea abies and shown to be structurally related, but not orthologous, to the angiosperm AP2-like genes. The two P. abies genes are differentially expressed in different organs and may be important develop- mental regulators. Key words: Norway spruce, Picea abies, transcription factors, plant development. Introduction Many developmental events in plants are regulated by transcription factors. A group of recently discovered plant transcription factors involved in developmental regulation are the APETALA2 AP2)-related proteins, which belong to the large AP2uEREBP family Riechmann and Meyerowitz, 1998). A common feature of these proteins is a conserved AP2 domain Jofuku et al., 1994), which is involved in DNA binding Ohme- Tagaki and Shinski, 1995) and may also mediate protein± protein interactions Okamuro et al., 1997). The AP2 domain is present as one repeat in the EREBP subfamily and as two repeats in the AP2 subfamily. AP2-related genes have so far been reported from three eudicotyledonous and one monocotyledonous species. The gene function is known in four cases, based on mutant phenotypes. The ®rst characterized gene of the subfamily, AP2, was isolated from Arabidopsis thaliana L.) Jofuku et al., 1994), and is known to affect meristem and ¯oral organ identity as well as ovule and seed coat development. Recently, it was also shown to alter the in¯orescence architecture, when ectopically expressed in Petunia hybrida Vilm. Maes et al., 1999). Another gene from A. thaliana, AINTEGUMENTA ANT ) Elliott et al., 1996; Klucher et al., 1996), is required for ovule development and also plays a role in ¯oral organ growth. In Zea mays L., an AP2-related gene Glossy15 Gl15) Moose and Sisco, 1996) regulates the identity of leaf epidermal cells during the vegetative phase change Evans et al., 1994) and the gene INDETERMINATE SPIKELET1 IDS1) controls the spikelet meristem determination affecting the number of ¯oral meristems Chuck et al., 1998). The members of the EREBP subfamily, which is named after the ®rst isolated genes, Ethylene Response Element Binding Proteins Ohme-Tagaki and Shinski, 1995), are mainly expressed during biological or physical stress, such as pathogen attack, ethylene or ABA treat- ment, drought, cold or cadmium treatment, and appear to play a role in stress responses. The AP2uEREBP gene family has a limited distribution within the different taxa. Homeobox genes and MADS- box genes, many members of which also control plant development Chan et al., 1998; Riechmann and Meyerowitz, 1997), exist in animals and yeast as well, whereas AP2uEREBP-related genes have so far only been found in the angiosperm group of higher plants. In this paper, isolation, sequence analyses and differential expression of two AP2-related genes of a gymnosperm, Picea abies L.) Karst. Norway spruce), are reported. 1 The nucleotide sequences reported here will appear in the GenBank, EMBL and DDBJ databases under the accession numbers AF253970 PaAP2L1) and AF253971 PaAP2L2). 4 To whom correspondence should be addressed. Fax: q46 18 673279. E-mail: [email protected] Journal of Experimental Botany, Vol. 52, No. 358, pp. 1111±1115, May 2001 ß Society for Experimental Biology 2001

Two APETALA2-like genes of Picea abies are differentially expressed during development

  • Upload
    t

  • View
    213

  • Download
    1

Embed Size (px)

Citation preview

����� ���������

�� ������������� ����� � ��� ��� ��� ��������������

��������� ������ ����� � ���!

����� "�#���$%&% '���� ���� ��( ��� ���� � � ��� ��$

� ���������� ����� �������� ������� ������ ������� ���� �� ����� �������� �������� ������� ���������� � �������� ���� � �!�"����� ���# ������� ������� ���!����� � $�% !�& #�� '(�������� )* �������� ������

�������� �� � � �������� � �������� �

�)����*�

�#� � ������� ���� �� ��� * ��� � � ����� ���*���*�����*����� � ��*� ��+ �#� ����� �� �� � ���� ����� � �#�� �� ��� ���� �� ����� �� ��� ������ �# �� � )� ����*������� �������% )�� � � ��# � � ��% � �#� ���� ���� �������� �����+ �#��� �� ��� ����� ��� �������������� ����������� ��������� ����� ��� �� )� � � ����� ����� �� ����� ������� ��+

��� ������ ������ ������� +���� �%���� ������������� ��������

� ��� ���� ������!

��� ��*�� �

���� ����������� ����� �� ���� ��� ��������� ������ ������ ����� � � ��� � �������� �� ���������� ���� ������ ����� ������� �� �������������������� ��� ��� �������� ������������� ����� !���� ����� � ��� ����� �����"�#� �������"�������� ��� �����!��$ %&&'�� � ���� �������� ��� � ����� � � �� ����� ��� ����� �(��)��� ��� %&&*� !���� � ������� �� +,� ������� �-��������)� ��� .��� )� %&&/� ��� ��� �� ������� �����0����� ���������� �-)���� �� ��� %&&1�� ��� �������� � �� ��� � �� ����� �� ��� �"�#� ����������� � �! ����� �� ��� ��� �������������������� ���� ���� ��� ���� ������ ��� �����

������������ ��� �� ���������� ���� ���� ���� ������� � )�!� �� ��� �� � �� �� ������� ������ � ��� 2� � ����������$�� ���� � ���

�������� ��� !� � ����� ��� ����� �� ����������� �(��)� �� ��� %&&*� ��� � )�!� � ������ ���� ������ 3��� ���� �������� � !��� � ���� ��� ��� ������������� "������� �� !� �� �!� � ����� �����3�� ����� ������������ !��� ��������� �4�� �� �������� ����� 5���� ���� �� ��� %&&&�� ������ ������� �� ������� ������������ ���� � ��������� ��� %&&67 8������ �� ��� %&&6� � ��9����� �� ������������� ��� �� ��� � ��� �� 3��� ���� ��!���:� ��� ���� �� �� ����������� ���� �������� �������� � ��� .� � %&&6� �������� ��� �������� � ������������ ���� ������ ��� ���������� �� � ����������� �� ��� %&&*� ��� ��� ���� �� ���!������"��#�$��� �� "�� ����� ��� �)���� ���� ��������������� ��������� ��� ������ � 3��� ���� ��� �;���) �� ��� %&&'��

��� ������ � ��� �!�%� �������� !���� � ����� ����� ��� 2� � � ����� ���� �������� !�� ����������� %���& ������� �-��������)� ��� .��� )� %&&/� ��� ������ �4�� �� ������ �������� � �� ���� ��� ��� � ������ �����) �������� � �#� ���������� ������ ��� � ������� ��������� ��� ���� ���� � ��� �� ��� �� � � �

��� �����!�%� ���� ������ �� � ������� �� ��������!����� ��� ��������� ��4�� <���4 ���� ��� ��+.��4 ���� ���� ������ � !���� �� ��������� ��������� �;��� �� ��� %&&'7 "�������� ��������!��$ %&&1� �4� � �� ������ ��� ��� � � !��� !����� �����!�%��������� ���� ���� ��� ��� �������� �� ��� ���� ��� ��� � ������ ���� � :� ��� ��� � ����� �9����� ����� � ��� �������������4�� �� � �! ����������� ���� � � ���� ��� �'�� ��� ���� 8�� �� �,�!�� ����� ��� �������

" #$� ��� ������ ��%������ �������� $��� �� ������ �� �$� &��'��(� )'* ��� ++', ��������� ����� �$� ��������� ������� �-���./

0+�,+��'1 ��� �-���./" 0+�,+���1!2 #� �$�� �������������� �$�� � �� ���������! -�3� �24 " 4/��/.! )5��� � #����!6�$� �7�8��!� �!��

-"���� ������������ ���� � .�/ ��� $/ )�(� ��/ ''''0'''�� 1� ���'

� 9������ ��� )3��������� '�� �8� � "

��������� ��� ��# ��

+���� ��������

.��� � �� ��� !��� ������� ������$�� �� %/ ��� �� =>�������� ��4��� ��� ��� �� !��� !����� ���� !��� �����������4�������� �� ?�� ��������� ����������� !����� !��� ������������� � :��� ��� �:��� ��� %&1&�� ����� / !��) � ��!�� ��� ������� !��� ������ �� � ������ ��� !� � � ��� ��� !������ !��� � ��������� �������� ������@������ +����� ��� 2� � 6 ���� ��� ������� !��� ��!� ���> �; �� ������� ����� ��� ����� ��� ���� !��� ��!������� ����������� �������� ��� ��������� � ' � ������ � %=�!��)����� .���� �� ",� �4������� !��� ��)�� ������ �����!�� �� ������� ����� ��� �� ��� ��� � ��� ��!�������������

���������� � �� �� ������� � ��� �� ��� ���� ����&/ A '' A �� !��� ��������� ��� ���������� � �� ������ ����� �������� ����� ��� �� ����� %&&=�� .����� ����� !���������� � �#����������� ������ �� ' !��) �� ������� ��* !��) ��� ���� ���������� � ����� ������� �#$�)� ����� ����� %&&'��

B����� ��� ���� ��� ��� !��� �������� ��� � ����� !������!��� ,�!�� ���� ���� ����� �������� �� ��� %&&' ��������� ��� ��� ��� ���� !��� �������� �� ���� � %&&'�

��� ������� ��� ��2"���� ���� ���

���� ",� !� �4������� ��� 1�!��)��� ������� � �� ����;���� �� ��� %&&=�� �+,� !� ����� �$�� � ��� / �� ����",� />> �� ����� �C�;�;C�C�;C�;��;C�������������������5� ��� %/ D �����5 ����� � ���� ����� ��� � �> �� �������� ��� �+,� ������� ������� !� ����2��!��� ��� �4��� <��� B������� �;" .� ��� �#����������������� � ��� ��� ���������� �;" ����� �/��;�C��E��C�CCEC�E�;,�� ��� /��;"��C��CC�,�;,C�;,�;E�� !���� !��� ������� ��� �� ����� �9����� ����� ��� ����� � �� ������� ��� ��� �� ���� ����� ������ �������� ������� ��� �� ��� ��� � �+,� � ����� ������ ���� =�� ��� /��"�;� ����� ����2����� ��+,� ��� � !� ������� � ��� ��� ����� C�;�;C�C�;�C�;��;C� ��� ��������� ���� ���2� ����� � ��� ����2��+,� �������� !��� ����� �� ��� C���� ����� ����������� �9������ � ��� ��� �#:=11 �������� �9������ ����)��������� ��� �� ��� !��� ����� �� !��� ����� B������ ���� ������ ��� ���5�����

����������� ����� � !� ��� � ����� ��� �! �� ������� !��� ���� ����������� ������� ���� ��� ���� ������� �� ������� ���� �� ������ D*>�/6� ��� ��� ������� D%�/*6� ���� ��� ���� D*%*66� (��� �(��'����� �������� �B%=*%%6� � "� ��� ���� �B>*'&>>� �(���� ��� ����� �B%=�>>%� �(���% ��� ����� �B%=�>>�� !����)��� ������� �B>>=%>>� ��� ���(*+� ��� ���� F*1//*����� ���� ���� ��� ��� ��������� �9����� �� ��� ����� ������� ��� �! ��� ����� ����� ��� ��� ���)�����!��� ���� !��� ������� �� ���5���� ��� ����� ��� ��� ��� ������� ������� �������� �������� �� ��D�G�.!���� �>>>�� +� ����� ���� +,� �9����� !������� ����� �������� � ��� <8E'/ ���� �<� ���!� �� ��� %&'/� ���!��� ���� � ���� ���� ��� ���!��� ������ �� �������� !��� ��� �������� �� � >�/� ���������� ���������������� ��#"� !���� �������� !� ������� � ������� ���� ������� �� ����� ����� ��!� �������� � B� �� ������ %>>> ����������� !�����������

34�+�3

���� ",� !� ������ ��� ��������� ���� ��� ���� ������� � ���� ��� ������� !��� +,� �:� ���� ��� 2� � �+,� �����!� ����� �$�� � �� ������ ����� ��� ����� � ��� ���� !� ��?� ��� � /> �� ��� % �� !� � �� �� �/ �� �;" ������� !��� =� ����� � C��� ���2� ����� /��;����;CCC�����;���;�C ��� /����C�CCC��;��;�;��C�; !���� �� � ������ ��� �4�� �� � �����$� ��� �� ��������� ��� �����$� ���� ���� ��� ���� ���2� ����� /����CC;�C��C��;�;�;C�;� ��� /��C���C�C���;��CC�;C�;� !��� � ��� ��� ������� !��� �� ����2�� !������ ����� /�� ;�CC��C��C�;;�;�C�C� ��� /���;��;��C;�;;�C�C;�;�� ���2� �� ��� �� ��� '�'� �����8��������� �� ��� %&&/� � � ����� �� ��� �������9������� ��� �;" ������� !��� ������� �� ��� � �!��� !������������� �� ��� �

������� ��� ���*���� �

D ��� "���;" ����2����� ��� "�;� �+,� �9����� ���� ���� � ����� ���� ����� � �! �������������������$�� ���� � �� ��� ,�!�� ����� :� ���2� � �;" ����2����� ���������� ����� !��� � �� �������� �� � �� ����� ����� � ��� �� ������� ������� ��� ��� �� ���� ���� ����� ��� +,� ������������2�� ��� �� ��� �������� � �9����� ����������� � ��� ��� ����� ����� � ��� � ������ �� ���� ��� ���� � ,�4� � �������� ������� � �� ��� ��� ����� ����� ��� ��� !��� �+,� �9������!� ����� ��� �� !� � ����� !��� =��"�;�� @���/��"�;� !� � �� � ����� ��� ��������� ��� � ������� � �������� ���� ����� � ������ ������������� ��� ���� !� 2� � � ������ ��� �������� !� ������ ����2�� ����� � ��� ���� ���2� ����� � ���� ��� 2� � "�;� ������� !��� ������ �� ��� ����� ����� ������ �� ����� ���� ��� ��������� ������ � ������� ������� :� ��� ���!��� "�;� �4������� !�������� ���2� ����� ������ �� �� �� ����� ����� ���� �! ���� !��� � �� ��� �� ��� /�� ��� =������� !��� ��������

B� ��� � ��� ���� ��� "�;� ������� ������� �!�������� �������� ��� ��� ����� !� ������ �� ��������� �� ����� ������ � ������ ���� ��� �! �������� �� ���� �� � ��������� ��� ��� ��� ���� ���� �;"����� ���� ����� � �9����� �� ��� ������ �����/�� ��� =������� � ��� ���� !��� �� ������ D ��� ��� ������ �+,� �������� ������� ��� ������ ���������� ��� � � � ��� ������ ����� ����� � ������� !��� ����2��� ���� !��� ���� ����� ��� ����� ��� ��2�� ��� �9����� �

��� �+,� �������� ������� �� ��� �! ���� ������ �� �� ������� ����� ���� �� � %/&= � ������ ���� � %'&& � ��� ���� ��� ��� �� ����� !��� ���������� �������� !����� � /'/'= ��� 1>�/= �� ��������� ��� ���� ���� �9����� �! ���������� ����� � ��� ��� �������� � ��� �����"�#������� �"�������� ��� �����!��$ %&&'� �B��� %� ���

"""� .�5��� �� � !

����� �� ����������$�� ������ � !���� ��� �������� ������ ����� � ��� � ����� ���� !��� ����������$� ��'�� ��� �����$��,$�#� �� ��������$��

� � �� ������� ���!��� ������% ������� ������� �����������)� ����� � ��� �� ��� �! ����� � ��� ������� +,��������� ��� ����� ��� �� ������)�� ����� ���!��� ���� �B��� %�� ��� � �������������� �����$���� ����� � ���� �� � ������ ����,��������� � ��� ��� ������ -�� ��� ��� � ����� ����� � ������ �� ������� ���!��� ��� ����� ��� ��������� ���� ���� ���� ��� �� ������2�� �� ������������)� ����� �B��� %#0+�� -�� � ���� �B��� %#� � ������ ���!��� ��� ���� ������� ��� ��� ��� ���������� ��� ��� ���� �! �B��� %; +� ��� ���!��� ������ ����� ��� ��� ����4� ������� � ��� �4��� ���� � ��� ����� �� ����� ���� ������ ���!���

��� ����� �B��� %�� ��� �� � ���� � �� ��� �� � ������� ����4� ������� � ��� ���� ��� ����� ��������� ������� � ��� � ���� ��� �� )�!� ��� ������� �� ������� �� ������ ��� ���� ������ ���������������� � ��� �������� � ��� ����� � � ��� ��������!��� �����$� �����$� ��� ��� )�!� ���� ������� � �! �� ��� ��� ��� ���������)�� ����� ���� ����� �� ��� ���� ����� �� �������� � ������� � ��� )�!� ���� ��� ����� �4��� ������� ����� ���������� ��� ����� �9����� �

� ���������� ����� � !� �� �� � ��� ���� ���� �9����� �� ��� ��� ���������)�� ����� �������� ��B��� %�� � ������% ��� ������� ��� ��� ���� �������� ������� � ���� �B��� ���� -� ��� ����� �� ������ ������% ���� � � �� ��� ������� � ������������ �(��)� �� ��� %&&*� ��� �� ����� �<�������� �� ��� �>>%� !���� � �� ����� �� �����

���� �� ��0+� ��������� � ���� ���� �� �� ����� ����� � ����������� ����� � ��� ��� ��� ���������)�� ����� ��� �! ��� ����� ����� ����������� �#0+� ;� ����� ���� ���� �� ���� ��� � ��� ����� � :�������� ���� ���� ��� ����� �� ���) ���� ��� ���������� ������ �������� �� ����� ����� ��� .����2�� �������� � ����������� ����� � ��� ����� �4� �0+ ���� �� � ��� �� ����� ����� ������� �� B��� %�0+ �� ��������� :� ���� ����� ��� �� ����� ������� ��� ������� ��� ���� ���� ��� ��� ��� ������� ��� �� ��������� ������ � ���� ���� � �!� �� ��� !���� �4� �

�:)#�*���������� #���� �� ������ """�

������ ��������� �� ��� ����� ����� ����� � �������� ��� �!��� ������� ��� �� ��� ����� � !��� �� ������� "����1 �-)���� �� ��� %&&1� ���������� � !���� � ��)�!�� <!���� �����$����� ��� �� ��� ������� � ��� ��� �����$�������(���� ��� ��� �� ���� ���� � "� ��� �������� ��� ������� � ���� ���� !��� ��� ����� � � �� �� � ��������� �9����� �� ���� � ���� ���� �B��� �#�� ��� ���� ���� ���� ��� ��� ��� ���� ������ ������� �������� � ��� ��������� ����� � ������� ���� ����� ����� �������� � ���� ��������� � ��� ����� � �������� � ��������� ��� ������� ���� ������� ��������� ��� ��������� ����� ��������� ���� � ���� ��� ���� ���� �9����� ���� ���� ��?����� � ������� ������� !��� � �������������� ������� ������� ���� �� ���� ��� ���� ������ !��� ��������� ���������� �� ���� � ����� � ��� ������ ���� ������� �� ��� ����� � ���� ���� �� ������� ���� !��� ����� ��� +,� ������� �������� ��� ����� �

��� �� ���� � ��� �����$� ��� �����$� ����� ���� �� ��������� ��� � ���� ��� ���� ������� ��� ��� !� ������ � ��� "���;"� ��� �4�� �� ������� � ��� �! ���� !��� ���� � ������ ��� �������� �B��� =�� �4�� �� � �����$� !� ��� �� ��������� ��� ������ ��� ��� ��� �� !� �� !��)������������ �� ���� ��� ��� ��� �� �� �� ����������� ���� ������� � ��� �����$� ���� ���� �� ������ �� ����� ����� ����� % � � ������������� ������ ��� �������� ����� ' �� �����$����� ���� !��� �������� ������ ���� �� ���������� ���� ������� ��� ��� �� � �� ���� ������� ��� ������ ����� ����� ���������� ��� ��� �4�� �� ������!��)�� �� ������ ��� � ��� ����

<!���� ��� �������� � �����$� ��� �����$��4�� �� �� ��������� ���� � �� ��������� ������������ ���� � �� ��2����� �� ���!��� ����� �� ������ ������� �� ��� � ���� � C��� �4�� �� � ����� � ������� ��� �� �����$�� � ������� ���� � �� ��

��� ��� ��� ���� ��� �� �� ��?��� � ������ �������� ��������� ����� ����� ����� �����9���� ������ ������� ���2����� � ����������!��� ���� ����� � ���� �� ��������� .����� !��� ���������� � ��� �����!�%� ������ ���� �!� ���� �����4�� �� �� �� ��!�� �������� !��� � ����������������� �(��)� �� ��� %&&*7 8������ �� ��� %&&67 ;���)�� ��� %&&'7 ��� �� ��� %&&'��

��� � ��� 2� � ���� ���� �����!�%����)� ���� ������� )�!� ��� �� ���� ��� ���� ���� ������ ������ ��� !���� �4���� ����� �� ���� � ������ �������������� �� ���� ��� � ������ ���� � ���������� ��� � �����$� ��� �����$� � �� )�!� ����� ��������� ������� �� !��� ���� ��� ���� ������������������ ��� ����� ������������ �4�� �� ������ ���� � ���� ���� ��� ������� �� ���������� �� ������������ ��� �� � �� �� ��� ��� ���� ��� �! ���� ���� ��������� ������� �

�*�� ������ ����

��� !�) !� ����� �� ��� .!��� � ;����� �� B�� ������ ������������ "� ����� ��� �� ��� ,�� ������ B��������@� ��� �������� � +� .����� B���� �� ��� �+,� ���� ��� ���������� ���� ������� �

�������*��

����� � ��� ������ �� %&&'� ����������� ����� ���� ��������� ��� ������� ������� ��������� � �'�� ��� ����� ����� � ���������� ���� � ���� �%%0��*�

��� �� ���� �� ������ �� �������� ��� %&&'�<���4� �� ���� ���������� ��������� �� ������������ ����� %0%&�

���� � ������� � ������� �� %&&=� � ���� ��� ��2���������� �� � ������ ",� ��� ��� ���� � ��� ����� ��������� �������� ��� %%=0%%6�

�� � ������ �� ��� �� %&&'� ��� ����� � ���$� �)���� ���� ��� ���� �� ��� �����$�����)� ���� ������,����� � -������ ���� � ���������� ��� %%*/0%%/*�

���� !� ����������� ���� � ��� ���� �������� �� �� � ��� ��� �������� �9����� ��� �#� ��� ��������� �9����� �� ��� ��� ���������)�� ����� ������� �� B��� %�� #� ��� ����� ��� />� ��� �!��� ��� ������� �

���� "� +������� � �����$� ��� �����$� ���� ���� �� "���;" �������� �%� ��� ��� ��� �� �=� � �� ��� ������� ������ ��� 2� ���!�� �� � �� ������ � %>�������� ��!������� ���� �*� �������� � �� ����� ���� �/� �� ������ �6� ��� ���� �1� ��� ��� ������������� ���������� ������� �'� �� �������� ����� ����� �&� ��� �� ����������� ����� ����� ����� % � �%>� ��� ' � �%%�� ���� %� �! �������� ����� �� ��� �;" ������� ��� ��� �!� � ���� �! ��� �4�� �� � � ��������� ���� '�'��

"""2 .�5��� �� � !

#���$%��$$�� & ��� ������ �� %&&=� ;�� �2����� � ����������� ��������� � �'�� ��� � ������ ���� � � �������� �������� �� �� �� ��� ���������� ���� ���0��&�

#����$$ �� ��$���� �� ��$$��� # '��% �� (� �� )*� �����$�% � ����� � �+�$ ��� %&&6� ������������ �� �����$�����)� ���� � ����� �� !��� ���������� �� ���� ��������� ��� 3��� ���� ��!��� ��� ������� �� %//0%6'�

#���% ��� ��%%�% �� ���$�� ��� %&&*� <���������������� � �������� ������� � ������������� �������� �����$�� ���������� ���� %&1%0%&'%�

��%���,� � -�%��� � .��� (� %&'/� +����� ��� �������� ��� �� � �������� ���) � ����������� +,�� �� �� ������� �� ���� ��� ��� %6>0%1*�

/���%$�� (� %&1&� ������� �������� ��9�������� � ������.����� ��� �'�� ��� ������� � ���������� ���� ���� =1=0='>�

��0�� -� ��� ���� ��) 1�� ���$��� � '�+��� �-�%&&*� ;���� � ����� �� 3!�� ��� ��� ����������� ��� ������ ���� �����$��� ��� ��� ���� ��%�%%0%��/�

-�� �� -� ��, � ���%�� � ��% �� ��� %&&6� ��������������� ���� � ����� �� ��9����� �� ������� ������ ��������� ��������� � ������� � ��� 3��������� ���� �����$��� ��� ��� ���� �� %=10%/=�

-�������� � (����� - #��%$��2+ �� %&&/� � '�'� ��������� �� ��� ������� ��� �� ���� ������� ��� ,�!�� ����� ��� ����� �� ������� �� =&%0*>=�

��� * -�%��� � ���+� . �3� � ����� � .�+��� �4������� - ������� -� %&&'� �! ���� ������ �����

+"�#% ��� +"�#� !��� �� �"�#����� +,� ������������ ������ �! �������� ����� ���� ������ ���!�� ��������� ��� �!�������������� � ��� ���� �4�� �� �� �������� �� ����� ��� ��� ��� ���� ��� %=&%0%*>6�

���% ( 1�� �� �$���� 5 6�$�0 � -���+� � �7���, � ����% � 1�� ���$��� � ����$% (� �>>%� ������� � ����)����� ��� ����� ��� �� 3!�� ��� ��� ���������� ������ ���� �� ��&0�**�

���% ( 1�� ���$��� � ����$% (� %&&&� ��� ��3�� ����������������� � ������ ����� � ���2�� �� ��� ����� ��������� � � ����� ����������� ������� ��� %&&0�>'�

���%� �� ��% � ��� %&&6� �������� �� �����$�����)� ������� ���$� ���� �������� ���� �������� ���� ��������� ����� ���������� ��� =>%'0=>�1�

'+�4(���� � ���%� �� %&&/� ������������������ +,�������� ����� ���� �������� !��� �� ����������� � ����������� ��� ��� ���� � %1=0%'��

'�+��� �- ��%$�� � 1��������� � 1�� ���$��� � ��0�� -�� %&&1� ��� ��� ����� � �����$�� ��2�� � ����� ��! ������ � +,� ������� ����� �� ����� ������������� �� ��� ����� ������ �� ������! " � ���1>1601>'%�

��� +��� �� ������,�$� #�� %&&1� ��+. ����� ����� �� ���� ���������� ��������� ��������� �� %>1&0%%>%�

��� +��� �� ������,�$� #�� %&&'� ��� �����"�#� ������� ���� ���� ������ ����� � ��������� ��������� ��6==06*6�

�,�00��� ��� �>>>� ��D�G� ����������� ������ "���������� #$� %���� �������&� 5�� �� *�>�*�� .������� ����� .��������� �� ���� ��� �

�:)#�*���������� #���� �� ������ """�