ADN EN HONGOS

(TRANSFORMACIÓN DE LOS HONGOS)

Pazmiño LeninRosero Alfredo

Valla Luis

TEMARIO

1. Introducción

2. Transformación de hongos

2.1 Antecedentes

2.2 Protocolos de Transformación

2.3 Vectores de Transformación

2.3.1 Marcadores de selección

1. INTRODUCCIÓN

Organismos eucariotas Hospederos para la

producción de proteínas

Se clasifican en: Levaduras (Unicelulares ) Hongos Filamentosos

Amplia diversidad de aplicaciones biotecnológicos

Características principales de los hongos

Mayor tamaño y genoma Organización celular compleja Núcleo definido Ciclos de vida complejos

Crecimiento vegetativo (micelios) Morfogénesis (cambio de forma)

Forma esporas sexuales y esporas asexuales

Los cromosomas que pueden ser separados por electroforesis.

1. INTRODUCCIÓN

1. INTRODUCCIÓN

El número de cromosomas varía con las especies.

2. TRANSFORMACIÓN DE LOS HONGOS

2.1 Antecedentes Los primeros experimentos en los años 70s.

Transfiriere fragmentos de

ADN cromosomal

Cepas mutantes

(requerimientos específicos)

Cambia un aminoácido o nucleótido.

Basado en convertir:células del hongo en protoplastos

2.2 Protocolos de transformación

Hongos filamentosos se basa en el método de convertir el micelio del hongo en protoplastos.

Existen varias modificaciones al método básico, con las cuales se pretende mejorar la frecuencia de transformación

2.2 Protocolos de transformación

2.3. Vectores de transformación

Los vectores de transformación son diseñados para:

Transformación

integrativa

Ser mantenidos

como plásmidos

• Recombinación homóloga

• Integración Ectópica

Insertar el ADN en un sitio con similitud

Se integra al azar  

Vectores multifuncionales: Genes que permiten su selección

Orígenes de replicación (ori)

2.3. Vectores de transformación

Esquema del vector multifuncional

2.3.1 Marcadores de selección

Identificadores de células transformadas

• Transformación heteróloga

• Transformación Homóloga

Complementan auxotróficos

• Ejemplos: Higromicina B,fleomicina, kanamicina o el benomil

• Desventaja: pueden presentar resistencias

Resistencia antibiótica • crecer fuentes de

carbono y nitrógeno que la sepa hospedante no utiliza

• Ejemplo: gen de acetamidasa

Confieren la capacidad de

crecer

Los vectores son usados para:

Aumentar el número de copias de un gen en los cromosomas.

Interrumpir o reemplazar un gen deseado o no deseado.

Levadura ha permitido separa cerca de 6000 genes para determinar las funciones de cada uno de ellos

2.3. Vectores de transformación

Casete consiste en un

gen de selección (encuentra en cada extremo junto con cadenas cortas del gen a modificar)

el vector (liberado por acción de una enzima de restricción).

2.3. Vectores de transformación

2.3. Vectores de transformación

Compara su fenotipo hasta asociar un gen particular con una función particular, no siempre se origina un fenotipo detectable.

Levaduras obtención mayor eficiencia de recombinación homóloga que en hongos filamentosos, pues la recombinación es más fácil al trabajar con fragmentos cortos de ADN y cada deleción se marca con una secuencia única.

(a) Integración al azar

Por sobrecruzamiento de secuencias de ADN

(b) Integración modificada por enzima de restricción

Solamente en el sitio que actúa la enzima de restricción

2.3. Vectores de transformación

Para asegurar una buena expresión del gen

Se puede dirigir el gen hasta el sitio específico del cromosoma.

• .

2.3. Vectores de transformación

Una cepa que contiene un gen determinado mutado con un plásmido que contiene el mismo gen. El gen se volverá funcional si existe un sobrecruzamiento simple y el vector se integra en el mismo sitio que el gen

Hongo filamentoso por doble sobrecruzamiento

La enzima de restricción corta una sola vez el plásmido y los vuelve lineal.

2.3. Vectores de transformación

GRACIAS