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8/10/2019 Survival of Escherichia Coli and Salmonella Spp. In
1/6
V o l .
5 4 ,
N o . 1 2P P L I E D AND ENVIRONMENTAL
M I C R O B I O L O G Y ,
D e c .
1 9 8 8 , p . 2 9 0 2 - 2 9 0 7
0 0 9 9 - 2 2 4 0 / 8 8 / 1 2 2 9 0 2 - 0 6 0 2 . 0 0 / 0
C o p y r i g h t
1 9 8 8 ,
A m e r i c a n
S o c i e t y
f o r
M i c r o b i o l o g y
S u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a
c o l i
a n d
S a l m o n e l l a
s p p .
i n
E s t u a r i n e
E n v i r o n m e n t s t
MARTHA W. RHODES* AND HOWARD
K A T O R
D e p a r t m e n t of
B i o l o g i c a l
a n d F i s h e r i e s
S c i e n c e s ,
V i r g i n i a
I n s t i t u t e
o f
M a r i n e
S c i e n c e ,
S c h o o l
o f
M a r i n e
S c i e n c e ,
C o l l e g e
o f
W i l l i a m a n d
M a r y ,
G l o u c e s t e r
P o i n t ,
V i r g i n i a
2 3 0 6 2
R e c e i v e d 1 2
May
1 9 8 8 / A c c e p t e d
3 1
A u g u s t 1 9 8 8
S u rv i v a l o f
E s c h e r i c h i a
c o l i
a n d S a l m o n e l l a
s p p .
i n
e s t u a r i n e
w a t e r s
wa s
c o m p a r e d
o ve r a
v a r i e t y
o f
s e a s o n a l
t e m p e r a t u r e s
d u r i n g
i n
s i t u
exposure
i n
d i f f u s i o n
c h a m b e r s .
S u b l e t h a l s t r e s s
was
m e a s u r e d
b y
b o t h
s e l e c t i v e - v e r s u s - r e s u s c i t a t i v e e n u m e r a t i o n
p r o c e d u r e s
a n d
an
e l e c t r o c h e m i c a l
d e t e c t i o n
m e t h o d . E . c o l i
a n d
S a l m o n e l l a
spp.
t e s t
s u s p e n s i o n s , p r e p a r e d
t o
m i n i m i z e
s u b l e t h a l
i n j u r y ,
were
e x p o s e d
i n
a
s h a l l o w t i d a l
c r e e k
a n d a t a s i t e 7 . 1 km f u r t h e r d o w n r i v e r .
B a c t e r i a l d i e - o f f a n d s u b l e t h a l
s t r e s s
i n
f i l t e r e d e s t u a r i n e
w a t e r
were
i n v e r s e l y r e l a t e d t o w a t e r
t e m p e r a t u r e .
S a l m o n e l l a
s p p . p o p u l a t i o n s
e x h i b i t e d
s i g n i f i c a n t l y
l e s s
d i e - o f f a n d
s t r e s s t h a n d i d E .
c o l i
a t w a t e r
t e m p e r a t u r e s
o f
< 1 0 C .
A l t h o u g h
t h e
m o s t
p r o n o u n c e d
r e d u c t i o n s
( c a .
3
l o g
u n i t s )
i n
t e s t b a c t e r i a
o c c u r r e d
d u r i n g
s e a s o n a l l y
warm
t e m p e r a t u r e s
i n
t h e
presence
o f
t h e
a u t o c h t h o n o u s
m i c r o b i o t a ,
1 0 2 t o
1 0 4
t e s t c e l l s
pe r
m l r e m a i n e d
a f t e r
2
w e e k s
o f
exposure
t o
t e m p e r a t u r e s
o f
> 1 5 C .
R e d u c t i o n s
i n t e s t b a c t e r i a
were a s s o c i a t e d w i t h
i n c r e a s e s
i n
t h e
d e n s i t i e s
o f
m i c r o f l a g e l l a t e s
a n d
plaque-
f o r m i n g
m i c r o o r g a n i s m s . T h e s e
s t u d i e s
d e m o n s t r a t e d
t h e
s u r v i v a l
p o t e n t i a l
o f
e n t e r i c
b a c t e r i a
i n
e s t u a r i n e
w a t e r s
a n d
s h o w e d
t h a t
s u r v i v a l was a f u nc t i o n o f
i n t e r a c t i n g
b i o l o g i c a l
a n d
p h y s i c a l
f a c t o r s .
F e c a l
c o l i f o r m s a r e a n
o p e r a t i o n a l l y
d e f i n e d
g r o u p i n g
o f
e n t e r i c b a c t e r i a w h o s e
p r e s e n c e
i n n a t u r a l
w a t e r s
i s u s e d a s
a n
i n d i c a t o r
o f
f e c a l
c o n t a m i n a t i o n
a n d
t h e r e f o r e t h e
p o s s i -
b l e
p r e s e n c e
o f
p a t h o g e n i c m i c r o o r g a n i s m s .
An
a s s u m p t i o n
f u n d a m e n t a l t o t h e
i n d i c a t o r
c o n c e p t
i s t h a t
o f
p a r i t y
i n t h e
s u r v i v a l
o f
t h e
i n d i c a t o r
a n d
e n t e r i c
p a t h o g e n s
( 6 )
o v e r a
r a n g e
o f
a q u e o u s
e n v i r o n m e n t s
a n d
v a r i e d
p h y s i c o c h e m i c a l
c o n d i t i o n s . T h i s
r e p o r t
c o ns i de r s a n
a s p e c t
o f
t h i s
p a r i t y
p a r a d i g m a s i t
a p p l i e s t o e s t u a r i n e
w a t e r s .
S t u d i e s
c o m p a r i n g
s u r v i v a l o f
f e c a l c o l i f o r m s
a n d
p a t h o -
g e n i c
b a c t e r i a i n
e s t u a r i n e a n d c o a s t a l
s e a w a t e r s
h a v e f r e -
q u e n t l y
y i e l d e d
c o n f l i c t i n g
r e s u l t s .
B e a r d
a n d
M e a d o w c r a f t
( 3 )
o b s e r v e d t h a t
E s c h e r i c h i a c o l i s u r v i v e d
l o n g e r
t h a n d i d
S a l m o n e l l a
t y p h o s a
i n s t e r i l e s e a w a t e r .
I n
c o n t r a s t ,
o t h e r
o b s e r v a t i o n s f o r s t e r i l e
s e a w a t e r h a v e
r a n g e d
f r o m
s l i g h t l y
s l o w e r
d i e - o f f o f
S a l m o n e l l a
s p p .
t h a n o f
E . c o l i
( 3 8 )
t o
p r o l o n g e d
s u r v i v a l
o f
S a l m o n e l l a e n t e r i t i d i s
c o m p a r e d w i t h
E .
c o l i ( 4 1 ) . R e c e n t
i n
v i t r o
s t u d i e s
( 9 , 3 7 )
u s i n g s t e r i l e
e s t u a r i n e
w a t e r h a v e
r e p o r t e d
g r o s s l y d i s s i m i l a r s u r v i v a l
( a n d
c u l t u r a b i l i t y )
b e t w e e n
S .
e n t e r i t i d i s a n d
E . c o l i . I n
o p p o s i t i o n ,
M c C a m b r i d g e
a n d
M c M e e k i n
( 2 5 ) o b s e r v e d t h a t
p o p u l a t i o n s
o f
E . c o l i
a n d
S a l m o n e l l a
t y p h i m u r i u m
r e m a i n e d
v i r t u a l l y u n a l t e r e d
a f t e r 1 0 d a y s o f
e x p o s u r e t o s t e r i l e
e s t u a r i n e w a t e r i n
v i t r o .
To
s o m e
d e g r e e , t h e
d i s p a r i t i e s
i n t h e s e r e p o r t s
may
b e
a t t r i b u t e d
t o
d i f f e r e n c e s i n
e x p e r i m e n t a l
m e t h o d s a n d
r e l a t e d
f a c t o r s w h i c h
c a n i n f l u e n c e
b a c t e r i a l
s u r v i v a l a n d
r e c o v e r y .
T h e r e
i s
e v i d e n c e
t h a t
l a b o r a t o r y
m a n i p u l a t i o n s
( 3 4 )
a n d
i s o l a t e
h i s t o r y
( 1 ,
1 6 ,
3 9 )
a f f e c t c e l l v i a b i l i t y
a n d
c a n
y i e l d
t e s t
s u s p e n s i o n s
o f s u b l e t h a l l y
s t r e s s e d c e l l s
w h o s e
p h y s i o -
l o g i c a l
s t a t u s
may
b e u n d e t e c t e d b y
common
s e l e c t i v e
e n u m e r a t i o n
p r o c e d u r e s
( 5 ,
1 9 ,
2 1 , 3 3 , 3 4 ) .
S i m i l a r l y , f a i l u r e
t o
r e c o v e r
s t r e s s e d c e l l s
a f t e r e x p o s u r e t o e s t u a r i n e
e n v i r o n -
m e n t s
c a n
l e a d
t o m i s i n t e r p r e t a t i o n o f t h e f a t e o f
t h e
c e l l s
a n d
u n d e r e s t i m a t i o n
o f t h e
a s s o c i a t e d h e a l t h
r i s k .
O f
p o s s i b l e g r e a t e r
c o n c e r n
t h a n
t h e
i n f l u e n c e o f
t h e s e
*
C o r r e s p o n d i n g
a u t h o r .
t
C o n t r i b u t i o n
1 4 8 4 f r o m
t h e
V i r g i n i a
I n s t i t u t e o f
M a r i n e S c i e n c e .
f a c t o r s
i n
c o m p a r a t i v e s u r v i v a l
e x p e r i m e n t s i s t h e
q u e s t i o n -
a b l e v a l i d i t y o f a n
a p p r o a c h
w h e r e b y
e n t e r i c
c e l l s
a r e
e x p o s e d , e i t h e r
i n
v i t r o o r i n
s i t u , t o s t e r i l e
e s t u a r i n e o r
c o a s t a l s e a w a t e r i n
o r d e r t o a s s e s s t h e i r
s u r v i v a b i l i t y .
S u r -
v i v a l
o f
a l l o c h t h o n o u s b a c t e r i a
u n d e r
e s t u a r i n e
c o n d i t i o n s i s
k n o w n
t o
b e a f f e c t e d
b y p h y s i c a l f a c t o r s
a s
w e l l
a s
b y a
v a r i e t y o f
i n t e r a c t i o n s
w i t h
n a t i v e m i c r o b i a l
p o p u l a t i o n s .
E n t e r i c
b a c t e r i a ma y
c o m p e t e p o o r l y w i t h
a u t o c h t h o n o u s
m i c r o b e s a t
l o w n a t u r a l l e v e l s
o f n u t r i e n t s
( 8 ,
2 0 ) . P r e d a t i o n
a n d
a n t a g o n i s m
h a v e
b e e n d e m o n s t r a t e d a s
p r o c e s s e s c o n -
t r i b u t i n g t o
t h e
d e m i s e
o f
e n t e r i c b a c t e r i a i n
v i t r o
( 2 3 - 2 6 ,
3 1 ,
3 5 ,
4 2 ) .
U n f o r t u n a t e l y ,
d a t a
d e s c r i b i n g
t h es e p r o c es s es
a r e
l i m i t e d
b e c a u s e
t h e r e h a v e
b e e n
f e w i n
s i t u
s t u d i e s
o f
e n t e r i c
s u r v i v a l
i n e s t u a r i n e e n v i r o n m e n t s
a n d
m o s t i n v o l v e d
t e s t
c u l t u r e s
s u s p e n d e d
i n s t e r i l i z e d
s e a w a t e r .
T h i s
r e p o r t
d e s c r i b e s
t h e r e s u l t s
o f
i n
s i t u
e x p e r i m e n t s
d e s i g n e d t o e x a m i n e
t h e
e f f e c t
o f
t h e
a u t o c h t h o n o u s
e s t u a -
r i n e
m i c r o b i o t a
o n
e n t e r i c
b a c t e r i a .
S p e c i f i c a l l y ,
s u r v i v a l o f
E . c o l i
a n d
S a l m o n e l l a
s p p . w a s
m e a s u r e d
i n
t h e
p r e s e n c e
a n d
i n t h e
a b s e n c e
o f
t h e
n a t u r a l
m i c r o b i o t a
a t
t w o e s t u a r i n e
s i t e s o f
c o n t r a s t i n g
p h y s i c o c h e m i c a l
c h a r a c t e r i s t i c s . I n a d
d i t i o n ,
t h e e f f e c t
o f
s u b l e t h a l s t r e s s
o n b a c t e r i a l s u r v i v a l
w a s
m e a s u r e d
b y
u s i n g p r o c e d u r e s f o r t h e
d e t e c t i o n a n d
r e c o v -
e r y
o f
s u b l e t h a l l y i n j u r e d c e l l s .
M A T E R I A LS ND
M E T H O D S
D e s c r i p t i o n
o f
s t u d y
a r e a .
T h e
W a r e
R i v e r ,
a
s u b e s t u a r y
f o r m e d
b y
t h e
c o nf l u en ce o f
t w o t i d a l
f r e s h w a t e r
s t r e a m s ,
f l o w s 9 . 4 km t o
M o b j a c k
B a y o n
t h e
s o u t h w e s t e r n s h o r e o f
C h e s a p e a k e
B a y
( F i g . 1 ) .
One o f t h e
s t r e a m s , F o x M i l l
R u n ,
r e c e i v e s
a p p r o x i m a t e l y 0 . 6
m i l l i o n l i t e r s o f
s e c o n d a r y
e f -
f l u e n t
p e r
d a y f r o m a
s e w a g e t r e a t m e n t
p l a n t l o c a t e d 4 . 3
km
u p s t r e a m
o f
t h e
F o x M i l l Run
e x p o s u r e
s i t e .
C o n c e n t r a t i o n s
o f
t o t a l
p h o s p h a t e a n d
o r g a n i c
n i t r o g e n
w e r e g e n e r a l l y
h i g h e r
a t F o x
M i l l
Run
t h a n
a t t h e
s e c o n d e x p o s u r e
s i t e ,
l o c a t e d
7 . 1
km
f u r t h e r
d o w n r i v e r o n
t h e
m a i n s t e m
o f
t h e
Ware
R i v e r . Mean
s a l i n i t i e s
d u r i n g
s u r v i v a l
e x p e r i m e n t s
r a n g e d f r o m
1 2
t o
2 2 o
a t t h e
F o x M i l l Run
s i t e
a n d
f r o m
2 1
t o
2 4 o
a t
t h e Ware
R i v e r
s i t e .
2 9 0 2
8/10/2019 Survival of Escherichia Coli and Salmonella Spp. In
2/6
SURV I V A L OF
E .
COLI AND
SALMONELLA S P P . 2 9 0 3
F I G . 1 . L o c a t i o n o f s t u d y area
a n d
d i f f u s i o n
c h a m b e r
d e p l o y -
ment
s i t e s i n
Fox
M i l l Run
FMR)
a n d t h e Ware
R i v e r ( W R ) . S T P,
S e w a g e
t r e a t m e n t
p l a n t .
Chamber
d e s i g n
a n d c o n s t r u c t i o n .
M c F e t e r s - S t u a r t
( 2 7 )
d i f f u s i o n
c h a m b e r s
were m o d i f i e d ( 3 4 ) t o
a c c o m m o d a t e
5 0
m l
o f
t e s t
s u s p e n s i o n
a n d t o
m i n i m i z e c o n t a m i n a t i o n b y
i n d i g e n o u s m i c r o o r g a n i s m s
t h r o u g h
l e a k a g e ,
p r e s u m a b l y
b e t w e e n
m e m b r a n e - c h a m b e r
i n t e r f a c e s .
A d d i t i o n a l
c h a n g e s
were made d u r i n g
t h e p r e s e n t s t u d y
t o
f a c i l i t a t e
s a m p l i n g
a n d p r e v e n t e n t r y
o f c o n t am i na t i n g m i c r o o r g a n i s m s t h r o u g h
t h e
s a m p l i n g
p o r t s .
T h r e a d e d
p o r t s
o f T u f f a k
Rohm a n d
H a a s C o . , P h i l a d e l p h i a ,
P a . ) ,
an
a u t o c l a v a b l e
p o l y c a r b o -
n a t e ,
were a t t a c h e d
t o t h e c e n t r a l spacer
b y
f e m a l e
t h r e a d s
a n d
s e a l e d
w i t h
0
r i n g s .
P o r t s
were
s e a l e d
w i t h serum
s t o p p e r s
w i t h
s t e e l - f i l l e d
epoxy
a n d c o v e r e d
w i t h
t h r e a d e d
T u f f a k c aps t o
p r e v e n t
f o u l i n g
o f t h e
s t o p p e r .
B e f o r e
b e i n g
a u t o c l a v e d
a t
1 2 1 C
f o r 1 5
m i n ,
p o l y c a r b o -
n a t e m e m b r a n e s
( p o r e
s i z e ,
0 . 2
, L m ;
N u c l e p o r e
C o r p . ,
P l e a s a n t o n ,
C a l i f . ) were
a t t a c h e d t o
t h e
c e n t r a l spacer w i t h
a s i l i c o n e
l u b r i c a n t
vacuum
grease Dow
C o r n i n g C o r p . ,
M i d l a n d ,
M i c h . )
a n d
p o r t o p e n i n g s
were
f i t t e d
w i t h thumb
screws.
A f t e r
s t e r i l i z a t i o n ,
r e t a i n e r
p l a t e s
were s e c u r e d t o
t h e c en t ra l
spacer
w i t h s t a i n l e s s - s t e e l
w i n g
n u t s
a n d
b o l t s .
O r g a n i s m s .
E .
c o l i
was i s o l a t e d
f r o m
human f e c e s
a n d
i d e n t i f i e d
as
p r e v i o u s l y
d e s c r i b e d ( 3 4 ) .
Human s a l m o n e l l a
i s o l a t e s
were
o b t a i n e d
f r o m
e i t h e r
t h e
V i r g i n i a
D e p a r t m e n t
o f
G e n e r a l
S e r v i c e s , R i c h m o n d ,
or
t h e I nf ec t i o u s
D i s e a s e
D i v i s i o n ,
C e n t e r s f o r
D i s e a s e
C o n t r o l ,
A t l a n t a ,
G a .
S a l m o -
n e l l a
tennessee
i s o l a t e s
were
u s e d , e x c e p t
i n t h e
May
e x p e r i m e n t ,
when
S .
t y p h i m u r i u m
was u s e d . I s o l a t e s
were
m a i n t a i n e d
on
t r y p t i c soy agar
s l a n t s
a t
4 C
a n d
u s e d
w i t h i n
8
w e e k s .
P r e p a r a t i o n
o f
i n o c u l a .
I s o l a t e s
were
c u l t u r e d
i n M 9
m i n -
i m a l medium
( 3 2 )
( p H 7 . 0 )
m o d i f i e d
t o c o n t a i n
5
g l y c e r o l
i n s t e a d
o f
g l u c o s e .
C e l l s
were
i n c u b a t e d
a t
3 5 C
f o r 2 4
h ,
d i l u t e d
1 , 0 0 0 - f o l d
i n t o
f r e s h
m e d i u m ,
a n d
i n c u b a t e d f o r a n
a d d i t i o n a l
2 4
h ,
a t
w h i c h t i m e
t h e y
were
i n
s t a t i o n a r y p h a s e .
A c e l l
s u s p e n s i o n
was
p r e p a r e d
i n s t e r i l e
r i v e r water
t o
y i e l d
1 0 4 t o 1 0 5
c e l l s p e r
m l .
P o r t i o n s o f
2 0 m l w e r e
d i s p e n s e d i n t o
s t e r i l e
b o t t l e s
a n d t r a n s p o r t e d t o
t h e f i e l d
f o r
i n o c u l a t i o n
o f
d i f f u s i o n c h a m b e r s .
T o t a l e l ap s ed
t i m e f r o m p r e p a r a t i o n t o
c h a m b e r
i n o c u l a t i o n a l l o w e d
f o r o n e t o t w o
c e l l
d i v i s i o n s
( < 0 . 5
l o g i n c r e a s e
i n
d e n s i t y ) .
C h a m b e r e x p o s u r e p r o t o c o l . C e l l s w e r e
s u s p e n d e d
i n w a -
t e r
c o l l e c t e d
f r o m
e a c h
e x p o s u r e
s i t e
i m m e d i a t e l y b e f o r e
i n t r o d u c t i o n
i n t o
t h e d i f f u s i o n
c h a m b e r s .
E a c h c h a m b e r w a s
f i l l e d
w i t h 2 0
m l
o f
e i t h e r
n o n f i l t e r e d
o r d o u b l e - f i l t e r e d w a t e r
( 0 . 4 5 -
a n d
0 . 2 - , u m - p o r e - s i z e
f i l t e r s ) a n d
2 0 m l
o f a n
a p p r o p r i -
a t e
b a c t e r i a l
s u s p e n s i o n .
D u p l i c a t e
c h a m b e r s
w e r e p r e p a r e d
a t e a c h
e x p o s u r e
s i t e f o r
f i l t e r e d a n d n o n f i l t e r e d
t r e a t m e n t s .
C h a m b e r s w e r e d e p l o y e d
0 . 5 t o 1 m b e l o w t h e
s u r f a c e i n
f l o t a t i o n
d e v i c e s
t a i l o r e d
f o r
e a c h
e x p o s u r e s i t e . A t
s e l e c t e d
e x p o s u r e
i n t e r v a l s , s a m p l e s w e r e
r e m o v e d
a s e p t i c a l l y
b y
u s e
o f s t e r i l e
h y p o d e r m i c
s y r i n g e s w i t h 2 0 - g a u g e n e e d l e s .
B e f o r e s a m p l e s
w e r e
t a k e n ,
c h a m b e r s w e r e s h a k e n ,
mem-
b r a n e s w e r e i n s p e c t e d f o r d a m a g e ,
a n d p o r t s t o p p e r s
w e r e
s w a b b e d w i t h
a l c o h o l
a n d f l a m e d .
E n u m e r a t i o n .
E . c o l i d e n s i t i e s w e r e m e a s u r e d b y
a r e p a i r
d e t e c t i o n p r o c e d u r e f o r
s t r e s s e d f e c a l c o l i f o r m s
( 1 8 ) . T h i s
p r o c e d u r e
w a s m o d i f i e d
t o
i n c l u d e
s p r e a d
p l a t i n g
o n t r y p t i c
s o y a g a r
w i t h
i n c u b a t i o n
a t
3 5 C f o r
2
h ,
f o l l o w e d
b y
o v e r l a y i n g
w i t h
1 0 m l
o f
v i o l e t
r e d
b i l e
a g a r
GIBCO
D i a g n o s t i c s ,
M a d i s o n , W i s . )
a n d
i n c u b a t i o n
a t 4 4 . 5
0 . 5 C
f o r
2 2
2 h . W e
a d a p t e d
t h e
r e p a i r
d e t e c t i o n p r o c e d u r e
f o r
S a l m o n e l l a
s p p . e n u m e r a t i o n
b y o v e r l a y i n g
t h e
p l a t e s
w i t h
1 0
m l
o f
b r i l l i a n t
g r e e n
s u l f a
a g a r ( D i f c o
L a b o r a t o r i e s ,
D e t r o i t , M i c h . ) a n d i n c u b a t i n g
t h e s a m p l e s
a t 4 2
0 . 5 C .
T e s t
b a c t e r i a
w e r e
a l s o
e nu m e r a t e d b y
n o n r e s u s c i t a t i v e
p r o c e d u r e s .
E . c o l i w a s r e c o v e r e d b y b e i n g
s p r e a d
p l a t e d
d i r e c t l y o n t o
v i o l e t
r e d
b i l e a g a r
a n d
i n c u b a t i o n
a t 4 4 . 5 C f o r
2 2
2
h .
S a l m o n e l l a
s p p .
w e r e e n u m e r a t e d b y
b e i n g
s p r e a d
p l a t e d
o n t o
b r i l l i a n t
g r e e n
s u l f a
a g a r
a n d
i n c u b a t e d a t 4 2 . 5 C
f o r
2 2
2 h .
H e t e r o t r o p h i c
b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s
w e r e e n u m e r a t ed b y
b e i n g
s p r e a d
p l a t e d o n
a
h e t e r o t r o p h
m e d i u m 2 ) . C o l o n i e s
w e r e c o u n t e d
a f t e r 2 w e e k s o f i n cu b a t i o n
a t
r o o m t e m p e r a -
t u r e
a n d
c o r r e c t e d
f o r
g r o w t h
o f
e n t e r i c
t e s t
c e l l s
b y
s u b -
t r a c t i o n . B a c t e r i o v o r o u s
a n d
l y t i c m i c r o o r g a n i s m s
w e r e
c o u n t e d
b y p l a q u e
a s s a y ( 1 2 ) .
T o t a l h e t e r o t r o p h i c
a n d a u t o -
t r o p h i c
m i c r o f l a g e l l a t e s
w e r e
e n u m e r a t e d b y e p i f l u o r e s c e n c e
m i c r o s c o p y 2 ) .
C h a m b e r s c o n t a i n i n g
e n t e r i c b a c t e r i a
i n
f i l t e r - s t e r i l i z e d s i t e w a t e r w e r e r o u t i n e l y e x a m i n e d
f o r c o n -
t a m i n a t i o n
b y
a u t o c h t h o n o u s m i cr o o r g a n i s m s , u s i n g
m e t h -
o d s d i s c u s s e d
a b o v e .
D e t e r m i n a t i o n
o f s u b l e t h a l
s t r e s s .
q u a n t i t a t i v e
i nd e x o f
s u b l e t h a l s t r e s s
w a s
o b t a i n e d
b y
c o m p a r i n g
d e n s i t i e s o f
o r g a n i s m s
r e c o v e r e d
b y
t h e
r e p a i r p r o c e d u r e s
d e s c r i b e d
a b o v e
w i t h
t h o s e o b t a i n e d
when s e l e c t i v e m e d i a
a n d
t e m -
p e r a t u r e s
w e r e
a p p l i e d .
A
s e c o n d
m e t h o d ,
b a s e d o n e l e c t r o -
c h e m i c a l
d e t e c t i o n
1 ) ,
w a s
u s e d t o
q u a n t i f y
s t r e s s
i n
E . c o l i .
S t r e s s
w a s d e f i n e d a s
t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n
a
p r e d i c t e d
e l e c t r o c h e m i c a l
d e t e c t i o n
t i m e
( E D T )
i n
E C
medium
( D i f c o )
a t
4 4 . 5 C
f o r
n o n e x p o s e d
c e l l s
a n d
t h e o b s e r v e d
E DT
f o r
c e l l s
e x p o s e d
t o a
s e l e c t e d t r e a t m e n t .
RESULTS
C h a n g e s
i n d e n s i t i e s
o f E .
c o l i a n d
S a l m o n e l l a
s p p .
w e r e
o b s e r v e d i n f i l t e r e d
a n d
n o n f i l t e r e d
d i f f u s i o n c h a m b e r s
a t
e a c h
e x p o s u r e
s i t e .
T h e s e
c h a n g e s
a r e
i l l u s t r a t e d w i t h s u r -
v i v a l c u r v e s
f r o m t h e F o x
M i l l Run s i t e
( F i g .
2 a n d
3 ) ,
w h i c h
w e r e
g e n e r a l l y
n o n l i n e a r ;
t h e
c u r v e s
o f t e n
m a n i f e s t e d a
m u l t i p l i c a t i o n p h a s e
d u r i n g
t h e
f i r s t
3
d a y s ,
f o l l o w e d
b y
a
s e c o n d
p e r i o d
c h a r a c t e r i z e d
b y
s t a b l e o r
d e c l i n i n g
d e n s i t i e s .
V O L .
5 4 ,
1 9 8 8
8/10/2019 Survival of Escherichia Coli and Salmonella Spp. In
3/6
2 9 0 4
RHODES AND KATOR
6 -
4
2 -
6 -
4
4 (
2 -
E .
c o l i
2 4 6 8
1 0
1 2 1 4
1 6
Time ( d a y s )
F I G .
2 .
S u r v i v a l
o f
E .
c o l i
i n
d i f f u s i o n
c h a m b e r s
c o n t a i n i n g
f i l t e r e d a n d n o n f i l t e r e d
F o x
M i l l
Run
w a t e r a f t e r i n s i t u e x p o s u r e
a t
F o x M i l l
Run d u r i n g v a r i o u s
m o n t h s . S y m b o l s : 0 , F e b r u a r y ;
0 ,
M a r c h ; A , A p r i l ;
A ,
M a y ;
0 , J u l y ; * , N o v e m b e r .
To
c l e a r l y
f o c u s t h i s p a t t e r n ,
t h e
e x p o n e n t i a l d i e - o f f
c o e f f i -
c i e n t ,
k
( 1 1 , 2 2 ) ( T a b l e
1 ) ,
w a s c a l c u l a t e d f o r
t h e f i r s t 3
d a y s
o f e x p o s u r e a s
w e l l a s t h e r e ma i n i n g e x p o s u r e
p e r i o d
a t e a c h
s i t e .
E f f e c t o f
f i l t r a t i o n a n d
s e a s o n a l
w a t e r t e mp e r at u r e .
When
w a t e r t e m p e r a t u r e s
w e r e
1 8 C o r h i g h e r ,
l a r g e
n e g a t i v e
v a l u e s
o f k , r e f l e c t i n g
m u l t i p l i c a t i o n ,
o c c u r r e d
d u r i n g t h e
i n i t i a l
e x p o s u r e
p h a s e
i n
b o t h
f i l t e r e d a n d n o n f i l t e r e d
w a t e r .
S u b s e q u e n t l y ,
r e d u c t i o n s
i n
d e n s i t i e s o f E .
c o l i a n d S a l m o -
S a l m o n e l l a
s p p .
6
-
4
2 -
F i l t e r e d
z : - _ _ _
= f f i _ - -
:
I *
___-
=
0
O
2
4 6 8
1 1 1
0
2
4i681
12 14
1
6
A
6 -
4
2
N o n f i l t e r e d
E - 0 -
~ ~
O_~~~
P
A t - . ~ 0
,
6 8
1 0 1 2
14
16
Time ( d a y s )
F I G .
3 . S u r v i v a l o f S a l m o n e l l a
spp. i n
d i f f u s i o n c h a m b e r s
con-
t a i n i n g f i l t e r e d a n d
n o n f i l t e r e d
Fox M i l l Run
water a f t e r i n
s i t u
exposure
a t Fox M i l l Run
d u r i n g
v a r i o u s m o n t h s .
S y m b o l s : 0,
F e b r u a r y ; 0,
M ar c h ; A ,
A p r i l ; A, M a y ; O ,
J u l y ;
* ,
N o v e m b e r .
n e l l a s p p . w e r e s i g n i f i c a n t l y
g r e a t e r i n n o n f i l t e r e d
t h a n i n
f i l t e r e d w a t e r
( W i l c o x o n
s i g n e d - r a n k s t e s t ,
P
c
0 . 0 0 2 ) .
B e l o w 1 0 C , s u r v i v a l
d i f f e r e d b e t w e e n
E .
c o l i
a n d S a l m o -
n e l l a
s p p . E .
c o l i
s u r v i v a l d u r i n g
t h e
f i r s t
3
d a y s
w a s
v a r i a b l e ,
w i t h s m a l l
d i f f e r e n c e s
b e t w e e n
f i l t e r e d
a n d
n o n f i l -
t e r e d
w a t e r
c o n d i t i o n s .
D u r i n g t h e
r e m a i n i n g p e r i o d ,
E .
c o l i
m o r t a l i t y
r a t e s w e r e i n v e r s e l y
c o r r e l a t e d
w i t h
t e m p e r a t u r e
( K e n d a l l ' s
t a u ,
P
c
0 . 0 2 )
i n
b o t h
f i l t e r e d
a n d
n o n f i l t e r e d
t r e a t m e n t s . I n
c o n t r a s t , a t
l o w t e m p e r a t u r e s s m a l l
a b s o l u t e
v a l u e s
o f k f o r
S a l m o n e l l a s p p .
r e f l e c t e d l o w r a t e s
o f
a f t e r g r o w t h o r
d i e - o f f d u r i n g
t h e
i n i t i a l
e x p o s u r e p e r i o d .
A f t e r
3 d a y s , S a l m o n e l l a s p p .
d i e - o f f w a s
g r e a t e r
i n
n o n f i l -
t e r e d t h a n
i n f i l t e r e d
w a t e r . T h e r e
w a s n o s i g n i f i c a n t
c o r r e -
l a t i o n b e t w e e n
m o r t a l i t y
o f
S a l m o n e l l a
s p p .
a n d t e m p e r a t u r e
( K e n d a l l ' s t a u , P
2
0 . 0 5 ) i n
e i t h e r
f i l t e r e d o r
n o n f i l t e r e d
w a t e r .
M i c r o f l a g e l l a t e
d e n s i t i e s
r e a c h e d
m e a n maximum v a l u e s
d u r i n g
t h e i n i t i a l
3 - d a y
e x p o s u r e
p e r i o d
( F i g . 4 ) i n
A p r i l ,
M a y , a n d
J u l y . T h e s e t i m e s
c o r r e s p o n d e d
w i t h i n i t i a t i o n
o f
t h e s p r i n g
b l o o m
a n d i n c r e a s i n g
s e a s o n a l w a t e r
t e m p e r a -
t u r e s . A f t e r
3
d a y s ,
d e n s i t i e s
d e c l i n e d
o v e r t h e
r e m a i n d e r
o f
t h e
e x p o s u r e p e r i o d .
I n c o n t r a s t ,
a t s e a s o n a l t e m p e r a t u r e s
o f
c a .
1 0 C
o r
l e s s , m i c r o f l a g e l l a t e
n u m b e r s d e c r e a s e d a n d
t h e n
i n c r e a s e d ,
r e a c h i n g
maximum
v a l u e s
a t
8
d a y s
( N o v e m b e r )
o r l a t e r
( F e b r u a r y a n d
M ar c h ) . P l a q u e d e n s i t i e s
r e a c h e d
maximum
v a l u e s a t t h e w a r m e s t
t e m p e r a t u r e s
a n d
d e c l i n e d
a t t e m p e r a t u r e s
b e l o w
1 0 C . Maximum
d e c r e a s e s i n e n t e r i c
b a c t e r i a l d e n s i t i e s
( 3
t o 8 d a y s )
g e n e r a l l y c o r r e s p o n d e d
w i t h
t h e t i m e s
a t w h i c h
c o m p o n e n t s
o f
t h e
a u t o c h t h o n o u s
m i c r o -
b i o t a
w e r e
i n c r e a s i n g o r h a d r e a c h e d
maximum
d e n s i t i e s .
H e t e r o t r o p h i c
b a c t e r i a a l s o
r e a c h e d maximum
d e n s i t i e s
w i t h i n 3 t o 8 d a y s
o f e x p o s u r e ( d a t a
n o t s h o w n ) .
E f f e c t o f
e x p o s u r e s i t e .
S a l m o n e l l a s p p .
s u r v i v a l
i n f i l t e r e d
w a t e r
w a s
f a v o r e d
a t
t h e
F o x
M i l l
Run s i t e ( W i l c o x o n
s i g n e d - r a n k s t e s t ,
P
=
0 . 0 3 ) r e l a t i v e
t o
t h a t a t t h e
W a r e R i v e r
l o c a t i o n . D i f f e r e n c e s
i n
d i e - o f f
c o e f f i c i e n t s b e t w e e n
s i t e s
w e r e g r e a t e s t
d u r i n g F e b r u a r y
a n d M a r c h .
T h e r e
w a s
n o
s i g n i f i c a n t
d i f f e r e n c e b e t w e e n
s i t e s
i n E .
c o l i
s u r v i v a l
i n
f i l t e r e d
w a t e r
o r
u n d e r
n o n f i l t e r e d
c o n d i t i o n s
f o r e i t h e r
t y p e
o f
e n t e r i c
b a c t e r i a
( W i l c o x o n
s i g n e d - r a n k s
t e s t ,
P > 0 . 0 5 ) .
S u r v i v a l
o f E . c o l i
v e r s u s S a l m o n e l l a
s p p .
S u r v i v a l
o f
S a l m o n e l l a s p p .
w a s
s i g n i f i c a n t l y
g r e a t e r
t h a n
t h a t
o f E .
c o l i
( W i l c o x o n
s i g n e d - r a n k s t e s t ,
P
=
0 . 0 2 5 ) i n
f i l t e r e d w a t e r a t
F o x M i l l
R u n . I f
t h e e n t i r e d a t a
s e t i s
c o n s i d e r e d ,
t h e r e w a s
n o
s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e
( W i l c o x o n
s i g n e d - r a n k s
t e s t ,
P >
0 . 0 5 )
i n
s u r v i v a l
b e t w e e n
s p e c i e s o f
t e s t b a c t e r i a
i n f i l t e r e d
w a t e r
a t t h e W a r e
R i v e r s i t e .
H o w e v e r , a t
l o w w a t e r
t e m p e r a t u r e s ,
s u r v i v a l o f
S a l m o n e l l a
s p p .
w a s f a v o r e d a t
b o t h s i t e s ;
1 0 0 a n d 83
o f s a l m o n el l a e
s u r v i v e d
a f t e r
1 w e e k
o f
e x p o s u r e
i n F o x M i l l
Run
a n d
t h e W a r e R i v e r
s i t e ,
r e s p e c t i v e l y ,
c o m p a r e d
w i t h .6
o f
E .
c o l i
d u r i n g
t h e s a m e
p e r i o d .
S i m i l a r
d i f f e r e n c e s w e r e
n o t o b s e r v e d
i n n o n f i l t e r e d
w a t e r .
S u b l e t h a l s t r e s s .
S u b l e t h a l s t r e s s
i n E .
c o l i
w a s
i n v e r s e l y
r e l a t e d
t o
w a t e r t e m p e r a t u r e ,
a s
d e m o n s t r a t e d
b y
r e p r e -
s e n t a t i v e
e x p e r i m e n t s
s h o w n i n F i g . 5 . P r o n o u n c e d
E DT
d e l a y s
o b s e r v e d
i n F e b r u a r y
a n d M a r c h
i n c r e a s e d
p r o g r e s -
s i v e l y
w i t h e x p o s u r e .
D u r i n g
N o v e m b e r a n d
A p r i l ,
t h e
m i n i m u m s t r e s s
e v i d e n t a t 3
d a y s d i d
n o t p r o g r e s s i v e l y
i n t e n s i f y . E DT
d e l a y s w e r e o b s e r v e d
o n l y a f t e r
1 5
d a y s
i n
May a n d
J u l y ,
p e r i o d s o f e l e v a t e d
t e m p e r a t u r e .
E n u m e r a t i o n
o f
E .
c o l i
a n d
S a l m o n e l l a s p p . b y r e s u s c i -
t a t i v e a n d
n o n r e s u s c i t a t i v e
m e t h o d s
s h o w e d t h e d e v e l o p -
m e n t o f
s u b l e t h a l s t r e s s i n
t h e F e b r u a r y
a n d M a r c h
e x p e r i -
m e n t s
( T a b l e 2 ) .
I n c o n t r a s t ,
d i f f e r e n c e s
i n r e c o v e r y a s
d e t e r m i n e d
b y r e s u s c i t a t i v e
a n d
n o n r e s u s c i t a t i v e m e t h o d s
F i l t e r e d
7
. . _
,
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- - - *
0
0
. 0
E
1 - j
Q
=
CP
0
2 4 6
8
1 0
1 2
1 4
N o n f i l t e r e d
- ~ ~ ~ ~ ~ ~
A~
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El
0
I - - ,
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0
-
A P P L .
E N V I R O N . M I C R O B I O L .
8/10/2019 Survival of Escherichia Coli and Salmonella Spp. In
4/6
SURV I V A L
O F E . COLI
AND
SALMONELLA S P P . 2 9 0 5
T A B L E
1 .
S u r v i v a l o f E .
c o l i
a n d S a l m o n e l l a s p p . i n f i l t e r e d a n d n o n f i l t e r e d e s t u a r i n e
w a t e r d u r i n g
t w o e x p o s u r e
i n t e r v a l s a t
e a c h s i t e
D i e - o f f
c o e f f i c i e n t ( k
[ d a y - l ] ) a
E . c o l i S a l m o n e l l a s p p .
Mo o f Mean w a t e r Mean
s a l i n i t y
E x p o s u r e
i n t e r v a l
( d a y s ) E x p o s u r e
i n t e r v a l
( d a y s )
exposure
temp
( C )
( s ) E x p o s u r e interval_ day)_Exposure_iterval_ days
0 - 3 3 - 1 5
0 - 3 3 - 1 5
F N F
F
N F
F
N F
F
N F
F o x
M i l l
Run
F e b .
6 . 7 1 1 . 7 - 0 . 1 5 0 . 0 3 0 . 6 8 0 . 9 2 - 0 . 0 3 - 0 . 1 6 0 . 0 4 0 . 8 7
M a r c h
8 . 8 1 8 . 2 0 . 3 6 0 . 2 3 0 . 5 8 0 . 7 2 0 . 0 2 0 . 0 1 0 . 0 7 0 . 7 4
A p r i l 1 7 . 8 1 4 . 3 - 0 . 8 4 - 0 . 3 0
0 . 0 1
0 . 5 8 - 0 . 4 4 0 . 3 6
0 . 0 3 0 . 4 9
May 2 5 . 1 1 8 . 2 - 0 . 6 5 - 0 . 4 8 0 . 0 3 0 . 8 0 - 0 . 9 9 0 . 3 2 0 . 0 7 0 . 4 5
J u l y
2 8 . 2 1 9 . 9 - 0 . 8 6 - 0 . 5 6 0 . 0 7 0 . 5 7 - 1 . 0 6 - 0 . 9 6 0 . 0 6 0 . 6 8
N o v . 1 0 . 3 2 2 . 1
- 0 . 1 7 - 0 . 0 8 0 . 0 9
0 . 5 1
0 . 0 4 0 . 4 7 0 . 0 7 0 . 3 7
W a r e R i v e r
F e b .
5 . 9
2 1 . 1 0 . 0 5
0 . 0 7 0 . 9 2 0 . 8 3 - 0 . 0 9 - 0 . 2 0 0 . 2 5 0 . 5 1
M a r c h 7 . 7 2 3 . 6
0 . 7 2 0 . 7 7
0 . 6 4 0 . 6 2 0 . 1 8 0 . 1 6
0 . 6 1 0 . 7 5
J u l y
2 7 . 9
2 1 . 7
- 0 . 5 1
- 0 . 3 8 0 . 0 7 0 . 4 3 - 0 . 7 8 0 . 6 7
0 . 1 0
0 . 5 5
N o v .
1 1 . 7
2 4 . 4 - 0 . 5 0
0 . 3 3
0 . 0 8
0 . 5 3
0 . 2 2 0 . 1 1 0 . 1 0
0 . 4 8
a
-k
=
l n
C 2 1 C 1 ) / T 2
T 1 ) ,
w h e r e
C 2
a n d
C 1 a r e t h e b a c t e r i a l d e n s i t i e s a t
f i n a l
( T 2 )
a n d i n i t i a l
T 1
t i m e s
o f e x p o s ur e . F , F i l t e r e d
e s t u a r i n e w a t e r ;
NF, n o n f i l t e r e d
e s t u a r i n e w a t e r .
were g e n e r a l l y
l e s s
t h a n
0 . 1 l o g u n i t f o r
b o t h o r g a n i s m s
d u r i n g
J u l y
a n d N o v e m b e r .
DISCUSSION
D i e - o f f o f e n t e r i c b a c t e r i a i n e s t u a r i n e
e n v i r o n m e n t s h a s
b e e n
b r o a d l y
a t t r i b u t e d t o a
v a r i e t y
o f
i n t e r a c t i n g
p h y s i c a l ,
c h e m i c a l , a n d
b i o l o g i c a l
f a c t o r s a n d
processes. A l t h o u g h
u n d e r s t a n d i n g t h e s e
f a c t o r s a n d t h e i r r e l a t i v e
i m p o r t a n c e
i s
j u s t i f i a b l e p u r e l y on
an
e c o l o g i c a l
b a s i s ,
i n
p r a c t i c a l t e r m s
s u c h
s t u d i e s
ar e necessary t o
assess
t h e
v a l i d i t y
a n d
s u i t -
a b i l i t y
o f
t h e f e c a l
c o l i f o r m group or o t h e r m i c r o b i a l
i n d i c a -
E
Q )
0 '
Ol
0
Q)
: 3
0~
0)
0
2
4
6 8 1 0
1 2 14 1 6
Time
( d a y s )
F I G . 4 .
C h a n g e s
i n d e n s i t i e s
o f
m i c r o f l a g e l l a t e s
a n d
p l a q u e -
p r o d u c i n g m i c r o o r g a n i s ms d u r i n g
v a r i o u s
months i n d i f f u s i o n cham-
b e r s
c o n t a i n i n g
n o n f i l t e r e d e s t u a r i n e w a t e r i n o c u l a t e d
w i t h
e n t e r i c
b a c t e r i a .
S y m b o l s : 0,
F e b r u a r y ;
0,
M a r c h ; A ,
A p r i l ; A,
M a y ;
[
J u l y ;
* ,
November.
t o r s
w h i c h
may
b e
u s e d
as q u a n t i t a t i v e measures
o f
f e c a l
p o l l u t i o n
i n
s h e l l f i s h - g r o w i n g
w a t e r s .
R e s u l t s o f t h i s s t u d y d e m o n s t r a t e d
t h e p r o l o n g e d s u r v i v a l
p o t e n t i a l
o f E .
c o l i
a n d
s a l m o n e l l a e i n
t h e e s t u a r i n e e n v i r o n -
m e n t .
A t
warm t e m p e r a t u r e s , p r o n o u n c e d m u l t i p l i c a t i o n
o f
t h e
e n t e r i c
b a c t e r i a e x a m i n e d o c c u r r e d
i n i t i a l l y
i n
b o t h
f i l t e r e d
a n d
n o n f i l t e r e d e s t u a r i n e w a t e r .
O u r
e x p e r i m e n t s d i d
n o t
d e t e r m i n e w h e t h e r t h i s
m u l t i p l i c a t i o n o c c u r r e d
a t t h e
expense
o f
a m b i e n t
n u t r i e n t s or was
d u e t o u t i l i z a t i o n o f
e n d o g e n o u s
reserves.
P h y s i o l o g i c a l i n d i c e s
o f
s t r e s s d e m o n -
s t r a t e d t h a t
E .
c o l i a n d
s a l m o n e l l a e were
a l s o
m i n i m a l l y
s t r e s s e d
a t warm
w a t e r
t e m p e r a t u r e s .
T h e s e
o b s e r v a t i o n s
s u p p o r t p r e v i o u s
f i n d i n g s
i n
a n o t h e r
e s t u a r y
t h a t
E . c o l i
d i e - o f f ( 2 )
a n d
s u b l e t h a l
s t r e s s
( 3 4 )
i n f i l t e r e d
w a t e r
ar e
i n v e r s e l y
r e l a t e d t o t e m p e r a t u r e .
I - -
F-
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C )
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: 3
E
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0
1 0 - U
8 -
March
6 -
4 -
2 -
0 2 4
6
8
1 0 1 2
1 4
1 6
Time
( d a y s )
F I G .
5 .
I n c i d e n c e
o f s u b l e t h a l s t r e s s
i n
E .
c o l i
e x p o s e d
i n d if fu -
s i o n c h a m b e r s a t
Fox
M i l l
Run
( 0 ,
[ r e p l i c a t e s ] )
an d Ware
R i v e r
( I , * [ r e p l i c a t e s ] )
as measured
b y
a n
e l e c t r o c h e m i c a l
d e t e c t i o n
m e t h o d .
V a l u e s o f
1 0
i n d i c a t e
no
e l e c t r o c h e m i c a l
r e s p o n s e
a f t e r a t
l e a s t 1 8 h
o f
i n c u b a t i o n .
- - - , U p p e r
95 c o n f i d e n c e
l i m i t f o r t h e
p r e d i c t e d
EDT.
5 B a c t e r i o v o r e s
a n d
L y t i c
M i c r o o r g a n i s m s
2 ~~ 0 - - - - = - Z g
--
- 2
o
A
S- n ^ m
A
~ ~ ~ ~ ~ ~
.. .. ..
0
-
/
r
V O L .
5 4 ,
1 9 8 8
I
8/10/2019 Survival of Escherichia Coli and Salmonella Spp. In
5/6
2 9 0 6 RHODES A N D
KATOR
T A B L E
2 .
S u b l e t h a l
s t r e s s
a s m e a s u r e d
b y p e r c e n t
c u l t u r a b i l i t y ,
u s i n g
n o n r e s u s c i t a t i v e a n d r e s u s c i t a t i v e
e n u m e r a t i o n
m e t h o d s
M o o f
R e c o v e r y a f t e r 1 wk o f
e x p o s u r e
e x p o s u r e
E .
c o l i
S a l m o n e l l a
s p p .
F o x
M i l l
Run
F e b .
N G b 5 8
M a r c h
6 5
6 2
A p r i l
1 0 7
9 6
May
1 0 5
9 4
J u l y 1 0 6
9 5
N o v .
9 8 1 1 9
W a r e
R i v e r
F e b .
N G
6 5
M a r c h 3 7
5 3
J u l y 1 0 2
1 2 0
N o v .
1 0 7 8 1
a
P e r c e n t
r e c o v e r y
c a l c u l a t e d
a s
( b a c t e r i a l
d e n s i t y
a s
n o n r e s u s c i t a t e d
c e l l s / b a c t e r i a l
d e n s i t y
a s
r e s u s c i t a t e d
c e l l s )
x
1 0 0 .
b
N G ,
No
g r o w t h
on n o n r e s u s c i t a t i v e
m e d i u m .
I n
c o n t r a s t ,
a
c o n c l u s i o n
o f o t h e r i n
s i t u
s u r v i v a l s t u d i e s
( 1 3 ,
4 1 ) w a s
t h a t E . c o l i d i e - o f f
w a s
d i r e c t l y
r e l a t e d t o
t e m p e r a t u r e .
W e b e l i e v e
t h a t u n d e t e c t e d
c o n t a m i n a t i o n
b y
i n d i g e n o u s
m i cr o o r g a n i s m s a n d
t h e
e x p e r i m e n t a l
m e t h o d o l -
o g y
u s e d
may
h a v e c o n t r i b u t e d t o t h i s
c o n c l u s i o n .
I t
h a s
b e e n o b s e r v e d b y
u s ( 2 )
a n d o t h e r s
( 3 6 )
t h a t
c o m m o n l y
u s e d
m e m b r a n e - d i f f u s i o n
c h a m b e r s b e c o m e
c o n t a m i n a t e d
b y
b a c -
t e r i a
a n d
e u c a r y o t e s i n
t h e e n v i r o n m e n t . H a r s h
l a b o r a t o r y
m a n i p u l a t i o n s
o f t e s t
b a c t e r i a l
i n o c u l a
( e . g . , c e n t r i f u g a t i o n ,
w a s h i n g , a n d
r e s t i n g
a t
c o l d t e m p e r a t u r e s ) s t r e s s
t h e
c e l l s
b e f o r e
e x p o s u r e
t o
e n v i r o n m e n t a l
s t r e s s o r s ,
a n d
r e c o v e r y
o f
d e b i l i t a t e d
c e l l s b y s e l e c t i v e
e n u m e r a t i o n
t e c h n i q u e s
w i l l
u n d e r e s t i m a t e t h e
s u r v i v i n g p o p u l a t i o n ( 3 4 ) .
D i f f e r e n c e s
i n
s u r v i v a l
a s a
f u n c t i o n
o f
s e a s o n w e r e a l s o
r e l a t e d t o t h e a u t o c h t h o n o u s e s t u a r i n e
m i c r o b i o t a . P r o -
n o u n c e d
d i f f e r e n c e s
i n
m o r t a l i t i e s u n d e r
f i l t e r e d
v e r s u s
n o n f i l t e r e d
c o n d i t i o n s
d u r i n g
t h e
w a r m e s t
t e m p e r a t u r e s
w e r e a s s o c i a t e d w i t h t h e
p r e s e n ce o f
maximum d e n s i t i e s o f
i n d i g e n o u s
m i c r o o r g a n i s m s . B a c t e r i a l
d e n s i t i e s a t e l e v a t e d
t e m p e r a t u r e s
w e r e
t h e
n e t
r e s u l t
o f
m u l t i p l i c a t i o n
( d u r i n g
t h e
i n i t i a l
3
d a y s a n d
p r e d a t i o n - a n t a g o n i s m
a n d
d e a t h .
B e c a u s e
o f
g r e a t e r
m u l t i p l i c a t i o n
a t warm
t e m p e r a t u r e s ,
d i e - o f f i n
n o n f i l t e r e d
w a t e r w a s l e s s
a p p a r e n t
t h a n
a t
c o l d
t e m p e r a -
t u r e s .
A l t h o u g h e n t e r i c
a t t r i t i o n
w a s
s i g n i f i c a n t
i n
n o n f i l t e r e d
w a t e r , s u b s t a n t i a l
n u m b e r s o f t e s t
o r g a n i s m s
p e r s i s t e d ( e . g . ,
1 0 2 t o 1 0 4 b a c t e r i a
p e r m l ) a f t e r 2
w e e k s
o f
e x p o s u r e .
I n v i t r o
s t u d i e s
u s i n g
n o n f i l t e r e d
s e a w a t e r
h a v e s h o w n
m o r e
d r a -
m a t i c r e d u c t i o n s
i n E . c o l i
( 2 5 , 3 1 ) . I t
i s p o s s i b l e
t h a t
b e l o w
c r i t i c a l
p r e y
d e n s i t i e s o f
1 0 6 t o
1 0 7
b a c t e r i a
p e r
m l
( 4 , 1 0 , 1 4 ,
1 5 ,
1 7 , 4 0 ) , p r e d a t o r s a n d
p r e y
may c o e x i s t . T h e c o n t i n u e d
d e c l i n e
o f
b a c t e r i a
b e y o n d
t h e
l e v e l
c r i t i c a l
t o
s u p p o r t
p r e d a t i o n
i n
v i t r o ma y b e d u e
t o u n s u c c e s s f u l
c o m p e t i t i o n
w i t h
i n d i g e n o u s
m i c r o o r g a n i s m s f o r
n u t r i e n t s . I n
d i f f u s i o n
c h a m b e r s , n u t r i e n t s
may
c o n t i n u e
t o
b e
r e p l e n i s h e d b y
d i f f u s i o n
a t
t h e m e m b r a n e
i n t e r f a c e .
C o m p a r a t i v e
i n s i t u
s u r v i v a l s t u d i e s
o f
E .
c o l i
a n d S a l m o -
n e l l a
s p p .
a r e
f e w a n d
h a v e n e i t h e r
a d d r e s s e d t h e
s i g n i f i -
c a n c e o f
t e m p e r a t u r e
n o r
b e e n
c o n d u c t e d a t
t e m p e r a t u r e s
b e l o w
1 0 C . A l t h o u g h c o m p a r a b l e
i n i t i a l d e a t h
r a t e s o f E .
c o l i a n d
s a l m o n e l l a e ,
f o l l o w e d b y p r o l o n g e d
s u r v i v a l o f t h e
f o r m e r , w e r e r e p o r t e d
3 ) , o t h e r s
( 3 0 ,
4 1 )
n o t e d
t h a t S a l m o -
n e l l a
s p p . e x h i b i t e d s o m e w h a t
g r e a t e r
v i a b i l i t y t h a n d i d
E .
c o l i .
O u r
r e s u l t s
d e m o n s t r a t e d
t h a t
a l t h o u g h E .
c o l i
a n d
s a l m o n e l l a e s h o w e d
s i m i l a r
s u r v i v a l b o t h
i n t h e
a b s e n c e a n d
i n t h e
p r e s e n c e
o f n a t u r a l m i c r o b i o t a
a t
warm
t e m p e r a t u r e s ,
d i e - o f f r e s u l t s f o r t h e
i n d i c a t o r a n d
p a t h o g e n
i n
f i l t e r e d
w a t e r
a t
t e m p e r a t u r e s
b e l o w
1 0 C w e r e
q u i t e
d i f f e r e n t .
T h e s e
r e s u l t s
ma y e x p l a i n
t h e
f i n d i n g s
o f
B r e z e n s k i a n d
R u s s o -
manno
7 ) ,
who
r e p o r t e d
t h e
i s o l a t i o n o f
s a l m o n e l l a e
f r o m
i n d i v i d u a l c l a m s
w i t h f e c a l
c o l i f o r m
m o s t - p r o b a b l e - n u m b e r
v a l u e s o f
< 2 0 / 1 0 0
g .
T h e
a u t h o r s
n o t e d
t h a t t h e
w a t e r
t e m p e r a t u r e
was 5 C
a n d
s p e c u l a t e d
t h a t s a l m o n e l l a e
ma y
e x h i b i t
g r e a t e r
s u r v i v a l
t h a n
d o f e c a l
c o l i f o r m s i n t h e c l a m
s p e c i e s
s t u d i e d .
F i n a l l y ,
i t i s o f
p a r t i c u l a r
i n t e r e s t
t h a t e v e n
a t
e n v i r o n m e n t a l
t e m p e r a t u r e s
b e l o w
1 0 C ,
t h e
p r e s e n ce o f
t h e
m i c r o b i o t a
w a s a s s o c i a t e d w i t h
r e d u c e d s u r v i v a l
o f
s a l m o n e l l a e .
R e c e n t i n
v i t r o s t u d i e s o f s u r v i v a l o f
E . c o l i a n d
S a l m o -
n e l l a e
s p p .
i n s t e r i l e
e s t u a r i n e
w a t e r h a v e
d e m o n s t r a t e d b o t h
v i r t u a l l y u n a l t e r e d b a c t e r i a l
d e n s i t i e s
o v e r
a 1 0 - d a y
p e r i o d
( 2 4 , 2 5 )
a n d
a n i m m e d i a t e d e c l i n e
i n c u l t u r a b l e b a c t e r i a
9 ,
3 7 , 4 3 ) . I t
i s
p o s s i b l e t h a t t h e
s u r v i v a l o f
e n t e r i c b a c t e r i a
o b s e r v e d i n t h i s
s t u d y may h a v e b e e n
e n h a n c e d n o t o n l y
b y
n u t r i e n t
e n r i c h m e n t
a c r o s s t h e
m e m b r a n e
i n t e r f a c e s b u t
a l s o
b y a b e n e f i c i a l a s s o c i a t i o n
w i t h
f o u l i n g
o r g a n i s m s .
M c F e t e r s
e t
a l .
( 2 8 , 2 9 ) d e m o n s t r a t e d t h e
p o t e n t i a l
o f
a s y m b i o t i c
r e l a t i o n s h i p b e t w e e n
i n d i c a t o r a n d p a t h o g e n i c
b a c t e r i a
a n d
a l g a l
m a t c o m m u n i t i e s i n
o l i g o t r o p h i c f r e s h
w a t e r .
I n t h e p r e s e n c e
o f t h e i n d i g e n o u s
m i c r o b i o t a ,
t h e r e
w e r e
n o
d i s c e r n i b l e d i f f e r e n c e s i n b a c t e r i a l
s u r v i v a l b e t w e e n
t h e
s t u d y
s i t e s .
T h i s
i n v e s t i g a t i o n
h a s
d e m o n s t r a t e d t h a t E . c o l i
a n d
S a l m o n e l l a
s p p .
c a n
m u l t i p l y a n d
s u r v i v e i n t h e e s t u a r i n e
e n v i r o n m e n t .
T h e i r d e m i s e
w a s a t t r i b u t e d
p r i m a r i l y
t o
e i t h e r
l o w
w a t e r
t e m p e r a t u r e s
o r
p r e d a t i o n - a n t a g o n i s m
b y t h e
n a t u r a l
m i c r o b i o t a
a t w a r m e r
t e m p e r a t u r e s .
A l t h o u g h r e s u l t s
o b t a i n e d
w i t h i n t h e
m i c r o c o s m o f
m e m b r a n e - d i f f u s i o n c h a m -
b e r s ma y b e
s u b j e c t
t o b o t t l e
e f f e c t s ,
t h e s e
f i n d i n g s p o t e n -
t i a l l y p a r a l l e l
n a t u r a l e v e n t s o n
s u s p e n d e d p a r t i c l e s
o r w i t h i n
s e d i m e n t s .
T h e
m o s t
i m p o r t a n t
f i n d i n g s
o f t h i s
s t u d y
w e r e
i )
t h e
p e r s i s t e n c e o f S a l m o n e l l a
s p p . c o m p a r e d w i t h
E .
c o l i i n
f i l t e r e d
w a t e r
b e l o w
1 0 C
a n d
i i )
t h e p o t e n t i a l
o f
t h e s e
o r g a n i s m s f o r
a f t e r g r o w t h a n d s u r v i v a l
d u r i n g
warm
t e m p e r -
a t u r e
c o n d i t i o n s . T h e
f o r m e r
s u g g e s t s t h e n e e d f o r s t u d i e s
t o
e x a m i n e t h e r o l e
o f t h e i n d i g e n o u s
m i c r o b i o t a
i n
e n t e r i c
s u r v i v a l
a t
l o w w a t e r
t e m p e r a t u r e s . T h e
l a t t e r
q u e s t i o n s
t h e
u n i v e r s a l
v a l i d i t y o f f e c a l
c o l i f o r m s a s a
n u m e r i c a l s t a n d a r d
i n s h e l l f i s h - g r o w i n g
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A C K N O W L E D G M E N T S
W e
t h a n k
J a n e W i n g r o v e ,
J o s e p h
B o y e r ,
a n d
K e n n e t h
W o r r e l l
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t h e i r v a l u a b l e t e c h n i c a l
a n d
f i e l d
a s s i s t a n c e .
A p p r e c i a t i o n i s e x -
p r e s s e d
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S a l l y
H e n d e r s o n , V i r g i n i a D e p a r t m e n t
o f G e n e r a l
S e r v -
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A l m a
M u r l i n ,
C e n t e r s
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D i s e a s e C o n t r o l , f o r
s u p p l y i n g
b a c t e r i a l
c u l t u r e s a n d
t o
t h e
Ware R i v e r
Y a c h t C l u b f o r
u s e o f t h e i r
f a c i l i t i e s . W e a l s o
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E r i c
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M i c h a e l
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F e d . 4 1 : 7 2 5 - 7 3 7 .
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An e v a l u a t i o n
o f
f a c t o r s
a f f e c t i n g t h e s u r v i v a l
o f E s c h e r i c h i a
c o l i
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S a l i n i t y , p H ,
a n d n u t r i e n t s .
A p p l . M i c r o b i o l . 8 : 2 4 7 - 2 5 0 .
9 . C o l w e l l , R . R . , P . R .
B r a y t o n ,
D . J .
G r i m e s , D . B . R o z a k , S . A .
H u q , a n d L . M.
P a l m e r .
1 9 8 5 .
V i a b l e
b u t n o n - c u l t u r a b l e
V i b r i o
c h o l e r a e a n d
r e l a t e d p a t h o g e n s i n t h e
e n v i r o n m e n t : i m p l i c a t i o n s
f o r
r e l e a s e o f
g e n e t i c a l l y e n g i n e er e d m i c r o o r g a n i s m s .
B i o / T e c h -
n o l o g y
3 : 8 1 7 - 8 2 0 .
1 0 .
D a n s o , S .
K .
A . ,
a n d
M. A l e x a n d e r . 1 9 7 5 .
R e g u l a t i o n o f p r e d a -
t i o n b y
p r e y d e n s i t y : t h e
p r o t o z o a n - R h i z o b i u m r e l a t i o n s h i p .
A p p l . M i c r o b i o l .
2 9 : 5 1 5 - 5 2 1 .
1 1 .
E l - S h a a r a w i ,
A .
A . ,
a n d
W.
0 .
P i p e s .
1 9 8 2 . E n u m e r a t i o n a n d
s t a t i s t i c a l
i n t e r f e r e n c e ,
p .
4 3 - 6 6 . I n
W.
0 .
P i p e s
( e d . ) ,
B a c t e r i a l
i n d i c a t o r s
o f
p o l l u t i o n .
CR C
P r e s s , I n c . , B o c a
R a t o n ,
F l a .
1 2 .
E n z i n g e r ,
R .
M . ,
a n d
R . C . C o o p e r .
1 9 7 6 . R o l e
o f b a c t e r i a a n d
p r o t o z o a i n t h e r e m o v a l o f E s c h e r i c h i a
c o l i
f r o m
e s t u a r i n e
w a t e r s . A p p l . E n v i r o n .
M i c r o b i o l . 3 7 : 7 5 8 - 7 6 3 .
1 3 .
F a u s t , A . ,
A . E .
A o t a k y ,
a n d
M. L .
H a r g a d o n .
1 9 7 5 . E f f e c t
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s i t u
s u r v i v a l
o f E s c h e r i c h i a c o l i
MC-6
i n
a n e s t u a r i n e
e n v i r o n m e n t . A p p l .
M i c r o b i o l .
3 0 : 8 0 0 -
8 0 6 .
1 4 .
F e n c h e l ,
T .
1 9 8 2 .
E c o l o g y
o f
h e t e r o t r o p h i c
m i c r o f l a g e l l a t e s .
I I .
B i o e n e r g e t i c s
a n d
g r o w t h .
M a r . E c o l .
P r o g .
S e r .
8 : 2 2 5 - 2 3 1 .
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F r y , J . C . ,
a n d
D .
G .
S t a p l e s .
1 9 7 4 .
T h e
o c c u r r e n c e a n d
r o l e
o f
B d e l l o v i b r i o
b a c t e r i o v o r u s
i n a
p o l l u t e d
r i v e r .
W a t e r
R e s .
8 :
1 0 2 9 - 1 0 3 5 .
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G r a n a i , C . ,
I I I . ,
a n d
R . E .
S j o g r e n .
1 9 8 1 . I n s i t u a n d
l a b o r a t o r y
s t u d i e s o f
b a c t e r i a l
s u r v i v a l
u s i n g
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m i c r o p o r o u s
m e m b r a n e
s a n d w i c h .
A p p l .
E n v i r o n .
M i c r o b i o l .
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M . ,
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A l e x a n d e r .
1 9 7 8 .
P r o t o z o a n
d e n s i t y
a n d
t h e
c o ex i s t en ce o f
p r o t o z o a n
p r e d a t o r s
a n d b a c t e r i a l
p r e y .
E c o l o g y
5 9 : 1 4 0 - 1 4 6 .
1 8 . H a c k n e y , C .
R . ,
B .
R a y ,
a n d
M.
L .
S p e c k .
1 9 7 9 .
R e p a i r
d e t e c t i o n
p r o c e d u r e
f o r e n u m e r a t i o n o f f e c a l c o l i f o r m s
a n d
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f r o m s e a f o o d
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A p p l .
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m e t h o d s
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r e c o v e r y
o f
i n j u r e d
c o l i f o r m s
a n d s a l m o n e l l a e .
J .
F o o d
P r o t . 4 2 :
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C o m p e t i t i v e
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t e r i a c e a e
f r o m s e a w a t e r .
A p p l .
M i c r o b i o l .
1 6 : 1 6 1 6 - 1 6 1 8 .
2 1 .
K a p e r ,
J . B . ,
G .
S .
S a y l e r ,
M.
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B a l d i n i ,
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R . R .
C o l w e l l .
1 9 7 7 .
A m b i e n t - t e m p e r a t u r e
p r i m a r y
n o n s e l e c t i v e e n r i c h m e n t
f o r
i s o l a t i o n
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S a l m o n e l l a
s p p .
f r o m a n
e s t u a r i n e e n v i r o n m e n t .
A p p l .
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c o n t r i b u t i n g
t o
t h e
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c o l i f o r m
b a c t e r i a
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t i d a l
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P r o t o z o a n
p r e -
d a t i o n o f
E s c h e r i c h i a c o l i i n e s t u a r i n e w a t e r s .
W a t e r R e s .
1 3 :
6 5 9 - 6 6 3 .
2 4 .
M c C a m b r i d g e ,
J . ,
a n d T . A .
M c M e e k i n . 1 9 8 0 . R e l a t i v e e f f e c t s
o f
b a c t e r i a l
a n d p r o t o z o a n
p r e d a t o r s
o n
s u r v i v a l o f
E s c h e r i c h i a
c o l i
i n
e s t u a r i n e
w a t e r
s a m p l e s .
A p p l .
E n v i r o n . M i c r o b i o l . 4 0 :
9 0 7 - 9 1 1 .
2 5 .
M c C a m b r i d g e ,
J . ,
a n d T . A .
M c M e e k i n .
1 9 8 0 .
E f f e c t
o f t e m p e r -
a t u r e
o n
a c t i v i t y
o f p r e d a t o r s o f S a l m o n e l l a t y p h i m u r i u m
a n d
E s c h e r i c h i a
c o l i i n
e s t u a r i n e
w a t e r .
A u s t .
J .
M a r .
F r e s h w a t e r
R e s . 3 1 : 8 5 1 - 8 5 5 .
2 6 .
M c C a m b r i d g e ,
J . ,
a n d T . A .
M c M e e k i n . 1 9 8 1 . E f f e c t
o f
s o l a r
r a d i a t i o n a n d
p r e d a c i o u s m i c r o o r g a n i s m s
o n s u r v i v a l o f f e c a l
a n d
o t h e r
b a c t e r i a .
A p p l .
E n v i r o n . M i c r o b i o l .
4 1 : 1 0 8 3 - 1 0 8 7 .
2 7 .
M c F e t e r s ,
G . A . ,
a n d D .
G .
S t u a r t .
1 9 7 2 .
S u r v i v a l o f c o l i f o r m
b a c t e r i a
i n
n a t u r a l
w a t e r s : f i e l d
l a b o r a t o r y s t u d i e s
w i t h mem-
b r a n e - f i l t e r c h a m b e r s .
A p p l . M i c r o b i o l .
2 4 : 8 0 5 - 8 1 1 .
2 8 . M c F e t e r s , G . A . ,
S . A .
S t u a r t , a n d
S . B .
O l s o n .
1 9 7 8 .
G r o w t h
o f
h e t e r o t r o p h i c b a c t e r i a
a n d
a l g a l
e x t r a c e l l u l a r p r o d u c t s
i n
o l i g o -
t r o p h i c w a t e r s .
A p p l . E nv i r o n. M i c r o b i o l . 3 5 : 3 8 3 - 3 9 1 .
2 9 . M c F e t e r s , G . A . ,
S . A . S t u a r t , a n d S . B .
O l s o n . 1 9 7 8 .
I n t e r a c -
t i o n s
o f a l g a e a n d
h e t e r o t r o p h i c
b a c t e r i a i n
a n o l i g o t r o p h i c
s t r e a m ,
p .
5 6 - 6 1 .
I n M. W. L o u t i t a n d J . A .
R . M i l e s
( e d . ) ,
M i c r o b i a l
e c o l o g y .
S p r i n g e r - V e r l a g ,
New Y o r k .
3 0 .
M e t c a l f ,
T .
G . ,
L . W.
S l a n e t z , a n d
C . H .
B a r t l e y .
1 9 7 3 .
E n t e r i c
p a t h o g e n s
i n
e s t u a r y w a t e r s
a n d
s h e l l f i s h , p .
2 1 5 - 2 3 4 . I n C . 0 .
C h i c h e s t e r a n d H .
D . G r a h a m ( e d . ) ,
M i c r o b i a l
s a f e t y
o f f i s h e r y
p r o d u c t s .
A c a d e m i c
P r e s s ,
I n c . , N ew
Y o r k .
3 1 .
M i t c h e l l ,
R . ,
S .
Y a n k a f s k y , a n d H . W.
J a n n a s c h .
1 9 6 7 .
L y s i s o f
E s c h e r i c h i a c o l i b y
m a r i n e
m i c r o - o r g a n i s m s .
N a t u r e
( L o n d o n )
2 1 5 : 8 9 1 - 8 9 2 .
3 2 .
N a k a d a , D . , a n d B . M a g a s a n i k .
1 9 6 4 .
T h e r o l e o f i n du c er
a n d
c a t a b o l i t e
r e p r e s s o r
i n t h e
s y n t h e s i s
o f
b e t a - g a l a c t o s i d a s e
b y
E s c h e r i c h i a
c o l i . J .
M o l . B i o l .
8 : 1 0 5 1 2 7 .
3 3 . R a y , B . 1 9 7 9 . M e t h o d s t o
d e t e c t s t r e s s e d
m i c r o o r g a n i s m s . J .
F o o d P r o t . 4 2 : 3 4 6 - 3 5 5 .
3 4 .
R h o d e s ,
M.
W . ,
I .
C .
A n d e r s o n ,
a n d
H . I .
K a t o r . 1 9 8 3 . I n s i t u
d e v e l o p m e n t
o f
s u b l e t h a l s t r e s s
i n E s c h e r i c h i a
c o l i :
e f f e c t s
o n
e n u m e r a t i o n .
A p p l .
E n v i r o n .
M i c r o b i o l . 4 5 : 1 8 7 0 - 1 8 7 6 .
3 5 .
R o p e r ,
M.
M . ,
a n d K .
C . M a r s h a l l .
1 9 7 8 .
B i o l o g i c a l
c o n t r o l
a g e n t s
o f
s e w a g e b a c t e r i a
i n
m a r i n e
h a b i t a t s .
A u s t . J . M a r .
F r e s h w a t e r
R e s . 2 9 : 3 3 5 - 3 4 3 .
3 6 .
R o p e r ,
M.
M . ,
a n d
K . C .
M a r s h a l l .
1 9 7 9 . E f f e c t s
o f
s a l i n i t y
o n
s e d i m e n t a t i o n
a n d
o f
p a r t i c u l a t e s
o n
s u r v i v a l
o f
b a c t e r i a i n
e s t u a r i n e
h a b i t a t s .
G e o m i c r o b i o l .
J .
1 : 1 0 3 - 1 1 6 .
3 7 .
R o s z a k ,
D .
B . ,
D .
J . G r i m e s ,
a n d R .
R . C o l w e l l . 1 9 8 4 . V i a b l e b u t
u n r e c o v e r a b l e
s t a g e
o f S a l m o n e l l a e n t e r i t i d i s i n
a q u a t i c s y s -
t e m s .
C a n .
J . M i c r o b i o l .
3 0 : 3 3 4 - 3 3 8 .
3 8 .
S l a n e t z ,
L .
W . ,
a n d C .
H .
B a r t l e y .
1 9 6 5 . S u r v i v a l
o f f e c a l
s t r e p t o c o c c i
i n
s e a w a t e r . H e a l t h L a b . S c i . 2 : 1 4 2 - 1 4 8 .
3 9 .
S t r a n g e ,
R .
E .
1 9 7 6 .
M i c r o b i a l
r e s p o n s e
t o m i l d
s t r e s s . M e a -
d o w f i e l d
P r e s s
L t d . , D u r h a m , E n g l a n d .
4 0 .
V a r o n , M . ,
a n d B . P .
Z e i g l e r .
1 9 7 8 .
B a c t e r i a l
p r e d a t o r - p r e y
i n t e r a c t i o n a t
l o w
p r e y
d e n s i t y .
A p p l .
E n v i r o n . M i c r o b i o l .
3 6 :
1 1 - 1 7 .
4 1 .
V a s c o n c e l o s ,
G .
J . ,
a n d R .
G .
S w a r t z .
1 9 7 6 .
S u r v i v a l
o f
b a c t e r i a
i n
s e a w a t e r
u s i n g
a d i f f u s i o n c h a m b e r
a p p a r a t u s
i n
s i t u .
A p p l .
E n v i r o n . M i c r o b i o l . 3 1 : 9 1 3 - 9 2 0 .
4 2 .
V e r s t r a e t e , W . ,
a n d
J .
P .
V o e t s . 1 9 7 6 .
C o m p a r a t i v e s t u d y
o f
E .
c o l i s u r v i v a l
i n two
a q u a t i c
e c o s y s t e m s .
W a t e r R e s .
1 0 : 1 2 9 - 1 3 6 .
4 3 .
X u ,
H .
S . ,
N .
R o b e r t s ,
F .
L .
S i n g l e t o n ,
R . W.
A t t w e l l ,
D .
J .
G r i m e s ,
a n d
R . R .
C o l w e l l .
1 9 8 2 .
S u r v i v a l
a n d
v i a b i l i t y
o f
n o n c u l t u r a b l e
E s c h e r i c h i a c o l i
a n d
V i b r i o
c h o l e r a e
i n
t h e
e s t u -
a r i n e
a n d
m a r i n e e nv i r o n m en t . M i c r o b .
E c o l . 8 : 3 1 3 - 3 2 3 .
VOL.
5 4 ,
1 9 8 8