PSA-IgM

XXI Congresso Nazionale

24 Giugno 2011

Proposta nuovi protocolli clinici SIUrO e update protocolli

Andrea B. Galosi

Clinica Urologica, Ospedali Riuniti, Ancona

Accuratezza diagnostica

dell’immunocomplesso PSA-IgM nella

diagnosi precoce del carcinoma prostatico

TITOLO

Studio PSA-IgM

• Studio spontaneo

• Osservazionale

• Prospettico

• Multicentrico

• Test diagnostico

Gli immunocomplessi rappresentano una nuova classe di biomarcatori con un maggiore potenziale diagnostico, se comparato al biomarcatore libero corrispondente.

PSA-IgM: Razionale

La recente scoperta di immunocomplessi formati da immunoglobuline della classe M (IgM) e biomarcatori tipici della neoplasia epatica e del colon retto (SCCA e CEA)

1. Pontisso P, Quarta S, Caberlotto C, Beneduce L, Marino M, Bernardinello E, Tono N, Fassina G, Cavalletto L, Gatta A, Chemello L - Progressive increase of SCCA-IgM immune complexes in cirrhotic patients is associated with development of hepatocellular carcinoma. Int J Cancer, 2006, 119:735-40

 

2. Castaldi F, Marino M, Belluco C, De Marchi F, Mammano E, Nitti D, Lise M, Fassina G - Detection of circulating CEA-IgM complexes in early stage colorectal cancer. Int J Biol Markers, 2005, 20: 204-8.

 

3. Beneduce L, Castaldi F, Marino M, Quarta S, Ruvoletto M, Benvegnù L, Calabrese F, Gatta A, Pontisso P, Fassina G -Squamous cell carcinoma antigen–IgM complexes as novel biomarkers for hepatocellular carcinoma. Cancer, 2005, 103: 2558–65.

 

Le IgM multivalenti sono considerate la principale componente dell’immunità innata, essendo capaci di legarsi ad un ampio range di antigeni tumorali

I biomarcatori tumorali possono formare immunocomplessi circolanti, costituiti dal biomarcatore associato alle IgM, riscontrabili nel siero dei pazienti.

Il ruolo delle IgM

Immunocomplessi: la teoria dell’ Immunosorveglianza

L’immunosorveglianza tumorale prevede che il sistema immunitario possa riconoscere e distinguere gli antigeni tumore-specifici (immunoediting) dagli effettori immunitari nativi o adattativi e, nella maggior parte dei casi, distruggere le cellule tumorali prima che esse diventino clinicamente rilevabili.

PSA-IgM: Razionale

Le 3 fasi dell’Immunoediting• Nella fase di eliminazione il sistema immunitario riconosce le cellule tumorali e le annienta completamente o parzialmente.

• Nella fase di equilibrio il tumore e il sistema immunitario si neutralizzano.

• Nella fase di “fuga” si selezionano delle varianti cellulari tumorali che sono in grado di evadere la risposta immunitaria, la proliferazione delle cellule tumorali sfugge al controllo del sistema immunitario e il tumore continua a crescere.

PSA-IgM: Razionale

L’immunoediting è un processo dinamico costituito da 3 fasi: eliminazione, equilibrio e fuga…

IMMUNOCOMPLESSI PSA-IgM, UNA NUOVA CLASSE DI BIOMARCATORI PER IL CANCRO ALLA PROSTATA…

Distribuzione dei levelli di PSA-IgM (cut off = 145,1 AU/mL)

Beneduce et al. Cancer Detection and prevention 2007, 31:402-407

Confronto tra il PSA con cut-off 4 e 10 ng/mL ed il PSA-IgM

• Specificità del PSA-IgM (88%) rispetto al PSA 4 (SP = 4%) e al PSA 10 (SP = 71%)

• Sensibilità di PSA-IgM (40%) rispetto al

PSA 10 (22%) è quasi raddoppiata

• Uso combinato di PSA-IgM e PSA 10 porta i livelli di sensibilità e specificità rispettivamente al 60% e al 63% (7)

Anticorpo PRIMARIO anti-PSA

Campione da analizzare

Anticorpo SECONDARIO anti-PSA-IgM coniugato con PEROSSIDASI

Cromogeno

Intensità del pozzetto [PSA-IgM]

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Determinazione PSA-IgM tramite metodica ELISA ELISA (Enzyme-Linked (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)ImmunoSorbent Assay)

Disegno dello studio

Multicentrico prospettico

Analisi di una coorte di 150 pazienti destinati a re-biopsia prostatica, in precedenza sottoposti a prima biopsia, con esito negativo

Obiettivo primario

• Verificare l’utilità diagnostica del PSA-IgM come indicatore della presenza del carcinoma nella seconda biopsia

– Sensibilità e specificità, VPP, VPN

– Accuratezza diagnostica

Obiettivi secondari

1. Correlazione con il Gleason score bioptico

2. Correlazione allo stadio clinico (TNM)

3. Validazione del valore ottimale di cut-off (definito dalla curva ROC)

4. Correlazione con la categoria di rischio clinico (NCCN 2010) e all’evoluzione clinica       

CRITERI DI INCLUSIONE

• Se il valore di PSA è costantemente superiore a 10 ng/mL

• Quando la PSA velocity è superiore a 0.75 ng/mL/anno

• In presenza di ASAP o HGPIN

• Se la prima biopsia risulta inadeguata (meno di 6 prelievi,

assenza di ghiandole prostatiche, frammenti troppo piccoli

o non leggibili)

• Prelievi ematici presso la struttura ospedaliera (Emocromo,

PT, PTT, eventuale ripetizione del PSA)

CRITERI DI ESCLUSIONE

• Neoplasie concomitanti

• Malattie auto immuni

• Infezioni clinicamente in atto

• Terapia cortisonica

• Terapia immunosoppressiva

• Trattamento con inibitori 5-alfa redattasi

• Pazienti che non eseguono prelievi ematici

preliminari alla biopsia presso la struttura

ospedaliera

ANALISI STATISTICA( by L. Pappagallo)

• Statistica Descrittiva • Curve ROC• PSA-IgM, cut off 145 AU/mL

– 30-40 paz veri positivi è la stima attesa dei paz con CaP individuati nei 150

– semi‑ampiezza dell’interv.conf.(assunto come misura del grado di precisione delle stime di sensibilità e specificità) è circa 8%.

• Potenza statistica 90% per incrementi di sensibilità/specificità compresi tra 10% e 15%, partendo da valori attesi (ipotesi nulla) di 80% e 50% rispettivamente.

• Lo studio prevede di raccogliere del siero del paziente, che fa parte di un prelievo di sangue programmato e necessario alla regolare pratica clinica.

• Tale prelievo ematico è necessario e preliminare alla biopsia prostatica– test emocagulativi, – emocromo ed eventuale ripetizione del PSA

PSA-IgM

• Il prelievo ematico – NON deve essere eseguito per il solo PSA-

IgM– Rientra nella routine del centro– Segue i protocolli assistenziali e la copertura

assicurativa ospedaliera– Segue le modalità stabilite senza devianze

dai protocolli vigenti presso le singole strutture

PSA-IgM

RECLUTAMENTO• Paziente idoneo alla re-biopsia

• Foglio informativo di partecipazione

• Prelievo ematico eseguito presso struttura per accertamenti pre-biopsia + donazione di 10ml di sangue ai fini dello studio

• Consenso– Non è previsto nessun tipo di compenso economico

– I risultati del test saranno comunicati alle visite di controllo dal Suo urologo, ma non influenzeranno alcuna decisione terapeutica.

– “semplice gesto potrà aiutare chi, come Lei, è affetto da questa patologia”

1) Centro Regionale indicatori biochimici di tumore – Venezia (Gion M.)

2) Ospedale Ca Foncello – Treviso (Fandella A.)

3) Ospedale S. Orsola Malpighi – Bologna (Bertaccini A, Schiavina R, Marchiori D.)

4) Villa Tiberia – Roma (Vincenti G.)

5) Presidio Sanitario Grandenigo – Torino (Squeo M.S.)

6) Ospedali Riuniti di Ancona (Galosi A.)

7) Policlinico G.B. Rossi – Verona (Novella G.)

8) I.N.R.C.A. – Ancona (Pierangeli T.)

9) Clinica Urologica di Novara (Marchioro G.)

10) Urologia Torvergata – Roma (Virgili G.)

11) Urologia S. Raffaele – Milano (Nava D.L.)

12) Ospedali Riuniti di Bergamo (Roscigno M.)

13) Ospedale di Asti (Cussotto M.)

14) Ospedale di Forlì (Gunelli R.)

15) Ospedale di Castellanza – Varese (Consonni P.)

16) Ospedale di Fidenza – Parma (Benecchi L.)

17) Azienda Universitaria Federico II – Napoli (Montanaro V.)

18) Policlinico Universitario di Palermo (Serretta V.)

19) Istituto Tumori Regina Elena (Canitano S, Sentinelli S.)

20) Policlinico di Bari (Martino P.)

Centri Partecipanti

Coordinatori ScientificiBertaccini - Fandella - Galosi - Gion

COSTI• Spese sostenute dalla SIURO

– Approvazione comitati etici– Spedizione– Analisi– Kit dosaggio– Raccolta CRF– Analisi dei dati

• Assenti i costi aggiuntivi per Ospedale • Assenti i costi assicurativi addizionali• Polizza ospedale per prelievo ematico• Non prevede finanziamenti, né compensi per gli

sperimentatori

D.L. 14.7.2009

• Il Decreto Legislativo del 14 Luglio 2009 riguardante i requisiti minimi per le polizze assicurative a tutela dei soggetti partecipanti alle sperimentazioni cliniche dei medicinali

• Art. 4 si chiarisce che tali criteri non sono applicabili agli studi osservazionali.

• Gennaio 2011

– Approvazione Comitato Etico centro coordinatore

Ospedali Riuniti, Ancona, Maggio 2011

– Ready to start: Ancona

– Attivazione di altri centri

• Attivazione del Laboratorio Centrale di Venezia

• Reclutamento (10 casi /centro = 200 casi) ed analisi dei

dati

• Report SIUrO Bologna 2012

Time Table

Raccolta - Analisi - Spedizione

• Prelievo ematico 5 ml di sangue da distribuire in una provetta con separatore di siero integrato SST II Advance gel acrilico Silice micronizzata.

• Centrifuga 1.500g (3200RPM) x per 10-20 min a temperatura ambiente (20-25°C)

• Stoccare a - 80°C, (in alternativa a - 20° per non più di 6 mesi) il siero così ottenuto in provette criogeniche con tappo a vite da 2 ml.

• Le analisi saranno centralizzate in unico laboratorio.

Identificazione della provetta

PROTOCOLLO DI TRASPORTO

Tutti i materiali biologici devono essere trasportati:• In contenitori con ghiaccio secco che garantiscano una

temperatura controllata per almeno 48 ore. • Corriere TNT• I codici identificativi del pacco e del trasporto• Documento che fornisca la tracciabilità• Le spedizioni saranno effettuate dal lunedì al mercoledì

Dr. Gion Massimo

Ospedale Civile di Venezia

Castello 6777

30122 – Venezia

Disponibili alla partecipazione

1. Bertaccini, Schiavina, Marchiori, Martorana

2. Benecchi3. Canitano4. Consonni5. Cussotto6. Fandella7. Galosi, Muzzonigro8. Gunelli9. Marchioro10.Martino

10. Montanaro

11. Nava

12. Novella

13. Pierangeli

14. Roscigno

15. Serretta

16. Sentinelli

17. Squeo

18. Vincenti

19. Virgili

FASE 5: analisi dei datiL’ultima fase prevede la costruzione della curva standard dai valori di OD del calibratore. Le concentrazioni dei campioni vengono estrapolate dalla curva.

La concentrazione di PSA-IgM viene espressa in unità arbitrarie (AU) per mL (AU/mL).

Le procedure diagnostiche corrispondono alla pratica clinica

corrente e non alterano la gestione clinica del paziente

PSA-IgM