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INSTITUTO DE MEDICINA LEGAL Y CIENCIAS FORENCES DIVISION MEDICO LEGAL II ANCASH DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA FORENSE LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA LA PRUEBA DE ADN Blgo. Segundo S. Fernández Gutiérrez Coordinador de DEBIOLFOR

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LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR

Y GENETICA

LA PRUEBA DEADN

Blgo. Segundo S. Fernández GutiérrezCoordinador de DEBIOLFOR

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Sub Gerencia de Biología Molecular y GenéticaLaboratorio de Biología Molecular y Genética LABIMOGBiólogo Gian Carlo Iannacone de la Flor Av. Abancay 491- 6° piso LimaTeléfono 01-6255555 anexo 6111

ORGANIZACIÓN DEL LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA

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SUBGERENCIA DE BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA

LABORATORIO DESCENTRLIZADO NORTE

DML III CHICLAYOLABORATORIO CENTRAL LIMA

LABORATORIO DESENTRALIZADO SUR

DML III AREQUIPA

· TUMBES· PIURA· LAMBAYEQUE· LA LIBERTAD· CAJAMARCA· HUANUCO · AMAZONAS· SAN MARTIN

· CERRO DE PASCO· JUNIN· ANCASH· LORETO· UCAYALI· HUANCAVELICA · AYACUCHO· ICA

· AREQUIPA· MOQUEGUA· TACNA· PUNO· CUZCO· APURIMAC · MADRE DE DIOS· ICA

LABORATORIO DESCENTRALIZADO DE AYACUCHOCASOS DE DESPARECIDOS POR VIOLENCIA CONTRA LOS

DERECHOS HUMANOS

ORGANIZACIÓN DE LA RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA

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QUE ES EL ADN

El ADN (Acido Desoxiribonucleico) es la sustancia quimica donde se almacenan las instrucciones que dirigen el desarrollo de un huevo hasta formar un organismo adulto, que mantienen su funcionamiento y que permiten la herenciaUna molecula de ADN esta compuesta por dos cadenas y cada una de ellas formada por nucleotidos

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SERVICIOS DESCRIPCIÓN

IDENTIFICACIÓN

· Cadáveres NN · Agresión Criminal · Integridad Sexual · Personas Identificadas

FILIACIÓN (PATERNIDAD)

 · Filiaciones en personas · Filiaciones en cadáveres

HOMOLOGACION · Para identificacion de presuntos agresores sexuales o actores en la escena del crimen

APLICACIONES DE LA PRUEBA DE ADN

Costos de la prueba en el ámbito civilCODIGOS Laboratorio de Biología Molecular y Genética S/.

2186

101 Prueba de paternidad o filiación en personas vivas -ADN (hijo, madre, Supuesto padre) 1333.3

107 Prueba de ADN en persona adicional 454.2

201 Identificación o filiación en cadáveres o restos 1336.3

203 Por persona adicional 409.6

301 Homologacion de muestras dos individuos 888.2

302 Por muestra adicional 445.1

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LA PRUEBA DEL ADN Es la prueba de máxima validez científica para

determinaciones de parentesco en el mundo. La confiabilidad es tan grande como la que le

merezca a usted el laboratorio al que le confía la prueba. Su resultado es contundente.

Para cada persona examinada se analiza mediante la técnica STR (short tandem repeats) un total de 13 marcadores genéticos (loci de secuencias repetitivas tetraméricas) en varios cromosomas del ADN que corresponden al llamado CODIS.

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El CODIS, según expertos constituye el conjunto de marcadores del ADN que permite identificar singularmente a una persona como para que sus resultados sean comparables con el banco de datos de identificación de individuos de los EE.UU.

Esta combinación especial CODIS hace que el perfil genético obtenible para un individuo arroje típicamente una probabilidad de repetición al azar en otro individuo de 1 en 1015 (ó 1 en 1,000,000,000,000,000 personas) ..... [recordemos que en el planeta Tierra hay 6,500,000,000 humanos vivos aprox. y tan solo la cuarta parte de ellos son hombres en edad fértil.] Es entonces una prueba CONTUNDENTE.

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Técnicamente la prueba puede arrojar un resultado negativo (exclusión de paternidad) con un 100% de certeza o uno positivo (inclusión de paternidad ) con un 99.9999% de certeza.

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Aquí debemos hacer la precisión de que si no se dice 100% sino 99.9999% es por razones meramente estadísticas. Hay solo dos casos teóricamente posibles en que se podría decir que alguien sí es el padre con un 100 % de certeza:a) Luego de haber hecho el análisis a TODOS LOS

HOMBRES DEL PLANETA y haber descartado a los demás.

b) Luego de haber analizado todos y cada uno de los 4,500 millones de nucleótidos de la molécula de ADN del padre presunto.

Naturalmente, ambas proposiciones son en la práctica imposibles y un 99.9999999% de certeza estadística es entonces perfectamente satisfactorio.

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Revisión de la evidencia

Extracción de ADN

Amplificación

Detección

Comparación y estadística

PASOS DEL PROCESO DE ANALISIS DE ADN

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Validez de diferentes tipos de Muestra como fuentes de ADN

Muestras 1-8 Excelentes.Muestras 9-15 Buenas o Regulares.Muestras 16-17 Regulares o Malas.Muestras 18-21 No aceptables.

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Validez de diferentes tipos de Muestra como fuentes de ADN

1. Hisopos de Muestras de la Mejilla.- Se necesita tomar muestras con dos hisopos estériles frotando vigorosamente el interior de las mejillas (un hisopo por mejilla). La idea es que de esta manera unas pocas células epiteliales puedan ser desprendidas y transferidas al hisopo. Este tipo de muestras permite resultados finales en sólo una semana.

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2. Sangre Total.- La sangre total (generalmente venosa) funciona muy bien siempre y cuando la toma haya sido hecha recientemente y colectada apropiadamente en un tubo tipo vacutainer® que contenga el preservante apropiado.

La sangre que ha de ser guardada por períodos largos debe ser refrigerada. Sólo en estas condiciones la muestra de sangre puede servir tan bien como una muestra de células de mejilla.

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3. Sangre de Cordón Umbilical.- La sangre del cordón umbilical funciona muy bien si llega al laboratorio en buenas condiciones. La sangre tomada de este modo toma igual de tiempo en procesarse que la tomada en tubos vacutainer®.

4. Manchas de Sangre.- Las manchas de sangre que funcionan bien deben haberse tomado en unos papeles absorbentes que poseen unas sustancias que impiden la acción de enzimas degradantes sobre la

sangre.• 5. Semen.- El semen debe llegar al laboratorio

congelado en tubos apropiados si es de más de 24 horas. Si es una muestra reciente basta con el condón debidamente anudado y guardado en refrigeración hasta por 24 horas. Sin embargo, procesar el ADN de estas muestras toma un poco más de tiempo.

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6. Células Fetales tomadas vía Amniocentesis.- Estas células funcionan siempre bien como fuente de ADN fetal. Sin embargo, hay que considerar que se requiere ponerlas en cultivo durante una semana antes de procesarlas

La amniocentesis consiste en insertar una aguja fina a través de la pared abdominal de la madre gestante hasta penetrar dentro del útero. Se toma una muestra del líquido en el que flota el feto y es precisamente de este líquido que posteriormente se colectan algunas células fetales de donde se extraerá el ADN. Este procedimiento toma unos 10 minutos y es realizado por el ginecólogo típicamente a partir de las 14 semanas de gestación.

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7. Tejido Fetal proveniente de Abortos.- El tejido fetal es una excelente fuente de ADN siempre que no se le haya expuesto previamente a la acción del formol (formaldehído al 37%). Se requiere una semana extra para procesar estas muestras.

8. Condones o Preservativos de Látex.- El semen contenido en condones sirve muy bien como fuente de ADN. Es importante que el condón se mantenga en refrigeración luego de haber sido usado. condones usados en relaciones sexuales se puede derivar hasta dos tipos de ADN (los ADN de ambos miembros de la pareja). Es importante notar que del material presente en

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9. Manchas de Semen en Ropa.- Se requiere tiempo adicional para procesar estas muestras. Se sugiere refrigerar el pedazo de ropa lo antes posible.

10. Tejidos provenientes de Exhumaciones.- Muestras exhumadas colectadas de tejido profundo del muslo o de médula ósea tomada del fémur suelen funcionar un 75% de las veces.

11. Cordón Umbilical Seco.- Muestras tomadas del cordón umbilical seco funcionan el 50% de las veces y toman hasta varias semanas adicionales para procesarse.

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12. Cepillos de Dientes.- Los cepillos dentales usados funcionan un 50% de las veces. Toman por lo menos una a dos semanas más para procesarse.

13. Basurilla de Rasuradoras Eléctricas.- La basurilla colectada del interior de las rasuradoras eléctricas puede ser una buena fuente de ADN. Estas muestras toman unas dos semanas extras para procesarse.

14. Tampones (tampax®) o toallas femeninas.- Pueden ser una excelente fuente de ADN. Hay que refrigerarlas apenas se recojan. Toman dos semanas extra para ser procesadas.

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15. Cabello Arrancado.- El cabello debería ser halado con suficiente fuerza como para desprender la raíz viva de las hebras de cabello. Se necesitaría unas 10 a 20 hebras bien tomadas para que se pueda obtener suficiente tejido. El proceso de estas muestras toma unas cuatro semanas.

16. Colillas de Cigarrillo.- Las colillas que no han estado expuestas al ambiente por mucho tiempo suelen funcionar en muchos casos. Requieren algunas semanas adicionales de proceso.

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17. Papel Higiénico (o kleenex®) Usados.- Son mala fuente de ADN. Sin embargo, cuando están manchados con sangre y son transportados correctamente al laboratorio, sí funcionan con mucha frecuencia.

18. Pelo Caído.- El cabello, vello o pelo corporal caído (telogénico) constituye cabello, vello o pelo que llegó al final de su ciclo de vida y se desprende del cuerpo de manera natural. Este tipo de cabello o pelo nunca funciona como buena fuente de ADN y se encuentra típicamente en: peines, cepillos de cabello, ropa, almohadas, sábanas, rejillas de desagüe de las duchas. Asimismo, el cabello cortado no funciona como fuente de ADN.

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19. Sangre (en estado de descomposicion).- Las muestras de sangre tomadas en tubos no estériles, sin preservantes y mantenidas a temperatura ambiente por períodos extendidos de tiempo, definitivamente no funcionan. Cualquier ADN que se pueda extraer de dichas muestras estará tan degradado que sencillamente no podremos amplificar fragmentos suficientemente grandes como para ser analizados.

20. Tejidos mantenidos en Formol.- Biopsias o tejidos colectados durante autopsias que hayan sido puestos en frascos con formol definitivamente no funcionan.

21. Cenizas Fúnebres.- Los tejidos cremados definitivamente no funcionan pues en las cenizas fúnebres no hay ADN rescatable .

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OPCIONES PARA LA ELECCION DE RESTOS OSEOS PARA ADN

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TOMA DE MUESTRAS EN ESCENA DEL CRIMEN

Las evidencias serán analizadas en los Laboratorios de Biología Forense de cada Division Medico Legal (DML) a nivel nacional antes de ser remitidas al Laboratorio de Biología Molecular y de Genética en Lima y seguirán el procedimiento descrito en las Guías Practicas de Procedimientos Criminalísticos en la Escena del Crimen aprobado con Resolución de Fiscalia de la Nación Nº 609-2010-MP-FN.

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No es recomendable enviar todos los indicios analizados por los equipos criminalísticos en una escena de crimen al laboratorio de ADN. Lo más adecuado es que el PROFESIONAL QUE PARTICIPA EN EL RECOJO de indicios para la prueba de ADN en la escena del crimen RECOMIENDE A LA AUTORIDAD el tipo y número de muestras a enviar al laboratorio de ADN. El resto de evidencias pueden permanecer en las Divisiones Médicos Legales o donde la autoridad crea conveniente.

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ADN Forense (Identificación)

Identificar potenciales sospechosos cuyo ADN pueda compararse al ADN dejado en la escena del crimen

Exonerar a personas acusadas injustamente Identificar víctimas de crímenes y catástrofes Identificar la paternidad y otros parentescos Identificar especies en peligro y protegidas

como ayuda a los oficiales de vida salvaje

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PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR UNA PRUEBA DE ADN EN EL AMBITO TANTO CIVIL COMO PENAL

• FISCALIA: Necesidad de una prueba de ADN, Oficiar a la Sub Gerencia Laboratorio de Biología Molecular y Genética – Lima

Biólogo Gian Carlo Iannacone de La Flor Av. Abancay 491- 6° piso Lima

• LABIMOG: Responde con un Oficio de Respuesta a la Fiscalía y un Memorándum de Autorización a la DML correspondiente (insumos)

• DML: Encargado de realizar las coordinaciones con la Fiscalía para realizar la toma de muestra (Fecha y Hora y con 15 de anticipación para programar la movilidad)

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DIVISION MEDICO LEGAL II

ANCASH

• Huaraz• Recuay• Carhuaz• Aija• Ocros

DIVISION MEDICO LEGAL I

HUARI

• Huari• Antonio

Raymondi• Asuncion• Carlos Fermin

Fitzcarral

DIVISION MEDICO LEGAL I

CARAZ

• Huaylas• Yungay• Sihuas• Pomabamba• Mariscal

Luzuriaga• Marañon

DIVISION MEDICO LEGAL I

BOLOGNESI

• Bolognesi

DISTRIBUCION JURISDICCIONAL DE LAS DIVISIONES MEDICO LEGALES PARA LA TOMA DE MUESTRAS DE ADN EN CASOS DE FILIACION Y

HOMOLOGACION

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1. Bioseguridad: • Utilizar guantes, gorro, mascarilla y bata

para evitar el contacto directo con la muestra.

• En lo posible emplear material desechable.

• Prohibir comer, beber o fumar durante el proceso de recolección.

• Evitar hablar o estornudar sobre las muestras.

• El material para la recolección (bolsas, pipetas, jeringas agujas, hisopos , tubos etc.) deben estar limpios de primer uso , secos o estériles según sea el caso

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SITUACION ACTUAL DEL LABORATORIO DE BIOLOGIA FORENSE

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NECESIDADES URGENTES DEL LABORATORIO • Centrifuga de Mesa• Acido Nítrico• Hexagon OBTI• Fosfatasa Acida Prostática

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Muchas Gracias

Departamento de Biología ForenseDivisión Medico Legal II Ancash – 043-426196 Anexo 3820Biólogo: Segundo Fernández GutiérrezRPM: #943996001 [email protected]

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