Microbial Fermentation of Rice Straw

8/3/2019 Microbial Fermentation of Rice Straw

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A P P n r M I C R O B I O L O G Y , A p r . 1 9 7 5 , p . 5 1 0 - 5 1 4C o p y r i g h t 0 1 9 7 5 A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y V o l . 2 9 , N o . 4P r i n t e d i n U . S . A .

M i c r o b i a l F e r m e n t a t i o n o f R i c e S t r a w : N u t r i t i v e C o m p o s i t i o na n d I n V i t r o D i g e s t i b i l i t y o f t h e F e r m e n t a t i o n P r o d u c t sYOUN W. HAN I

W e s t e r n R e g i o n a l R e s e a r c h L a b o r a t o r y , A g r i c u l t u r a l R e s e a r c h S e r v i c e , U . S . D e p a r t m e n t o f A g r i c u l t u r e ,B e r k e l e y , C a l i f o r n i a 9 4 7 1 0R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n 1 8 N o v e m b e r 1 9 7 4

R i c e s t r a w was f e r m e n t e d w i t h C e l l u l o m o n a s s p . a n d A l c a l i g e n e s f a e c a l i s .M i c r o b i a l c e l l s a n d u n d i g e s t e d r e s i d u e , as w e l l as c h e m i c a l l y t r e a t e d (NaOH orNH4OH) a n d u n t r e a t e d s t r a w s , were a n a l y z e d f o r n u t r i e n t c o m p o s i t i o n a n d i nv i t r o d i g e s t i b i l i t y . I n a t y p i c a l f e r m e n t a t i o n , 7 5 % o f t h e r i c e s t r a w s u b s t r a t e wasd i g e s t e d , a n d 1 8 . 6 % o f t h e t o t a l s u b s t r a t e w e i g h t t h a t d i s a p p e a r e d was r e c o v e r e das m i c r o b i a l p r o t e i n . T h e m i c r o b i a l c e l l f r a c t i o n wa s 3 7 % p r o t e i n a n d 5% c r u d ef i b e r ; t h e r e s i d u e was 1 2 % p r o t e i n a n d 4 5 % c r u d e f i b e r . T h e m i c r o b i a l p r o t e i na m i n o a c i d p r o f i l e was s i m i l a r t o a l f a l f a , e x c e p t f o r l e s s c y s t e i n e . T h e m i c r o b i a lc e l l s h a d more t h i a m i n e a n d l e s s n i a c i n t h a n T o r u l a y e a s t . I n v i t r o d i g e s t i b i l i t yo f t h e m i c r o b i a l p r o t e i n was 4 1 . 2 t o 5 5 % ; t h a t o f c e l l u l o s e was 5 2 % .

T h e m a j o r l i m i t a t i o n s o f s t r a w a s a n a n i m a lf e e d a r e l o w d i g e s t i b i l i t y a n d l o w p r o t e i n c o n -t e n t . E f f o r t s h a v e b e e n m a d e t o i n c r e a s e t h ef e e d v a l u e o f c e r e a l s t r a w s b y c h e m i c a l a n dp h y s i c a l t r e a t m e n t s , a s w e l l a s n u t r i e n t s u p -p l e m e n t a t i o n . T h e d i g e s t i b i l i t y o f v a r i o u s c r o ps t r a w s c a n b e i n c r e a s e d b y t r e a t i n g w i t h N a O Ho r NH4OH, b u t t h e l o w p r o t e i n s t i l l r e q u i r e sn i t r o g e n s u p p l e m e n t a t i o n . A d d i t i o n s o f u r e a ,m o l a s s e s , b r a n c h e d - c h a i n f a t t y a c i d s , s u l f u r ,a n d o t h e r m i n e r a l s h a v e m e t w i t h v a r y i n gs u c c e s s ( 2 , 4 , 5 , 6 , 1 2 , 1 7 ) .R e c e n t l y e f f o r t s h a v e b e e n made t o p r o d u c eh i g h - p r o t e i n a n i m a l f e e d b y m i c r o b i a l f e r m e n -t a t i o n o f c e l l u l o s i c s u b s t r a t e s ( 9 , 1 0 ) . We nowr e p o r t t h e n u t r i t i v e c o m p o s i t i o n a n d i n v i t r o d i -g e s t i b i l i t y o f t h e p r o d u c t s o f m i c r o b i a l f e r m e n -t a t i o n o f r i c e s t r a w .

MATERIALS AND METHODSM i c r o o r g a n i s m s , m e d i a , a n d g r o w t h . A s p e c i e so f C e l l u o m o n a s a n d A l c a l i g e n e s f a e c a l i s , i s o l a t e d b yt h e a u t h o r , w e r e u s e d . T h e i r c u l t u r a l c h a r a c t e r i s t i c s

a n d c o n d i t i o n s f o r g r o w t h h a v e b e e n r e p o r t e d e l s e -w h e r e ( 9 , 1 0 ) . Th e g r o w t h medium c o n t a i n e d( N H ) S 0 4 ( 6 . 0 g ) ; KHPO4 ( 1 . 0 g ) ; KHPO4 ( 1 . 0 g ) ;M g S O 4 ( 0 . 1 g ) ; C a C l 2 ( 0 . 1 g ) ; y e a s t e x t r a c t ( 0 . 5 g ) ;F e C l , . 6 H 2 0 ( 1 6 . 7 m g ) ; Z n S O 4 .7HO ( 0 . 1 8 m g ) ;C u S O 4 . 5 H 2 0 ( 0 . 1 6 m g ) ; C a C l 2 ( 0 . 1 8 m g ) ; e t h y l e n e -d i a m i n e t e t r a a c e t i c a c i d ( 2 0 . 1 m g ) ; a n d 1 0 t o 5 0 g o fc e l l u l o s i c s u b s t r a t e p e r l i t e r o f d i s t i l l e d w a t e r .S u b s t r a t e . C a l i f o r n i a r i c e s t r a w ( O r y z a s a t i v a L i n -n a e u s ) , f i e l d - d r i e d a n d c h o p p e d t o p a s s t h r o u g h aI P r e s e n t a d d r e s s : USDA, A R S , W e s t e r n R e g i o n , D e p a r t -m e n t o f M i c r o b i o l o g y , O r e g o n S t a t e U n i v e r s i t y , C o r v a l l i s ,O r e . 9 7 3 3 1 .

7-mm s c r e e n , w a s u s e d a s a s u b s t r a t e . P a r t o f t h ec h o p p e d s t r a w w a s t r e a t e d w i t h 4% N a O H s o l u t i o n( 1 0 : 1 , w a t e r - s t r a w ) a t 1 0 0 C f o r 1 5 m i n , t h e e xc e ssc a u s t i c l i q u i d w a s e x p r e s s e d , a n d t h e t r e a t e d s t r a ww a s o v e n - d r i e d ( 6 0 C ) . T h e o t h e r p a r t o f t h e s t r a ww a s s p r a y e d w i t h a q u e o u s a m m o n i a ( 5 N N H 4 O H ) i nt h e a m o u n t o f 5 . 2 % o f t h e s u b s t r a t e , a n d k e p t a t a m -b i e n t t e m p e r a t u r e f o r 3 0 d a y s b e f o r e b e i n g s u b j e c t e dt o m i c r o b i a l f e r m e n t a t i o n ( 2 0 ) .F e r m e n t a t i o n . F e r m e n t a t i o n s w e r e c a r r i e d o u t a t3 5 C i n 4 0 - l i t e r H u m f e l d f e r m e n t o r s ( 1 3 ) . T h e f e r m e n -t a t i o n m i x t u r e w a s a g i t a t e d ( 1 4 0 r p m ) a n d a e r a t e d( 0 . 5 v o l o f a i r / v o l o f medium p e r m i n ) w i t h s t e r i l i z e da i r . T h e m e d i u m ( 2 0 l i t e r s ) c o n t a i n e d 3 t o 5% ( d r yw e i g h t ) o f r i c e s t r a w . S e p a r a t e l y g r o w n a c t i v e c u l t u r e so f C e l l u l o m o n a s s p . a n d A . f a e c a l i s w e r e i n o c u l a t e d .F e r m e n t a t i o n c o n t i n u e d f o r 3 t o 5 d a y s .I n v i t r o d i g e s t i b i l i t y . I n v i t r o c e l l u l o s e d i g e s t i b i l -i t y w a s d e t e rm i n e d b y m e a s u r i n g d i s a p p e a r a n c e o fs u b s t r a t e i n s o l u b l e d r y m a t t e r u p o n t r e a t m e n t w i t hc e l l u l a s e ( " O n o z u k a " S S , K a n e m a t s u - G o s h o , L t d ,New Y o r k ) a n d p r o t e a s e ( " P r o n a s e " B g r a d e , C a l b i o -c h e m , L o s A n g e l e s , C a l i f . ) , a n d w a s e x p r e s s e d a s t o t a ls o l u b l e s a f t e r e n z y m e s . I n v i t r o p r o t e i n d i g e s t i b i l i t yw a s d e f i n e d a s t h e d e c r e a s e i n s u b s t r a t e n i t r o g e n a f t e rt r e a t m e n t w i t h f u n g a l p r o t e a s e ( S t r e p t o m y c e s g r i -s e u s ) a n d c h i c k p a n c r e a s a c e t o n e p o w d e r ( 1 8 ) .Rumen m e t a b o l i s m . Rumen m i c r o b e s w e r e o b -t a i n e d f r o m a f i s t u l a t e d s h e e p t h a t w a s m a i n t a i n e d o na l f a l f a h a y w i t h f r e e a c c e s s t o d r i e d r a n g e g r a s s .S u s c e p t i b i l i t y o f s u b s t r a t e s t o rumen m i c r o b i a l a t t a c kw a s d e t e r m i n e d b y m e a s u r i n g t o t a l g a s a n d v o l a t i l ef a t t y a c i d ( V F A ) p r o d u c t i o n . VFA s a m p l e s a c i d i f i e dw i t h m e t a - p h o s p h o r i c a c i d w e r e a n a l y z e d o n anA e r o g r a p h 2 0 4 g a s l i q u i d c h r o m a t o g r a p h . Th e r a t e o fr u m i n a l f e r m e n t a t i o n w a s m e a s u r e d b y a n a e r o b i cW a r b u r g p r o c e d u r e s a n d d e s c r i b e d b y Oh e t a l . ( 1 7 ) .V i t a m i n , a m i n o a c i d s , a n d c h e m i c a l a n a l y s i s .

5 1 0


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MICROBIAL FERMENTATION OF R I C E STRAWA l l v i t a m i n a a s a y s w e r e m i c r o b i o l o g i c a l : t h i a m i n ea n d n i a c i n b y t h e m e t h o d s o f G y o r g y a n d P e a r s o n ( 8 ) ,f o l i c a c i d b y t h e m e t h o d o f J u k e s ( 1 4 ) , a n d p y r i d o x i n eb y t h e A s s o c i a t i o n o f O f f i c i a l A n a l y t i c a l C h e m i s t s ( 1 ) .A m i n o a c i d s w e r e a n a l y z e d b y i o n - e x c h a n g e c h r o m a -t o g r a p h y a f t e r 1 0 m g o f p r o t e i n w a s h y dr o l y z ed w i t h1 0 m l o f 6 N HC1 u n d e r v a c u u m a t 1 1 0 C f o r 2 4 h .C y s t i n e p l u s c y s t e i n e w a s d e t e r m i n e d a f t e r p r e t r e a t -m e n t w i t h p e r f o r m i c a c i d . L i g n i n w a s d e t e r m i n e da c c o r d i n g t o V a n S o e s t ( 1 9 ) . P r o t e i n w a s c a l c u l a t e db y m u l t i p l y i n g t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n t o t a l n i t r o g e na n d N H 8 - n i t r o g e n b y 6 . 2 5 . A l l o t h e r c h e m i c a l a n a l y -s e s , u n l e s s o t h e r w i s e s p e c i f i e d , w e r e c a r r i e d o u t a c -c o r d i n g t o t h e A s s o c i a t i o n o f O f f i c i a l A n a l y t i c a lC h e m i s t s m e t h o d s ( 1 ) .

RESULTS AND DISCUSSIONWhen a m i x e d c u l t u r e o f C e l l u l o m o n a s s p .a n d A . f a e c a l i s w a s g r o w n o n r i c e s t r a w , s u b -s t r a t e u t i l i z e d d e p e n d e d o n t h e i n i t i a l s u b s t r a t e

l e v e l , i n o c u l u m s i z e , f e r m e n t a t i o n t i m e , a n ds u b s t r a t e p r e t r e a t m e n t . F i g u r e 1 s h o w s m a t e -r i a l b a l a n c e o f a t y p i c a l f e r m e n t a t i o n o f NaOH-t r e a t e d s t r a w . A f t e r 3 d a y s , 7 5 % o f t h e i n i t i a ls u b s t r a t e h a d b e e n d i g e s t e d , 1 5 0 g o f u n d i g e s t e df e r m e n t a t i o n r e s i d u e r e m a i n e d , a n d 1 7 8 g o f m i -

c r o b i a l c e l l p r e c i p i t a t e h a d b e e n p r o d u c e d . T h er e s i d u e f r a c t i o n ( m a i n l y u n di g e s t e d s t r a w p l u ss o m e m i c r o b i a l c e l l s ) w a s 1 2 % p r o t e i n a n d t h em i c r o b i a l c e l l f r a c t i o n ( m a i n l y m i c r o b i a l c e l l s , as m a l l a m o u n t o f f i n e f i b e r s , a n d p r e c i p i t a t e dm i n e r a l s ) w a s 3 7 % p r o t e i n . T h u s , 8 4 g o f p r o t e i n( 1 8 g i n t h e r e s i d u e a n d 6 6 g i n t h e c e l l s ) w a so b t a i n e d b y d i g e s t i n g 4 5 0 g o f t h e i n i t i a l 6 0 0 g o fr i c e s t r a w , a n e t p r o t e i n y i e l d o f 1 8 . 6 % .T a b l e 1 l i s t s t h e c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f t h er i c e s t r a w s u b s t r a t e s a n d p r o d u c t s o f t h e i rm i c r o b i a l f e r m e n t a t i o n . T h e u n t r e a t e d r i c es t r a w c o n t a i n e d 0 . 6 7 % n i t r o g e n , 2 9 . 8 % c r u d ef i b e r , a n d 1 5 . 8 % s i l i c a t h a t a c c o u n t e d f o r m o s to f t h e 1 8 . 6 % a s h . N a O H t r e a t m e n t r e m o v e da b o u t h a l f o f t h e s i l i c a , p r o b a b l y b y s o l u b i l i z a -t i o n o f t h e a m o r p h o u s s i l i c a . I t a l s o r e m o v e d t h er e d u c i n g s u g a r s . T h e a m m o n i a t r e a t m e n t i n -c r e a s e d b o t h t o t a l a n d N H 3 - n i t r o g e n , p o s s i b l yb y f o r m a t i o n o f ammonium s a l t s a n d a m i d e so f c e l l u l o s e . Ammonia t r e a t m e n t , h o w e v e r , r e -m o v e d s i l i c a l e s s t h a n NaOH.T h e u n d i g e s t e d f e r m e n t a t i o n r e s i d u e w a sa b o u t 1 2 % p r o t e i n a n d 4 5 % c r u d e f i b e r . T h i sl e v e l o f p r o t e i n w a s e q u i v a l e n t t o t h a t o b t a i n e d

2Lu l t u r e M e d i u m1 9 . 5 L M i n e r a l s o l n .6 O O g N a O H - t r e a t e d r i c e s t r a w

r C e l l u l o m o n a s s p . & A . f a e c a l i s

d a y s , 3 5 CI t r a t i o n a

1 5 0 R e s i d u e1 8 g p r o t e i n

1 8 L F i l t r a t e J6 6 g p r o t e i nC e n t r i f u g a t i o n b.-1 7 8 g p r e c i p i t a t e | 1 8 L E f f l u e nt |

1 3 2 g c e l l s c4 6 g s i l i c a , f i b e r , e t c .F I G . 1 . S c h e m a t i c d i a g r a m o f r i c e s t r a w f e r m e n t a t i o n . W e i g h t s e x p r e s s e d o n d r y m a t t e r b a s e s . ( a )F i l t r a t i o n b y p a s s i n g t h r o u g h t w o l a y e r s o f c h e e s e c l o t h ; ( b ) c e n t r i f u g a t i o n b y S h a r p l e s c e n t r i f u g e a t 5 0 , 0 0 0r p m ; ( c ) c e l l m a s s d e t e r m i n e d o n t h e b a s i s o f 50% p r o t e i n i n t h e c e l l .

V O L . 2 9 . 1 9 7 5 5 1 1


3/5


4/5

MICROBIAL FERMENTATION OF RICE STRAWT A B L E 4 . I n v i t r o d i g e s t i b i l i t y o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s

P r o t e i n C r u d e f i b e rP r o d u c t C o n t e n t a D i g e s t i b i l i t y b C o n t e n t a D i g e s t i b i l i t y b( % ) ( % ) (%)(%)

R i c e s t r a w 4 . 2 2 9 . 8 3 0 . 3 0 . 5 0N a O H - t r e a t e d s t r a w 3 . 1 3 2 . 5 7 3 . 2 0 . 2 7N H 4 O H - t r e a t e d s t r a w 7 . 2 3 4 . 5 5 7 . 4 X 0 . 4 1F e r m e n t a t i o n r e s i d u e ' 1 2 . 8 5 5 . 5 : 1 0 . 6 9 4 5 . 0 5 1 . 7 0 . 4 4M i c r o b i a l c e l l s 3 8 . 2 4 1 . 6 0 . 2 5 5 . 7

a P e r c e n t a g e o f d r y m a t t e r .b M e a n s a n d s t a n d a r d d e v i a t i o n .c F r o m f e r m e n t a t i o n o f N a O H - t r e a t e d s t r a w .n i n e i n t h e l a t t e r . O r g a n i s m s g r o w n on T r y p t i -case soy b r o t h c o n t a i n e d a h i g h e r e s s e n t i a la m i n o a c i d c o n t e n t t h a n t h o s e grown on t h es t r a w - m i n e r a l s o l u t i o n . Th e a m i n o a c i d p r o f i l eo f t h e m i x e d c u l t u r e grown on r i c e s t r a w wass i m i l a r t o t h a t o f a l f a l f a , e x c e p t f o r l e s s c y s -t e i n e . E i g h t y p e r c e n t o f t o t a l n i t r o g e n i n m i -c r o b i a l c e l l s was r e c o v e r e d as p r o t e i n n i t r o g e n ;t h e r e s t was t h e n u c l e i c a c i d s a n d o t h e r n i t r o g e -n o u s c o m p o u n d s .T a b l e 3 compares t h e v i t a m i n s i n m i c r o b i a lc e l l s grown on s t r a w w i t h T o r u l a y e a s t ( C a n d i d au t i l i s ) . T h e m i c r o b i a l c e l l s c o n t a i n e d more t h i a -m i n e a n d l e s s n i a c i n t h a n y e a s t . F o l i c a c i d a n dp y r i d o x i n i n t h e m i c r o b i a l c e l l s were e q u i v a l e n tt o T o r u l a y e a s t . T h u s , m i c r o b i a l c e l l s f r o ms t r a w f e r m e n t a t i o n may p r o v i d e v i t a m i n s asw e l l as p r o t e i n .Th e i n v i t r o d i g e s t i b i l i t y o f p r o t e i n i n t h ef e r m e n t a t i o n p r o d u c t s r a n g e d f r o m 41% t o 55%( T a b l e 4 ) . T h i s r e l a t i v e l y l o w p r o t e i n d i g e s t i b i l -i t y may b e a t t r i b u t e d t o m i c r o b i a l c e l l w a l l s ,s i n c e Y a n g ( 2 1 ) h a s s h o w n t h a t s o n i c a t i o n o fm i c r o b i a l c e l l s i m p r o v e d t h e i r p r o t e i n u t i l i z a -t i o n b y a n i m a l s . C r u d e f i b e r d i g e s t i b i l i t y ( t o t a ls o l u b l e s a f t e r e n z y m e s ) was 30% f o r raw r i c es t r a w , 73% f o r N a O H - t r e a t e d s t r a w , a n d 57% f o rN H 4 O H - t r e a t e d s t r a w . Some o f t h e d i g e s t i b l em a t t e r i n s t r a w was a p p a r e n t l y u s e d b y m i c r o -o r g a n i s m s f o r p r o t e i n p r o d u c t i o n . H o w e v e r ,e n o u g h d i g e s t i b l e m a t t e r ( 5 2 % t o t a l s o l u b l e sa f t e r e n z y m e s ) was l e f t i n t h e f e r m e n t a t i o nr e s i d u e t o w a r r a n t i t s p o t e n t i a l use as a r u m i -n a n t f e e d .T o t a l i n v i t r o gas p r o d u c t i o n f o r t h e f e r m e n -t a t i o n r e s i d u e was l o w e r t h a n t h a t f o r u n t r e a t e ds t r a w a n d a l k a l i - t r e a t e d s t r a w ( T a b l e 5 ) . VFAp r o d u c t i o n , h o w e v e r , p a r a l l e l e d i n v i t r o d i -g e s t i b i l i t y ; t h e f e r m e n t a t i o n r e s i d u e p r o d u c e dmore VFA t h a n u n t r e a t e d r i c e s t r a w b u t l e s st h a n a l k a l i - t r e a t e d s t r a w . None o f t h e s t r a w or

T A B L E 5 . R u m i n a l m e t a b o l i s m o f t h e p r o d u c t sG a sp r o d u c t i o n N e t VFAP r o d u c t ( m m o l / 8 h / p r o d u c t i o n

1 0 g o f rumen ( m g / 1 0 0 m l )c o n t e n t )R i c e s t r a w 0 . 7 9 9 2 0 7N a O H - t r e a t e d s t r a w 0 . 9 7 7 3 7 8N H 4 O H - t r e a t e d s t r a w 0 . 8 8 5 3 4 5F e r m e n t a t i o n r e s i d u e a 0 . 5 7 9 3 1 2C o n t r o l ( a l f a l f a ) 1 . 3 0 7 4 0 9

a F r o m f e r m e n t a t i o n o f N a O H - t r e a t e d s t r a w .p r o d u c t s f r o m s t r a w f e r m e n t a t i o n p r o d u c e d a smuch g a s o r VFA a s a l f a l f a .T h u s , t h e l a b o r a t o r y d a t a i nd i c at e t h a t t h em i c r o b i a l c e l l f r a c t i o n , w i t h i t s h i g h p r o t e i nc o n t e n t , m ay b e u s e d a s a p r o t e i n s o u r c e f o r t h en o n r u m i n a n t s , a n d t h e f e r m e n t a t i o n r e s i d u e f o rt h e r u m i n a n t s .

ACKNOWLEDGMENTSI a c k n o w l e d g e t h e a s s i s t a n c e o f J . H . Oh o f t h e U n i -v e r s i t y o f C a l i f o r n i a H o p l a n d F i e l d S t a t i o n , w h o p e r f o r m e dt h e r u m e n m e t a b o l i s m s t u d y ; A . C . W a i s s , w h o s u p p l i e dN H r - t r e a t e d s t r a w ; a n d t h e m e m b e r s o f F i e l d C r o p s a n dC h e m i c a l P h y s i c s L a b o r a t o r i e s o f W R R L , A R S , w h o p e r -f o r m e d t h e c h e m i c a l a n a l y s e s .

LITERATURE CITED1 . A s s o c i a t i o n o f A n a l y t i c a l C h e m i s t s . 1 9 7 0 . O f f i c i a l m e t h -o d s o f a n a l y s i s , 1 1 t h e d . W a s h i n g t o n , D . C .2 . B r a y , A . C . , a n d J . A . H e m s l e y . 1 9 6 9 . S u l p h u r m e t a b o -l i s m o f s h e e p . 1 V . T h e e f f e c t o f v a r i e d d i e t a r y s u l p h u rc o n t e n t o n s o m e b o dy f l u i d s u l p h a t e l e v e l s a n d o n t h eu t i l i z a t i o n o f u r e a - s u p p l e m e n t e d r o u g h a g e b y s h e e p .A u s t . J . A g r i c . R e a . 2 0 : 7 5 9 - 7 7 3 .3 . B r e s s a n i , R . 1 9 6 8 . T h e u s e o f y e a s t i n human f o o d s , p .9 0 - 1 2 1 . I n R M a t e l e s a n d S . R T a n n e n b a u m ( e d . ) ,S i n g l e c e l l p r o t e i n . T h e MIT P r e s s , C a m b r i d g e , M a s s .4 . C a m p l i n g , R . C . , M . F r e e r , a n d C . B a l c h . 1 9 7 2 . F a c t o r sa f f e c t i n g t h e v o l u n t a r y i n t a k e o f f o o d b y c o w . B r . J .N u t r . 1 6 : 1 1 5 - 1 2 4 .5 . C h u r c h , D . C . , W. H . K e n n i c k , a n d A . T . R a l s t o n .

5 1 3O L . 2 9 , 1 9 7 5


5/5

A P P L . M I C R O B I O L .1 9 7 1 . F a t a n d urea f o r f i n i s h i n g s t e e r s . P r o c . W e s t . S o c .Am . S o c . A n i m . S c i . 2 2 : 1 2 3 .6 . D o n e f f e r , E . , I . 0. A . A d e l f e , an d T . A . 0. C . J o n e s . 1 9 6 9 .E f f e c t o f urea s u p p l e m e n t a t i o n o f t h e n u t r i t i v e v a l u e o fN aO H t r e a t e d o a t s t r a w . A d v . Chem. S e r . 9 5 : 3 2 8 - 3 4 2 .7 . G u g g o l z , J . R . , R . M. S a u n d e r s , G . 0. K o h l e r , an d T .K l o p f e n s t e i n . 1 9 7 1 . E n z y m a t i c e v a l u a t i o n o f processf o r i m p r o v i n g a g r i c u l t u r a l wastes f o r r u m i n a n t f e e d s . J .A n i m . S c i . 3 3 : 1 6 7 - 1 7 0 .8 . G y o r g y , P . , a n d W. N . P e a r s o n . 1 9 6 7 . The v i t a m i n s , 2 n de d . , p . 6 0 . A c a d e m i c P r e s s , New Y o r k .9 . H a n , Y . W . , a n d C . D . C a l l i h a n . 1 9 7 4 . C e l l u l o s e f e r m e n -t a t i o n : e f f e c t o f s u b s t r a t e p r e t r e a t m e n t on m i c r o b i a lg ro w th . A p p l . M i c r o b i o l . 2 7 : 1 5 9 - 1 6 5 .1 0 . H a n , Y . W . , C . E . D u n l a p , a n d C . D . C a l l i h a n . 1 9 7 1 .S i n g l e c e l l p r o t e i n f r o m c e l l u l o s i c w a s t e s . F o o d T e c h -n o l . 2 5 : 3 2 - 3 5 , 5 6 .1 1 . H a n , Y . W . , a n d V . R . S r i n i v a s a n . 1 9 6 8 . I s o l a t i o n a n dc h a r a c t e r i z a t i o n o f a c e l l u l o s e - u t i l i z i n g b a c t e r i u m .A p p l . M i c r o b i o l . 1 6 : 1 1 4 0 - 1 1 4 5 .1 2 . H e m s l e y , J . A . , a n d R . J . M o i r . 1 9 6 3 . The i n f l u e n c e o fh i g h e r v o l a t i l e f a t t y a c i d s on t h e i n t a k e o f u r e a - s u p p l e -m e n t e d l o w q u a l i t y c e r e a l h a y b y s h e e p . A u s t . J . A g r .R e s . 1 4 : 5 0 9 - 5 1 7 .

1 3 . H u m f e l d , H . J . 1 9 4 7 . An i m p r o v e d l a b o r a t o r y - s c a l ef e r m e n t o r f o r s u b m e r g e d c u l t u r e i n v e s t i g a t i o n s . J .B a c t e r i o l . 5 4 : 6 8 9 - 6 9 6 .

1 4 . J u k e s , T . H . 1 9 5 5 . A s s a y o f c o m p o u n d s w i t h f o l i c a c i da c t i v i t y , p . 1 2 1 - 1 5 1 . I n D . G l i c k ( e d . ) , M e t h o d s o fb i o c h e m i c a l a n a l y s i s , v o l . 2 . I n t e r s c i e n c e P u b l i s h e r s ,I n c . , New Y o r k .1 5 . L i v i n g s t o n , A . L . , A . E . A l l i s , a n d G . 0. K o h l e r . 1 9 7 1 .A m i n o a c i d s t a b i l i t y d u r i n g a l f a l f a d e h y d r a t i o n . J .A g r . F o o d C h e m . 1 9 : 9 4 7 - 9 5 0 .1 6 . M o o r e , S . 1 9 6 3 . On t h e d e t e r m i n a t i o n o f c y s t i n e a sc y s t e i c a c i d . J . B i o l . C h e m . 2 3 8 : 2 3 5 - 2 3 7 .1 7 . O h , J . H . , W . C . W e i r , a n d W. M . L o n g h u r s t . 1 9 7 1 .F e e d v a l u e f o r s h e e p o f c o r n s t a l k s , r i c e s t r a w a n db a r l e y s t r a w as c o m p a r e d w i t h a l f a l f a . J . A n i m .S c i . 3 2 : 3 4 3 - 3 4 7 .1 8 . S a u n d e r s , R . M . , a n d G . 0. K o h l e r . 1 9 7 2 . I n v i t r o d e t e r -m i n a t i o n o f p r o t e i n d i g e s t i b i l i t y i n w h e a t m i l l f e e d s f o rm o n o g a s t r i c a n i m a l s . C e r e a l C h e m . 4 9 : 9 8 - 1 0 3 .1 9 . V a n S o e s t , P . J . 1 9 6 3 . U s e o f d e t e r g e n t s i n t h e a n a l y s i so f f i b r o u s f e e d s . II. A r a p i d m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a -t i o n o f f i b e r a n d l i g n i n . J . A s s o c . O f f . A g r . C h e m .4 6 : 8 2 9 - 8 3 5 .2 0 . W a i s s , A . C . , J . G u g g o l z , G . 0. K o h l e r , H . G . W a l k e r , J r . ,a n d W . N . G a r r e t t . 1 9 7 2 . I m p r o v i n g d i g e s t i b i l i t y o fs t r a w s f o r r u m i n a n t f e e d b y aqueous a m m o n i a . J .A n i m . S c i . 3 5 : 1 0 9 - 1 1 2 .

2 1 . Y a n g , S . P . 1 9 6 9 . N u t r i t i o n a l v a l u e o f s i n g l e - c e l l p r o t e i n ,p . 3 3 - 4 1 . I n P r o c . 3 1 s t A n n u . C o n f . C h e m u r g i eC o u n c i l . T h e C h e m u r g i e C o u n c i l , New Y o r k .

5 1 4 H AN

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