Manual de Bioquimica

AMILASA BILIRRUBINAS TOTAL Y FRACCIONADAS LIPASA TEST. DE ADA

ACIDO URICO ALBUMINA EN SUERO CALCIO COLESTEROL CREATININA CPK TOTAL CPK MB DESIDROGENASA LACTICA FOSFORO FOSFATASA ALCALINA FOSFATASA ACIDA PROSTATICA GLUCOSA GAMA GLUTAMIL TRANSFERRASA HIERRO HDL LDL PROTEINAS TOTAL Y FRACCIONADAS PROT. U/LCR TRANSAMINASA TGO TRANSAMINASA TGP TRANSFERRINA TRIGLICERIDOS UREA

MANUAL DE TECNICAS DE BIOQUIMICA

ANALITO : AMILASA

METODO: PUNTO FINAL

FUNDAMENTO DEL TEST:

El sustrato, almidón tamponado, se incuba con la muestra, produciéndose la hidrólisis enzimática. Esta se detiene por el agregado de reactivo de iodo, que al mismo tiempo produce color con el remanente de almidón no hidrolizado. La disminución de color respecto de un sustrato color (sin muestra) es la medida de la actividad enzimática, que se expresa en Unidades Amilolíticas (Smith & Roe) /decilitro (UA/dl), comparables con las Unidades Sacarogénicas (Somogyi)/decilitro.

MATERIALES , EQUIPOS , MUESTRAS y REACTIVOS:

MATERIALES:

- Agua destilada- Contenedor para desechos peligrosos desde el punto de vista biologico.- Puntas esteriles- Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 2 ml.

EQUIPOS:

- Baño de agua a 37º C- Equipo espectrofotometro, ( SHEM-7.)-- Micropipetas automáticas 10 ul.

MUESTRA:

- Suero u orina REACTIVOS:

- Reactivo sustrato 1 : listo para usar- Reactivo de Iodo 2: listo para usar

PROCEDIMIENTO DEL TEST:

1. Permita que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos (18-30ºC).2. Graduar el baño de agua a 37 ºC.3. Identificación de las muestra a procesar.4. En dos tubos de fotocolorimetro marcados C (Control) y D (Desconocido) :5. Agregar 0.5ml de sustrato 1 a los tubos Control y Desconocido 6. Dejar unos minutos en baño de agua a 37ºC y agregar 10 ul de muestra problema al tubos desconocido.7. Incubar a 37ºC.A los 7 minutos y medio exactos, agregar 0.5 ml de reactivo de Iodo 2 a los tubos Control y

Desconocido.8. Mezclar por agitación suave. Retirar los tubos del baño de agua y agregar 4 ml de agua destilada.

NOTA ::El color de la reacción es estable durante una hora por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.

CALCULOS E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:

C - D

Amilasa (UA/dl) = --------- x 1000

C

VALORES DE REFERENCIA:

CONDICIÓN CLINICA SUERO

(UA/dl)

ORINA

(UA/hora)

Normal < 120 < 260

Pancreatitis aguda 300 a 12.000 Mas de 900

Pancreatitis crónica Hasta 200 Mas de 300

Parotiditis 200 a 350 350 a 750

Parotiditis c/complicación

Pancreática Mas de 350 Mas de 750

Procesos abdominales

Agudos (sin pancreatitis) Normal Normal

ANALITO: BILIRRUBINAS

METODO: PUNTO FINAL


La bilirrubina reacciona específicamente con el acido sulfanilico diazotado produciendo un pigmento color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se medí fotocolorimetricamente a 530 nm.

Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazo reactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un desarrollador acuoso que posibilite su reacción. De forma tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de reacción.

MATERIALES , EQUIPOS , MUESTRAS, Y REACTIVOS:

MATERIALES:

Agua destilada- Contenedor para desechos peligrosos desde el punto de vista biologico.- Puntas esteriles- Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrios de 2 ml, 5.0 ml.-

EQUIPOS: Equipo espectrofotometro ( SHEM-7)

- Micropipetas automáticas 20 ul, 50 ul, 200 ul.

MUESTRA: Suero, plasma o líquido amniotíco.

REACTIVOS: Desarrollador : listo para usar

- Reactivo sulfanilico: listo para usar- Diazo reactivo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar 1 parte de Nitrito de sodio con 21 partes de

Reactivo Sulfanilico. -


1. Identificación de las muestra a procesar.2. En tres tubos de fotocolorimetro marcados B (Blanco) D (Directa) T( Total).3. Agregar 2.5 ml de agua destilada a los tubos Blanco y Directa y 2.5 ml del Reactivo Desarrollador al tubo total.4. Luego agregar 200 ul muestra problema a los tubos Blanco, Directa y Total. A continuación agregar 200 ul de

Reactivo Sulfanilico al tubo Blanco, 200 ul de Diazorectivo a los tubos Directa y Total.5. Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de 5 minutos, leer en espectrofotómetro a 546 nm, llevando

a cero el aparato con el agua destilada6. Nota: sueros ictéricos debe emplearse la técnica descripta pero con menores cantidades de muestra de acuerdo

a la severidad de la ictericia. De tal forma, en caso de ictericia moderada se usaran 50 ul de suero mientras que frente a una ictericia intensa se requieren solo 20 ul. Multiplicar los resultados obtenidos por 3.79 y 9.38 respectivamente.

NOTA:El color de la reacción es estable durante 4 y 15 minutos excepto para la bilirrubina directa que debe leerse a los 5 minutos excatos. Si se lee antes, abra subvaloración de los resultados por la reacción incompleta. Si se lee después, abra sobrevaloración porque comienza a reaccionar la bilirrubina libre..


Bilirrubina total ( mg/dl) = ( T – B) x F

Bilirrubina directa ( mg/dl) = ( D – B) x F

Bilirrubina libre (indirecta) = B.Total – B.Directa


ADULTOS:

Directa: hasta 0.25 mg/dl

Total: hasta 1.0 mg/dl

CONTROL DE CALIDAD:

suero control liofilizado standatrol es (2 niveles) dentro de las 2 horas de preparaciòn.

REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS:

inserto del producto ( winer lab)

ANALITO: ADENOSINA DEAMINASA

METODO: PUNTO FINAL

MARCA : NEW LAB


La adenosina deaminasa ADA, reacciona con adenosina para producir inopina + amoníaco.

ADA

Adenosina + H2O --------- Inopina +NH3

Los iones amoniaco que se forman se valoran por el método de Berthelot, donde el amoniaco en presencia de una base reacciona con el fenol e hipoclorito de sodio, formando azul de indofenol.


MATERIALES:

- Agua DestiladA. Contenedor De Residuos Biolögicos

- Puntas Esteriles- Cronometro.- Cubetas para espectro.

EQUIPOS: Equipo espectrofotometro ( SHEM-7)

Micropipetas automáticas 25 ul..

MUESTRA: Suero, liquido ( pleural, ascitico, pericardico, cefalo raquideo.) ,Previa centrifugaciòn

REACTIVOS:

- Buffer fosfato Ph 6.5 : listo para usar- Solución de Adenosina : Listo para usar- Standard de sulfato de amonio- Reactivo color 1: listo para usar- Reactivo color 2: listo para usar


1. Identificación de las muestra a procesar.2. En cuatro tubos de fotocolorimetro marcados b (blanco) s (standard) b.m (blanco de muestra) y m( muestra

problema).3. Agregar 0.5 ml de buffer fosfato al tubo blanco, 0.5 ml standard al tubo standard, 0.5 ml de sol. Adenosina a los

tubos blanco de muestra y muestra, agregar 25 ul de agua destilada a los tubos blanco y standard y 25 ul de muestra al tubo de muestra problema

4. Mezclar, tapar los tubos e incubar a 37ºc por 1 hora.7. Agregar 1.5 ml de reactivo de color 1 a los tubos blanco, standard, blanco de muestra y a la muestra problema,

luego agregar 25 ul de muestra al tubo blanco de muestra, agregar 1.5 ml de reactivo 2 los tubos blanco, standard, blanco de muestra y a la muestra problema.1. Mezclar e incubar 37ºc por 30 minutos.8. Leer la absorbancias contra agua destilada a 546 nm,.


Do muestra - Do muestra blanco

Actividad ( U/L) = -------------------------------------------------- x 50

Do Standard - Do reactivo blanco

DO = valor de densidad optíca.


Suero : 13 – 21 U/L

Liquido Pleural: 0 – 45 U/L

Liquido Ascitico: 0 – 40 U/L

Liquido Pericardio: 0 – 20 U/L

Liquido Cefalorraquídeo: 0 – 6 U/L


inserto del producto

ANALITO : LIPASA

METODO: PUNTO FINAL

MARCA: DIALAB


En la presencia de colipasa y ácidos biliares la lipasa fracciona el susutrato síntetico a glicerol y metilresorufinester, los que son espontáneamente degradadoa ácido glútamico y metilresorufin.

La combinación de la lipasa y de los acidos biliares hace la reacción específica para la lipasa pancreática sin interferencia de esterasas y enzimas lipolíticas.

La medicíon de la absorbancia es proporcional a la actividad en la muestra.


MATERIALES: Contenedor para desechos.

- Puntas esteriles, Cronometro.- Tubos de 13 x 100- Cubetas de espectro.

EQUIPOS: Micropipeta de 450 ul

- Micropipeta de 50ul- Equipo de espectrofotometro SHEM-7

MUESTRA: Suero, plasma con heparina.

REACTIVOS:

- Rvo1 buffer.- Rvo. 2 sustrato de color


1. Identificación de las muestra a procesar.2. El equipo debe estar ya programado para este examen en la concentración Nº 5 llevando a cero con el agua

destilada.3. En un tubo de Kant agregar 450 ul de buffer mas 10 ul de calibrador, colocar en baño de agua a37ºC por 5

minutos.4. Retirar del baño e agua y agregar 50 ul de Rvo 2 mezclar e invertir en una cubeta y leer. hasta arrogar su

resultado y retirar la cubeta.5. En un tubo de Kant agregar 450 ul de buffer mas 10 ul de Muestra, colocar en baño de agua a37ºC por 5 minutos.6. Retirar del baño e agua y agregar 50 ul de Rvo 2 mezclar e invertir en una cubeta y leer. hasta arrogar su resultad


Hasta 60 U/L


inserto del producto

METODO MANUAL DE

BIOQUIMICA PARA

CORROBORACIÓN DE

RESULTADOS

ANALITO : ACIDO URICO

METODO: PUNTO FINAL

MARCA : WIENER


El esquema de reacción es la siguiente:

UOD

Acido úrico + 2H2O + O2 alantoina + H2O2 + CO2

POD

2H2O2 + 4-AF + 3,5-DHSl quinonimina roja


MATERIALES: Agua destilada

- Contenedor para desechos peligrosos desde el punto de vista biologico.- Puntas esteriles- Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml.

EQUIPOS: Baño de agua a 37º C

- Equipo shem-7,BT 3000plus- Micropipetas automáticas 10 ul.

MUESTRA: Suero u Plasma.

REACTIVOS: Reactivo buffer 1 : listo para usar

- Reactivo sustrato 2: listo para usar- Standard : listo para usar- Rvo de trabajo : mezclar 4 partes de reactivo 1 + 1 parte del reactivo 2.


1. Permita que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos (18-30ºC).2. Graduar el baño de agua a 37 ºC.3. Identificación de las muestra a procesar.4. en dos tubos de fotocolorimetro marcados S ( estándard ), y D ( desconocido ) :5. agregar 1 ml de reactivo de Trabajo a los tubos stándard, y desconocido. luego agregar,10 ul de estándard al

tubo Standard y 10 ul de suero problema al tubo desconocido.6. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 Cº en baño maria. 7. Leer la absorbancia en espectrofotometro a 505 mn, llevando el aparato a cero con el agua destilada.

Nota: El color de la reacción es estable durante 30 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.


10.0 mg/dl ( concent. de st)

Ácido úrico ( mg/l) = D x F donde Factor = -------------------------

Ab. Standard


Hombres :2.5 – 6.0 mg/dl

Mujeres : 2.0 – 5.0 mg/dl

CONTROL DE CALIDAD :

Standatrol nivel 1 Standatrol nivel 2


inserto del producto (winer )

ANALITO: ALBUMINA

METODO: PUNTO FINAL

MARCA : WIENER


La albúmina reacciona específicamente-sin separación previa- con la forma aniónica de la 3,3’,5,5’- tetrabromo cresolsulfon ftaleina (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en medio tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbancia a 625 nm respecto del blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra.


MATERIALES:


EQUIPOS: Equipo shem-7.

- Micropipetas automáticas 5 ul.-

MUESTRA: Suero.

REACTIVOS:

- Rvo BCF: listo para usar.- Standard.


1. Identificación de las muestra a procesar.2. en dos tubos de fotocolorimetro marcados S ( estándard ), y D ( desconocido ) :3. agregar 1.75 ml de reactivo de BCF a los tubos blanco, stándard, y desconocido. luego agregar, 5 ul de

Stándard al tubo Standard y 5 ul de suero problema al tubo desconocido.4. Mezclar con una varilla. Mantener los tubos entre 15 y 28ºC durante 10 minutos. Leer en espectrofotómetro a

625 nm llevando a cero con el blanco de reactivo.5.

NOTA: El color de la reacción es estable durante 20 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.


3.4 mg/dl (concent. de st)

Albumina (g/dl) = D x F donde Factor = -----------------------------

Ab. Standard


3.5 – 4.8 g/dl.





ANALITO: CALCIO

METODO: PUNTO FINAL

MARCA: WIENER


El calcio reacciona con el arsenazo III, dando un complejo de color azul que se mide fotocolorimétricamente a 650 nm.

MATERIALES, EQUIPOS , MUESTRAS y REACTIVOS:

MATERIALES:


EQUIPOS: : Equipo shem-7

Micropipetas automáticas 10 ul.

-

MUESTRA: Suero, orina.

REACTIVOS:

- Rvo provisto: listo para usar- Standard.-


1. Identificación de las muestra a procesar.2. en dos tubos de fotocolorimetro marcados S ( estándard ), y D ( desconocido ) :3. agregar 1 ml de reactivo a los tubos stándard, y desconocido. luego agregar, 10 ul de Stándard al tubo

Standard y 10 ul de suero problema al tubo desconocido.4. Mezclar e incubar 2 minutos a temperatura ambiente (15 – 25ºC). Leer la absorbancia en espectrofotómetro a

650 nm llevando a cero con el agua destilada.5.

Nota: El color de la reacción es estable durante 60 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.

CALCULOS DE LOS RESULTADOS:

10 mg/dl (concent. de st)

Calcio serico (mg/dl) = D x F donde Factor = -----------------------------

Ab. Standard

D

Calcio urinario ( mg/24 horas) = ----- x 200 mg/24 horas

S


Suero: 8,5 – 10,5 mg/dl

Orina: hasta 300 mg/dl





ANALITO: COLESTEROL

METODO: ENZIMÁTICO

MARCA : WIENER


La secuencia reaccional es la siguiente:

CHE

ésteres del colestrol colesterol + acido grasos

CHOD

colesterol + O2 colesten-3-ona + H2O2

POD

H2O2 + 4-AF + aceptor quinonimina roja


MATERIALES: Contenedor para desechos peligrosos desde el punto de vista biologico.

- Puntas esteriles- Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml.


- Equipo shem-7,- .Micropipetas automáticas 10 ul.-


REACTIVOS: Reactivo de trabajo: listo para usar

- Standard : listo para usar



tubo Standard y 10 ul de suero problema al tubo desconocido.6. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 Cº en baño maria.7. Leer la absorbancia en espectrofotometro a 505 mn llevando el aparato a cero con el agua destilada.



200 mg/dl ( concent. de st)

colesterol( mg/l) = D x F donde Factor = ------------------

Ab. Standard


Deseable: < 200 mg/dl

Moderadamente alto: 200 – 239 mg/dl

Elevado: > 240 mg/dl





ANALITO: CREATININA

METODO: CINÉTICO

MARCA : WIENER


La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reacción de jaffe) produciendo un cromógeno rojo. La velocidad de esta reacción, bajo condiciones controladas, es una medida de la concentración de creatinina de la muestra puesto que se comporta como una reacción cinética de primer orden para la creatinina. Por otra parte se a demostrado que los cromógenos no-creatinina que interfieren en la mayor parte de las técnicas convencionales, reaccionan dentro de los 30 segundos de iniciada la reacción. De manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reacción, el incremente de color se debe exclusivamente a la creatinina.

MATERIALES, EQUIPOS, MUESTRAS y REACTIVOS:


- Puntas esteriles.Cronometro.- Cubetas para espectro. Pipetas de vidrio de 1 ml.


- Micropipetas automáticas 200 ul.

MUESTRA: Suero , Plasma u Orina.

REACTIVOS: Reactivo Acido Pícrico (1) : listo para usar

- Reactivo B (2): listo para usar- Standard : listo para usar- Rvo de trabajo: mezclar 4 partes de reactivo 1 + 1 parte del reactivo 2.


I.-Técnica para suero o plasma:

1. Identificación de las muestra a procesar.2. Antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con el agua destilada a 505 nm.3. en dos tubos de fotocolorimetro marcados S (estándard), y D (desconocido) .Agregar 1,2 ml de reactivo de

Trabajo a los tubos, stándard, y desconocido. luego agregar, 200 ul de estándard al tubo Standard y 200 ul de suero problema al tubo desconocido.

4. Mezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cronómetro y proseguir la incubación. A los 30 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y D1) y continuar la incubación. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y D2) a los 5 minutos (4 minutos 30 segundos después de la primera lectura).

II.-Técnica para Orina:

Recolectar y preparar la muestra como se describió en “Recolección”, efectuando una dilución 1:50 de la misma en agua destilada. Aplicar luego la técnica I.



Creatinia en suero ( mg/l) = D x F donde Factor = ---------------------------

Ab. Standard

D2 - D1

Creatinina en orina (mg/24horas) : ----------- x Volumen.

S2 – S1


Suero o plasma:

Hombres: 0.7 – 1.3 mg/dl

Mujeres: 0.6 – 1.1 mg/dl

Orina:

Hombres: 14 – 26 mg/24 horas

Mujeres: 11 - 20 mg/24 horas





ANALITO: CPK TOTAL

METODO: CINÉTICO UV OPTIMIZADO

MARCA: WIENER



Cretinita kinasa

Creatinina fosfato + ADP Creatinina + ATP

hexoquinasa

ATP + glucosa ADP + glucosa -6-p

G-6-PDH

glucosa-6-P + NADP+ gluconato-9-P+NADPH + H+


MATERIALES Puntas esteriles

- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml.

EQUIPOS: Equipo shem-7


MUESTRA: Suero, Plasma .

REACTIVOS: Reactivo A Buffer : listo para usar

- Reactivo B Sustrato: listo para usar- Rvo de trabajo: mezclar 5 partes de reactivo A + 1 parte del reactivo B.


1. Identificación de las muestra a procesar.2. Antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con el agua destilada en el BTR número de concentración

es el Nº 23.3. en un tubos de fotocolorimetro marcado D (desconocido) .Agregar 1, ml de reactivo de Trabajo al tubo

desconocido. luego agregar, 40 ul de suero problema al tubo desconocido.4. Mezclar inmediatamente e invertir a una cubeta de espectro, colocar al equipo del BTR y esperar unos 8 minutos

para el resultados.


Suero o plasma:

Hombres: Hasta 195 U/L

Mujeres: Hasta 170 U/L





ANALITO: CPK MB


MARCA: WIENER



Cretinita kinasa

Creatinina fosfato + ADP Creatinina + ATP

hexoquinasa

ATP + glucosa ADP + glucosa -6-p

G-6-PDH

glucosa-6-P + NADP+ gluconato-9-P+NADPH + H+


MATERIALES: Puntas esteriles










desconocido. luego agregar, 40 ul de suero problema al tubo desconocido.

8. Mezclar inmediatamente e invertir a una cubeta de espectro, colocar al equipo del BTR y esperar unos 8 minutos para el resultado.


Hasta 16 u/l





ANALITO: DESIDROGENASA LACTICA


MARCA: WIENER


Basado en el siguiente esquema de reacción.

LDH

Piruvato + NADH + H+ L-lactato + NAD+













para el resultados.


Hombres: 160 – 320 U/L





ANALITO: FOSFATEMIA

METODO: CINÉTICO UV

MARCA: WIENER


El fósforo inorgánico (Pi) reacciona en medio ácido con el molibdato para dar un complejo fosfomolíbdico que se medi espectrofotométricamente a 340 nm.






MUESTRA: Suero, Plasma u Orina. (orina de 24 horas el frasco debe contener 2 ml de acido clorhídrico)

REACTIVO: Rvo: listo para usar

- Standard


1. Identificación de las muestra a procesar.2. en dos tubos de fotocolorimetro marcados S ( estándard ), y D ( desconocido ) :3. agregar 1 ml de reactivo a los tubos stándard, y desconocido. luego agregar, 10 ul de Stándard al tubo

Standard y 10 ul de suero problema al tubo desconocido.4. Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (15 – 25ºC). Leer la absorbancia en espectrofotómetro a

340 nm llevando a cero con el agua destilada NOTA: La reacción final es estable 20 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leída en ese lapso.


Fósforo inorgánico (Pi) (mg/dl) = D x F

4 mg/dl

Donde f = -----------

S

Orina:

D

Pi (g/24horas) = -------- x 0,4 x V

S


Suero o plasma:

Adulto: 2,5 – 5,6 mg/dl.

Orina:

0,3 – 1,0 g/24 horas


SUERO:




ANALITO: FOSFATASA ALCALINA

METODO: CINÉTICO OPTIMIZADO

MARCA: WIENER


La fosfatasa alcalina (ALP o monoésteres ortofosfórico fosfohidrolasa, EC.3.1.3.1.) hidroliza al P-nitrofenilfosfato (p- NFF), que es incoloro, produciendo fosfato p-nitrofenol a Ph alcalino. La velocidad de aparición del anion p- nitrofenolato a 405 nm, es proporcional a la actividad enzimática de la muestra.

La dietanolamina (DEA),regula el PH de la reacción y actúa como aceptor del fosfato liberado por la fosfatasa, observándose como resultado una activación de la reacción y capacidad tamponante cuando se emplea p-NFF como sustrato; por tal razón, la DGKC y la SSCC la han seleccionado para el desarrollo de sus métodos optimizados .





- Micropipetas automáticas 10 ul.MUESTRA: Suero, Plasma.







para el resultado.


Adulto 65 – 300 u/l.

Niños hasta 645 u/l.





ANALITO: FOSFATASA ACIDA PROSTATICA

METODO: CINÉTICA

MARCA: WIENER


La FACP hidroliza el alfa – nafil fosfato ph 5,2 con liberación de fosfato y alfa – naftol. El naftol reacciona su vez con un diazoreactivo presente en el sistema 4-clorotolueno -1,5-diazo alfa- naftalendisulfonato produciendo un pigmento amarrillo de modo que el aumento de la absorbancia leído a 405 nm es proporcional a la actividad fosfatasica de la muestra.



- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml.- Cronometro- gradilla



MUESTRA: Suero.

REACTIVOS: Buffer citrato : listo para usar

- Sustrato NF: comprimido- Rvo de trabajo: Para cada determinación disolver un comprimido de sustrato NF en 2 ml de buffer

citratado, agitando suavemente hasta lograr disolver completamente.


1. Identificación de las muestra a procesar.2. Antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con el agua destilada en el BTR en una absorbancia de

405 nm.3. en un tubos de fotocolorimetro marcado D (desconocido) .Agregar 1, ml de reactivo de Trabajo al tubo

desconocido preincubar unos minutos. luego agregar, 100 ul de suero problema al tubo desconocido.4. Mezclar inmediatamente e invertir a una cubeta de espectro, colocar al equipo del BTR y disparar

simultáneamente un cronometro. A los 4 minutos registrar la D.O. Leer posteriormente la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

5. determinar la diferencia promedio de absorbancia/minuto restando cada lectura de la anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio para los cálculos.

CALCULOS DE LOR RESULTADOS:

Fosfatasa acida prostática (u/l) = absorbancia promediado /minuto x 853.


Adulto: 0 – 3,7 u/l



ANALITO: GLUCOSA

METODO: ENZIMÁTICO

MARCA : WIENER



GOD

Glucosa + O2 +H2O ácido glucónico + H2O2

POD

2 H2O2 + 4-AF + 4-hirdoxibenzoato quinonimina roja



- Puntas esteriles- Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml.- Gradilla.


- Eq Equipo shem-7,- Micropipetas automáticas 10 ul.

MUESTRA: Suero, Plasma, L.C.R.




1. Permita que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos (18-30ºC).2. Graduar el baño de agua a 37 ºC.3. Identificación de las muestra a procesar.4. en dos tubos de fotocolorimetro marcados S ( estándard ), y D ( desconocido ):5. agregar 1 ml de reactivo de Trabajo a los tubos, estándard, y desconocido. luego agregar, 10 ul de estándard al

tubo Standard y 10 ul de suero problema al tubo desconocido.6. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 Cº en baño maría.7. Leer la absorbancia en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con el agua destilada.

NOTA:El color de la reacción es estable durante 30 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.


100 mg/dl (concent. de st)

Glucosa ( mg/l) = D x F donde Factor = ------------------

Ab. Standard


Deseable: 70 - 110 mg/dl



L.C.R. : 40 – 74 mg/dl





ANALITO: GAMAGLUTAMIL TRANSFERASA

METODO: (Szasz modificado) cinético

MARCA: WIENER


La gamaglutamil transferasa es una carboxipeptidasa que cataliza la siguiente reacción:

Gama-GT

L-gama-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida + glicilglicina L-gama-glutamilglicilglicina + 5-amino-2-nitrobenzoato













para el resultado.


Hombres: 11 – 50 U/L

Mujeres: 7 – 32 U/L





ANALITO: FER COLOR

METODO: PUNTU FINAL

MARCA: WIENER


El hierro sérico se libera de la unión con su proteína transportadora especifica la transferrina en buffer acetato pH 4,5 y en presencia de un reductor,el acido ascórbico.

Posteriormente reacciona Con el reactivo de color,piridil bis fenil triazina sulfanato dando un complejo color magenta.


MATERIALES: Puntas estériles

- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml. Gradilla.


- Micropipetas automáticas 200 ul.MUESTRA: Suero, Plasma u Orina. (orina de 24 horas el frasco debe contener 2 ml de acido clorhídrico)

REACTIVO: Rvo: listo para usar

- Standard


1. Identificación de las muestra a procesar.2. en tres tubos de fotocolorimetro marcados B (Blanco), S ( estándard ), y D ( desconocido ) :3. agregar 1 ml de reactivo a los tubos stándard, y desconocido. luego agregar, 200 ul de agua destilada al tubo

blanco, 200 ul de Stándard al tubo Standard y 200 ul de suero problema al tubo desconocido. mezclar y leer el tubo desconocido. Luego agregar 200 ul de Rvo de color. Mezclar inmediatamente. Volver a leer cada tubo a los 5 minutos, llevando el aparato a cero con el agua.

NOTA:Los tubos deben ser leídos entre 5 y 60 minutos luego de completados los pasos de procedimiento.


Corregir la lecturas de S y D, restándoles los blancos correspondientes:

S – B = S corregida

D – (B+BS) = D corregida

Fe (ug/dl) = D corregida x f

100 ug/dl

Donde f = -----------------

S corregida


Adulto: 114.6 ug/dl

Mujeres: 103.3 ug/dl





ANALITO: LDL COLESTEROL

METODO: CINETICO

MARCA: WIENER


Las lipoproteínas de baja densidad (ldl) se separan del suero precipitándolas selectivamente mediante el agregado de polímeros de alto peso molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las demás lipoproteínas ( HDL y VLDL); el colesterol ligado a las mimas se determina empleando el sistema enzimático colesterol oxidasa/peroxidasa con colorimetría según trinder (Fenol/4-AF). Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las LDL.


MATERIALES: Contenedor para desechos peligrosos desde el punto de vista biológico.

- Puntas estériles- Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml.


Equipo shem-7- Micropipetas automáticas 100 ul.

MUESTRA: Suero.

REACTIVOS: Reactivo precipitante: listo para usar


1. Permita que el reactivo alcance la temperatura ambiente antes de usarlos (18-30ºC).2. Graduar el baño de agua a 37ºC.3. Identificación de las muestra a procesar.4. En un tubo de khan colocar: 200 ul de muestra mas 100 ul de reactivo precipitante homogenizar agitando

durante 20 segundos y dejar 15 minutos en un baño de agua a 20 – 25ºC.Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m. Separar inmediatamente el sobrenadante.

5. en tres tubos de fotocolorimetro marcados B (blanco) S ( estándard ), y D ( desconocido ) :6. agregar 2 ml de reactivo de Trabajo a los tubos stándard, y desconocido. luego agregar,20 ul de estándard al

tubo Standard y 20 ul de suero problema al tubo desconocido.7. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 Cº si se usa el reactivo de trabajo de colesterol enzimático.Retirardel baño y

enfriar. Leer en espectrofotometro a 505 nm ,llevando el aparato de absorbancia con el blanco.

NOTA:: El color de la reacción es estable durante 30 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.


LDL colesterol (mg/dl) = Colesterol total (*) – ( D x f )

62.4

F = ----------

s


Riesgo bajo o nulo : < 129 mg/dl

Riesgo moderado a elevado : 130 – 189 mg/dl

Riesgo muy elevado : >= 190.0 mg/dl





ANALITO: PROTEINAS TOTALES

METODO: PUNTO FINAL

MARCA : WIENER


La albúmina reacciona específicamente-sin separación previa- con la forma aniónica de la 3,3’,5,5’- tetrabromo cresolsulfon ftaleina (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en medio tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbancia a 625 nm respecto del blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra.



- Puntas esteriles, Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 2 ml.


- Micropipetas automáticas 5 ul.MUESTRA: Suero.

REACTIVOS: Rvo BCF: listo para usar, Standard.


1. Identificación de las muestra a procesar.2. en dos tubos de fotocolorimetro marcados S ( estándard ), y D ( desconocido ) :3. agregar 1.75 ml de reactivo de BCF a los tubos blanco, stándard, y desconocido. luego agregar, 25 ul de

Stándard al tubo Standard y 25 ul de suero problema al tubo desconocido.4. Mezclar con una varilla. Incubar 15 minutos a 37 ºC. leer en espectrofotometro a 540 nm. llevando a cero con el

agua destilada.NOTA:: El color de la reacción es estable durante 12 horas por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.



Proteínas totales (g/dl) = D x F donde Factor = -----------------------------

Ab. Standard


6,1 a 7,9 g/dl.





ANALITO: PROTI U/LCR

METODO: PUNTO FINAL

MARCA : WIENER


Las proteinas presentes en las muestras reaccionan en medio acído con el complejo rojo de Pirogalol-Molibdato originando un nuevo complejo coloreado que se cuantifica espectrofotométricamente a 600 nm.



- Puntas esteriles. Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml.Gradilla.


- Equipo shem-7- Micropipetas automáticas 20 ul.-

MUESTRA: . orina, L.C.R.




1. Permita que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos (18-30ºC).2. Graduar el baño de agua a 37 ºC.3. Identificación de las muestra a procesar.4. en dos tubos de fotocolorimetro marcados S ( estándard ), y D ( desconocido ):5. agregar 1 ml de reactivo de Trabajo a los tubos, estándard, y desconocido. luego agregar, 20 ul de estándard al

tubo Standard y 20 ul de orina problema al tubo desconocido.6. Mezclar e incubar 10 minutos a 37 Cº en baño maría.7. Leer la absorbancia en espectrofotómetro a 600 nm o en fotocolorimetro ( 580-620 nm ) llevando el aparato a

cero con el agua destilada.



Proteinas en orina de 24 horas:

D

mg de proteínas / 24horas = ---------- x V x 1000

S

Proteínas en orina ocasional:

D

Mg/dl proteínas : -------- x 1000

S

Proteínas en LCR:

D

Mg/dl proteínas : -------- x 1000

S


Orina de 24 horas: 30 – 140 mg/dl

Orina ocasional: 25 mg/dl

LCR: 15 -45 mg/dl





ANALITO: TRANSAMINASA TGO


MARCA: WIENER


Basado en el siguiente esquema reaccionante:

GOT

L-aspartato +2-oxoglutarato oxolacetico+L-glutamato

MDH

oxalacetato + NADH + H+ L-malato + NAD+


MATERIALES: Puntas esteriles, Cubetas para espectro.

- Pipetas de vidrio de 0.5 ml.EQUIPOS: Equipo shem-7



REACTIVOS: Reactivo A Buffer : listo para usar, Reactivo B Sustrato: listo para usar

- Rvo de trabajo: mezclar 4 partes de reactivo A + 1 parte del reactivo B.


1. Identificación de las muestra a procesar.2. Antes de agregar la muestra, llevar el equipo a cero con el agua destilada 3. en un tubos de fotocolorimetro marcado D (desconocido) .Agregar 0.5ml de reactivo de Trabajo al tubo

desconocido colocando tres minutos en baño maria. luego agregar, 50 ul de suero problema al tubo desconocido.

4. Mezclar inmediatamente e invertir a una cubeta de espectro, colocar al equipo y esperar unos minutos para el resultados.







inserto del producto (winer

ANALITO: TRANSAMINASA TGP


MARCA: WIENER

FUNDAMENTO DEL TEST: Basado en el siguiente esquema reaccionante:

GPT

L-alanina +2-oxoglutarato Piruvato + L-glutamato

LDH

Piruvato + NADH + H+ L-lactato + NAD+



- Pipetas de vidrio de 0.5 ml.EQUIPOS: Equipo shem-7,starfax, selectra2

- Micropipetas automáticas 50 ul.MUESTRA: Suero, Plasma .




1. Identificación de las muestra a procesar.2. Antes de agregar la muestra, llevar el equipo a cero con el agua destilada .3. en un tubos de fotocolorimetro marcado D (desconocido) .Agregar 0.5ml de reactivo de Trabajo al tubo

desconocido colocando tres minutos en baño maria . luego agregar, 50 ul de suero problema al tubo desconocido. Mezclar inmediatamente e invertir a una cubeta de espectro, colocar al equipo y esperar unos minutos para el resultados.








ANALITO: TRANSFERRINA

METODO: PUNTO FINAL

MARCA : WIENER


La transferrina o proteína transportadora especifica del hierro, se determina por su actividad fisiológica de captar Fe (III) A PH mayor a 7,2 donde la transferrina se satura en presencia de Fe (III) en exceso, en remanente de Fe (III) no ligado se elimina totalmente por coprecipitacion con carbonato de magnesio.

El hierro unido ala transferrina se libera y determina colorimétricamente según la técnica de FER-COLOR la cantidad de transferrina se expresa como los microgramos de Fe (III) con que está saturada.


MATERIALES: Agua destilada

- Contenedor para desechos peligrosos desde el punto de vista biologico. Puntas esterilesCronometro.Cubetas para espectro.

- Pipetas de vidrio de 1 ml.EQUIPOS: Equipo shem-7

Micropipetas automáticas 250 ul.MUESTRA: Suero .

REACTIVOS: Solucion saturante : listo para usar

- absorbente 2: listo para usar


1. Permita que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos (18-30ºC).2. Graduar el baño de agua a 37 ºC.3. Identificación de las muestra a procesar.4. en un tubo de fotocolorimetro marcados D ( desconocido ) :5. agregar 0.5 ml de solución saturante al tubo desconocido. luego agregar,250 ul de suero problema al tubo

desconocido.6. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 Cº en baño maria, luego agregar ½ copita de Rvo absorbente por un lapso de 5

minutos, posteriormente se centrifuga por 15 minutos a 3000 rpm. Sacar muy lentamente sin mezclar y del sobrenadante.

7. en tres tubos de fotocolorimetro marcados B (blanco), S ( estándard ), y D ( desconocido ) :8. agregar 1 ml de reactivo a los tubos stándard, y desconocido. luego agregar,200 ul de agua destilada al blanco,

200 ul de Stándard al tubo Standard y 200 ul de sobrenadante problema al tubo desconocido. mezclar y leer el tubo desconocido. Luego agregar 200 ul de Rvo de color. Mezclar inmediatamente. Volver a leer cada tubo a los 5 minutos, llevando el aparato a cero con el agua.

9. Leer la absorbancia en espectrofotometro a 560 mn o en fotocolorimetro ( 490 - 530 nm ) llevando el aparato a cero con el blanco.



Corregir la lecturas de S y D, restándoles los blancos correspondientes:

S – B = S corregida

D.sobrenanadte – (B+BS) = D corregida

Fe (ug/dl) = D corregida x f

100 ug/dl

Donde f = -----------------

S corregida

CALCULOS PARA % DE TRANSFERRINA:

Hiero serico (ug/dl)

Saturación % = --------------------------- X 100

Transferrina (ug/dl)


Transferrina:250 – 400 ug/dl

Saturación de transferrina % : 20 – 55 %



ANALITO: TRIGLICERIDOS

METODO: ENZIMÁTICO

MARCA : WIENER

FUNDAMENTO DEL TEST: La secuencia reaccional es la siguiente:

Lipoprotein lipasa

triglicéridos glicerol+ ácido grasos

glicerol Kinasa

glicerol + ATP glicerol-1-P + ADP

GPO

glicerol-1-fosfato + O H2O2 + dihidroxiacetonafosfato

POD

2H2O2 + 4-AF + clorofenol quinonimina roja



- Puntas esteriles Cronometro.- Cubetas para espectro.- Pipetas de vidrio de 1 ml.


- Equipo shem-7- Micropipetas automáticas 10 ul.


REACTIVOS: Rvo de buffer:

- Enzimas:- Standard : listo para usar- REACTIVO DE TRABAJO:

Agregar 20 ml de buffer en un vial de enzimas, mezclar hasta la disolucíon completa de las enzimas. Homogenizar y fechar.



tubo Standard y 10 ul de suero problema al tubo desconocido.6. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 Cº en baño maria.7. Sacar del baño maria y dejar enfriar unos minutos.8. Leer la absorbancia en espectrofotometro a 505 mn ,llevando el aparato a cero con agua destilada.

.



200 mg/dl ( concent. de st)

trigliceridosl( mg/l) = D x F donde Factor = ------------------

Ab. Standard


Deseable: < 150 mg/dl



Muy elevado : 500 mg/dl





ANALITO: UREA

METODO: CINÉTICO UV

MARCA: WIENER

FUNDAMENTO DEL TEST: La secuencia reaccional es la siguiente:

ureasa

urea + H2O 2NH3 + CO2

GLDH

NH3 + NADH + H+ + 2-oxoglutarato i-glutamato + NAD+H2O



- Pipetas de vidrio de 1 ml.EQUIPOS: Equipo shem-7




- Reactivo B Sustrato: listo para usar, Stanadrd: listo para usar- Rvo de trabajo: mezclar 4 partes de reactivo A + 1 parte del reactivo B.



es el Nº 8.3. en un tubos de fotocolorimetro marcado S (Standard) .Agregar 1, ml de reactivo de Trabajo al tubo desconocido.

luego agregar, 10 ul de standard al tubo stándard, Mezclar inmediatamente e invertir a una cubeta de espectro, colocar al equipo del BTR y esperar unos 8 minutos para el resultado.

4. Luego en un tubo de fotocolorimetro marcado D (desconocido) .Agregar 1, ml de reactivo de Trabajo al tubo desconocido. luego agregar, 10 ul de suero problema al tubo desconocido.

5. Mezclar inmediatamente e invertir a una cubeta de espectro, colocar al equipo del BTR y esperar unos 8 minutos para el resultado.


Suero o plasma: 10 – 50 mg/dl.




inserto del producto (winer)

Documents

Manual de Bioquimica