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5/22/2018 Lab 1 Microscopa Ptica
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NORMAS DE
LABORATORIOPontificia Universidad Catlica de Valparaso
Facultad de Ciencias Bsicas y MatemticasInstituto de Biologa
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Obligaciones
delantal OBLIGATORIO.
80% de asistencia.
entrada al laboratorio en horario fijado.
ingreso al prctico con la gua delaboratorio pertinentey con losmateriales solicitados.
prohibido el cambio de seccin.
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pertenencias guardadas en los lockers.
pelo largo tomado.
prohibido fumar, beber y/o comer.
comportamiento adecuado yrespetuoso con docentes, ayudantes ycompaeros.
dejar los microscopios apagados ydesenchufados.
Obligaciones
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todo material debe quedar limpio alfinal del prctico.
cuidado con el material utilizado.
cualquier material cortopunzante rotodebe ser debidamente desechado.
celulares apagados o en tono de
silencio. profundizar los conocimientos previo
a la actividad.
Obligaciones
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Evaluaciones Todas las clases se realizar un control de
entrada. (20% del laboratorio) Primera prueba de laboratorio, terica-
prctica. (45% del laboratorio) Segunda prueba de laboratorio, terica. (35%del laboratorio)
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Programa de actividades
Lab 1. Microscopia ptica
Sistemas del microscopioPoderes del microscopio
Formacin de la imagen
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Programa de actividades
Lab 2. Formas y tamaos celulares
Reconocimiento de tiposcelulares en tejidos.
Determinacin de factoresque determinan tiposcelulares.
Tejido epitelial y conjuntivo
Tejido muscular y nervioso
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Lab 3. Tipos de microscopia
Programa de actividades
Conocimientoterico de los tiposde microscopiautilizadoscomnmente enbiologa celular.
Tipos de tcnicasen la preparacin delas muestras.
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Lab 3. Frotis de sangre.
Programa de actividades
Obtencin de muestras
histolgicas. Observacin ycaracterizacin declulas sanguneas.
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Lab 4. Fagocitosis
Programa de actividades
Obtencin dehemocitos deMytilus edulis.
Observacin defagocitosis en
clulas de levadura.Caracterizacin delas etapas de lafagocitosis.
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Lab 5. Citoesqueleto y Mitosis.
Programa de actividades
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Lab 6. Conteo y viabilidad celular.
Programa de actividades
Tcnica experimental paraestimar viabilidad de clulasde Saccharomyces cerevisiaeen diferentes condiciones.
Conteo de clulas en cmara
de neubauer.
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Programa de actividades
Lab 7. Extraccin de protenas
Lisis Celular
Extraccinmecnica
Buffer de lisis
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Lab 8. Cuantificacin de protenas.Mtodo de Bradford.
Programa de actividades
Realizar una curva decalibrado utilizando BSAcomo protena patrn.
Determinar la
concentracin de protenatotal en una muestra.
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Lab 9. Electroforesis de protenas
Programa de actividades
Conocer la tcnica de
separacin deprotenas en geles deA/BA.
Calcular el PMapararente de unamuestra problema.
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Laboratorio N 1
Microscopa ptica
Laboratorio Biologa Celular
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Microscopia
Una clula animal tpica mide de 10 a 20 m de dimetro, lo quees unas 5 veces ms pequeo que la partcula ms pequea visible
al ojo humano desnudo. Las clulas animales no-solo son pequeas,sino que tambin son incoloras y transparentes.
La descripcin de sus detalles internos se debe en gran parte, aque durante la ltima parte del siglo XIX, se desarrollaron
variadas tinciones que permitieron aumentar el contraste losuficiente como para hacer evidentes las diferentesestructuras intracelulares.
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1 metro = 100 centmetros
1 centmetro = 10 milmetros1 milmetro = 1000 micras1 micra () =1.000 nanmetros1 nanmetro = 10
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Sistemas que componen unMicroscopio
Sistema Mecnico Sistema deIluminacin
Sistema deAmplificacin
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Sistema Mecnico
Pie
Columna
Platina
Tubo o can
Revolver o Tambor
Tornillos de focalizacin
Macromtrico
Micromtrico
Carro de Vernier
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Sistema de iluminacin
Fuente luminosa
Espejo
condensador
Diafragma Iris
Anillo porta filtro
Sistema de Amplificacin
Lentes Oculares
Lentes objetivos
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A. Oculares
B. Revolver
C. Lentes objetivos
D. PlatinaE. Carro de vernier
F. Condensador.
G. Tornillo macromtrico.
H. Tornillo micromtrico
I. Diafragma Iris
J. Tornillo
K. Interruptor
L. Potencimetro
M. Brazo
N. Pie
M
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Sistema de iluminacin y formacinde la imagen
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Propiedades del microscopio
Poder de Resolucin
Poder de Penetracin
Poder de Aumento
Poder de Definicin
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Poder de Resolucin
Capacidad del instrumento para dar imgenesdistintas de puntos situados muy cerca uno delotro.
Poder de resolucin = 1______Lmite de resolucin
RELACIN INVERSAMENTEPROPORCIONAL
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Limite de resolucin (LR)
Distancia mnima a la cual se deben encontrardos objetos para verlos por separado.
LR = K ___AN
K = 0.61 (para microscopios pticos)
= longitud de onda de la luz blanca (0.5 m).AN = apertura numerica
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Apertura Numrica
Producto (n sen ) que aparece en la expresindel poder de resolucin
A.N = n sen
n= ndice de refraccin del medio:
Aire = 1 A. inmersin = 1,4
Semiangulo deapertura
Objetivo
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Semingulo de apertura
AN = n sen
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Ejercicios:
Calcule el limite de resolucin yposteriormente el poder de resolucin con lossiguientes datos:
I:
- Lambda 0.5 micrmetros- ndice de refraccin del aire y aceite- Semiangulo igual a 14,4
II:- Lambda 0.4 micrmetros.- ndie de refraccin del aire y aceite.- ngulo de apertura de 60
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Muestra de Hilos de colores Con el objetivo de 5x Cuntos colores de
hilos distintos distingue? Al pasar al objetivo de 10x Qu sucede? y al
de 40x Qu explicacin le da usted a esto? Para observar uno de los hilos sobre el otro
con mas precisin que estructura (parte) del
microscopio deber mover? Por qu?
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Poder de definicin:
Es la capacidad del microscopio de dar imgenesntidas, de contornos precisos
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Poder de Penetracin
Cualidad de las lentes que permite averiguarhasta que lmite podemos reconocer detalles deestructuras situadas a diferentes niveles de la
preparacin.Ejercicio: Con los hilos de colores Cmo varia la penetracin
(profundidad) cuando se cambia de objetivo de 10x al de
40x? Determinar con cual de los aumentos se obtiene:
Mayor amplitud de campo Menor distancia de trabajo Mayor poder de resolucin
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Poder de aumentoRazn que existe entre el tamao de la imagen producida
por el microscopio y el tamao del objeto observado.
Ejercicio:
Si tengo el objetivo del microscopio en 40x y el ocular en10x, en cuanto veo aumentada la imagen.
Aumento total = aumento lente objetiva x aumento lente ocular
Directamente proporcional
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Muestra de Papel milimetrado
Observar una muestra de papel milimetrado con unaletra impresa ( 5X)
Con un papel milimetrado medir la distancia entre el
objetivo y la preparacin en el portaobjeto. Usando las lneas del papel milimetrado determine eldimetro del campo observado, luego el radio y apartir de ste calcule el rea del campo.
Usando las lneas del papel milimetrado determine eltamao de la letra.
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Enfocar la letra con el objetivo 10X: Mida la distancia entre el lente objetivo y la
preparacin con un papel milimetrado. Describa como se ve la letra (derecha, invertida,
difusa, etc) Desplace la platina a la derecha y a la izquierda
en que direccin se mueve la letra? Usando las lneas del papel milimetrado, calcule el
rea del campo observado
Muestra de Papel milimetrado