Hoefer SE615 y SE675 Ruedas de gel múltiples

mu  SE615-IM/Spanish/Rev.C0/08-12

man ual del usuarioEspañol

• pi

Tabla de contenidos Advertencias de seguridad y precauciones ............... ii

Introducción..........................................................1

Configuración máquina colada ................................5

Fundición con placas divisoras ...............................7

Verter estándar geles homogéneos ...........................9

Verter los geles de gradiente estándar....................11

Verter geles de apilamiento ..................................15

Extracción de los geles polimerizados ....................16

Solución de problemas .........................................18

Cuidado y mantenimiento .....................................20

Apéndice A: Los números de identificación de gel ..21

Apéndice B: Referencias ......................................21

Información para pedidos .....................................22

Advertencias de seguridad y precauciones• La acrilamida es una neurotoxina.

• Utilice guantes al manipular la acrilamida o poliacrilamida.

• Use una máscara contra el polvo la hora de sopesar la acrilamida o la preparación de solu-ciones de acrilamida.

Protección de su equipo

Para mantener el instrumento en excelentes condiciones, por favor tome los siguientes pasos importantes:

• Use agua saturada de n-butanol para geles de resolución overlayering durante la polimer-ización.

• Evite el uso de espátulas metálicas pequeñas para separar las placas. Espátulas puede astil-lar los bordes de las placas de vidrio y evitar que el sellado.

• Después del colado, puede ser necesario usar una cuña para separar un sándwich de vidrio y gel a partir de otra. Deslice una Wonder Wedge entre sándwiches adyacentes para separarlas.

• pii

¡Importante! La mayoría de disolventes orgánicos que incluyen metanol, isobutanol, isopropanol y n-butanol incluso se manía o la nube de plástico acrílico con una exposición prolongada. Utilice sólo pequeñas cantidades de la superposición con los geles.

Introducción

Tamaños de gelLos Hoefer® SE615 y SE675 ruedas de gel Múltiples han sido diseñados para lanzar verti-cales geles de acrilamida de la losa de la concen-tración o gradiente homogéneo.

Utilice las ruedas con 16 × 18 cm placas de vidrio y 2 espaciadores cm de ancho para emitir 16 × 14 cm geles. Utilice separadores de 1 cm de ancho para emitir 16 × 16 cm para los geles de electroforesis en dos dimensiones. Los geles resultantes son compatibles con Hoefer SE400, SE600 y SE600 Chroma vertical Unidades losa electroforesis en gel.

Geles homogéneos y el gradienteEl SE615 y SE675 se puede utilizar para la fundición de geles tanto homogéneos y degra-dado. Geles de gradiente se emitan a través del puerto en la parte inferior de la rueda. Cuando se lanza geles homogéneos, los resultados son más consistentes cuando los geles son emitidos desde la parte inferior. La región en forma de V en la parte inferior de la unidad de colada permite la solución de gel a subir uniforme-mente, produciendo geles idénticos.

• p1

Fundición estándarEn el procedimiento de colada estándar, un gel se funde entre dos placas de vidrio mantenidos aparte por un par de espaciadores. (Véase la Fig. 2 en la página 5.) El resultado puede ser descrita como un “sandwich”, con el gel entre dos placas de vidrio. Cuando se configura una unidad de placa vertical de electroforesis en gel, se coloca el vidrio y el emparedado de gel en la unidad de electroforesis.

El número máximo de geles puede convertir simultáneamente utilizando el procedimiento de colada estándar se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1. El número máximo de geles estándar emitidos  0,75-mm   1,0-mm  1,5-mm    espaciadores   espaciadores  espaciadores

SE615 11 10 10

SE675 4 4 4

• p2

Fundición con placas divisorasTal vez le resulte útil para duplicar el número de geles se ejecutan simultáneamente en una unidad de electroforesis. Esto puede lograrse por colada un “sándwich”. Un sándwich contiene una placa de vidrio divisor dentada y un segundo par de espaciadores entre las placas estándar, y por lo tanto forma dos capas de gel entre tres placas de vidrio (véase la Fig. 3 en la página 8) placas divi-sorias están disponibles para el SE400 y SE600.

El número máximo de geles puede convertir simultáneamente, usando placas divisoras (dos geles por sándwich), se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2. El número máximo de geles emitidos con placas divisoras  0,75-mm   1,0-mm  1,5-mm    espaciadores   espaciadores  espaciadores

SE615 14 14 12

SE675 6 6 4

Véase la Fig. 1 en la página 4 para identificar los componentes de las ruedas de gel múltiples. Para obtener información sobre las piezas, accesorios y equipos relacionados, consulte la página 22.

Verter segunda dimensión-geles de la losaEn la preparación de la segunda dimensión geles de losa en las ruedas múltiples, es importante para verter las losas a la altura correcta.

Si está utilizando tiras de IPG, que no es necesa-rio un gel de apilamiento. Verter el gel segunda dimensión-a 0,5-1,0 cm por debajo de la parte superior del emparedado para la colada están-dar, o 1 cm por debajo de la muesca si está colada con placas divisoras. Esto permite un amplio espacio para tener las tiras IPG entre las dos placas de vidrio. El uso de 1,0 o 1,5 mm de espaciadores con tiras de IPG.

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SE615 y SE675 componentes

número  descripción

1 Cuerpo de Rueda, incluye la placa frontal

2 Abrazadera de resorte (4)

3 Junta de espuma cable de

4 Silicona bloque de desplazamiento*

5 Bloque separador de acrílico

6 Peine

7 Policarbonato hoja de relleno

8 Placa de vidrio

9 Espaciador

10 Puerto de entrada

11 Nylon tornillo

* Un bloque de silicona pequeño desplazamiento también está disponible para el SE675.

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8

Fig 1. Componentes de los SE615 y SE675 ruedas de gel múltiples.

15 6

7

!

0

8

1

9

2

3 4

Configuración máquina colada

Preparación de la máquina de colada

1

Si la placa frontal está unido a la máquina de colada, retírelo. Retire los cuatro abrazaderas laterales, afloje los dos tornillos de mano, y deslice la placa frontal.

2

Quite el cable de la junta de espuma. Aplique una ligera capa de lubricante con sello de gel y sustituir la junta.

3

Cuando se lanza geles de gradiente, conecte el tubo de la máquina de gradiente al orificio de entrada en la parte inferior de la placa frontal. Geles homogé-neos También se podrá votar a través de este puerto. Si fundición geles homogéneos de la parte superior, insertar el bloque de desplazamiento adecuado al aire libre, en forma de V en la región inferior de la cámara.

4

Coloque la máquina de colada se abre en una posición horizontal con la espalda a la mesa de trabajo.

Fig 2. Construcción de un sándwich de vidrio para la colada estándar.

• p5

Nota: No bloquee el orificio de entrada de color rojo en la parte inferior de la placa frontal.

lanzador

placa de vidrio

espaciador

placa de vidrio

papel de cera o una hoja de policarbonato

un sándwich

Nota: Para realizar la separación de los bocadillos de gel polimerizado más fácil, coloque las hojas de papel de cera en el lanzador entre cada conjunto de sándwiches de cristal.

Nota: Al analizar un gran número de geles, que puede ser útil para incluir los números de identificación de gel en el gel polimerizado.

Véase el apéndice en la página 21 para obtener instrucciones sobre cómo hacer las etiquetas de identificación de gel. Ligeramente húmedo y coloque las etiquetas en la parte inferior del emparedado de gel durante el montaje de la pila.

Nota: Si utiliza láminas de policarbonato en lugar de papel encerado entre cada sándwich, el lanzador tiene un menor número de bocadillos.

La construcción de la pila

1Colocar una lámina de policarbonato en la máquina de colada de manera que 1/3 de la hoja se extiende fuera de la parte superior.Puede utilizar esta hoja como una palanca para inser-tar hojas de relleno después de todos los sándwiches están en su lugar. Todos los componentes restantes quede a ras contra el fondo y los lados.

2Coloque una hoja de papel encerado sobre la lámina de policarbonato. Construir el sándwich por primera vez en la máquina de colada.

3Coloque una hoja de papel de cera en la parte supe-rior del sándwich y construir el siguiente sandwich.

4Repita el paso 3, alternando el papel de cera y boca-dillos de gel. Durante el emparedado final, poner una lámina de policarbonato en lugar de papel de cera de modo que el nivel de la solución de gel es visible a través de la placa frontal.

5Coloque la placa frontal de la máquina de colada y asegurarse de que la pila se ajusta perfectamente, alrededor de 0,5 mm por encima del borde de la rueda. Si es necesario, ajustar el número de láminas de policarbonato adicionales, bloques de acrílico espaciadores, placas de vidrio y bocadillos para obtener un ajuste perfecto.

6Asegúrese de que los separadores son rectos y en los bordes de las placas de vidrio. Utilice el “Spacer Mate” para corregir la alineación si es necesario.Si es necesario, tomar la placa frontal de apagado y asegurarse de que todos los bordes de los componen-tes de la pila se descarga. Pulse en las que se están pegando a cabo hasta que todos los bordes están al ras y vuelva a colocar la placa frontal de la máquina de colada.

7Asegure la placa frontal con los cuatro abrazaderas de resorte y apretar los tornillos del fondo.

• p6

Fundición con placas divisorasPara duplicar el número de geles se ejecutan de forma simultánea en las unidades SE600 y afines, colocar una placa de vidrio divisor de muescas y otro par de separadores entre las placas de vidrio estándar. El resultado es un “club sándwich”, con dos capas de gel formada por las tres placas de vidrio.

Para utilizar las placas divisoras, siga las instruc-ciones de “Verter estándar geles homogéneos” en la página 9 o “Verter los geles de gradiente estándar” en la página 11. Cuando el cálculo de volúmenes de solución, utilice la fórmula en la página 9. Al apilar emparedados de vidrio, use el siguiente procedimiento.

1

Pila de sándwiches de cristal en la máquina de colada, con un club sándwich para cada uno de dos geles que se proyectan. Llenar el espacio extra con los bloques de acrílico, placas de vidrio y láminas de policarbonato.

2

Deslice en una lámina de policarbonato contra la parte posterior.

3

De diapositivas en un sándwich de vidrio. (Ver Fig. 3).

Para construir un sándwich, diapositiva en una placa de vidrio rectangular y espaciadores lugar a lo largo de cada uno de los dos bordes laterales. Deslice en una placa divisora de vidrio con muescas y espa-ciadores lugar a lo largo de cada uno de los bordes laterales. Finalmente, deslice en una placa de vidrio rectangular segundo.

• p7

Nota: Para una visibilidad óptima, coloque una lámina de policarbonato en contra de la placa frontal.

4

Coloque una lámina de policarbonato o papel encerado en la parte superior del sándwich.

Repita el paso 3, alternando el papel de cera y de los sándwiches.

5

Después de que el sándwich último, añadir bloques acrílicos y espaciadores adicionales hojas de poli-carbonato hasta toda la pila es de aproximadamente 0,5 mm por encima del borde de la caja.

• p8

Fig 3. La construcción de un “club sándwich” para la fundición de placas divisorias.

placa de vidrio

espaciador

placa divisora con muescas

espaciador

placa de vidrio

papel de cera o una hoja de policarbonato

un club sándwich

adicional club sándwiches

Verter estándar geles homogéneosTabla 3. Ruedas de gel y el volumen requeridogel de ruedas  volumen requerido  gradiente fabricante   (ml)  tamaño*

SE615 190–500 SG500

SE675 60–150 SG100 o SG500

*El tamaño real depende del volumen calculado.

1

Preparar y solución desgasificar monómero sufici-ente para llenar todos los emparedados al nivel de la placa dentada.

La siguiente fórmula permite solución adicional para llenar el espacio entre el sandwich y la cámara:

N gel de apilamiento. Solución de llenado hasta justo debajo de la parte superior de la placa dentada. Si las bolsas de aire forman, retire con una pipeta o una jeringa. Introducir un peine, con un ligero ángulo, en cada sándwich, teniendo cuidado de no atrapar el aire debajo de los dientes.

Gel de apilamiento. Completa solución a 4 cm por debajo de la parte superior de la placa de vidrio rectangular. Esta altura permite 1 cm de gel de apila-miento por debajo de los pozos. Verter el gel y apli-car una superposición. Después el gel se establece, preparar el gel de apilamiento, como se describe en la página 15.

2-D electrophoresis. Completa solución a aproxima-damente 1,0 cm por debajo de la parte superior de la placa de vidrio rectangular. Esta altura permite 4 a 5 mm de espacio para la tira IPG y un sello de agarosa. Superponer el gel de separación como se describe en el paso 3.

¡Advertencia! La acrilamida es una neurotoxina. Utilice guantes al manipular la acrilamida o poliacrilamida. Use una máscara contra el polvo la hora de sopesar la acrilamida o la preparación de las poblaciones de acrilamida.

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Nota: El multiplicador de 1,1 en esta fórmula asegura una solución suficiente para llenar el volumen muerto.

Monomer vol. = altura × ancho × espaciador × número total × 1,1 (ml) (cm) (cm) espesor (cm) gel sandwiches

¡Atención! Isobutanol modas o las nubes en las paredes giratorias acrílicas, por lo que es difícil ver los geles.

2

Añadir iniciador y catalizador, y se vierte la solución en los sándwiches de cristal de la parte superior.

La solución fluye desde un sándwich a otro a través de la ranura en la parte inferior de la máquina de colada y se eleva al mismo nivel en todos los emparedados. Vierta lentamente para evitar el llenado excesivo.

3

Después de alcanzar el nivel final, superponer cada emparedado de gel con 300 µl de agua saturada de n-butanol o tampón.

Utilice la misma cantidad de plantilla en cada emparedado de gel para asegurar que todos los geles polimerizar a las mismas alturas. Vierta el líquido suavemente, teniendo cuidado de no perturbar la superficie del gel.

Después de la polimerización es completa, eliminar el n-butanol y sustituirla con tampón o añadir gel de apilamiento. El agua saturada de n-butanol se nublan las piezas de acrílico si se utiliza en grandes canti-dades o durante largos períodos de tiempo.

4

Permitir que los geles para polimerizar al menos una hora. Para eliminar los geles polimerizados, consulte “Extracción de geles polimerizados” en la página 16. Para agregar un gel de apilamiento, consulte la “Verter geles de apilamiento” en la página 15.

• p10

Verter los geles de gradiente estándarVéase la Fig. 1 en la página 4 para un diagrama de los componentes lanzador. Consulte el apartado “Configuración máquina colada” en la página 5 para los volúmenes de solución recomendada.

Configuración de la máquina de gradiente

1

Preparar una solución de glicerol desplazamiento 50% que contenía una pequeña cantidad de azul de bromofenol: aproximadamente 75 ml para el SE615 y 35 ml para el SE675.

2

Calcular la cantidad de solución de gradiente tendrá haciendo referencia a la fórmula en la página 9.

Para geles unidimensionales: Utilice un gel de separa-ción de 12 cm con un gel de 4 cm de apilamiento.

Para geles de dos dimensiones utilizando tiras IPG: Calcular la cantidad de solución necesaria para llenar los bocadillos a aproximadamente 0.5-1.0 cm por debajo de la parte superior de las placas.

3

Configure la bomba peristáltica. Usando un cilindro graduado y agua, ajustar la velocidad de flujo de modo que el volumen de la solución de separación de gradiente más el volumen de la solución de glicerol será completamente entregado en 10-15 minutos.

4

Elija un fabricante de gradiente que contiene no más de cuatro veces el volumen total de solución de gradiente que se vierte. Compruebe que el fabricante de gradiente es limpia y que la toma y el puerto de mezcla son libres de acrilamida polimerizada.

• p11

5

Montar los componentes del gradiente. (Ver Fig. 5).

A. Cierre todas las válvulas fabricante de la pendiente y colocar una barra de agitación en la cámara de mezcla, el uno con el puerto de conexión del tubo.

B. Conecte un extremo de un trozo de tubo a la salida de la fábrica de gradiente.

C. Ejecutar el otro extremo de la tubería a través de la bomba peristáltica y adjuntarlo a un conector del tubo.

D. Utilizar una segunda pieza de tubo para conectar el conector del tubo al orificio de entrada de color rojo en la parte inferior de la máquina de colada.

• p12

Fig 5. Gradiente de realizar las conexiones del sistema.

Multiple gel caster

Bomba peristáltica Agitador magnético

Gradiente fabricante

Cámara de mezclaCámara de mezcla

Verter geles de gradiente de separación

1

Preparar y desgasificar las dos soluciones de monómero para el fabricante de gradiente.

Añadir glicerol o sacarosa a la solución de concen-tración de acrilamida superior para estabilizar el gradiente como la solución se bombea pulg disminuir la concentración de iniciador de polimerización de modo que se produce de arriba a abajo. Esto mini-miza la mezcla convectiva debido al calor generado por la polimerización.

2

Cerca tanto del puerto de mezcla y orificio de salida, en su caso, en el fabricante de gradiente. Cierre la tubería de la toma cuando se utiliza el SG500.

3

Añadir iniciador y catalizador, e inmediatamente se vierte la solución de acrilamida luz (baja concen-tración) en la cámara-la cámara de mezcla con el puerto de salida. Abrir la válvula de mezcla ligera-mente para permitir que el canal de conexión para llenar y forzar la salida de burbujas de aire.

Cerrar la válvula de nuevo y se vierte la solución de acrilamida pesado (alta concentración) en la cámara de depósito.

4

Inicie el agitador magnético y soltado o abrir la válvula de salida. Arranque la bomba y abra la válvula mezcladora.

¡Advertencia! La acrilamida es una neurotoxina. Utilice guantes al manipular la acrilamida o poliacrilamida. Use una máscara contra el polvo la hora de sopesar la acrilamida o la preparación de las poblaciones de acrilamida.

• p13

5

Cuando casi toda la solución de acrilamida se drena desde el fabricante de gradiente, parar la bomba y cierre la válvula mezcladora. Incline la máquina de gradiente hacia el lado de salida y eliminar los últimos mililitros de la mezcla. No permita que las burbujas de aire para entrar en el tubo.

6

Añadir la solución de glicerol al desplazamiento de la cámara de mezcla y encienda la bomba. Asegúrese de que no se introducen burbujas. De la bomba hasta la parte inferior de la máquina de colada se llena con una solución de desplazamiento justo por debajo de las placas de vidrio, y luego apague la bomba. Fijar fuera de la tubería a la puerta de entrada de color rojo de la rueda.

7

Superponer cada emparedado separado con 300 µl de agua saturada de n-butanol o tampón.

Utilice la misma cantidad de superposición en cada gel para asegurar que todos los geles polimerizar a la misma altura. Con cuidado y suavemente la pipeta del líquido, cuidando de no alterar la superficie del gel.

Después de la polimerización, eliminar el n-butanol. Vuelva a colocar con tampón o añadir un gel de apilamiento.

8

Permitir que los geles para polimerizar al menos una hora.

Para eliminar los geles polimerizados, consulte “Extracción de geles polimerizados” en la página 16. Para agregar un gel de apilamiento, consulte la “narración de geles de apilamiento en la página 15.

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Nota: las nubes Isobutanol el acrílico, por lo que es difícil ver los geles.

Verter geles de apilamientoPuede añadir geles de apilamiento a todo el conjunto de los geles polimerizados (homogé-nea o gradiente), mientras que los bocadillos se encuentran todavía en la caja de colada, o usted puede añadir gel de apilamiento a los geles indi-viduales inmediatamente antes del uso.

Para una resolución óptima, agregar el gel de apilamiento en el último minuto para evitar la difusión de los amortiguadores entre las dos capas de gel.

1

Si usted está vertiendo geles de apilamiento más tarde, vaya al paso 1 en “Extracción de los geles polimerizados” en la página 16.

Si está vertiendo geles de apilamiento ahora, calcu-lar el volumen de solución de gel de apilamiento monómero necesario haciendo referencia a la siguiente fórmula:

Donde:• Altura es la distancia entre el gel de separación y la

parte superior de las placas.

• Ancho es la distancia entre los espaciadores.

2

Enjuague en agua saturada de n-butanol superposición con agua destilada o tampón Tris y se invierte el lanza-dor para drenarlo. Repita esto 2-3 veces.

3

Desgasificar el gel de apilamiento solución de monómero y añadir catalizador y el iniciador.

• p15

Monomer vol. = altura × ancho × espesor × número total × 1,1 (ml) (cm) (cm) (cm) geles apilamiento

4

Sustituir el lanzador en posición vertical. Asegúrese de que la superficie del gel de separación está libre de líquido.

Utilizar una pipeta para llenar cada emparedado individualmente con una solución de monómero de apilamiento-gel.

5

Mantenga un peine, que se adjunta a un nuevo peine, en un ángulo de 45° y se centra en el sándwich. Insertar un extremo en el gel de manera que el diente final está casi completamente insertado. Lentamente baje los dientes del peine restantes en una por una, al girar el peine gradualmente hacia abajo hasta que esté en una posición horizontal.

Refiérase a la Figura 1 en la página 4 de la posición final del peine. Repita esto para cada sándwich.

6

Permitir que los geles de apilamiento para polimerizar al menos una hora. Para eliminar los geles polimeriza-dos, consulte “Extracción de geles polimerizados” por debajo de.

Extracción de los geles polimerizados

1

Después de que los geles se han polimerizado, poner la máquina de colada en una posición horizontal. Si se vierte geles de apilamiento, dejar los panales en su lugar. Retire la placa frontal.

2

Sugerencia al lanzador vierta la solución de glicerol.

3

Deslice la pila de bocadillos, bloques de acrílico, poli-carbonato y las hojas de fuera de la rueda. Retire los bloques de acrílico y las hojas de policarbonato de la parte superior de la pila.

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Nota: El oxígeno inhibe la polimerización de gel. No atrapar burbujas de aire por debajo de los dientes del peine.

Nota: Utilizar geles con geles de apilamiento de inmediato. No guarde.

4

Retire con cuidado de vidrio individuales y bocadillos de gel de la pila. Si es necesario, insertar una cuña entre los sándwiches Wonder adyacentes para separarlas.

Trabaje despacio y con precaución cuando se indis-cretas además bocadillos adyacentes después de la polimerización.

5

Enjuague el lanzador y láminas de policarbonato, como se describe en “Cuidado y mantenimiento” en la página 20.

Para almacenar geles para uso futuroEnjuague los bocadillos individuales con agua destilada. Llenar casetes con tampón de gel de almacenamiento. Envolver bocadillos de gel que no esté utilizando en este momento en una envol-tura de plástico y guárdelos en el refrigerador.

Para utilizar geles de inmediato

1

Suavemente eliminar los panales tirando de ellos hacia arriba y fuera del emparedado de gel.

2

Llenar los pocillos con el tampón de electroforesis SDS.

3

Cargue las muestras y el montaje completo. Consulte los manuales de usuario que vienen con SE600 y SE400 sistemas de la serie de electroforesis.

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Nota: El tampón SDS hace que las placas de vidrio resbaladizo.

Nota: No utilizar espátulas metálicas para separar a los emparedados. Espátulas estrechas de metal a menudo astillar los bordes de las placas de vidrio, haciendo que la placa ineficaz para el sellado en el tanque de electroforesis.

Nota: Separar los bocadillos entre sí antes de colocar los geles en la nevera.

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Solución de problemassíntoma  posible causa  acción recomendada

La suciedad, la grasa o las huellas dactilares en los platos.

Diferentes cantidades de superposición se utilizaron en los geles de separación antes de la polimerización.

Fugas de la junta.

Empaque dañado.

Pila demasiado alta.

Las burbujas atrapadas bajo los bocadillos de gel.

Polimerizado de gel en la ranura.

Tiempo insuficiente para los niveles de gel que se estabilice.

Las burbujas de aire bajo los dientes del peine.

Polimerización insufi-ciente.

Peine quita demasiado abrupta.

Polimerización de los Pobres.

No hay papel encerado entre placas de vidrio.

Acomodo irregular.

1. Los geles se adhie-ren a las placas de vidrio al abrir sándwich.

2. Los geles son emitidos de forma simultánea diferentes tamaños.

3. Fugas de Caster.

4. Gel alturas desiguales.

5. Ejemplos de pozos dañados o fuga.

6. Gel difíciles de separar emparedados.

7. Geles de gradiente desiguales.

Remoje las placas en un detergente de laboratorio fuerte, enjuague bien con agua destilada. Manipu-lar con guantes solamente.

Utilice la misma cantidad de superposición en todos los geles de separación. Añadir la super-posición tan rápidamente como sea posible.

Aplique una capa delgada de Gel Seal a la junta cada vez que se utiliza la unidad.

Compruebe la junta de espuma para los apodos o desgaste y reemplazar si es necesario.

Quitar placas de relleno de gel o sandwiches hasta la parte superior de pila es justo por debajo del nivel de la pared lanzador.

Verter la solución de monómero en un sandwich y permitir que el surco en el enchufe para distribuir uniformemente la solución.

Asegúrese de que la ranura en el conector triangu-lar es limpio y libre de material.

Espere un minuto antes de la superposición de los geles. Añadir la misma cantidad de superposición de cada emparedado.

Eliminar las burbujas de aire antes de insertar los peines. Deslice peine en solución en un ángulo. Si el peine se debe quitar, añadir más solución de monómero antes de volver a colocar el peine.

Permitir que el gel se establece para un mínimo de 1 hora.

Retire lentamente el peine con una ligera inclinación para evitar daños en el gel.

Degas solución de gel de apilamiento. Aumentar catalizadores hasta 0,1% v/v TEMED, 0,1% v/v de APS.

Coloque papel encerado entre sándwiches en la pila.

Añadir sacarosa o glicerol a la solución de monómero pesada. Añadir una pequeña cantidad de azul de bromofenol a la solución pesada para rastrear la formación del gradiente.

Disminuir la velocidad de bombeo.

• p19

síntoma  posible causa  acción recomendada

APS insuficiente o TEMED.

Pila de APS está mojado.

O2 en solución de gel.

Soluciones a baja temperatura.

TEMED es viejo.

No hay suficiente reticulante.

Demasiado bis mucho.

Demasiado bis mucho.

Demasiado catalizador: gel polimerizado en <10 min.

No catalizador sufici-ente: gel polimerizado en >50 min.

Soluciones que no estén mezclados.

La muestra no contiene mismo tampón como gel de apilamiento.

Demasiado TEMED o APS.

Tampón SDS o de la muestra es viejo.

Interfaz entre los pobres gel de separación y el gel de apilamiento.

Polimerización incom-pleta.

Geles de acrilamida o de edad avanzada.

El gas en gel.

Acrilamida o bis contienen ácido acrílico.

El agua es impura.

8. N polimerización de gel de SDS (o polimer-ización incompleta.)

9. Gel demasiado blandos.

10. Gel es frágil.

11. Gel es de color blanco.

12. Gel contiene remolinos, artefactos de polimerización.

13. Las bandas son difusas o amplia.

14. Movilidades de proteínas no son constantes.

15. De fondo pesado durante la tinción de plata.

Aumentar tanto la APS y TEMED en un 30-50%. Solución de APS es viejo. Maquillaje APS nuevo cada día.

APS es higroscópico. Abra una nueva botella.

Degas al menos 10 minutos.

Asegúrese de que todas las soluciones están a temperatura ambiente (20-30 °C).

Utilice el nuevo TEMED.

Reticulador debe ser 2,6% de C para el estándar de geles de SDS donde

%C = g bis × 100 (g monomer + g bis)

Vea el # 9.

Ver las concentraciones de las soluciones. Vea el # 9.

Reducir tanto APS y TEMED un 25%.

Aumentar tanto APS y TEMED un 50%. También vea el # 8.

Mezcle bien después de añadir TEMED.

Utilizar el mismo tampón para la muestra como para el gel de apilamiento.

Reducir las concentraciones de un 25%.

Utilizar soluciones frescas.

Eliminar todo el líquido desde la superficie del gel de separación antes de añadir las soluciones de gel de apilamiento.

Vea el # 8.

No almacene la acrilamida líquido más de 3 meses. Utilice geles dentro de 1-2 semanas de casting. Utilice geles con apiladores de inmediato.

Degas gel de soluciones al menos 10 minutos.

Utilizar reactivos especificados como pureza elec-troforesis.

Utilice sólo agua doblemente destilada.

Cuidado y mantenimiento• No esterilizar en autoclave o calentar cualquier

parte por encima de 45 °C.

• No exponga la máquina de colada o de sus partes a los disolventes orgánicos.

LimpiezaEnjuague la rueda, placa frontal, tapones de sili-cona y láminas de policarbonato con detergente diluido y enjuague con agua destilada. Deje que la unidad se seque completamente.

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Apéndice A: Los números de identificación de gelPara la identificación positiva de los geles, etiqu-etar cada losa mediante la incorporación de un pequeño sello impreso en papel de filtro fino en la parte inferior del gel. Use una máquina de escribir de carbono de la cinta, una fotocopia-dora o impresora láser para hacer estas etiqu-etas, ya que muchos líquidos a base de tintas se someten a electroforesis de papel durante un plazo de electroforesis SDS.

Una variedad de esquemas de numeración son posibles. En nuestra experiencia el más fácil utiliza tres partes como sigue:

• Una letra mayúscula para identificar el investi-gador o el gel de una serie extendida.

• Un niño de dos o tres dígitos, el número de serie para identificar el lote de gel de losa.

• Una letra minúscula para identificar a un gel en el lote. Desde un máximo de 14 geles se pueden hacer en un proceso por lotes, utiliza las letras A-N.

Los números resultantes, en el formato A63a, A63B…, etc, ofrecen un sistema útil para el seguimiento y la indexación cruzada experimen-tos y la producción de gel.

Apéndice B: ReferenciasLaemmli, U.K. 1979. Nature (London) 227:680–685.

SDS-PAGE and IEF Handbook.

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Información para pedidosproducto  cantidad  código

SE615 Gel Kit de múltiple Caster, 10 geles 1 SE615 Incluye, 20 placas de vidrio, ahorrador de espacio de la placa, 5 hojas de relleno, 100 hojas de papel de cera y el Spacer-Mate de la plantilla de alineación. (Orden de los peines y separadores por separado.)

SE675 Gel múltiple Kit ruedas, 4 geles 1 SE675 Incluye, 8 placas de vidrio, 3 de ahorro de espacio-platos, 5 hojas de relleno, 100 hojas de papel de cera y el Spacer-Mate de la plantilla de alineación y los tapones de llenado. (Orden de los peines y separadores por separado.)

Junta de espuma cable, 61 cm × 4,5 mm 1 SE208

Rojo puerto de entrada 4 XP010

Pinzas de color rojo de primavera 4 SE253

Las placas de vidrio, 18 × 16 cm 2 SE6102

Anotó placas de vidrio divisor, 18 × 16 cm 1 SE6102D

Bloque de acrílico de 11 mm de espesor, 18 × 16 cm 1 SE612

Policarbonato relleno hojas 5 SE613

El papel de cera, hojas precortadas, 18 × 16 cm 100 SE614

Spacer-Mate plantilla para alinear espaciadores 3 SE6119SM

Tornillos de nailon 12 SE6003U-2

Tapón de llenado de silicona, SE615 1 SE618

De relleno de silicona conector serie, SE675. Incluye un pequeño tapón grande y 1. 1 SE678

Gel Seal, ¼ oz. tubo 1 SE6070

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SG500 degradado Hacedor, 500 ml de volumen total 1 SG500

Wonder Wedge 1 SE1514

Espaciadores  longitud (cm)  espesor (mm)  ancho (cm)

16 0,75 2 2 SE6119-2-.75

16 1,0 2 2 SE6119-2-1.0

16 1,5 2 2 SE6119-2-1.5

16 1,0 1 2 SE6118-2-1.0

16 1,5 1 2 SE6118-2-1.5

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Peines número  espesor   ancho   de pozos  (mm)  (mm)  cantidad  código

10 0,75 8,3 1 SE511-10-.75

10 1,00 8,3 1 SE511-10-1.0

10 1,50 8,3 1 SE511-10-1.5

12 0,75 7,6 1 SE511-12-.75

12 1,00 7,6 1 SE511-12-1.0

12 1,50 7,6 1 SE511-12-1.5

15 0,75 5,7 1 SE511-15-.75

15 1,00 5,7 1 SE511-15-1.0

15 1,50 5,7 1 SE511-15-1.5

20 0,75 4,1 1 SE511-20-.75

20 1,00 4,1 1 SE511-20-1.0

20 1,50 4,1 1 SE511-20-1.5

28a 0,75 2,7 1 SE511-28-.75

28a 1,00 2,7 1 SE511-28-1.0

28a 1,50 2,7 1 SE511-28-1.5aPeine de profundidad 15 mm, todos los demás de 25 mm.

Peines de preparaciónEstos peines son de 25 mm de profundidad, ajustable a 10 o 15 mm.

número  espesor  ancho (mm)  pozos prep/ref  (mm)  prep/ref   cantidad  código 

1/1 0,75 121/6 1 SE511-R-.75

1/1 1,00 121/6 1 SE511-R-1.0

1/1 1,50 121/6 1 SE511-R-1.5

1/2 0,75 113/6 1 SE511-DR-.75

1/2 1,00 113/6 1 SE511-DR-1.0

1/2 1,50 113/6 1 SE511-DR-1.5

Nuevo peine ajustable 1 SE511-BKA

Se requiere para convertir cualquier peine profunda de 25 mm a 10 o 15 mm de profundidad.

Hoefer, Inc. 84 October Hill Road Holliston, MA 01746

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