SciELO Books / SciELO Livros / SciELO Libros JORGE, TCA., and CASTRO, SL., orgs. Doença de chagas: manual para experimentação animal [online]. Rio de Janeiro: Editora FIOCRUZ, 2000. 368 p. Antropologia e Saúde collection. ISBN 85-85676-75-2. Available from SciELO Books <http://books.scielo.org>.

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Front Matter / Elementos Pré-textuais / Páginas Iniciales

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FUNDAÇÃO OSWALDO CRUZPresidente

Eloi de Souza Garcia

Vice-Presidente de Ambiente, Comunicação e InformaçãoMaria Cecília de Souza Minayo

EDITORA FIOCRUZCoordenadora

Maria Cecília de Souza Minayo

Conselho EditorialCarlos E. A. Coimbra Jr.Carolina M. BoriCharles PessanhaHooman MomenJaime L. BenchimolJosé da Rocha CarvalheiroLuiz Fernando FerreiraLuiz David CastielMiriam StruchinerPaulo AmarantePaulo GadelhaPaulo Marchiori BussVanize MacêdoZigman Brener

Coordenador ExecutivoJoão Carlos Canossa P. Mendes

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Tania C. Araújo-Jorge & Solange L. de Castro

Edição comemorat iva aos 90 anos d a descobertad a doença de Ch ag as (1909-1999)

organizadoras

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Copyright © 2000 dos autoresTodos os direitos desta edição reservados àFUNDAÇÃO OSWALDO CRUZ / EDITORA

ISBN: 85-85676-75-2

Capa, projeto gráfico e tratamento de imagens Angélica Mello

Editoração eletrônica Beatriz de Moraes Vieira

Preparação de originais e copidesque Solange L. de Castro

Revisão Marly Willcox

Revisão final Marcionílio Cavalcanti de Paiva

Catalogação-na-fonteCentro de Informação Científica e TecnológicaBiblioteca Lincoln de Freitas Filho

2000EDITORA FIOCRUZRua Leopoldo Bulhões, 1480, térreo – Manguinhos21041-210 – Rio de Janeiro – RJTels.: (21) 598-2701 e 598-2702Telfax: (21) 598-2509

Jorge, Tania C. de Araújo (org.)Doença de chagas: manual para experimentação animal. / Organizado por Tania C. de Ara-

újo-Jorge e Solange Lisboa de Castro. – Rio de Janeiro : Editora Fiocruz / Instituto OswaldoCruz, 2000.

368p., il., tab.

1. Doença de Chagas-induzido quimicamente 2. Animais de Laboratório 3. Manuais de La-boratório [tipo de publicação] I. Castro, Solange Lisboa de (org.)

CDD - 20.ed. – 616.9363

J82d

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Para

Carlos Chagas, o pai, o desbravador de um caminhoque hoje muitos pesquisadores brasileiros estão seguindo,

mirando-se no seu exemplo único e admirávelde cientista, médico e formador

de investigadores para lidar comproblemas que atingem a gente brasileira.

Carlos Chagas, o filho, que nos conduziu pelos caminhos da ciência,da filosofia e da ética, através de suas aulas, conselhos

e apoio para atividades de divulgação e popularização científicas,além das muitas “caronas” na volta para casa após o dia-a-dia

da rotina com que nos formamos cientistas noInstituto de Biofísica que leva seu nome.

O prazer do convívio com este grande mestre só não suplanta o privilégio de termos podido estar e aprender com ele.

Maria P. Deane, a cientista brilhante, a mulher de fibra,ousada na vida e na ciência,

a voz dos pesquisadores em tantas lutas, questionadora de paradigmas,

e sobretudo a grande mestra na experimentação animal,que nos ensinou a ter um profundo respeito pelos animais de laboratório.

Sentimos sua ausência.

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AgrAgrAgrAgrAgraaaaa dec imen tosdec imen tosdec imen tosdec imen tosdec imen tos

Este trabalho foi realizado com o estímulo de muitos colegas, a quem

agradecemos. Gostaríamos de apresentar agradecimentos especiais

• aos nossos alunos, que nos vêm desafiando para uma postura mais ativa e criativa no ensino da parasitologia,biologia celular e imunologia, e que testaram, na prática, cada um dos protocolos apresentados neste manual,por vezes assinando a co-autoria de alguns capítulos;

• aos nossos primeiros orientadores, professores Wanderley de Souza, Maria de Nazareth Meirelles e Mécia M.Oliveira, que além de nos apresentarem ao Trypanosoma cruzi e aos camundongos infectados, nos brindamcom sua amizade firme e constante;

• ao professor José Rodrigues Coura, incansável mestre e batalhador, que está sempre pronto a nos ajudar, sejacom aulas, textos, conselhos, sugestões e, sobretudo, pelo empenho para a edição final desta publicação;

• ao professor Zigman Brener, que vem acompanhando e influenciando, continuamente, nosso trabalho desdeos tempos de estudantes, até nossa atuação profissional, sempre com sugestões oportunas e com inestimávelajuda cada vez que solicitamos. Não é sem razão que ele vem participando, sistematicamente, das diversasbancas de teses que doutoraram os pesquisadores do nosso departamento;

• aos colegas do Departamento de Ultra-estrutura e Biologia Celular do IOC que nos deram “coberturalogística”, dividindo muitas das atribuições que deixamos acumular por conta do tempo necessário para aconclusão deste trabalho;

• aos nossos colaboradores para a redação dos diferentes capítulos, não só pela qualidade das contribuições,como pela paciência até a publicação final;

• aos nossos filhos Julia, Pedro, Luiza e Bruno, e aos nossos companheiros, Luiz e Alexandre, além da Lúcia, quepacientemente nos aguardaram chegar tarde, dias seguidos, para que concluíssemos o preparo destes originais.

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A u t o rA u t o rA u t o rA u t o rA u t o reeeee sssss

Ana Maria Jansen - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - jansen@gene.dbbm.fiocruz.brAna Paula S. Pinho - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - pinhoap@gene.dbbm.fiocruz.brAndrea Henriques Pons - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - andreah@gene.dbbm.fiocruz.brAndreia Pereira de Souza - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - souzaap@gene.dbbm.fiocruz.brAngela C. V. Junqueira - Depto de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz - junqueir@gene.dbbm.fiocruz.brBianca Perdigão Olivieri - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - olivieri@gene.dbbm.fiocruz.brCelia V. P. Cardoso - Centro de Criação de Animais de Laboratório/Fiocruz - cardoso@cecal.fiocruz.brClaude Pirmez - Depto de Bioquímica e Biologia Celular, IOC/Fiocruz -/Fiocruz - pirmez@gene.dbbm.fiocruz.brClaudia M. L. M. Coutinho - Instituto de Ciências Biológicas/UFF - claudia@gene.dbbm.fiocruz.brCristiane V. Lisboa - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - gltp@gene.dbbm.fiocruz.brDavid A. Campbell - School of Medicine/Universidade da Califórnia/LA/EUA - dcp@pop.ucla.eduEdmundo Chapadeiro - Disciplina de Parasitologia/Faculdade de Medicina do Triângulo MineiroElen Mello de Souza - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - elen@gene.dbbm.fiocruz.br

Eliane Lages-Silva - Disciplina de Parasitologia/Faculdade de Medicina do Triângulo MineiroElisa Cupolillo - Depto de Imunologia, IOC/Fiocruz - ecupoli@ioc.fiocruz.brGeorge A. dos Reis - Lab. de Biologia Imunitária, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho/UFRJ - gdosreis@ibccf.ufrj.brGislâine A. Martins - Depto de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP

- gmartins@fmrp.usp.brHelene Santos Barbosa - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - helene@ioc.fiocruz.brJacenir S. Mallet - Depto de Entomologia, IOC/Fiocruz - jacenir@gene.dbbm.fiocruz.brJoão Santana Silva - Depto de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP

- jsdsilva@fmrp.usp.brJosé Rodrigues Coura - Depto de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz - jcoura@ioc.fiocruz.brJulio C. S. Aliberti - Depto de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP

- jaliberti@atlas.niaid.nih.govKatia S. Calabrese - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - calabres@gene.dbbm.fiocruz.brLuis Eduardo Ramírez - Disciplina de Parasitologia/Faculdade de Medicina do Triângulo Mineiro -

parasito.fmtm@mednet.com.brMarcelo Einicker-Lamas - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - einicker@ibccf.biof.ufrj.brMarcos Antonio P. Marques - Centro de Criação de Animais de Laboratório/Fiocruz - marques@cecal.fiocruz.brMaria da Glória Boneceni-Almeida - Depto de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, CPHEC/Fiocruz -

galmeida@gene.dbbm.fiocruz.brMaria de Nazareth Meirelles - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - meirelle@gene.dbbm.fiocruz.brMaria Nazaré Soeiro - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - nazare@gene.dbbm.fiocruz.brMaria Teresa Rivera - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - jean.vanderpas@skynet.be

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Mecia M. Oliveira - Lab. de Biomembranas, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho/UFRJ - mecia@chagas.biofis.ufrj.brMirian C. Pereira - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - mirian@gene.dbbm.fiocruz.brOctavio Fernandes - Depto de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz - octaviof@gene.dbbm.fiocruz.brPaulo Renato Antas - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - pzuquim@gene.dbbm.fiocruz.brPedro H. Cabello - Depto de Genética, IOC/Fiocruz - cabello@gene.dbbm.fiocruz.brRegina Helena Mangia - Depto de Medicina Tropical, IOC/FiocruzRenato Marchewsky - Lab. de Neurovirulência, Biomanguinhos/FiocruzRicardo de Mattos Santa-Rita - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz -santarit@gene.dbbm.fiocruz.brSebastião Enes R. Couto - Centro de Criação de Animais de Laboratório/Fiocruz - scouto@cecal.fiocruz.brSilvana Marques Araújo - Depto Análises Clínicas/Universidade Estadual de Maringá - marqueslima@wnet.com.brSolange Lisboa de Castro - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - solange@ioc.fiocruz.brSonia G. Andrade - Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz/Fiocruz - sgandrade@cpggm.fiocruz.brSuzana Corte-Real Faria - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - scrf@ioc.fiocruz.brSylvio Celso G. Costa - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - sycosta@gene.dbbm.fiocruz.brTania C. Araújo-Jorge - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - taniaaj@ioc.fiocruz.brTania Zaverucha do Vale - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - taniazo@gene.dbbm.fiocruz.brValdo D. Silva - Disciplina de Fisiologia/Faculdade de Medicina do Triângulo MineiroVinicius Cotta-de-Almeida - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - vinicius@gene.dbbm.fiocruz.brWilson Savino - Depto de Imunologia, IOC/Fiocruz - savino@gene.dbbm.fiocruz.br

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SSSSS u m á r i ou m á r i ou m á r i ou m á r i ou m á r i o

Apresentação ...................................................................................................................................................................................... 13

Parte I – Conceitos atuais em doença de Chagas humana e experimental1. Desafios da pesquisa científica após 90 anos da descoberta da doença de Chagas

1.1 Questões da doença humana para trabalho em modelos animaisTania C. Araújo-Jorge & Solange L. de Castro ...................................................................................................................... 17

1.2 A doença de Chagas humana e seus modelos de estudoJosé Rodrigues Coura ............................................................................................................................................................... 19

2. Vetores da doença de Chagas e sua relação com o hospedeiro vertebrado e o parasitaJacenir R. dos Santos Mallet .................................................................................................................................................... 25

3. A ecologia e a complexidade dos ciclos de transmissão do Trypanosoma cruzi na naturezaAna Maria Jansen, Cristiane V. Lisboa, Ana Paula S. Pinho, Renato Sergio Marchewsky,Regina H. R. Mangia, Elisa Cupolillo & Octavio Fernandes .................................................................................................. 33

4. Resposta do hospedeiro à infecção4.1 Respostas imune inata, inflamatória e de fase aguda na doença de Chagas

Tania C. Araújo-Jorge ............................................................................................................................................................ 394.2 A resposta imune celular na infecção experimental por Trypanosoma cruzi

George A. Dos Reis ................................................................................................................................................................ 484.3 A resposta imune humoral e as funções do linfócitos B na infecção por Trypanosoma cruzi

Maria Teresa Rivera ................................................................................................................................................................ 514.4 Participação de citocinas no determinismo de resistência ou susceptibilidade à infecção

experimental por Trypanosoma cruziGislâine A. Martins, Julio C. S. Aliberti & João S. Silva ...................................................................................................... 55

4.5 O timo como órgão-alvo na infecção pelo Trypanosoma cruziVinícius Cotta-de-Almeida & Wilson Savino ......................................................................................................................... 60

4.6 Imunomodulação da resposta T-dependente na doença de Chagas experimentalSylvio Celso G. da Costa, Katia S. Calabrese & Tania Zaverucha do Vale .............................................................................. 65

5. Hormônios na doença de Chagas5.1 Sistema adrenérgico

Mecia M. Oliveira ................................................................................................................................................................... 875.2 Hormônios sexuais

Solange L. de Castro & Elen Mello de Souza ........................................................................................................................ 905.3 Prolactina

Maria Teresa Rivera ................................................................................................................................................................ 936. Relação materno-fetal na infecção chagásica experimental

Maria Teresa Rivera & Silvana Marques de Araújo .............................................................................................................. 1037. Quimioterapia experimental

Solange L. de Castro, Ricardo de Mattos Santa-Rita & Marcelo Einicker-Lamas ................................................................. 111

Parte II – Protocolos e métodos de trabalho em doença de Chagas experimental8. Normas de segurança para o trabalho com Trypanosoma cruzi

Tania C. Araújo-Jorge & Claude Pirmez .............................................................................................................................. 125

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9. Modelos animais para o estudo in vivo da doença de Chagas9.1 Camundongo

Tania C. Araújo-Jorge .......................................................................................................................................................... 1349.2 Rato

Luis Eduardo Ramírez, Valdo D. Silva, Eliane Lages-Silva & Edmundo Chapadeiro ........................................................... 1409.3 Calomys callosus

Sonia G. Andrade ................................................................................................................................................................. 1439.4 Hamster

Luis Eduardo Ramírez, Eliane Lages-Silva & Edmundo Chapadeiro .................................................................................... 1459.5 Coelho

Luis Eduardo Ramírez, Eliane Lages-Silva & Edmundo Chapadeiro ................................................................................... 1499.6 Cão

Sonia G. Andrade ................................................................................................................................................................. 1579.7 Macaco

Maria da Glória Boneceni-Almeida ........................................................................................................................................ 16010. Planejamento de experimentos e escolha dos modelos: hospedeiro e parasita

10.1 Critério de escolha para o modelo de hospedeiro animal e da cepa do parasitaSolange L. de Castro & Tania C. Araújo-Jorge .................................................................................................................... 175

10.2 Trypanosoma cruzi: cepas de eleiçãoOctavio Fernandes & David A. Campbell .............................................................................................................................. 178

10.3 Planejamento de um experimento com infecção in vivo pelo Trypanosoma cruziTania C. Araújo-Jorge .......................................................................................................................................................... 182

10.4 Manutenção e obtenção dos diferentes estágios evolutivos em laboratórioHelene Santos Barbosa .......................................................................................................................................................... 184

11. Cuidados especiais com animais no biotério de experimentaçãoTania C. Araújo-Jorge, Maria Teresa Rivera, Celia V. P. Cardoso & Sebastião E. R. Couto ................................................ 197

12. Controle da qualidade dos animais antes da infecção experimentalCelia V. P. Cardoso, Marcos Antonio P. Marques, Tania C. Araújo-Jorge, Solange L. deCastro & Maria Teresa Rivera .............................................................................................................................................. 203

13. Sangria de animais e preparo de inóculos para infecção experimentalTania C. Araújo-Jorge, Maria Teresa Rivera, Solange L. de Castro & Marcos AntonioP. Marques ............................................................................................................................................................................ 215

14. Avaliação de parâmetros parasitológicos e de mortalidadeSolange L. de Castro, Tania C. Araújo-Jorge, Maria Teresa Rivera & Angela C. V.Junqueira .............................................................................................................................................................................. 219

15. Quantificação de marcadores humorais de inflamação, de resposta imune e de lesão tissular nos animais infectados

Tania C. Araújo-Jorge, Paulo R. Z. Antas & Solange Lisboa de Castro ............................................................................... 23716. Preparo de células para avaliação de parâmetros inflamatórios e imunológicos

Tania C. Araújo-Jorge, Vinícius Cotta-de-Almeida, Bianca P. Olivieri & Andrea Henriques-Pons ....................................... 25117. Coleta e processamento de órgãos e tecidos para avaliação da infecção

Andréa Pereira de Souza, Suzana Côrte-Real Faria, Claudia M. L. M. Coutinho, MariaNazaré C. Soeiro & Claude Pirmez ..................................................................................................................................... 265

18. Obtenção de células de camundongo para estudos in vitro em cultivo primário18.1 Interação do Trypanosoma cruzi com as células hospedeiras: estudos in vitro

Maria de Nazareth L. Meirelles & Tania C. Araújo-Jorge ................................................................................................... 28918.2 Protocolos de cultura primária

Helene S. Barbosa, Mirian C. S. Pereira & Maria de Nazareth S. L. Meirelles .................................................................... 29719. Sistematização e análise de resultados: confecção de planilhas, tabelas, gráficos e análises estatísticas

Solange L. de Castro, Tania C. Araújo-Jorge & Pedro H. Cabello ........................................................................................ 31520. Anexos ....................................................................................................................................................................................... 331