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Examenes de laboratorio para Hepatitis B y C 2015
Dr. Eliecer Villagra Cornejo Sección Virus Hepáticos y Emergentes Subdepartamento Enfermedades Virales Laboratorio Biomédico Nacional de Referencia.
Virus Hepatitis B
Antígeno “e” (HBeAg)
Antígeno core (HBcAg) Antígenos de
superficie (HBsAg)
ADN Polimerasa
ADN
Generalidades
• La hepatitis B es una enfermedad causada por VHB.
• Alrededor de 400 millones de personas persisten con
una infección crónica, con riesgo de evolucionar a
falla hepática, cirrosis y carcinoma hepatocelular
• Se estima que al año, es responsable de un millón de
muertes
Prevalencia HBsAg en el Mundo
• Es una enfermedad de distribución universal que se presenta
en forma endémica en todo el mundo, en nuestro país la
endemia es baja
• La prevalencia de HBsAg (+), estimada para la población
adulta chilena de 17 a 45 años de edad es de 0.15% (*).
*Ministerio de Salud de Chile. Encuesta Nacional de Salud 2009.
Evolución de la infección
por VHB
Niños
• 98% Crónico
• 2% Aguda
Adultos
• 1-10% Crónico
• 90-99% Agudo
Métodos diagnósticos VHB
• Detección de Antígeno
• Dispositivos individuales
Test Rápido: Inmunocromatografía
• Detección Antígeno o Anticuerpo
• Pueden ser automatizados, semiautomatizados o manual.
Inmunoensayo: EIA y CLIA
• Detección de partículas del ADN viral, independientemente de la fase de la enfermedad
Nucleic Acid Testing (NAT)
Algoritmo Confirmación
HBsAg
Antígeno de superficie (HBsAg)
Anti-Core Total (Anti-HBc total)
Neutralización HBsAg
Sero
logía
HBsAg
Tit
ulo
Semanas post a la exposición
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 100
Anti-HBc Total
HBeAg Anti-HBe
Síntomas
ADN
Perfil serológico de los
marcadores (Fase Aguda)
HBsAg
Tit
ulo
Semanas post a la exposición
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 Años
Anti-HBc Total
HBeAg Anti-HBe
ADN
Perfil serológico de los
marcadores (Fase Crónica)
Marcadores virales
* Puede encontrarse positivo en individuos crónicos.
§ vacunación reciente VHB (1-2 semanas), los test pueden dar un falso positivo.
Marcadores
Período
incubación
Inf.
aguda
Inf. pasada/
resuelta
Inf.
crónica
Vacunación
HBsAg ± + - + - §
Anti-HBs - - + - +
Anti-HBc Total - ± + + -
Anti-HBc IgM - + - ±* -
HBeAg ± + - ± -
Anti-HBe - - ± ± -
Resultado Confirmación
HBsAg
2012-2014
Algoritmo confirmación de HBsAg
Tamizaje HBsAg “A”
Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo
Informe:
Negativo HBsAg
Positivo Negativo
Técnica Confirmatoria “A”
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo
Informe: No
concluyente
Doble Tamizaje HBsAg
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo
Informe: Positivo
HBsAg
Algoritmo confirmación de HBsAg
Tamizaje HBsAg “A”
Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo
Informe:
Negativo HBsAg
Positivo Negativo
Técnica Confirmatoria “A”
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo
Informe: No
concluyente
Doble Tamizaje HBsAg
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo
Informe: Positivo
HBsAg
Algoritmo confirmación de HBsAg
Tamizaje HBsAg “A”
Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo
Informe:
Negativo HBsAg
Positivo Negativo
Técnica Confirmatoria “A”
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo
Informe: No
concluyente
Doble Tamizaje HBsAg
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo
Informe: Positivo
HBsAg Informe:
Negativo HBsAg
Algoritmo confirmación de HBsAg
Tamizaje HBsAg “A”
Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo
Informe:
Negativo HBsAg
Positivo Negativo
Técnica Confirmatoria “A”
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo
Informe: No
concluyente
Doble Tamizaje HBsAg
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo
Informe: Positivo
HBsAg Informe:
Negativo HBsAg
Algoritmo confirmación de HBsAg
Tamizaje HBsAg “A”
Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo
Informe:
Negativo HBsAg
Positivo Negativo
Técnica Confirmatoria “A”
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo
Informe: No
concluyente
Doble Tamizaje HBsAg
Anti-HB Core Total
Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo
Informe: Positivo
HBsAg Informe:
Negativo HBsAg
EVALUACIÓN TECNICAS
COMERCIALES DE HBsAg (1)
TECNICA
FABRICANTE
RECOMENDADO
BS LAB.
Murex HBsAg version 3 Murex X X
Bioelisa HBsAg Biokit S.A. X X
HBsAg Uni Form II Organon Teknika X X
IMX HBsAg Abbott X X
Merck Magia HBsAg Biotrol Diagnostic X X
ETI-MAK-4 (HBsAg) Dia Sorin s.r.l. X X
Inmulite (**) Diagnostic Products
Corporation
X X
Hepatitis B sAg/eAg (**) Glaxo SmithKline X
Hepatitis B (HBsAg) Elisa Wiener Lab. X X
EVALUACIÓN TECNICAS
COMERCIALES DE HBsAg (2)
AÑO
TECNICA
FABRICANTE
RECOMENDADO
BS LAB.
1999 Axsym System HBsAg Abbott X X
1999 HBsAg ELISA Test System3 Ortho X X
2000 Cobas core HBsAg II EIA Roche X X
2001 Vitros Kit HBsAg Ortho X X
2003 Bioelisa HBsAg colour Biokit S. A. X X
2003 VIDAS HBsAg Ultra Biomerieux X X
2004 Monolisa AgHBs Plus Bio-Rad X X
EVALUACIÓN TECNICAS
COMERCIALES DE HBsAg (3)
AÑO
TECNICA
FABRICANTE
RECOMENDADO
BS LAB.
2004 Monolisa HBsAg Ultra Bio Rad X X
2005 Architect HBsAg Abbott X X
2005 Hepanostika HBsAg Ultra Biomerieux X X
2007 Vikia HBsAg (**) Biomerieux X X
2008 Smart Comb HBsAg (**) Orgenics Ltd. X X
2008 Cobas-Elecsys HBsAg Roche X X
2008 Boioelisa HBsAg 3.0 Biokit S.A. X X
2012 Architect HBsAg II * Abbott X X
2013 Liaison XL Murex HBsAg Quant DiaSorin X X
2013 Access HBsAg Galénica X X
Virus Hepatitis C (VHC)
Familia Flaviviridae. Género Hepacivirus
55 -60 nm
Características VHC
Familia Flaviviridae. Género Hepacivirus
Descrito por Choo y Hougton en 1989
Su genoma:
Una molécula de RNA monohebra lineal.
Polaridad positiva.
9.600 bases de longitud
Virus de Hepatitis C
El VHC es el agente más importante causante de las hepatitis no A no B postransfusionales
Vía de transmisión parenteral (principalmente)
Primera causa de transplante hepático
Región estructural Región no estructural
Knipe, David M.; Howley, Peter M
2007 Lippincott Williams & Wilkins
Diagnóstico de Infección por VHC
• Detección de anticuerpos: ELISAs (3ª
generación)
• Detección de Ag/Ac: ELISAs (4ª generación)
• Técnicas suplementarias: RIBA o LIA
• Detección genómica: RT-PCR
ELISAS VHC 3 GENERACIÓN
ELISAS VHC 4 GENERACIÓN
INMUNOBLOT VHC (Técnica suplementaria) INNOLIA
RT-PCR VHC
•Amplificación de la parte más conservada del genoma (región 5’ UTR o 5’ no codificante)
Evolución de la infección por VHC
Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 2006 Dec;14(6):1238-43.
[Stability of hepatitis C virus RNA in various processing and storage conditions].
Liu CL1, Ren FR, Lü QS, Liu JH, Zhuang H.
Author information 1Department of Blood Transfusion, General Hospital of PLA, Beijing 100853, China.
Estabilidad de las muestras de Suero y Plasma para
realización de algoritmo de confirmación de VHC
Reducción del titulo de RNA en plasma guardado a 4ºC y 25ºC por 7 días
Tº 4ºC 25ºC
% RNA
70,9% 25,1%
- Luego de 4 ciclos de congelación - descongelación del plasma el
RNA viral se redujo a 61,9%
RESULTADOS INDETERMINADOS CON TECNICAS
SUPLEMENTARIAS DE INMUNOBLOT
- Los resultados indeterminados en poblaciones de baja prevalencia
tales como los donantes de sangre pueden estar relacionados con
reactividades cruzadas con antígenos virales o con anticuerpos en
caso de desordenes inmunológicos.
- Resultados falsos – negativos pueden obtenerse en pacientes
inmunodeprimidos, pacientes con VIH, pacientes receptores de
órganos solidos, hipoglobulinemia o agamaglobulinemia y
pacientes en hemodialisis.
EVALUACIÓN TECNICAS
COMERCIALES DE VHC(1)
TECNICA
FABRICANTE
RECOMENDADO
BS LAB.
ETI-AB-HCVK-3 (anti-VHC) Dia Sorin S. A. X X
Cobas Core Anti-VHC EIA II Roche X X
Monolisa Anti-HCV plus (V2) Bio-Rad X X
Test ELISA para Hepatitis C Bios Chile I.G.S.A X X
EVALUACIÓN TECNICAS
COMERCIALES DE VHC (2)
AÑO
TECNICA
FABRICANTE
RECOMENDADO
BS LAB.
1998 Serodia-HCV (**) Fujirebio inc. X X
1999 Enzymuntest HCV Boehriger X X
1999 HCV 3.0 Elisa Ortho Ortho X X
1999 IMX HCV 3.0 Abbott X X
1999 Axsym System HCV 3.0 Abbott X X
1999 Murex anti HCV 4.0 Abbott X X
2000 Cobas Core Anti-VHC EIA Roche X X
2001 Vitros Anti-VHC Ortho X X
EVALUACIÓN TECNICAS
COMERCIALES DE VHC (3)
AÑO
TECNICA
FABRICANTE
RECOMENDADO
BS LAB.
2006 Architect anti-VHC Abbott X X
2006 Murex HCV Ag/Ab combination Abbott X X
2006 Hepanostika HCV Ultra Biomerieux X X
2006 Advia Centaur Anti-HCV Bayer X X
2006 Monolisa HCV Ag/Ab ultra Bio-Rad X X
2008 Bioelisa HCV Biokit X X
2008 SmartComb HCV (**) Organics. Ltd. X X
2008 Cobas Elecsys Anti-HCV Roche X X
2009 Test ELISA HCV Acon X X
2012 Cobas Elecsys Anti –HCV II Roche X X
2012 Vidas Anti-VHC Biomerieux X X
2013 Liaison XL Murex HCV Ab DiaSorin X X
2014 Access VHC Galenica X X