Diagnostico Con Microscopio

8/3/2019 Diagnostico Con Microscopio

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DIAGNSTICO

?Clnico

?Directo=Etiolgico=Morfolgico

?Indirecto

Coprolgico

CoprocultivosHemtico

Genitourinarios

Biopsias

Inmunodiagnstico

Gentico

Precipitacin

Aglutinacin

Complemento

Anticuerpos marcados

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteHelmintos (huevos)


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Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (trofozoitos de amebas)

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (quistes)


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Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (flagelados)

Principales parsitos notificados al Sistema de Informacin Microbiolgica (SIM)

Total anual2002 2001 2000 1999

Anisakis 3 5 1 2Ascaris lumbricoides 64 37 37 10Blastocystis hominis 409 378 308 213Chilomastix mesnili 4 2 1 1Cryptosporidiumsp 121 88 54 97Cyclospora cayetanensis 30 0 1 0Echinococcus granulosus 5 10 38 29Entamoeba coli 20 37 32 31Entamoeba histolytica 33 15 3 6Entamoebasp 5 2 0 3Enterobius vermicularis 262 197 243 232Fasciola hepatica 0 2 1 2Giardia lamblia 730 561 508 523Leishmania donovani 2 3 4 1Leishmaniasp 24 26 16 7Plasmodium falciparum 120 114 100 84Plasmodium malariae 2 8 3 2Plasmodium ovale 8 7 10 3Plasmodiumsp 3 10 18 16Plasmodium vivax 23 38 29 22Schistosoma haematobium 2 1 0 1Schistosoma mansoni 0 2 1 0Taenia saginata 39 29 19 19Taeniasp 1 39 29 47Toxocaracanis 37 1 4 1Toxoplasma gondii 78 58 61 45Trichomonas vaginalis 198 168 164 165Trichuris trichiura 86 72 35 11Otros 146 122 92 88Nmero de laboratorios

declarantes 35 35 36 37


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Artefactos o pseudoparsitos-I

HuevoTrichuris

Polen

PolenPolen

MacrfagosEritrocitosCel. sanguneas

Cristal Charcot-Leyden

Pelo vegetalClula vegetal

Polen

Espiral vegetal

Levaduras

Huevos insectos

Cuerpos grasos

Parsito vegetal

Artefactos o pseudoparsitos-II


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TOMA DE MUESTRAS

?Recomendaciones al paciente

?Nmero de muestras

?Cantidad

?Recipientes y seguridad

?Examen y consistencia de las heces

CONSERVACIN DE LAS HECES-I

?Fijador de Schaudinn

HgCl2, etanol, glicerina y acticoQuistes y trofozoitosTincionesNo concentracin

?Alcohol polivinilico

Schaudinn+PVAQuistes y trofozoitos (ptimo)TincionesConcentracinLaborioso

?

SAF

Acetato sdico, actico y formolConserva la mayora de las formas parasitarias

ConcentracinNo HgPreparacin fcil y vida media muy alta


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?Formol

5% (quistes) y 10% (huevos helmintos)No valido para trofozoitos

ConcentracinNo tincinPreparacin sencilla

?MYFMertiolato, yodo y formolPermite concentracin?Preserva y tie

?Azida sdicaConserva casi todas las formasMuy txica

CONSERVACIN DE LAS HECES-II

EXAMEN MACROSCPICO

?Consistencia de las heces

?Presencia de mucus y sangre

?Formas parasitarias

macroscpicas

FormesSemiformesBlandas

Lquidas

LimpiezaMontaje


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EXAMEN MICROSCPICO DIRECTO

?Heces muco-sanguinolentas (rpido o fijar en PVA)

?Lquidas o semilquidas (pocas horas)

?Formes o semiformes (hasta 24h)

?Cmo realizarlo?Toma de muestraTincin opcionalObservacin

Heces

Solucinfisiolgica

Cubreobjetos

Mtodos de observacin

Frotis fecal para tincin permanente

Toma de muestra

Aplicacin de lamuestra

Extensin de lamuestra


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EXAMEN MICROSCPICO PREVIA CONCENTRACIN

?

Operaciones previas

?Mtodos

Homogeneizar

Restos voluminososRestos pesados

Fsicos SedimentacinFlotacin

Fsico-qumicos(difsicos)

Efectividad del diagnostico en funcin delmtodo seleccionado

Homogeneizacin Eliminacin restosvoluminosos

Eliminacin restospesados

Operaciones previas


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MTODOS DE SEDIMENTACIN-I

?Faust e Ingalls

?Jahnes y Hodges

1. Agua glicerinada

2. Tamizar3. Sedimentar (1h)4. Decantar sobrenadante5. Repetir el proceso dos veces (45 y 30 min)6. Observar sedimento

?Baroody y Most

1. Agua glicerinada o alcoholizada2. Tamizar

3. Sedimentar 30 s4. Centrifugar sobrenadante (1500rpm, 1-2 min)5. Resuspender y centrifugar de nuevo6. Repetir el ultimo proceso hasta clarificar7. Observar sedimento

?Van Someren

(Modificado por Gregoire)

1. Tween-80 al1%2. Tamizar

3. Llenar tubo con pinza abierta (2 m aprox)4. Sedimentar (20 min)5. Cerrar pinza y abrir llave6. Observar

MTODOS DE SEDIMENTACIN-II


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MTODOS DE FLOTACIN-I

?Fulleborn (salmuera)

1. Homogeneizar2. Reposar 45 min3. Observar capa superior

?Willis (salmuera)

1. Homogeneizar2. Llenar tubo Borrel hasta formar menisco3. Cubreobjetos sobre menisco4. Reposar 15 min5. Observar

Toma de muestra en un mtodo basado en l a flotacin

Capas obtenidas- flotacin

?Faust (sulfato de zinc)

1. Homogeneizar en agua2. Tamizar y recoger tamizado en tubo3. Centrifugar 1500 rpm, 5 min4. Decantar y repetir hasta clarificar5. Resuspender sedimento en SO4Zn6. Centrifugar 1500 rpm, 2min7. Observar

?Faust simplificado

1. Homogeneizar directamente en SO4Zn2. Tamizar3. Seguir pasos 6 y 7.

MTODOS DE FLOTACIN-II


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?Janeckso y Urbanyi

1. Homogeneizar (Biyoduro-yoduro)2. Tamizar

3. Centrifugar 2500 rpm, 3min4. Observar

?Sheather

1. Homogeneizar en sacarosa2. Centrifugar 500 g, 5 min3. Observar

MTODOS DE FLOTACIN-III

MTODOS DIFASICOS-I

?Rivas1. Homogeneizar (cido actico 5%)2. Tamizar3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsionar5. Centrifugar 1500rpm, 1min

6. Observar sedimento

?Ritchie1. Homogeneizar (solucin salina)2. Tamizar3. Centrifugar 1500rpm, 1min4. Decantar, resuspender y repetir hasta clarificar5. Resuspender en formol 10% y aadir eter

6. Emulsionar7. Centrifugar 1500rpm, 2min8. Observar sedimento

Capas obtenidas


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?Ritchie simple

1. Homogeneizar en formol 10%2. Tamizar

3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsionar5. Centrifugar 1500rpm, 2min6. Observar sedimento

?Bailenger 1. Homogeneizar (aceto-acetico)

2. Sedimentar 60 s3. Tamizar el sobrenadante4. Tubo ensayo (tamizado+eter)5. Emulsionar6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Observar sedimento

MTODOS DIFASICOS-II

1. Homogeneizar en MYF2. Tamizar3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsin estable5. Centrifugar 1500rpm, 1min6. Observar sedimento

1. Homogeneizar (TCA+formol)2. Tamizar y sedimentar 1min3. Ampolla decantacin (tamizado+eter)4. Emulsionar y reposar 2min5. Tomar el liquido claro del fondo6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Resuspender en solucin densa (NaBr)

8. Centrifugar 1500rpm, 1min9. Observar pelcula superficial

?Blagg y col.

?Thebauld

MTODOS DIFASICOS-III


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1. Homogeneizar (sulfato sodico)2. Aadir gota de Triton3. Tamizar4. Tubo ensayo (tamizado+eter)5. Emulsionar6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Observar sedimento

?Faust e Ingalls

MTODOS DIFASICOS-IV

PARASEP (mtodo comercial patentado)


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PARASEP (mtodo comercial patentado)

METODOS ESPECIALES COPROLOGICOS-IDiagnstico de Enterobius vermicularis

?Tcnica de Markey (torunda vaselinada)

?Tcnica de Graham (cinta adhesiva)

Modalidad 1 Modalidad 2


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METODOS ESPECIALES COPROLOGICOS-IIMtodos migratorios (Strongyloides stercoralis)

?Metodo de Baermann y Brugg?Metodo de Baermann y Lee

?Metodo de la placa de agar (S. stercoralis)

METODOS COPROLOGICOS CUANTITAVIVOS-I

?tiles para pocas especies?Intensidad / encuesta epidemiolgica?Orientacin tratamiento?Seguimiento eficacia

?Metodo de Kato-Katz


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METODOS COPROLOGICOS CUANTITAVIVOS-II

?Mtodo de Stoll 1. 4g heces + Erlenmeyer2. 60ml NaOH 0.1M3. 10 bolas vidrio4. Homogeneizar

5. 0.15ml en porta + cubre6. Huevos contados x 100 = huevos/g

?Mtodo de Cadwell

1. 4g heces + Erlenmeyer2. 4ml antiformina, mezclar y reposar 1h3. Solucin sacarosa hasta 40ml4. Tomar 0.1ml en porta + cubre5. Huevos contados x 100 = huevos/g

?Mtodo de la cmaraMcMaster

1. 3g heces + Erlenmeyer2. Aadir liquido hasta 45ml3. Homogeneizar4. Llenar cmara5. Huevos contados x 100=huevos/g

DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-I

Schistosoma haematobium

?Sedimentacin1. Tomar la orina2. Depositarla en copa sedimentacin3. Sedimentacin 1-2h

4. Centrifugar 2000g, 2min5. Observar sedimento

?Filtracin

1. Filtrar la orina y extraer filtro2. Colocarlo en un portaobjetos3. Aadir 1 gota de Lugol

4. Contar huevos en 10 ml de orinaInfeccin leve: 1-49 h/10mlInfeccin grave: mas de 50 h/10ml


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Filtracin

Toma de orina y filtracin Pase de aire

Tincin con Lugol

S. haematobium

DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-II

Microfilarias

?Triple concentracin

1. Aadir timerosal al 1% en la orina2. Dejar reposar toda la noche (Baermann)3. Recoger 10-30ml

4. Centrifugar 400g, 3-5 min5. Resuspender sedimento en solucin salina6. Centrifugar y examinar

?Filtracin

Igual que para Schistosoma

Loa loa

Dispositivo Baermann


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DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-III

Trichomonas vaginalis

?Muestras

1. Exudado vaginal2. Exudado uretral3. Semen4. Orina

?Mtodos1. Examen directo:

Diluir con solucin salinaCentrifugar si es orina

2. Tincin3. Cultivo

Trichomonas vaginalis

DIAGNOSTICO HEMATICO-I

Parsitos 1. Plasmodium sp2. Babesia sp3. Trypanosoma sp

4. Microfilarias

5. Leishmania sp

Muestra 1. Sangre2. Cundo tomarla?

Mtodos 1. Examen directo2. Gota gruesa

3. Frotis fino4. Previa concentracin

Gota gruesa

Frotis fino


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Plasmodium

Amastigotes

Trypanosoma

Tripomastigotes


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DIAGNOSTICO HEMATICO-II

Tinciones 1. Giemsa2. Wright

Examen preparaciones 1. Gota gruesa (100 campos; inmersin)2. Frotis (200-300 campos; inmersin)

Recomendaciones 1. Fijar frotis o hemolizar gota gruesaantes de 48h

2. Conservacin larga (resina de montaje)

Mtodos de concentracin 1. Capa opalina=Buffy Coat2. QBC; 3. Knott4. Filtracin; 5. Gradiente6. Triple centrifugacin7. PHA

DIAGNOSTICO HEMATICO-III

Extensin de la capa opalina (buffy coat)

1. Llenar un capilar de hematocrito (Wintrobe)2. Centrifugar 100g, 30min3. Examinar buffycoatCapas: plasma, clulas blancas (buffycoat) y eritrocitos

Concentracin de Knott

1. Sangre citratada (1ml) +formol 2% (10ml)

2. Centrifugar 500g, 2min3. Observar sedimento

Filtracin

1. Sangre citratada (1ml)+agua 10ml2. Agitar (hemolisis) y filtrar (5 micras)3. Pasar 10ml agua destilada

4. Pasar aire por el filtro5. Pasar 3ml de metanol6. Retirar filtro, secar y teir


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DIAGNOSTICO HEMATICO-IV

Centrifugacin en gradiente

1. Ficoll-Hypaque (4ml)+Sangre heparinizada (4ml)2. Centrifugar 400g, 40minCapas: plasma, cel.blancas, parsitos, cel.rojas

Triple centrifugacin

1. Centrifugar la sangre heparinizada 300g, 10min2. Recoger sobrenadante y centrifugar 500g, 10min3. Recoger sobrenadante y centrifugar 900g, 10min4. Examinar sedimento

Mtodo fitohemaglutinina (PHA)1. Sangre heparinizada+PHA (0.1mg/ml final)2. Mezclar suavemente3. Centrifugar 150g, 10min4. Centrifugar sobrenadante 700g, 10min5. Examinar sedimento

Metodo Quantitative Buffy Coat (QBC)


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ANALISIS DE MUESTRAS ESPECIALES

?Esputo

Paragonimus spQuiste hidatidicoAmebosis pulmonarLarvas Ascaris, Ancylostoma, Necator o StrongyloidesCryptosporidium

?Lquido cefalorraqudeoTripanosomiosis africanaMeningoencefalitis amebianaAngiostrongylus cantonensis

?Aspirados

DuodenalesSigmoidoscopiaGastroscopiaAbscesos pulmonares o hepticosGanglios linfticos, medula y bazoUlceras cutneas

CULTIVO DE PARASITOS

?Coprocultivos de helmintos

?Coprocultivos de protozoos

?Inoculacin animal

?Xenodiagnstico

Cultivo fecal en

tira de papel

Cultivo en placa Petri

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