Diagnostic de laboratoire des parasitoses

sanguicoles et tissulaires-1

Recherche de parasites sanguinoles et tissulaires :

plasmodium, leishmanies ,toxoplasme, trypanosomes et

microfilaires

Examen à l’état frais

Frottis mince et goutte épaisse: confection, fixation et

coloration Technique de leuco-concentration

4 EMME ANNEE PHARMACIE- PARASITOLOGIE

Plan

Introduction

Diagnostic de laboratoire de paludisme: frottis sanguin , goutte

épaisse, autres techniques ,(diagnostic différentiel avec les babesioses)

Diagnostic de laboratoire de leishmaniose viscérale:

Leucocytoconcentration++

Diagnostic de laboratoire Toxoplasmose

Diagnostic de laboratoire des trypanosomoses africaines et

trypanosomose américaine

Diagnostic de laboratoire des filarioses sanguinoles

Les parasitoses sanguicoles et tissulaires sont dues a des parasites

passant une partie ou la totalité de leur vie dans le sang et les tissus

de l’homme ou elles vont devoir être identifiées et quantifiées.

Introduction

Leur mise en évidence ou leur diagnostic de certitude est le premier

objectif vers lequel doit tendre toute technique biologique

diagnostique et pronostique.

Le diagnostic parasitologie doit permettre d’identifier

l’espèce parasitaire en cause, son stade de développement, et le nombre

de parasites (parasitemie) chiffre indispensable a l’évaluation

pronostique et au suivi thérapeutique.

les principaux parasites sanguinoles et tissulaires humains:

Protozoaires : plasmodium , babesies, les toxoplasmes, les

leishmanies ,les trypanosomes africains et sud américains,

Nématodes tropicaux : les microfilaires de certaines filaires.

Diagnostic du Paludisme

La première endémie parasitaire mondiale.

Chaque année 400 millions d’accès palustres et plus de deux

millions de morts

Le diagnostic du paludisme est une urgence

(délai de résultat inférieur à 2 heures).

biologique:

Anémie hemolytique

Thrombopénie,

Signes d'orientation

Clinique:

« Toute fièvre au retour d’une zone d’endémie est un paludisme jusqu’

à preuve du contraire »

Signes digestifs (embarras gastrique)

La prise d’une chimioprophylaxie antipalustre n’exclue pas le

diagnostic du paludisme.

Diagnostic biologique de certitude = Dg parasitologique direct

C’est l’observation de Plasmodium dans les globules rouges sur un

prélèvement de sang

On utilise la technique du frottis et de la goutte épaisse qui sont des

examens de référence.

Prélèvement

Le prélèvement doit être réalisé

Au moment des pics fébriles

Avant toute thérapeutique

Asepsie rigoureuse

Il se fait:

Soit par prélèvement capillaire au bout du doigt, lobe de l’oreille

ou talon (enfant) avec confection immédiate du frottis et de la

goutte épaisse(on jette la 1ere goutte car riche en lymphe)

Soit par ponction veineuse avec prélèvement dans un tube

contenant un anticoagulant ( EDTA)

Le frottis doit être fait immédiatement, sinon il faut conserver le

prélèvement à 4°c (maximum pendant une nuit car le parasite peut

évoluer et même donner des formes atypiques)

Déposer une goutte de sang à un centimètre environ du bord droit

d’une lame de verre bien dégraissée

Mettre en contact la goutte avec le petit bord d’une lame ou d’ une

lamelle (l’angle formé à droite étant de 45° environ) et laisser le

sang repartit régulièrement par capillarité le long du bord de la

lame(ou lamelle)

Etaler le sang en couche mono-érythrocytaire d’un geste rapide

et régulier en maintenant la lame selon un angle de 45°

1-Technique

Tenir les bords de l’extrémité gauche de la lame entre le pouce et

l’index de la main gauche.

Frottis sanguin mince (FS)

Sécher le frottis immédiatement en agitant la lame à l’aire par des

mouvements d’éventails vifs ou en la plaçant devant un ventilateur

(pas de séchage à la chaleur ou prés d’une source de chaleur)

NB: pour obtenir un frottis très mince , il faut

une lamelle mince

Un angle faible égale ou inferieure à 45°

Faire au minimum 3 frottis voir 5

Technique de confection

d’un frottis mince.

Frottis trop long

et trop épais.

La goutte de sang

a été trop grosse.

Frottis trop long et

trop épais. La goutte

de sang est trop

grosse, et la lamelle

trop large.

Frottis effiloché.

Mauvais contact

de la lamelle

sur la lame.

Bon frottis

Fixation au May Grunwald

Recouvrir complètement la lame par le MG

Laisser agir 1minute (sans laisser sécher la lame , pour cela il faut soit

ajouter du MG, soit mieux mettre la lame dans une boite de pétrie

fermée)

NB: la fixation se fait au méthanol pendant 3 à 5mn pour la coloration

GIEMSA

2- Coloration du frottis

La technique la plus utilisée est celle de May Grunwald qui

comporte plusieurs temps :

Coloration au May Grunwald (MG) :

- ajouter sur le MG autant de gouttes d’eau distillée que de MG

Bien mélanger en inclinant le portoir ou se trouve la lame dans

différents sens . Laisser agir 3 minutes

NB: le pH du colorant doit être voisin de 7 (ph acide :frottis pale, ph

alcalin: tout est bleu , ceux qui empêchent la mise en évidence des

parasites).

D) Lecture: au microscope optique G100,on commence par la queue

-Coloration au Giemsa

Rejeter le May Grunwald qui recouvre la lame sans laver

Recouvrir immédiatement la lame par la solution de Giemsa (1/10 à

1/20 )préparée extemporanément (Giemsa: 1 ml, eau tamponnée qsp :

10 ml) . Laisser agir 20 à 45minutes

Laver à l’eau du robinet sur jet continu(sans verser le colorant)

Laisser sécher à la température du laboratoire à l’abris des poussières

Réalisation simple

Économique(matériel rudimentaire)

Technique rapide (diagnostic d’urgence<1h) /GE

Diagnostic de certitude, dg d’espèce, dg de stade parasitaire

visualisation de l’aspect et taille de globule rouge

3) Avantages

Peu sensible (problème pour les parasitémies faibles)

Lecture prolongée (au moins 30 minutes)

4) Inconvénients

Résultats

Principales caractéristiques différentielles des différentes espèces plasmodiales sur un frottis

sanguin

NOM P.Falciparum P.malariae P.vivax P.Ovale

Diametre et

Trophozoites

bracelet

Anneau

Forme amoeboide

D=normalnormochrome

Filet à papillons

Tachesde

Maurer

anneau anneau

hémozoine

Écharpe équatoriale

D=réduit D=augmenté D=augmenté

Granulations de Schuffner

schizonte

n’existe pasdans le sang circulant sauf cas Exceptionnelles (24--32elements)

Prérosace

Rosace(marguerite:6-8elements)

Rosace(16-24elements)

gamétocytes

G.Femelle

NB:

10-12 élements

Trophozoites Schizontes Gamétocytes

polyparasitisme

Plasmodium falciparum

Frottis monotone, polyparasitisme .

Parasite surtout les GR jeunes sans changement de taille ni de forme

Anneau

Taches de

Maurer

bracelets

polyparasitisme

Filet à

papillon

Rosace 24 à 32

éléments(rarement retrouvé dans le sang

périphérique )

Plasmodium falciparum: trophozoïtesen anneau (Frottis monotone),Taches de Maurer

Plasmodium falciparum. Frottis. Une hématie parasitée par cinq trophozoïtes. Coloration M.G.G. Obj. 100

Gamétocyte femelle de P. falciparum

Forme en banane ou en cigare

Trophozoites Schizontes Gamétocytes

2-Plasmodium vivax

Frottis panaché, granulations de Schuffner,

GR parasités: augmentation de taille, pas de modification de forme

anneau Granulations

de Schuffner

Forme

amoeboideRosace 16 à

24 éléments

Plasmodium vivax. Frottis. Trois hématies avec granulations de Schüffner parasitées, dont deux voisines, avec des trophozoïtes de forme amiboïde. Coloration M.G.G. Obj. 100.

Plasmodium vivax. Frottis. Corps amiboïde dans une hématie de très grandeTaille caractéristique de P. vivax.

Trophozoite jeune dans une grande hématie ,granulations de Schuffner

P.Vivax : forme amoeboide

Plasmodium vivax. Frottis. Gamétocyte mâle microgamétocyte.Cytoplasme violet-bleu, pigment granuleux dispersé. Coloration M.G.G. Obj. 100.

Plasmodium vivax. Frottis. Corps en rosace contenant 24 mérozoïtes. Coloration M.G.G. Obj. 100

Corps en rosace éclatée liberant des mérozoites

Corps en rosace P ,vivax

Trophozoites Schizontes Gamétocytes

3-Plasmodium ovale

Frottis panaché, granulations de Scuffner

GR parasités: augmentation de taille et modification de

forme: ovalisés ou frangés

anneau Granulations de Schuffner Rosace 10 à 12

éléments

Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovale frangée à une extrémité,avec granulations de Schüffner et contenant un trophozoïte. Coloration M.G.G.

Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie de forme ovale, une autre triangulairefrangée aux 2 extrémités avec de nombreuses granulations de Schüffner et contenant chacuneun trophozoïte. Coloration M.G.G.

Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie d’assez grande taille avec granulationsde Schüffner contenant 2 trophozoïtes. Coloration M.G.G. Obj. 100

Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovale à extrémité pointue, une autre ovale avec de nombreuses granulations de Schüffner, contenant chacuneun trophozoïte. Coloration M.G.G. Obj. 100.

Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovale pointue à une extrémité contenantun schizonte à 3 noyaux. Nombreux grains de pigment et granulations de Schüffner.

Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovale avec granulations de Schüffneret pigment contenant un schizonte à 2 noyaux. Coloration M.G.G. Obj. 100

Plasmodium ovale. Frottis. Hématie d’assez grande taille contenantun gamétocyte de coloration bleu pale-rosé. Coloration M.G.G. Obj.

Plasmodium ovale. Frottis. Hématie arrondie d’assez grande taille contenantun gamétocyte avec noyau excentré, cytoplasme bleu et des grains de pigment dispersés.

Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovalisée contenant un gamétocyteavec noyau excentré, cytoplasme bleu, gros grains de pigment. Une deuxième hématie contientun trophozoïte avec des granulations de Schüffner. Coloration M.G.G. Obj. 100.

Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie de taille normale arrondie

contenant un très jeune gamétocyte et des granulatins de Schüffner. Une autre hématie

d’assez grande taille contenant un jeune gamétocyte, granulations de Schüffner et pigment

Hématie frangée,Rosace à 8 noyaux P ovale

Trophozoites Schizontes Gamétocytes

hémozoine

Plasmodium malariae

Frottis panaché

Parasite les GR agés, de taille normale ou diminuée

anneau Écharpe

équatorielRosace 6 à 8

éléments

P malariae hemogregariniforme

Plasmodium malariae. Frottis. Dans deux hématies de taillesurbnormale, trophozoïtes âgés en bande équatoriale avec pigment abondant.Coloration M.G.G.

Schizonte en bande équatoriale de P. malariae

Plasmodium malariae. Frottis. Hématie de taille subnormale. Schizonteà 3 noyaux, pigment abondant. Coloration M.G.G

Plasmodium malariae. Frottis. Hématie de taille normale.Schizonte mûr corps en rosace à 8 noyaux. Gros amas de pigment central.Coloration M.G.G. Obj.

Plasmodium malariae. Frottis. Deux gamétocytes occupant presque toute L’hématie de taille surbnormale. Coloration M.G.G. Obj. 100

• Parasite des primates qu’on considérait encore récemment comme

exceptionnel chez l’homme

• Fréquent en Malaisie, Thaïlande, Myanmar, Philippines et

Singapour

• Un parasite à cycle court, de 24 heures seulement, parfois

responsable de très fortes parasitémies et de pronostic sévère.

Plasmodium knowlesi

Plasmodium knowlesi

Principe: c’est une technique de concentration qui permet d'examiner

une grande quantité de sang dans une petite surface.

La goutte épaisse

Technique de la goutte épaisse

1-Dépôt du sang: déposer une grosse goutte de sang au milieu

de lame (2fois le volume utilisé pour un frottis).

2-Défibrination : pour empêcher la coagulation, avec le coin d'une

autre lame ou avec la pointe d’un vaccinostyle, étaler régulièrement le

sang sur une surface de 1 cm de diamètre, en tournant régulièrement

de façon homogène et en grattant un peu la surface du verre pour

favoriser l’adhérence pendant 2 minutes.

3-Sécher 24h à temperature ambiante ou 2h à 37°c .

Ne jamais fixer à la chaleur ou à l'alcool responsable d’une

fixation des hématies.

Coloration de la goutte épaisse

Déshémoglobinisaton (Lyse des GR et libération de l’Hb):recouvrir

abondamment la goutte épaisse avec de l’eau distillée

Laisser agir pendant 5 à 10 minutes jusqu'à décoloration complète, les

parasites, restent intacts sur la lame.

Coloration au Giemsa pendant 20 à 45 minutes

Laver à l'eau du robinet

Sécher à l'air.

Avantages:

très Sensible (détecte des parasitémies plus faibles)

Inconvénients:

Ne permet pas de faire le diagnostic des espèces plasmodiales

(sauf dans certains cas : elle peut montrer les gametocytes de

plasmodium falciparum, ou rosaces de P)

Lente

N’est pas recommandable si elle n’est pas associée au frottis

sanguin car la lecture est retardée de 12h et l’interprétation est

plus délicate

Goutte épaisse positive palsmodium sp

Goutte épaisse positive palsmodium falciparum

Goutte épaisse Plasmodium malariae

Réaliser d’abord le frottis puis

la goutte épaisse

Fixer d’abord le frottis au méthanol

Hémolyser la GE sans que l’eau ne

touche le frottis

Colorer la lame par le procédé

de coloration en série

Association goutte épaisse et frottis sanguin.

Autres techniques

Quantitative Buffy Coat (QBC): technique de concentration la plus

sensible- Équipement sophistiqué

Tests de diagnostic rapide (TDR) :Rapide - Seulement une aide au

diagnostic (La recherche d’antigènes spécifiques sur bandelettes)

PCR: uniquement pour laboratoires spécialisés - Coûteux

Sérologie: très utile pour certaines situations particulières(enquête

epidemiologique , suivi du traitement ,transfusion sanguine,..)

La méthode de référence pour le diagnostic du paludisme

demeure encore l'examen microscopique d'un frottis-goutte

épaisse coloré par le Giemsa.

Les TDR peuvent aider dans le dépistage

La PCR est très performante mais n’est pas accessibles à tous

Babésioses

Comme pour le paludisme, le diagnostic parasitologique est effectue

sur frottis de sang fixé et coloré au MGG.

Le polyparasitisme est fréquent et Babesia n’a pas de pigment parasitaire

Ils peuvent être confondus avec les formes des plasmodies en

particulier les trophozoites de Plasmodium falciparum.

Dg ≠Paludisme: absence d’hémozoїne dans le cytoplasme,

absence de schizontes et de gametocytes

.

On peut rechercher des anticorps specifiques par

immunofluorescence indirecte et amplifier par PCR des séquences

spécifiques d’ADN

Diagnostic de leishmaniose viscérale

Le diagnostic est évoqué a partir d’arguments :

- Epidemiologiques: les foyers sont localises dans le pourtour

de la Mediterranee, au Moyen-Orient, en Afrique de

l’Est, en Inde et sur le continent sud americain ;

- Cliniques associes a une triade classique : fievre folle,

hepatosplenomegalie et paleur avec une pancytopenie progressive.

Diagnostic biologique direct

C’est la recherche des leishmanies dans les cellules du systeme reticulo

histio macrophagique

Frottis de moelle osseuse colore au MGG:

Forme amastigote de Leishmania sp (formes ovoïdes de 2 a 6 μm de

diamètre, renfermant un noyau et un kinetoplaste)

Spécificité: 100%

Cependant,

Geste invasive, douloureuse

la lecture est longue et fastidieuse.

Formes amastigotes de leishmania sp sur un frottis de moelle chez un enfant

atteint de leishmaniose viscerale.

Les prélèvements sanguins ou de moelle peuvent être mis en culture

sur milieux specifiques (NNN (Novy-Mac Neal-Nicolle),milieu de

Schneider,…

Incubation 22-28°C

Examen de la culture: 1x/semaine

Souvent se positive la 1ère semaine

4 semaines avant de rendre un résultat négatif

Si culture positive: Promastigotes mobiles de Leishmania sp

forme allongée de 20 à 25 micron de taille, avec un noyau central, un

kinétoplaste et un flagelle libre.

Culture

Promastigotes de leishmania sp

Promastigotes de leishmania sp

En revanche, la technique de leucocytoconcentration donne des

résultats meilleurs que ceux de la culture et du medullogramme.

Inconvénients de la culture

Longue, fastidieuse, Contaminations bactériennes et fongiques

leucocytoconcentration (LCC)

Principe: technique qui permet de concentrer les parasites sanguins

sur la plus petite surface possible d’une lame et à éliminer les

globules rouges et les plaquettes.

A partir d’un prélèvement fait sur tube citraté (l’heparine

lèse les leishmanies)

1-Hémolyse :

- Dans un tube conique pour centrifugation, hémolyser 0,5 ml de sang

en le mélangeant avec 2,5 ml de la solution hémolysante

- Homogénéiser soigneusement le mélange par agitation au « vortex ».

-Laisser hémolyser et veiller à obtenir une hémolyse parfaite

L’hémolyse parfaite est obtenue en 10 à 20 mn lorsque le sang prend

un aspect « laqué ».

Méthode (technique)

2-Leucoconcentration :

-Concentrer les leucocytes et les parasites par une première

centrifugation de 10 minutes à 2500 tours par mn.

-Jeter le surnageant

La solution hémolysante (saponine)

Saponine :1ml

Formol:12,5ml

Glycerine:2,5ml

quantité suffisante Pour 500ml d’eau

Filtrer la solution obtenue 3fois et la conserver à température (-20°)

3-Etalement des frottis sur lame porte-objet :

-Reprendre le culot dans 100 µl d’eau salée à 0,9%.

-Homogénéiser soigneusement par agitation au « vortex ».

-Centrifuger une deuxième fois pendant 10 mn à 2000 tours par

mn.

-Jeter le surnageant.

-Confectionner des frottis à partir du culot de centrifugation sur

deux lames porte-objet.

4-Coloration :

Sécher les lames et réaliser une coloration, après fixation au

méthanol, par le Giemsa dilué au 1/10ème et soigneusement filtrés.

la coloration se fait pendant 30 à 45 mn et est immédiatement suivi

par un rinçage à l’eau de robinet.

5-Lecture :

Sécher les lames, et lire au microscope optique au G x100.

a

amastigotes de leishmania sp

Diagnostic indirect (séro immunologique) : recherche des

anticorps spécifiques dans le sérum du malade.

Plusieurs techniques peuvent être utilisées : ELISA, IFI,

western blot,…

Autres techniques

Biologie moléculaire: recherche d’ADN parasitaire par PCR

Diagnostic biologique de toxoplasmose

Chez le sujet immunocompétent

Du fait d’un passage de courte durée dans le sang, la recherche de

toxoplasme est souvent infructueuse et n’est pas réalisée, sauf dans

le cas de toxoplasmose congénitale ( suivi sérologique chez la

femme enceinte)

Chez le sujet immunodéprimé

La recherche directe du parasite dans le sang, LCR,, LBA, moelle

osseuse,. ponction ganglionnaire, biopsie cérébrale,…)

Frottis coloré:(lecture difficile): tachyzoites de T gondii (forme de

croissant asymétrique ou d'un arc, de 5 à 8 μm de long / 2 à 4 μm.

Biologie moléculaire: recherche de l’ADN toxoplasmique

Inoculation aux souris

Sérologie: souvent difficile à interpréter; IgM: en général absentes.

IgG: réponses diverses: titres faibles, élevés stables, ( des IgG)

Western Blot: production locale d'anticorps dans le LCR, HA

Trophozoites de toxoplasma gondii

Diagnostic prénatal : proposé en cas de séroconversion maternelle

Amniocentèse: réalisée à partir de 18 Semaines , au moins 4

semaines après la date présumée de l’infection maternelle

prélever 15 – 20 ml de liquide amniotique: inoculation à la souris,

PCR, Western blot

Toxoplasmose congénitale :

Sérologie de contrôle 10j après la naissance

Sérologie tous les mois puis tous les 2 mois durant la première année

Diagnostic néonatal: tout NN de mère contaminée en cours de grosse

Prélèvement de placenta : inoculation à la souris, PCR

Prélèvement de sang de la mère et de l’enfant : western blot ou ELIFA

Calcul de la charge immunitaire de la mère et de l’enfant

CI =

IgG spécifiques (en UI / ml) x 1000

IgG totales (en g / l)

Toxoplasmose oculaire

Sérologie: mise en évidence d’une synthèse locale des anticorps

spécifiques (IgG , IgM) dans l’Humeur Aqueuse (HA),.

Comparaison de la charge immunitaire de l’ Humeur aqueuse

avec celle du sérum = Coefficient Desmonts.

Comparaison du profil immunologique sérum / HA = analyse

comparée des spécificités des anticorps par Western Blot

PCR: recherche du parasite dans l’ HA

Les Trypanosomoses

Trypanosomoses africaines

Les trypanosomoseses humaines africaines sont provoquées

par deux sous-espèces Trypanosoma brucei gambiense

et Trypanosoma brucei rhodesiense.

Elles sont déterminées par la présence de trypanosomes dans le

systeme lymphatico-sanguin et nerveux, transmis par la

piqure d’une mouche du genre Glossina.

Diagnostic

Il est évoqué :

par le contexte epidemiologique : séjour en Afrique équatoriale

par les signes cliniques en particulier, une fièvre , des adénopathies

cervicales et sous claviculaires, une splenomegalie et en

cas de diagnostic tardif, tout signe neurologique (sensitifs,

psychiques, du sommeil ou moteurs), qui signe alors le

passage du parasite du systeme lymphatico-sanguin vers

le liquide cephalo rachidien.

Le diagnostic biologique

Est sanguin en première période lymphatico-sanguine et fonde sur

l’analyse du LCR en phase neurologique

Il doit par ailleurs permettre de préciser le stade de développement de

la maladie et l’eventuel passage des parasites du sang circulant vers le

LCR (phase meningo-encephalitique).

Plusieurs techniques d’examen ou d’enrichissement sont utilisees :

Examen direct entre lame et lamelle : les trypanosomes

ondulent entre les hématies

Frottis et goutte épaisse colores au MGG :

Trypomastigote ; forme allongée, 15 à 20 µm, noyau central,

kinétoplaste postérieur, membrane ondulante et flagelle libre à partir

de l'extrémité antérieure;

Forme mince, petit kinetoplaste

Centrifugation du sang en tubes capillaires

Les trypanosomes sont localises a la limite de séparation des globules

rouges et du plasma, visibles au microscope(X10 )

En cas de negativite, le recours aux ponctions ganglionnaires et aux

techniques serologiques sont necessaires (immunofluorescence

indirecte : IFI).

leuco concentration si l’hemolyse a été provoquée par l’eau

distillée ou saponine : les trypanosomes sont encore vivants.

En revanche, si l’hemolyse a ete provoquée par le formol: les

trypanosomes très fragiles sont tues, mais sont mieux conserves

les cultures et inoculation aux animaux sont peu pratiquées etdangereuses

Forme épimastigote : forme allongée, de 15 à 20 µm, noyau central,

kinétoplaste proche du noyau, flagelle libre à partir de l'extrémité

antérieure(culture)

Plus tardivement, apparaissent : anemie, hyperleucocytose,

monocytose, et surtout plasmocytose (cellule de Mott) et

protidémie forte quasi pathognomonique de la trypanosomose (les

IgM sont 4 fois supérieures a la normale).

les trypanosomes sont a rechercher dans le LCR ou l’apparition

d’IgM, signe d’atteinte neurologique.

Trypanosomose américaine

La trypanosomose américaine, ou maladie de Chagas, est provoquée

par Trypanosoma cruzi, parasite du sang et des tissus, transmis par les

déjections d’insectes hématophages de la famille des reduvides

Le diagnostic est évoqué

sur des arguments épidémiologiques( continent sud américain, Mexique

sud de l’Argentine) et des arguments cliniques aigus: (œdème

bipalpebral, unilateral (signe de Romana), fièvre irrégulière) et

chroniques (lésions musculaires, atteinte myocardique et digestive,

megaorganes).

La recherche du parasite se fait au niveau du sang, On utilise les mêmes

techniques que pour les trypanosomes africains.(examen direct ,frottis,

goutte épaisse, leuco-concentration,..)

a la phase aigue les examens sont positifs dans 90 % des cas, et

seulement 5 % a la phase chronique.

A la coloration au MGG: Trypanosoma cruzi (trypomastigote):15 a 25

μm kinetoplaste , beaucoup plus volumineux que celui de

Trypanosoma brucei.

Trypanosoma cruzi (trypomastigote):

Trypanosoma cruzi (trypomastigote)

la sérologie est indispensable (IFI, ELISA, hemagglutination passive)

En cas de négativité après répétition des examens

Le xénodiagnostic : c’est la recherche de trypanosomes dans les

dejections de réduves 20 jours après qu'elles aient piqué un malade.

exceptionnellement pratiqué

Filarioses sanguicoles

diagnostic des microfilaires sanguicoles

Les filaires sanguinoles :

Loa loa

Wuchereria bancrofti

Brugia malayi

séjour en zone d’endémie , hyper éosinophilie

signes cliniques sont très différents selon les espèces:

la loase: œdème allergique, migrateur, fugace( oedeme de

Calabar), localise préférentiellement aux membres supérieurs ou la

spectaculaire reptation de la filaire adulte sous la conjonctive de

l’œil.

Signes d’orientation

les filarioses lymphatiques:(Wuchereria bancrofti, Brugia malayi),

Lymphangite aigue et chroniques

Sclérose et éléphantiasis des membres.

Recherche et identification des microfilaires

Prélèvement de sang

Les microfilaires apparaissent dans le sang selon une périodicité qu’il

faut respecter pour optimiser le rendement diagnostique :

Loa loa : le jour, entre 10 h et 16 h

W. bancrofti: la nuit, entre 22 h et 4 h (sauf la variete pacifica, a

n’importe quel moment),

B. malayi : la nuit, entre 22 h et 4 h

Techniques de mise en évidence

Examen direct: goutte de 10 μL de sang frais, entre lame et

lamelle permettant de voir facilement la microfilaire entre les

globules rouges (Gx 10 )

Microfilaire de Loa loa.

Le frottis sanguin ou la GE colorés au MGG:

facilite le diagnostic d’espèce.

Les critères morphologiques d’identification sont en particulier:

la taille des microfilaires

la présence ou non d’une gaine plus ou moins coloree au Giemsa,

la forme de l’extrémité postérieure plus ou moins effilée,

l’extremite céphalique grande ou petite,

la présence plus ou moins terminale des noyaux somatiquex

Microfilaires Loa loa Wuchereria

bancrofti

Brugia malayi

Critères

Taille 300 um 300 um 250 um

Présence d’une

gaine plus ou

moins colorée

Gaine courte mal

colorée

Gaine courte bien

colorée

Gaine longue bien

colorée

L’espace

céphalique Court Court Long

l’extrémité

postérieure

(caudale)

Effilée contenant des

noyaux terminaux

Effilée contenant

des noyaux

subterminaux

2renflements

,1subterminal et

1terminal contenant

chacun un noyau

Microilaire de Loa loa : frottis sanguin

Frottis de sang: microfilaire de Loa loa

Microfilaire Wuchereria bancrofti Goutte épaisse.

Microfilaires Wuchereria bancrofti300 µm

Goutte épaisse: microfilaire de Wuchereria bancrofti

Microfilaires Brugia malayi. Frottis.

Microfilaire Brugia malayi = 250 um

La technique de leucoconcentration: est très utile en cas

de pauci parasitisme.

Elle conserve la mobilité des microfilaires

Elle permet une mensuration plus précise.

Microfilaire de Loa loa (LCC): 300 um

kit de detection des antigenes circulants specifiques de Wuchereria

bancrofti par immunochromatographie donne de bons résultats.

La sérologie: Les résultats obtenus doivent être interprètes avec

beaucoup de prudence du fait des réactions croisées nombreuses

existant entre les nématodes.