Determinación semicuantitativa de lectinas en leguminosas

7/29/2019 Determinacin semicuantitativa de lectinas en leguminosas

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DETERMINACIN

SEMICUANTITATIVA DELECTINAS EN

LEGUMINOSAS


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LECTINAS

Son glicoprotenas de origen no inmune quereconocen de manera especfica carbohidratosde la superficie celular o en suspensin;

aglutinan clulas y precipitan glicoconjugados.

Se han llamado tambin aglutininas,fitohemaglutininas, hemaglutininas, fitoaglutininaso protectinas.


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LECTINAS COMO FACTORES TXICOS

Se han descrito como molculas altamente txicas; causan un daoirreversible en el intestino delgado, que es su rgano blanco.

La toxicidad de las lectinas se caracteriza por la capacidad de inactivarlos ribosomas.

Las lectinas se unen a grupos glicosdicos de las membranas de lasclulas epiteliales del tracto digestivo, impidiendo la absorcin denutrientes, llegando a una necrosis intestinal.

No califican como factores antinutricionales debido a que no se unen aun nutriente especfico impidiendo su absorcin.


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ESPECIFICIDAD DE LAS LECTINAS

Todas las lectinas poseen dos o ms tipos deunin a carbohidratos, siempre y cuando las

estructuras sacridas sean semejantes osimilares; dicha especificidad entonces, estdada por el grupo glucosdico que poseen las

lectinas.


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SENSIBILIZACIN DE ERITROCITOS

Para que la reaccin de aglutinacin se lleve acabo de manera ms rpida, es necesario elevarla afinidad de las lectinas a los eritrocitos, por loque al sensibilizar, se busca exponer la parteglucosdica de las membranas celulares de loseritrocitos, modificando la carga de estas, para

que de esta manera las lectinas reconozcan msrpido al carbohidrato.


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SENSIBILIZACIN DE ERITROCITOS; TRIPSINA

Al ser una proteasa, la tripsina rompe los enlacespeptdicos de las protenas de la membranacelular de los eritrocitos, de modo que el residuo

glucosdico queda expuesto.

Otras enzimas que podran utilizarse seran otras

proteasas: bromelina, ficina, papana, pronasa yneurominidasa.


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FUNDAMENTO DE LA METODOLOGA

Se basa en el reconocimiento de los carbohidratos presentes enlas membranas de los eritrocitos, de modo que las lectinas que losreconozcan provocarn su aglutinacin; cuantificando la cantidadmnima de lectinas para causar aglutinacin gracias a la

preparacin de diluciones sucesivas de muestra a las que seaadirn los eritrocitos sensibilizados.

Se observar la reaccin de aglutinacin de los carbohidratos

presentes en las membranas celulares de los eritrocitos por accinde las lectinas.


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AGENTES IMPORTANTES EN LA METODOLOGA

Solucin salina isotnica: le dar estabilidadosmtica al medio.

Solucin de tripsina: se utiliza para llevar a cabo lasensibilizacin de eritrocitos.


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RESULTADOS

Eq. Muestra Peso (g) Titulo Cantidad de muestranecesaria para causaraglutinacin (g)

1 Frijol de soya crudo 1.1846 10 23.095

2 Frijol de soya tostado 1.0235 - -

3 Carne de soya (guten) 5.45 4 6812.5

4 Frijol peruano crudo 0.9801 10 19.14

5 Frijol peruano crudo 1.0054 10 19.63

6 Frijol negro crudo 1.0176 10 19.875

7 Frijol negro cocido en lata 5.0614 6 1581.68

8 Frijol negro cocido en casa 5.7225 6 1788.28

9 Garbanzo cocido 5.0057 2 25028.5

10 Garbanzo crudo 0.9764 2 4882


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CLCULOS

Frijol de soya crudo

Tubo 1 2 3 4 5 6 10

Cantidadinicial 23650 11825 5912.5 2956.25 1478.12 739.06 46.19

Cantidadfinal

11825 5912.5 2956.25 1478.12 739.06 369.53 23.09


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0

5

10

15

20

25

Frijol desoya crudo

Frijol desoya

tostado

Frijolperuano

crudo

Frijolperuano

crudo

Frijol negrocrudo

Cantidad de muestra para causar aglutinacin (g)

Cantidad de muestra paracausar aglutinacin (g)

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Carne desoya

(guten)

Frijol negrococido en

lata

Frijol negrococido en

casa

Cantidad de muestra para causar aglutinacin (g)

Cantidad de muestra paracausar aglutinacin (g)


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ANLISIS DE RESULTADOS

Se determin semicuantitativamente la cantidadnecesaria para causar aglutinacin en diferentesleguminosas ya sea con un tratamiento trmico

previo o simplemente no se realiz este. se muestra que las leguminosas que han sufrido un

tratamiento previo; la cantidad necesaria para laaglutinacin es alta comparando la cantidad que se

requiere para las leguminosas sin tratamientotrmico.


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Esto se debe a que al ser unas protenas (las lectinas),se desnaturalizan por calentamiento, por lo quedesaparecen, si las leguminosas se han cocinadocorrectamente, Ahora bien, un tratamiento trmicoinadecuado (a una temperatura del orden de los 80 C)

se dice en algunos casos que puede potencializar suefecto txico. En el caso del frijol de soya tostado elcual no se obtuvo ttulo para la determinacin delectinas puede deberse a que posteriormente del

proceso trmico que se pudo haber realizado, eltostado pudo influir an ms para la eliminacin delectinas.


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La destoxificacin de los alimentos que

contienen lectinas es por medio de tratamientotrmico, ya que son de origen protenico. Conlos mtodos tradicionales de coccin casero, se

puede obtener una adecuada inactivacin deestas protenas txicas; sin embargo, se deberecordar que en regiones de altitud elevada, elpunto de ebullicin se abate y puede ser una

limitante en el proceso de inactivacin.

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