CULTIVO DA MICROALGA Tetraselmis chuii PRINGS EM DIFERENTES MEIOS DECUL TURA.1

Vera L. M. Klein2Agunstin A. Gonzalez W.3

density of 126 x 104 cel/ml There was not greatdifference among lhe Erd-Schreiber's medium, andlhe media prepared with cattle washed-gut water 50ppt and with sugar cane alcohol waste 5 ppt andbetween lhe two last Althougth there was differencebetween lhe medium prepared fish extract and othersmedia

RESUMOOs autores sugerem meios de cultura alterna-

tivos para a microalga Tetrase/mis chuii, usando-seágua de matadouro, vinhoto e caldo de peixe, sendoutilizado o meio Erd-Schreiber como controle O me-lhor resultado obtido, foi com o meio preparado comcaldo de peixe na concentração de 5 ppm, que apre-sentou a densidade celular de 201 x 104 cel/ml; o meiopreparado com água de matadouro, numa concentra-ção de 50 ppm, apresentou uma densidade máxima de122 x 104 cel/ml; o vinhoto, na concentração de 5ppm, mostrou densidade de 152 x 104 cel/ml e o meioErd-Schreiber, usado como controle, teve a densida-de máxima de 126 x 104 cel/ml Nao foi evidenciaçlograndes diferenças entre os meios Erd-Schreiber,água de matadouro na concentração de 50 ppm evinhoto a 5 ppm e os dois últimos entre si. Entretantonotou-se diferença marcante entre o meio caldo depeixe e os demais

KEY WORDS - Microalgae, culture media, culture of

microalgae, Tetraselmis chuii

PALAVRAS-CHAVE - Microalgas, meios de cultura,cultivo de microalgas, Tetrase/mis chuii

CUL TURE OF THE MICROALGAE Tetraselm;s chu;;PRINGSIN DIFFERENTCUL TURE MEDIA.

SUMMARYIn this paper the authors suggest alternatives

of cultura media for culture of Tetraselmis chuii,using cattle washed-gut water, sugar cane alcoholwaste, fish extract and the Erd-Schreiber medium,used as controlo The best results obtained wasprepared with fish extract, in the concentration of 5ppt it present a celular density of 201 x 104 cel/ml; themedium prepared with cattle washed-gut water at 50ppt, present a maximum density Df 122 x 104 cel/ml;the sugar cane alcohol waste in the concentration of5 ppt was maximum value 152 x 104 cel/ml, Erd-Schreiber meduim used as contrai was a maximum

INTRODUÇÃOA larvicultura é parte essencial para o

sucesso de cultivos de espécies aquáticas,principalmente nos tipos intensivos e super-intensivo, chegando algumas vezes a atingir10% ou mais dos custos totais do projeto. Umdos itens que mais encarecem a larviculturaé o alimento fornecido às larvas dos crustá-ceos, durante os seus diversos estágios devida, devido a que, desde o final do estágionauplius, aquelas são alimentadas com micro-algas ou fitoflageladosmantidosem meios decultura elaborados à base de produtosquími-cos, que irão fornecer nutrientes necessáriosao seu desenvolvimento. Entretanto, quandose visa uma produção em larga escala, nosdeparamos com o inconveniente dos altoscustos.

A utilização de fertilizantes agrícolas,tais como uréia, sulfato de amônia, super-fosfato triplo ou adubo foliar, contitui umaalternativa para baratear os custos e apresen-taram resultados bastante satisfatóriosquan-do testados por YAMASHITA & MAGA-LHÃES1o.

Seguindo-se o princípio de baratear ocusto de produção, descobiu-se que substân-cias residuais como água de matadouro (pro-

1 Trabalho apresentado no II Congresso de Ciências

dei Mar, Havana - Cuba, 1990.2 Professora do Departamento de Engenharia de Pes-

ca CCA/UFC e pesquisadora do CNPq3 Engenheiro de Pesca.

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veniente da lavagem do estômago do boi),vinhoto (resíduo do processamento de cana-de-açúcar) e caldo de peixe (maceração derestos de vísceras de peixes) poderiam darresultados tão satisfatórios quanto os meiosconvencionais, apresentam como vantagemo fato de serem de fácil aquisição, sem repre-sentarem maiores gastos.

No presente estudo, testou-se o de-senvolvimento de Tetraselmis chuii, espécieque é importante fonte de alimentação debivalvos (WALNE~ e peneidos (HUDINAGA5;COOK & MURPHy2 e MOCK & MURPHy6),citados por YAMASHITA & MAGALHÃES10,utilizando-se os meios residuais já referidose tendo como meio de controle o Erd-Schreiber, meio convencional de fácil prepa-ração e que tem dado bons resultados quandotestado em laboratório.

Bezerra da EMPARN (Empresa de PesquisaAgropecuária do Rio Grande do Norte). Asmesmas chegaram em tubosde ensaio de 10ml, estando em meio de cultura NH15' que éo utilizado pela EMPARN para a manutençãode pequenos volumes. As cepas foram dei-xadas por dois dias a uma temperatura de 24:t: 1°C, sob a iluminação de uma lâmpadafluorescente de 40 watts, a uma distância de15 cm. Vale salientar que estas mesmascondições de temperatura e luminosidadeforam mantidas durante todo o período da

experiência.Após o período de adaptação, fez-se

repicagem para tubos de ensaio de 10 ml,contendo o meio Erd-Schreiber, cuja compo-sição consta na Tabela 1, sendo 8 ml do meioe 2 ml de inóculo. Manteve-se os tubos sobiluminação constante, sendo periodicamenteagitados a fim de promover o arejamento domeio, 6 dias depois, foram colocados 20 mldo inóculo em 150 ml do meio Erd-Schreibere, após 5 dias, foram inoculados em umvolume de 1.000 ml do meio.

MATERIAL E MÉTODOSPara a realização deste estudo foram

utilizados cepas de Tetraselmis chuii, gentil-mente cedidos pela Pesquisadora Dilma

Tabela 1 - Composição dos Meios de 'Cultura no Cultivo de Tretraselmis chuii.

Componente Meio E-S Meio C-P Meio A-M Meio comBásico Erd-Schreiber Caldo de Peixe Á ua de matadouro Vinhoto

NaNO3 100 mg - -Na2 HPO4 H20 200 mg - -água do mar 1.000ml 1.000ml 1.000ml 1.000

ml50mlExtrato do solo

Extrato de peixeÁgua de lavagemde víscerasVinhoto

5ml50 m

5ml

digerido com água potável. Ocorre o escorri-

mento daquela água de cor esverdeada e uti-

lizada como fonte de nutrientes. Experiência

similar foi realizada por BARTOLOMEU et alii1,

com a diferença que a água residual que serviu

como matéria prima era proveniente da lavagem

da carcaça do boi. Deixou-se que a água co.-

letada decantasse, sendo em seguida filtrada

em papel filtro. O material filtrado foi autoclavado

e adicionado na concentração de 50, 100 e 150

ml do mesmo para cada litro de água do mar

filtrada e autoclavada.

A partir de 1.000 mio é que passou-se atestar as diversas concentrações de cada umadas substâncias residuais, tendo como meiode controle o Erd-Schreiber, considerando omeio convencional.

As matérias primas utilizadas comofertilizantes em cada um dos meios testadosforam as seguintes:- Água de matadouro - coletada nas instala-ções do Frigorífico Industrial de Fortaleza(FRIFORT)durante a lavagem doestômagodogado bovino, ao se remover o sólido semi-

92 Ciên Agron, Fortaleza, 24 (1/2) pág. 91-100 -- Junho/Dezembro, 1993

afirmações de GRIFFITH et alii4, citado porOLIVEIRA e KOENING7, no sentido de serpossivel a obtenção de mais de 100 x 104 cel/ml, utilizando-se meio artificial (Figuras 1, 2

e 7 e Tabela 3).

Tabela 3 - Densidade Celular de Tetraselmis chuiiem Meios Erd-Schreiber e Caldo de Peixe com Repe-

tições

DIADE Ixe

CULTIVO eloçãoInoculo o 56

1° 12 902° 35 12 98ao 43 92 39 604° 86 27 1565° BB 26 109 1446° 41 120 102 7070 24 110 177 63eo 30 11500 52 126 2

54 B479 506B B2

109 57'00 =

58

20110885

- Vinhoto - resíduo da destilação da cana-de-açúcar isento de álcool e que foi coletado apartir das piscinas de repouso. Formado peloacúmulo de vinhoto das instalaçõesda YpiócaAgroindustrial, em Maranguape - Ceará. Deigual maneira o material foi submetido adecantação e posterior esterilização emautoclave, sendo adicionado nas concentra-ções de 5, 10 e 20 ml para cada litro de águado mar filtrada e autoclavada.- Caldo de peixe - preparado misturando-se500 g de peixe (vísceras ou resíduos domesmo) com 2 litros de água estuarina,autoclavando-o para depois, retirar-se o líqui-do sobrenadante, adicionando-o na propor-ção de 5 ml por litro de água do mar filtradae autoclavada.

A partir do volume de 1.000 ml, osbioensaios tiveram aeração constante.

As contagens foram realizadas seisvezes por semana, sendo as amostragensfixadas em formol a 4%, utilizando-se a câ-mara de Neubauer.

De um modo geral, para cada experi-mento utilizou-se pelo menos uma repetição,e aqueles que apresentaram melhoresperformances tiveram uma segunda repeti-ção, a fim de se determinar a concentraçãoideal de cada componente.

A composição dos nutrientes dos dife-rentes meios de cultura pode ser observadana Tabela 2.

Tabela 2 - Análise de Nutrientes dos Meios de Cultura

Residuais Utilizados nos Experimentos

NUTRIENTE Meio C-P A-M (2) COM(mg/l) (1) VINHOTO

NO3 0,48 70,NO2 10,60 0,0 6,60PO4 48,20 100,0 250,0PH - - 34- '

(1) Segundo OLIVEIRA & KOENING7.

o caldo de peixe, que é consideradoum meio de cultura com fertilização orgânica,apresentou bons resultados nos dois experi-mentos (inicial e repetição), chegando a atin-gir 201 x 104 cel/ml no experimento inicial e156 x 104 cel/ml na repetição. Ambos forambastante superiores àqueles obtidos porOLIVEIRA e KOENING7 em diluição de 2,5e 1,25 ppm de caldo de peixe, resultando40,38 e 18,88 x 104 cel/ml, respectivamente(Figuras 3 e 4 e Tabelas 3 e 6).

A maior densidade alcançada em meiofertilizado, organicamente, com água dematadouro foi na diluição de 50 ppm, isto é,a de menor concentração das três que foramtestadas. Seu melhor desempenho corres-ponde a 130 x 104 cel/ml, alcançado no 4°.dia de cultivo em um volume de 1 .000 ml

(Figura 6 e Tabela 5).As outras concentrações da água de

matadouro (100 e 150 ppm), apre~entaramresultados inferiores à de 50 ppm, parecendoque a elevada concentração de água fertiliza-da dificultou o desenvolvimento da cultura, aoimpedir a passagem de luz, impedindo, emúltima análise, a fotossíntese e por apresen-tar, também, sedimentação de partículas daágua de lavagem, oque promove o crescimen-to de outros microorganismos alheios à cul-tura, sendo fonte de contaminação da mesma(Figuras 1 e 2 e Tabelas 4, 5 e 6).

RESULTADOS E DISCUSSÕESO meio Erd-Schreiber, que foi utilizado

neste trabalho como padrão, apresentou umdesenvolvimento homogêneo em todo o perí-odo do experimento, sendo sua maior densi-dade alcançado no 14°. dia de cultivo, naordem de 172 x 104 cel/ml, confirmando as

93Junho/Dezembro, 1993Ciên Agron, Fortaleza, 24 (1/2) pág 91-100

Tabela 4 - Densidade Celular de Tetraselmis chuii Utlizando-se Meios de Cultura Água de Matadouro e Vinhoto

em Diferentes Concentrações

DIADE

CULTIVO

Número de células/ml x 104~5~~~~T ua de matadouro

100 PPMInic. Re').

Vinhoto10PPM

Reo50 PPM

In;" Re'J.150 PPM

Inic. Reo.20 PPM

Inic Reo.

---5 PPM

Inic R..",Inic

lnóculo

1°2°3040506070ao9010011°12013014°

14 41103317

15

231368757628

6433353

22301275

1811

18

1246

2517

61221132212025

47328

2213363622

82

73

5108

24

4845

57

20181722123

74

51

581211579377

15220

6

73

391121301221033322512254352723

9101422

203

168

2411

22181524

712574876

121

581

82652121

25

4710

10

5

18

21

27

11

1O3O

16382189

2426

Obs.: ""InIc. = inicial~ = Repetição

Tabela 5 - Densidade Celular de Tetraselmis chuii Obtida em Três Bioensaios. Utilizando-se Água de Matadouroa 50 ppm e Vinhoto a 5 ppm com meios de Cultura

lnóculo

1°203040SOSO70ao9010011°12°130'AO

14 41103317

6152127

1098

51381211579377

15220

6

73

16B

2411

3811213012210333225122543524~~

22181524

~

465

132636182038Q

581O242I;

826521?1

163821RQ

181052

Tabela 6 - Melhores Resultados Obtidos deTetraselmis chuii em Diferentes Meios de Cultura

Vale ressaltar que a água de matadou-ro é uma matéria-prima cuja concentraçãopode variar muito, dependendo da ocasião dacoleta, podendo ser mais ou menos diluída.

No meio fertilizado com vinhoto, omelhor desempenho foida ordem de 142 x 104cel/ml, atingida no 7°. dia de cultivo, emvolume de 1.000 ml, sendo bastante superioràqueles alcançados por PADILLA8, utilizan-do extrato de solo, e GRIFFITH et alii4 usandofertilizante orgânico, citado por OLIVEIRA eKOENING7 (Figuras 5 e 7).

Com respeito ao vinhoto, a maior dilui-ção (5 ppm) revelou-se como sendo mais

Junho/Dezembro, 199394 Ciên Agron, Fortaleza, 24 (1/2) pág 91-100

celular, o que, em parte, talvez tenha ocorridopela presença de elevados teores de fosfato.Não foi determinado o teor de nitrato devinhoto, por este conter muito material sólidoem suspensão.

Acredita mos que o pouco sucesso ob-tido no segundo e terceiro bioensaios comvinhoto a 5 ppm, tenha a sua explicação emalguma alteração das características físico-químicas do produto, pelo tempo de armaze-namento a que esteve submetido sob refrige-

ração.

indicada entre as três testadas (5, 10 e 20ppm) e o resultado mais satisfatório corres-

ponde a 152 x 104 cel/ml, atingido no 5°. dia,isto no primeiro bioensaio,já que no segundoa maior densidade foi de 58 x 104 cel/ml no

8°. dia em 1.000 ml, não repetindo estaeficiência na repicagem posterior. Acredita-se que isto deveu-se à contaminação verificada

pela presença e crescimento de outrosflagelados, que tiveram uma melhor assimi-lação de nutrientes que a Tetraselmís.

As outras diluições (10 e 20 ppm),

alcançaram resultados baixos, verificando-seum decrésc:mo do número de células apóso inóculo, e, praticamente, não havendo cres-

cimento, mantendo-se apenas a densidade

o baixo valor do pH do vinhoto influen-ciou para que este meio de cultura não ob-tivesse um bom rendimento,já que o pH idealpara microalgas marinhas está na faixa de7,6 :t 1 (GOMES3).

dias

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dias

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Ci) 2 3 5 7-94 6 8 10 11 12

~

;.dias

(i) 1 32 4 5 7 8 96 10 11 12 13 14dias

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FIG.6 Desenvolvimento de Tetraselmis ~ nos diferentes meiosde cultura utilizados.

~

..,Q)(

E...u

o.c

g 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 II 12J(.)

'oz

CONCLUSÕES1 - O melhor resultado alcançado foi

com o meio de caldo de peixe, sendo consi-derada sua concentração ideal 5 ppm;

2 - A água de matadouro na concen-

tração de 50 ppm apresentou densidademáxima de 122 x 104 cel/ml. Nas concentra-

ções de 100 e 150 ppm, não apresentoucrescimento tão satisfatório;

3- Das considerações testadas comvinhoto, como fertilizante dos meios de cul-tura, a que apresentou melhor resultado foi ade 5 ppm, com 158 x 1 04 cel/ml de densidadecelular no primeiro bioensaio. Em concentra-

Ciên Aoron., Fortaleza. 24 (1/2): páo. 91-100 -- Junho/Dezembro, 199398

"3 4" 5 8 13 14-li) dias

ções superiores a densidade celular diminu íaà medida que a concentração do meio aumen-

tava;

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4 - Não evidenciou-se grandes diferen-

ças entre o meio Erd-Schreiber (meio contro-le) e os meios fertlizados com água de ma-tadouro (50 ppm) e com vinhoto (5 ppm), nãoexistindo diferenças entre os dois últimosentre si. Entretanto, mostrou-se diferentes omeio de caldo de peixe com os meios ante-riormente referidos, nas concentrações de 50ppm para água de matadouro e 5 ppm paravinhoto, e

5 - Os bons resultados alcançados nas

concentrações consideradas ideais para cadaum dos meios em estudo revelam a possibi-lidade de serem utilizados em larga escala,substituindo parcial ou totalmente os meiosde cultura convencionais, reduzindo-se as-sim os custos de produção do organismo aser cultivado.

99Ciên Aaron. Fortaleza. 2411/2) Dáa 91-100 -- Junho/Dezembro. 1993

8. PADIL, M. G. Crescimento poblacionalde Tetraselmis suecica(Chlorophyceae) em ambiente contro-lado. Apud: OLIVEIRA, A. A. G. de &KOENING, L. L. Crescimento expo-nencial de Tetraselmis chuii com fer-tilizantes orgânicos. Arq. Biol. Tecnol.,Recife, (27) 3:293-298., 1984.

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7. OLIVEIRA, A. A. G. de & KOENING, L.L.Crescimento exponencial de Tetraselmischuii com fertilizantes orgânicos. Arq. Biol.

Tecnol., Recife, (27) 3:293-298.,1984.

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