Congreso Nacional Laboratorio Clínico 2018 25/SalaA3PDF... · la información del diferencial leucocitario del analizador hematológico en el diagnóstico de patología relacionada

Congreso Nacional Laboratorio Clínico

2018


2018

AGRADECIMIENTOS

• Elena Sukhacheva, Manager global Scientific Affairs Hematology; Beckman Coulter (Switzerland)

• Àngels Doñate, Beckman Coulter Barcelona

• Juan Gimeno, Beckman Coulter Barcelona


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ALGORTIMOS DIAGNÓSTICOS


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Primer paso analítico: HematimetríaCriterios de revisión y validación de hemogramas

Datos hemograma

OBJETIVO: identificar patología hematológica y observación del frotis de sangre periférica

CytoDiffCongreso Nacional Laboratorio Clínico

2018

CBC/DiffResult

Normal WBC

Result

Validation

Reporting

Abnormal WBC

Result

Slidemaking Slide Staining

Manual Count Reporting

Pathology Review

Reporting

25%

75%

2%

“WORK FLOW” LABORATORIO HEMATIMETRÍA


2018

Marker Cellular Expression

CD36-FITC Monocitos, ERIs, Plaquetas

CD2-PE Linfocitos T, LGG (células NK), blastos LA-T

CD294-PE Eosinófilos, Basófilos, Linfocitos T activados

CD19-ECD Linfocitos B, blastos LA-B

CD16-PC5Neutrófilos, Monocitos pro inflamatorios (anormales), linfocitos T/NK CD16-positivos

CD45-PC7 Todos los leucocitos

Reactivo CytoDiff (6-marcadores, 5-colores)


2018

Ba

Classifier

B-Cell

Classifier

Non-WBC

Classifier

Mo

Classifier

IG-EO

Classifier LyT

Classifier

BlastOther

Classifier

Eo

Classifier Im Mo

Classifier

B Blast

Classifier Mo±

Classifier

Ly ±

Classifier

Ne

Classifier

El algoritmo CytoDiff propone una selección poblacional celular sencilla que facilita lainterpretación de resultados. 13 histogramas secuenciales conforman el diagramafinal reduciendo la complejidad.


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From CD19 gate From LyT&NK gate From IG & Eo gate

From Mo gateFrom CD36 gate


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Morphological population

Immunological populations

Pathological populations


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Region/Gate name Description

Xt T-Blasts

Xb B-blasts

Xn non-T and non-B Blasts

Xm Monoblasts

T+ CD16+ T and NK lymphocytes

T- CD16-negative T and NK lymphocytes

Mo+ Pro-inflammatory monocytes (CD16+)

Mo- Non-inflammatory monocytes (CD16-)

Información en % y # de las poblaciones celulares leucocitarias detectadasCongreso Nacio

nal Laboratorio Clínico 2018

CytoDiff populations Cytology populations

B ly = B-lymphocytes CD16 negative T/NK-lymphocytes CD16 positive T/NK lymphocytes

Lymphocytes

Mo=Monocytes CD16neg + Monocytes CD16pos

Monocytes

CD16pos SSChigh neutrophils Mature Neutrophils

Eosinophils Eosinophils

Basophils Basophils

CD16neg SSChigh immature granulocytes Immature granulocytes

Blasts=B-cell precursor +T-cell precursor +

Non B and non T precursor +Mono precursor

Blast cells

Estos parámetros nos aportan: 1. Información adicional para el diagnóstico y tratamiento del paciente2. Test de selección de patología como paso previo a paneles de citometria

especializados3. Inmunomonitorización (control celular de la sepsis, control inmunológico de la

aplicación de drogas inmunosupresoras e inmunoterapia)Congreso Nacional Laboratorio Clínico

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¿en qué puede contribuir?

• Aporta información adicional de elevada especificidad enpacientes con sospecha de enfermedad hematológica; laHematimetría suele ser el primer contacto del paciente con elproceso diagnóstico.

• En el seguimiento de pacientes con patología hematológicaconocida; detección de células anormales y/o inmaduras.

• Complementar los algoritmos diagnósticos basados en reglasexpertas de Hematimetria y ampliar/contrastar la informacióndel frotis de sangre periférica.Congreso Nacio


• El objetivo del estudio es comparar la identificación decélulas patológicas mediante la observación al microscopioóptico como método de referencia en el primer estadiodiagnóstico en el laboratorio de rutina y la detecciónmediante citometría de flujo WBC-Diferencial

• Se han estudiado hasta el momento 500 pacientes en losque el análisis del frotis de sangre periférica es requerido(reglas expertas, algoritmos diagnósticos, alarmas internasy/o criterios numéricos del hemograma).

• Se han incluido también pacientes Hematológicos yOncológicos en seguimiento.


2018

¿Cuándo hacemos Cytodiff?

• Linfocitosis absoluta; linfocitosis relativa (valorarel hemograma con alarmas y gráficas)

• Monocitosis absoluta (valorar evolución, historiaclínica del paciente)

• Pediátricos con alarmas y/o gráfico anormal• Gráfico anormal (no separación poblaciones

leucocitarias; mala distribución de laspoblaciones)

• Pancitopenia• Casos control


2018

0102030405060708090

100

UTILIDAD DE CYTODIFF:RESULTADOS POR PATOLOGIA


2018

VALORACIÓN INICIAL DEL ESTUDIO

• Estudiamos 75.000 hemogramas de pacientes deAtención Primaria

• 5.5% aparece alarma Abnormal Lympho

• 1.2% aparece alarma Atypical Lympho

• 2% de las muestras presentan Linfocitosis absoluta(>4.500 células)

• Se realizan frotis por diferentes reglas expertas yalgoritmos diagnósticos en un 3-5% del total demuestras.


2018

GRUPO PACIENTES SOSPECHA SLP• Estudio sobre 100 pacientes con sospecha de SLP (alarma,

linfocitosis, gráficos)

CONDICIÓN OBSERVADA N (sobre 100 pacientes)

LEUCOCITOSIS (>12.500X103/µl) 55

LINFOCITOSIS RELATIVA (>45%) 73

LINFOCITOSIS ABSOLUTA (>4.5X103/µl) 77 (Ẋ=11.6)

MONOCITOSIS ABSOLUTA (>1.000X103/µl) 40

LINFOCITOSIS Y MONOCITOSIS 36

ALARMAS EN EL HEMOGRAMA 78

ALARMA %

Abnormal Lympho 60

Atypical Lympho 20

Blasts/Abnormal Lympho? 14

Blasts? 6


2018

100 PACIENTES SOSPECHA DE SLP

FSP

PRUEBAS COMPLEMENTARIAS(INMUNOFENOTIPO,

ASPIRADO MO,SEROLOGIA)


2018

LINFOCITOSISALARMAS HEMOGRAMA

GRÁFICOS ALTERADOS

FROTIS SANGRE PERIFÉRICA


ASPIRADO MO…)


2018

Paciente de 65 años de edad, mujer, control por DM II linfocitosis progresiva de dosaños de evolución y citología de aspecto reactivo en anteriores revisiones del frotis.En el hemograma: linfocitosis de 6x103/µl; alarma Abnormal Lympho.


2018

Linfocitosis absoluta citológicamente de aspecto maduro, con alguna célulade citoplasma abundante y de carácter probablemente reactivo.Escasas sombras celulares. Se recomiendan controles evolutivos.Congreso Nacio


CytoDiff, sugiere población de predominio T (CD19 débil) y algunas célulasNK. Inmunofenotipo básico SLP: 78% CD3, 14% CD19 y 7% CD56. BUENA CORRELACIÓN ENTRE CYTODIFF E INMUNOFENOTIPO (citología)Congreso Nacio


Paciente de 60 años de edad, varón, con amputación extremidad IAntecedentes de Hemorragia rectal auto limitada. Absceso periungueal. Ligero MEG e insomnio. Control ordinario en Medicina Familiar.En el hemograma: linfocitos de 1.1 x103/µl; monocitosis de 15.2 x103/µl; sin alarmas.


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Linfocitosis absoluta con monocitopenia; CYTODIFF con presencia de población depredominio B pero con cluster celular de morfología atípica, ausencia de monocitos.Inmunofenotipo SLP, población CD19 75%, CD4 68%, CD8 28% y CD3 13%. Monoclonal.ES NECESARIO AMPLIAR ESTUDIO INMUNOFENOTIPO SLP (TRICOLEUCEMIA). Congreso Nacio


Paciente de 41 años de edad, varón, sin antecedentes de interés. Acude a urgencias por fiebre y MEG de dos semanas de evolución. Motivo consulta: edemas en EEII.Leucocitosis con linfocitosis y monocitosis; alteración del gráfico de dispersión.Anemia y trombopenia. LEUCOCITOSIS+ANEMIA+TROMBOPENIA. Alarma Blasts?


2018

LA(no B, no T)


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HEMATOLOGICALDISORDER

BLASTS FLAG % BLASTS CELLAVISION

% BLASTS CYTODIFF

AML SI 2 7

AML SI 71 91

AML-QT SI 1,3 1,81

AML-QT SI 33,5 38,6

AML final QT NO 0 0

AML DX SI 20 19,64

AML DX SI 45,5 35,29

SMD SI 11 15

SMD SI 3 4

SMD NO 1 1

MPD-MF SI 1 1

MPD-MF SI 1 1

MPD-MF SI 1 1

MPD-MF SI 18 17

MPD-MF SI 7 10

MPD-TE SI 27 31

CORRELACIÓN CIFRA BLASTOS(MICROSCOPIO vs CYTODIFF)

.Existe buena correlación

.Los resultados son mejores amenor cifra de células


2018


ASPIRADO MO…)

????

LINFOCITOSISAbnormal LymphoGráfico anormal

CYTODIFF:CD19%= 2.34NO BLASTOS

CYTODIFF:CD19%= 3.63NO BLASTOS


????

¿CYTODIFF ANTES?

¿CYTODIFF DESPUÉS?


2018

Normal WBC

Result

CBC/DiffResult

Validation Reporting

Abnormal WBC

Result

Pathology Review

25%

Remisol Middleware

Reflex CytoDiff Test

Analyze onFC 500

20%

CytoDiff Result

5%

Manual Diff

1%

+

ETAPA INTERMEDIA Y COMPLEMENTARIAA LA REVISIÓN CITOLÓGICA DE LAS

MUESTRAS PATOLÓGICAS


2018

60 FSP SUGESTIVOS SLPC30 FSP MORFOLÓGICAMENTE NORMALES

(8 linfocitosis progresivas; control evolutivo)4 FSP ASPECTO REACTIVO

(1 paciente con Mononucleosis Infecciosa)6 FSP SUGESTIVOS LGG

(100)

FROTIS SANGRE PERIFÉRICA

CYTODIFF CD19% >15: 40 PACIENTESCYTODIFF CD19% <15: 60 PACIENTES



2018

CYTODIFF CD19% >15: 40 PACIENTES CYTODIFF CD19% <15: 60 PACIENTES

30 NORMALES4 POBLACIÓN T+

8 POBLACIÓN T/NK1 LAM

43 PACIENTES40 SLPC

43 NO SLPC

¿17?


2018

8 SLPC CYTODIFF NORMAL PARA CD19%2 MONONUCLEOSIS

1 MONOCITOSIS MADURA1 TUMOR SÓLIDO

1 HIV1GM-MM

INMUNOFENOTIPO CITOMETRIA:

48 SLPC TIPO B8 SLP CD56

3 SLPT1 LAM

4 LINFOCITOSIS POLICLONAL B(64 PACIENTES)

30 LINFOCITOSIS MONOCLONAL B (LLC)6 LINFOCITOSIS MONOCLONAL B NO LLC

3 TRICOLEUCEMIAS2 LINFOMAS FOLICULARES

4 LEZM3 LDCGB

2 SD SEZARY1 SLPT

¿14?


2018

CONSIDERACIONES DE LA TÉCNICAXb46.46%¿Blastos?


2018

Xb41.46%¿Blastos?


2018

POBLACIÓN CD2-94+ (25,24%)¿BASÓFILOS?


2018

En conclusión:

CYTODIFF permite incrementar la especificidad y ampliarla información del diferencial leucocitario del analizadorhematológico en el diagnóstico de patología relacionadacon esta serie.

Se obtiene información útil en la orientación diagnósticade muestras que deben ser analizadas por citometría deflujo específica, aportando mayor seguridad y objetividada la citología del frotis de SP.

El análisis de las muestras es sencillo y rápido por que suuso resulta ágil en laboratorios de Hematología de rutina.


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