CHANG Medium For Human Amniotic Fluid Cells€¦ · aplicaciones: 1. Cultivo primario de células de líquido amniótico. 2. Cultivo de células del líquido amniótico derivadas

CHANG Medium® DFor Human Amniotic Fluid Cells

Catalog No. T105

ENGLISH

INTENDED USECHANG Medium D may be used for the following applications: 1. the primary culture of amniotic fluid cells 2. growing passaged amniotic fluid cells 3. the culture of bone marrow cells 4. solid amnion tissue from chorionic villi sampling.

This medium has been designed for use in CO2 incubators (cultures equilibrated with 5%-8% CO2 atmosphere).

Precaution: Do not use CHANG Medium D beyond the expiration date indicated on the label.

PRODUCT DESCRIPTION CHANG Medium® D was developed for the primary culture of human amniotic f luid cel ls for use in karyotyping and other antenatal genetic testing. This formula has been optimized for both flask and in situ methodologies.

STORAGE AND STABILITY Store CHANG Medium D frozen at -10°C. Unused CHANG Medium D can be refrozen or stored at 2°C to 8°C.

Protect from fluorescent light.

See bottle label for specific expiration date. CHANG Medium D may be refrozen a maximum of 2 times and stored thawed at 2°C to 8°C for 14 days without affecting its function. Storage for longer than 14 days is not recommended.

COMPONENTS mg/LSalts ………………………………………………….. 8515Dextrose ………………………………………………. 880Amino Acids …………………………………………… 804L-Glutamine …………………………………………… 257Polypeptides ………………………………………….. 189Vitamins …………………………………………………. 61Deoxyribonucleosides ………………………………… 35Ribonucleosides ……………………………………….. 35Sodium Pyruvate ………………………………………. 97Other Components ……………………………………… 9Steroid Hormones ………………………………... 0.0009Bovine Serum Proteins ………………………… 12% v/vPhenol Red ……………………………………………... 10

PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in procedures that include the indicated application for which the device is intended.

Do not use any bottle in which the sterile packaging has been compromised.

PREPARATION FOR USE 1. Thaw CHANG Medium D rapidly by swirling bottle

in a 37°C water bath. 2. Antibiotics may be added if desired.

ALIQUOTING CHANG MEDIUM D 1. Thaw CHANG Medium D according to instructions. 2. Distribute aseptically into convenient sized aliquots

and refreeze. 3. Thaw aliquots in 37°C water bath when ready to use.

DIRECTIONS FOR USE The pH of the medium used to feed the cultures must be between 6.8–7.2 (i.e. the medium must be slightly yellowish salmon color). pH can easily be adjusted by placing the medium in a 5%-8% CO2 incubator with the cap slightly loosened for about 30 minutes.

The final pH must be 6.8-7.2.

DEUTSCH

BESTIMMUNGSZWECKCHANG Medium D kann für folgende Methoden eingesetzt werden:1. Primär Kultur von Amnionzellen2. Kultur passagierter Amnionzellen3. Kultur von Knochenmarkszellen4. Amniongewebe aus Chorion Villi Probenentnahme.

D i e s e s M e d i u m w u r d e h e r g e s t e l l t für die verwendung in CO2 inkubatoren (KULTUREN EQUILIBRIERT MIT 5%-8% CO2 ATMOSPHÄRE). Siehe Gebrauchshinweise.

Achtung: CHANG Medium D sollte nicht über das verfallsdatum (siehe Etikett) hinaus verwendet werden.

PRODUKTBESCHREIBUNGCHANG Medium® D wird verwendet zur Primärkultur von humanen Amnionze l len , Karyotyp ing und anderen pränatalen genetischen Testmethoden. Die Zusammensetzung wurde sowohl für Flaschen- als auch für In Situ-Methoden optimiert.

LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITÄTCHANG Medium D gefroren bei -10° C. Ungebrauchtes CHANG Medium D kann wieder eingefroren oder bei 2° C to 8° C im Kühlschrank aufbewahrt werden.

Vor fluoreszierendem Licht schützen.

Das Verfallsdatum steht chargenspezifisch auf dem Flaschenetikett. CHANG Medium D kann maximal 2 mal wieder eingefroren werden oder bei 2° C bis 8° C für 14 Tage ohne Qualitätsverlust aufbewahrt werden. Eine längere Kühlschranklagerung kann nicht empfohlen werden.

BESTANDTEILE mg/LSalze ..................................................................8515Dextrose .......................................................................880Aminosäuren ................................................................804L-Glutamin ...................................................................257Polypeptides .................................................................189Vitamine .........................................................................61Deoxyribonukleoside .....................................................35Ribonukleoside ..............................................................35Natrium Pyruvat .............................................................97andere Komponenten………………………………………… 9Steroid Hormone .....................................................0.0009Bovine Serum Proteine…………………………………12% v/vPhenolrot ……………………………………………... 10

VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGENDiese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten.

Keine Flaschen verwenden, deren sterile Verpackung beschädigt wurde.

GEBRAUCHSVORBEREITUNG1. CHANG Medium D durch Schwenken im 37° C

Wasserbad schnell auftauen.2. Antibiotika können, falls gewünscht, zugefügt werden.

ALIQUOTIEREN VON CHANG MEDIUM D1. CHANG Medium D entsprechend den instruktionen

auftauen.2. Aseptisch in gewünschte aliquots aufteilen und

einfrieren.3. Aliquots vor gebrauch im 37° C wasserbad auftauen.

GEBRAUCHSHINWEISEDer pH des medium mit dem die Kulturen gefüttert werden, muss im Bereich 6.8–7.2 liegen. (d.h. das Medium sollte eine leichte gelb-rosa Färbung haben). Der pH kann einfach eingestellt werden, indem das Medium mit leicht geöffnetem Verschluss für ca. 30 Minuten in einen 5%-8% CO2 Inkubator gestellt wird.

Der pH Wert muss 6.8-7.2 betragen.

ITALIANO

SCOPOCHANG Medium D puo essere utilizzato nelle applicazioni seguenti:1. colture primarie di cellule di liquido amniotico2. colture secondarie di cellule di liquido amniotico3. colture di cellule di midollo osseo4. tessuto amniotico da villi coriali

Questo terreno e’ stato sviluppato per l’uso in incubatore con CO2 (Colture equilibrate in atmosfera con IL 5 - 8% diI CO2).

Precauzioni: Non usare i componenti del CHANG Medium C dopo la data di scadenza indicata sull’etichetta.

DESCRIZIONE DEL PRODOTTOCHANG Medium® D è stato sviluppato per colture primariedi cellule di fluido amniotico umano per la determinazione del cariotipo ed altri test genetici prenatali. QUESTA FORMULA È STATA OTTIMIZZATA PER SISTEMI IN FIASCA E METODOLOGIE IN SITU. IN SITU.

CONSERVAZIONE E STABILITÀConservare il CHANG Medium D congelato a una temperatura compresa tra -10 °C. Il CHANG Medium D non utilizzato può essere ricongelato o conservato a 2° - 8° C.

Proteggere dalla luce fluorescente.

Far riferimento alle etichette dei singoli componenti per le date di scadenza specifiche. Il CHANG MEDIUM D non può essere ricongelato per più di 2 volte; una volta scongelato può essere conservato a 2° - 8° C per 14 giorni prima dell’uso senza che le prestazioni risultino alterate. Si raccomanda di non conservarlo a 2-8 °C per più di 14 giorni.

COMPONENTImg/L

Sale ............................................................................... 8515Destrosio ........................................................................ 880Aminoacidi ....................................................................... 804Glutamina-L .................................................................... 257Polipeptidi ........................................................................ 189Vitamine ............................................................................ 61Desossiribonucleosidi .......................................................35Ribonucleosidi ..................................................................35Piruvato di Sodio .............................................................. 97Altri Componenti .................................................................. 9Ormoni Steroidei ........................................................ 0.0009Proteine Da Siero Bovino ............................................ 12% v/vRosso Fenolo ..................................................................... 10

PRECAUZIONI E AVVERTIMENTIQuesto dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo è previsto.

Non usare flaconi in cui la confezione sterile sia stata compromessa.

PREPARAZIONE PER L’USO1. Scongelare velocemente il CHANG Medium D

mescolando la bottiglia in un bagno di acqua a 37° C.2. Aggiungere gli antibiotici .

ALIQUOTARE IL CHANG MEDIUM D1. Scongelare CHANG Medium D secondo le istruzioni.2. Suddividere, in ambiente asettico, il terreno in aliquote

e ricongelare.3. Scongelare le aliquote in un bagno di acqua a 37° C

quando si devono usare.

ISTRUZIONI PER L’USOIL Ph del terreno utilizzato deve essere compreso tra 6.8 e 7.2 (il terreno deve avere un colore leggermente giallo tendente al salmone). Il pH può essere aggiustato facilmente ponendo il terreno in un incubatore con CO2 al 5% - 8% con il tappo svitato per circa 30 minuti.

Il pH finale deve essere fra 6.8 – 7.2.

Uso Del CHANG Medium D Per Colture Primarie:

ESPAÑOL

APLICACIÓNCHANG Mediumâ D se puede utilizar en las siguientes aplicaciones:1. Cultivo primario de células de líquido amniótico.2. Cultivo de células del líquido amniótico derivadas del

cultivo primario.3. Cultivo de células de médula ósea.4. Tejido amniótico sólido obtenido de vellosidades

coriónicas.

Este medio ha sido diseñado para ser utilizado en incubadores de co2 (cultivos equilibrados en una atmosfera con 5% - 8% co2).

El pH final debe ser de 6.8 a 7.2. Por favor ver Instrucciones de uso.

Precaución: No usar CHANG Medium D después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTOCHANG Medium® D es un medio desarrollado para el cultivo primario de células humanas de líquido amniótico, para análisis de cariotipo y otras pruebas genéticas de diagnóstico prenatal. Esta Formula Se Ha Optimizada Para Metodologias En Frasco E In Situ.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDADConservar CHANG Medium D congelado a -10°C. Una vez descongelado, se puede recongelar o se puede conservar refrigerado entre 2°C y 8°C.

Proteger este producto de la luz fluorescente.

CHANG Medium D es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el envase. Una vez descongelado, se puede conservar refrigerado entre 2ºC y 8ºC un máximo de 14 días sin que ello altere su funcionalidad. Es posible hacer alícuotas y recongelar CHANG Medium D un máximo de 2 veces.

COMPONENTESmg/L

Sales .................................................................. 8515Dextrosa ............................................................... 880Aminoácidos ......................................................... 804L-Glutamina .......................................................... 257Polipéptidos .......................................................... 189Vitaminas ............................................................... 61Desoxirribonucleósidos ........................................... 35Ribonucleósidos ..................................................... 35Piruvato de Sodio ................................................... 97Otros Componentes ................................................. 9Hormonas Esteroides ...................................... 0.0009Proteínas de Suero Bovino ............................ 12% v/vRojo Fenol .............................................................. 10

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIASEste disposit ivo debe ser uti l izado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación prevista para el mismo.

No usar frascos en los que el envase estéril esté dañado.

PREPARACIÓN DEL PRODUCTO 1. Descongelar CHANG Medium D rápidamente poniendo la

botella al baño María a 37ºC y moviéndola en círculos.2. Si se desea, se puede añadir antibióticos.

PARA ALICUOTAR CHANG MEDIUM D 1. Descongelar CHANG Medium D de acuerdo a las

instrucciones.2. En condiciones de esterilidad, distribuir en alícuotas de

tamaño conveniente, y recongelar.3. Descongelar las alícuotas al baño María a 37°C en el

momento de utilizarla.

INSTRUCCIONES DE USOEl pH usado de los medios debe estar entre 6.8 y 7.2 (el medio debe ser de color ligeramente asalmonado). El pH puede ajustarse fácilmente poniendo el medio en un incubador al 5% a 8% CO2, con el tapón ligeramente desenroscado durante unos 30 minutos.

El pH final debe ser de 6.8 a 7.2.

FRANÇAIS

UTILISATIONLe milieu CHANG D peut être utilisé pour les applications suivantes :1. La cul ture pr imaire des cel lu les du l iqu ide

amniotique.2. Le repiquage des cellules du liquide amniotique.3. La culture des cellules de la moelle osseuse.4. La culture des tissus des prélèvements de villosités

choriales.

Ce milieu est destiné à une utilisation en incubateur (CULTURES EQUILIBREES EN ATMOSPHERE CO2 (5%-8%)).

Attention: Ne pas utiliser le milieu de CHANG D au delà de la date d’expiration figurant sur l’étiquette.

DESCRIPTION DU PRODUITLe milieu de CHANG® D est développé pour la culture primaire de cellules amniotiques humaines utilisées pour les caryotypes et autres tests de diagnostic antenatal. Cette formule a été optimisée pour les systèmes ouverts et fermés.

CONSERVATION ET STABILITÉConserver le milieu de CHANG D congelé a -10°C. Le milieu de CHANG D non utilisé peut être recongelé ou conservé entre 2°C et 8°C.

Protéger de la lumière fluorescente.

La date d’expiration figure sur l’étiquette. Le milieu de CHANG D peut être recongelé 2 fois au maximum et conservé entre 2°C et 8°C pendant 14 jours sans altération de ses capacités. Il n’est pas recommandé de le conserver au delà.

COMPOSANTS mg/LSels .................................................................... 8515Dextrose ................................................................880Acides aminés ..............................................................804L-Glutamine ..................................................................257Polypeptides .................................................................189Vitamines ........................................................................61Désoxyribonucléotides ...................................................35Ribonucléotides ..............................................................35Pyruvate de sodium ........................................................97Autres composants ...........................................................9Hormones stéroïdes ................................................0.0009Protéines de Sérum Bovin ……………………………… 12% v/vRouge de phénol …………………………………………... 10

PRÉCAUTION ET MISE EN GARDECe dispositif est destiné à une utilisation par un personnel formé aux procédures comprenant l’application indiquée pour laquelle le dispositif est destiné.

Ne pas utiliser de flacon dont la stérilité de l’emballage a été compromise. PRÉPARATION DU MILIEU CHANG D1. Décongeler le milieu de CHANG D rapidement en

agitant le flacon dans un bain marie à 37°C.2. Ajouter les antibiotiques.

PRÉPARATION D’ALIQUOTS DE MILIEU DE CHANG D1. Décongeler le milieu de CHANG D en suivant les

instructions.2. Dist r ibuer s tér i lement en volumes ut i les et

recongeler.3. Décongeler les aliquots au bain marie à 37 °C avant

l’emploi.

INSTRUCTIONS D’UTILISATIONLe pH du milieu utilisé pour supplémenter les cultures doit être situé entre 6.8-7.2 (le milieu est légèrement rose clair). Le pH peut facilement être ajusté en plaçant le flacon dans un incubateur CO2 (5% - 8%), le bouchon légèrement dévissé, pendant 30 minutes.

Le pH final doit être entre 6.8-7.2.

Use of CHANG Medium D for Primary Cultures: in situ Methodologies

1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate the cells.

2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patient’s own amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 0.5 mL above the cell pellet and resuspend. Add sufficient CHANG Medium D to the concentrated cell suspension to allow for final plating volume of 0.5 mL per cover slip (total of 4 coverslips) or 2 mL per flaskette.

3. Incubate cultures undisturbed at 37° C 5%-8% CO2 atmosphere.

4. Flood cultures on day 2 by adding 2 mL of CHANG Medium D.

5. After 4 to 5 days, the cultures should be checked for growth. Cultures should be fed once growth has been observed. Feed cultures by removing all of the culture supernatant and replacing with 2 mL fresh CHANG Medium D. It is recommended that cultures be fed every 2 days thereafter.

6. Check cultures for growth on/or after day 5, and harvest when sufficient colonies are observed.

7. Best results are obtained when the cultures are fed with CHANG Medium D the day before the harvest.

Use of CHANG Medium D for Primary Cultures: Flask Methodologies


2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patient’s own amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 1 mL above the cell pellet and resuspend. Add 4 mL of CHANG Medium D for a total volume of 5 mL per flask.


4. Check for growth on day 5. Change medium with fresh CHANG Medium D and harvest if sufficient cell growth is observed.

5. Check cultures for growth and completely change medium every day thereafter until sufficient colonies are observed and are ready to harvest.


Use of CHANG Medium D for Growing Passaged Amniotic Fluid Cells:

To passage the cells, treat the cultures with trypsin (or pronase, etc.) as you would normally do when cells are grown in conventional medium. However, protease treatment should be carefully monitored. Amniotic fluid cells grown in CHANG Medium D tend to be more sensitive to protease treatment than amniotic fluid cells grown in conventional medium. It may be necessary to modify your protocol to take this into account.

Note: Calcium Oxalate crystals commonly form in CHANG Medium D. The presence of these crystals has not been shown to cause any detrimental effect on product performance.

QUALITY ASSURANCESTERILITY Serum used in the production of CHANG Medium D has been tested for viral contamination per CFR Title 9 Part 113.53. It has also been screened for mycoplasma contamination. CHANG Medium D is sterilized by filtration through a 0.1 µ filter. Samples of CHANG Medium D are tested for possible bacteriological contamination following the sterility testing protocol described in the current USP Sterility <71>.

CHANG Medium® is a registered trademark of Irvine Scientific.

Chang Medium D für Primärkulturen: In Situ Methoden

1. Amnionf lüssigkei t bei niedr igen Drehzahlen zentrifugieren, um die Zellen zu konzentrieren.

2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener Amnionflüssigkeit resuspendieren. zB: den Überstand von 10 ml der zentrifugierten Amnionflüssigkeit bis auf o,5 ml über dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. Ausreichend CHANG Medium D zu der konzentrierten Zellsuspension zugeben: 0.5 ml pro Deckglas (maximal 4 Deckgläser) oder 2 ml pro Kulturflasche

3. Kulturen ungestört bei 37° C in 5%-8% CO2 atmosphäre inkubieren.

4. Am 2. Tag die Kulturen mit 2 ml CHANG Medium D In fluten.

5. Nach 4 bis 5 Tagen sollte das Wachstum der Kulturen überprüft werden. Die Kulturen sollten gefüttert werden, sobald sie wachsen. Dazu wird der Zellkulturüberstand entfernt und durch 2 ml neues CHANG Medium D ersetzt. Danach sollten die Kulturen alle 2 Tage neu gefüttert werden.

6. Kulturwachstum am oder nach dem 5.Tag überprüfen, und wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.

7. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag vor der Ernte nochmals mit CHANG Medium D gefüttert wird.

Anwendung von CHANG Medium D für Primäre Kulturen: Flaschenmethode


2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener Amnionflüssigkeit resuspendieren. zB: den Überstand von 10 ml der zentrifugierten Amnionflüssigkeit bis auf 1 ml über dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. 4 mL of CHANG Medium D zugeben zu einem Gesamtvolumen 5 mL pro Kulturflasche.

3. Kulturen ungestört bei 37° C in 5%-8% CO2 Atmosphäre inkubieren.

4. Kulturwachstum am 5.Tag überprüfen. Medium mit frischem CHANG Medium D austauschen und bei ausreichendem Zellwachstum ernten.

5. Kulturwachstum 5.Tag überprüfen und jeden Tag das Medium vollständig tauschen bis ausreichend Kolonien vorhanden sind. Danach ernten.


Anwendung von CHANG Medium D zur Kultur passagierter amnionzellen

Zum Passagieren der zellen werden die kulturen mit Trypsin (oder Pronase, etc.) behandelt. Genau so, als wären die zellen in einem konventionellen Medium gewachsen. Allerdings sollte die Protease Behandlung sorgfältig beobachtet werden, da amnionzellen, die in CHANG Medium D kultiviert wurden, sensitiver reagieren als Zellen nach Behandlung in konventionellen Medien. Unter Umständen muss das protokoll entsprechend modifiziert werden.

Achtung: in CHANG Medium D bilden sich gewöhnlich Kalzium Oxalat Kristalle. Das Vorhandensein dieser Kristalle hat bislang keinen mindernden Einfluss auf das Zellwachstum gezeigt.

QUALITAETSSICHERUNGSTERILITÄTSerum für die Produktion von CHANG Medium D wurde auf virale kontamination nach CFR Title 9 Part 113.53 und mycoplasma kontamination getestet. CHANG Medium D wurde sterilisiert durch Filtration mit einem 0.1 µ filter. Proben von CHANG Medium D auf mögliche bakterielle kontamination getestet nach dem Sterilitäts Test Protokoll beschrieben unter Steril ität (durch aktuellen USP Sterility Test <71>).

CHANG Medium® ist ein eingetragenes Warenzeichen von Irvine Scientific.

Metodologie In Situ.

1. Centrifugare il fluido amniotico a velocita bassa per concentrare le cellule.

2. Risospendere il pellet cellulare in una piccola quantità di liquido amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino a 0.5 mL al di sopra del pellet e e risospendere. Aggiungere alla sospensione concentrata di cellule una quantità di CHANG Medium D sufficiente per ottenere un volume finale di 0.5 mL per coversplip per copertura (per un totale di 4 coverslip) o di 2 mL per fiasca.

3. Incubare le colture a 37° C in atmosfera 5%-8% CO2.4. Al secondo giorno, aggiungere 2 mL di CHANG Medium

D alle colture.5. Dopo 4 o 5 giorni, controllare la crescita delle colture.

Arricchire le colture non appena si osserva una crescita rimuovendo il surnatante e sostituendolo con 2 mL di CHANG Medium D fresco. Si raccomanda di continuare ad arricchire le colture in questo modo ogni 2 giorni.

6. Controllare la crescita delle colture dopo 5 giorni, e prelevarle quando si osservano un numero sufficiente di colonie.

7. Risultati migliori si ottengono arricchendo con CHANG MEDIUM D le colture il giorno prima della raccolta.

Uso Di CHANG D Per Colture Primarie: Metodologie In Fiasca

1. Centrifugare il liquido amniotico a bassa velocità per concentrare le cellule.

2. Risospendere il pellet in una piccola quantità di liquido amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino a 1 mL al di sopra del pellet e risospendere. Agguingere 4 mL di CHANG Medium D per ottenere un volume totale di 5 mL per fiaschetta.

3. Incubare le colture a 37° in atmosfera al C 5%-8% CO2 8% CO2.

4. Controllare la crescita al 5° giorno . Sostituire il terreno con CHANG Medium D fresco e raccogliere se si osserva una sufficiente crescita cellulare.

5. Controllare la crescita e sostituire il terreno ogni giorno successivo al quinto fino a che le colonie sono in quantità sufficiente e pronte per la raccolta.

6. Migliori risultati si ottengono con colture arricchite con CHANG Medium D il giorno prima della raccolta.

Uso Di CHANG Medium D Per Colture Secondarie Di Liquido Amniotico

Per trasferire le cellule, trattare le colture con tripsina (o pronase, etc.) come nel caso di colture in terreno convenzionale. In ogni caso il trattamento con proteasi deve essere accuratamente monitorato. Le cellule di liquido amniotico coltivate in CHANG Medium D tendono a essere più sensibili al trattamento con proteasi rispetto cellule di liquido amniotico coltivate in un terreno tradizionale. In ragione di ciò può essere necessario modificare il protocollo.

Nota: Nel CHANG Medium D si possono formare cristalli di Ossalato di Calcio. La presenza di questi cristalli non alterano nè la qualità ne le performance del prodotto.

ASSICURAZIONE DI QUALITÀSTERILITA’Il siero utilizzato per la produzione di CHANG Medium D è stato testato per escludere contaminazione virale seguendo la procedura CFR Titolo 9 Parte 113.53. Il siero è stato testato anche per determinare eventuali contaminazioni da micoplasma. Il CHANG Medium D è sterilizzato per filtrazione mediante un filtro da 0.1 mm e sono testati per escludere eventuale contaminazione batteriologica seguendo il protocollo delle prove di sterilità descritto nella corrente test di sterilità USP <71>.

CHANG Medium® è un marchio registrato di Irvine Scientific.

Utilización De CHANG Medium D En Cultivos Primarios: Metodología In Situ1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para

concentrar las células.2. Resuspender el precipitado de células en un volumen

pequeño del propio líquido amniótico de la paciente. Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 0.5 mL de líquido, y resuspender. Añadir suficiente CHANG Medium D a la suspensión concentrada de células para alcanzar un volumen de cultivo final de 0.5 mL por cubre-objetos (un total de 4 cubre-objetos por muestra), o 2 mL por frasco.

3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en una atmosfera de 5% - 8% CO2.

4. En el día 2 del cultivo, añadir 2 mL de CHANG Medium D.

5. A los 4 o 5 días, comprobar el crecimiento en los cultivos. Una vez que se observe crecimiento, aspirar todo el medio de cultivo y añadir 2 mL de CHANG Medium D fresco. A partir de este momento, es recomendable cambiar el medio de los cultivos cada 2 días.

6. Comprobar el crecimiento de los cultivos durante o después del quinto día, y sacrificar cuando se observe que hay suficientes colonias.

7. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un cambio de medio con CHANG Medium D el día anterior al sacrificio.

Utilización de CHANG Medium D en cultivos primarios: Metodología en frasco.1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para

concentrar las células.2. Resuspender el precipitado celular en un volumen

pequeño del propio líquido amniótico de la paciente. Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 1 mL de líquido y resuspender. Añadir 4 mL de CHANG Medium D para obtener un volumen total de 5 mL por frasco.

3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en una atmósfera de 5% - 8% CO2.

4. Revisar el crecimiento en el día 5. Cambiar el medio por CHANG Medium D fresco y sacrificar el cultivo si observa un crecimiento suficiente .

5. Comprobar el crecimiento de los cultivos y cambiar completamente el medio cada día de aquí en adelante, hasta observar un número suficiente de colonias para sacrificar.


Utilización De CHANG Medium D En El Cultivo De Células Del Líquido Amniótico Derivadas De Cultivo Primario.

Para realizar pases de los amniocitos cultivados, tratar los cultivos con tripsina ( o pronasa, etc.) como se tratan normalmente las células en un medio convencional. Los amniocitos cultivados en Medio CHANG D tienden a ser más sensibles al tratamiento con proteasas que los cultivados en medios convencionales. Aunque se puede utilizar el mismo tratamiento con tripsina, pronasa, etc..., es recomendable controlar el proceso para reajustar el protocolo en caso que sea necesario.

Nota: Es posible la formación de Cristales de Oxalato de Calcio CHANG Medium D. No se ha demostrado que la presencia de esos cristales alteren el funcionamiento de este producto.

CONTROL DE CALIDADESTERILIDADEl suero usado en la producción de CHANG Medium D se ha testado para contaminación viral de acuerdo a la normativa CFR capítulo 9, apartado 113.53. Asímismo, se ha comprobado la contaminación por Micoplasma. CHANG Medium D está esterilizado por fitración en filtros de 0.1 micras. Las muestras de CHANG Medium D se comprueban para posible contaminación bacteriológica siguiendo los protocolos de esterilidad descritos en el test de esterilidad USP <71> actual.

CHANG Medium® es una marca registrada de Irvine Scientific.

Utilisation Du Milieu CHANG D Pour Cultures Primaires: Methode In Situ

1. Centrifuger le liquide amniotique à 1000 tours/min pendant 5 minutes pour concentrer les cellules.

2. Resuspendre le culot dans un petit volume du liquide amniotique de la patiente. Par exemple, aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml de liquide amniotique et resuspendre le culot dans 0,5 ml de ce liquide. Ajouter suffisamment de milieu de CHANG D au culot de cellules concentrées resuspendues pour obtenir un volume final nécessaire pour 4 lamelles (0,5 ml par lamelle) ou 2 ml par flaskette.

3. Incuber les cultures sans agitation à 37°C en atmosphère CO2 (5% - 8%).

4. Alimenter les cellules à J2 en ajoutant 2 ml de milieu de CHANG D.

5. Après 4 à 5 jours, la croissance des cultures doit être surveillée. Dès que des foyers ont été observés, les cultures doivent être supplémentées en enlevant le surnageant et en le remplaçant par 2 ml de milieu de CHANG D frais. Il est ensuite recommandé de changer le milieu tous les 2 jours.

6. Analyser la croissance des cellules au jour 5 et après et récolter les cellules lorsque suffisamment de colonies sont observées (15 à 20).

7. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cultures sont supplémentées la veille de la récolte avec du milieu de CHANG D frais.

Utilisation Du Milieu CHANG D Pour Cultures Primaires: Methode En Flacon


2. Resuspendre le culot dans un petit volume du liquide amniotique de la patiente. Par exemple, aspirer le surnageant obtenu par la centrifugation de 10 ml de liquide, ajouter 1 ml de ce liquide au culot et resuspendre. Ajouter 4 ml de milieu de CHANG D pour un volume total de 5 ml par flacon.

3. Incuber les cultures à 37 °C en atmosphère CO2 (5% - 8%).

4. Analyser la croissance à J5. Remplacer le milieu par du CHANG D frais et récolter si une croissance suffisante est observée.

5. Analyser les cultures et changer complètement le milieu tous les 2 jours jusqu’à ce que suffisamment de colonies soient observées et prêtes à être récoltées.

6. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cellules sont supplémentés la veille de la récolte.

Utilisation Du Milieu CHANG D Pour Le Repiquage Des Cellules Du Liquide Amniotique

Pour les subcultures, traiter les cultures avec la trypsine (ou pronase, etc.) comme vous le faites normalement lorsque les cellules poussent dans un milieu conventionnel. Cependant, le traitement avec des protéases doit être conduit prudemment. Les cellules amniotiques qui croissent dans le milieu de CHANG D ont tendance à être plus sensibles aux protéases que celles qui poussent dans un milieu traditionnel. Il est nécessaire d’en tenir compte dans votre protocole.

Note: Des cristaux d’oxalate de calcium sont susceptibles de se formr dans le milieude CHANG D. La présence de ces cristaux n’altèrent en rien les performances du milieu.

ASSURANCE QUALITÉSTÉRILITÉLe sérum utilisé pour la production du milieu de CHANG D est testé pour les contaminations virales et par mycoplasmes (CFR 9 title part 113.53). Le milieu de CHANG D est stérilisé par filtration avec des filtres de 0,1 µm. Des échantillons de milieu de CHANG D sont testés pour une éventuelle contamination bactérienne en suivant le protocole de contrôle de stérilité décrit dans les tests de stérilité courants de la pharmacopée américaine (USP) <71>.

Milieu CHANG® est une marque déposée de Irvine Scientific.

2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705 USATelephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706

Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.comPN 40281 Rev.8

For in vitro diagnostic use.

Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.

Per uso diagnostico in vitro.

Para uso en diagnóstico in vitro.

Pour l’usage diagnostique in vitro.

Para a utilização em diagnóstico in vitro.

Για in vitro διαγνωστική χρήση.

In vitro diagnostikum.

Til in vitro-diagnostik.

In vitro diagnostiseen käyttöön.

Lietošanai in vitro diagnostikā.

Voor in vitro diagnostisch gebruik.

Do stosowania w diagnostyce in vitro.

Pentru utilizarea fertilizării in vitro

För in vitro-diagnostik.

In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.

In vitro diagnosztikai célra.

Skirta in vitro diagnostikos tyrimams.

In vitro diyagnostik kullanım için.

European RepresentativeMPIESchutweg 13A5145 NP Waalwijk, The Netherlands

See instructionsfor use.

0050

Storage Temperature

Sterilized using aseptic processing techniques

(filtration)

Catalog Number

Expiration: Year - Month - Day

Lot Number

Caution, consult accompanying documents

CE Mark

Emergo Europe - Prinsessegracht 202514 AP The Hague

The Netherlands

Manufacturer: Irvine Scientific®

Glossary of Symbols*:

*Symbol Reference - EN ISO 15223-1, Medical devices – Symbols to be used with medical device labels, labeling.

PORTUGUÊS

UTILIZAÇÃO PREVISTAO CHANG Medium D pode ser utilizado nas seguintes aplicações:1. Cultura primária de células de líquido amniótico.2. Cultura de células do líquido amniótico derivadas da

cultura primária.3. Cultura de células de medula óssea.4. Tecido amniótico sólido obtido de amostras de

vilosidades coriónicas.

Este meio foi concebido para ser utilizado em incubadoras de co2 (culturas equilibradas numa atmosfera com 5% - 8% co2).

Atenção: Não utilizar o CHANG Medium D depois da data de expiração indicada no rótulo.

DESCRIÇÃO DO PRODUTO O CHANG Medium® D foi desenvolvido para a cultura primária de células humanas de líquido amniótico, para análises de cariótipo e outras provas genéticas de diagnóstico pré-natal. ESTA FÓRMULA ESTÁ OPTIMIZADA PARA METODOLOGIAS EM RECIPIENTE E IN SITU.

CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADEConservar o CHANG Medium D congelado -10°C. Uma vez descongelado, o CHANG Medium D pode ser recongelado ou conservado refrigerado entre 2°C e 8°C.

Proteger este produto da luz fluorescente.

O CHANG Medium D é estável até à data de expiração indicada no rótulo do frasco. Uma vez descongelado, pode ser recongelado no máximo 2 vezes e conservado refrigerado entre 2ºC e 8ºC no máximo 14 dias sem alterar a sua funcionalidade. O armazenamento para além de 14 dias não é recomendado.

COMPONENTES

mg/LSais .................................................................... 8515Dextrose ............................................................... 880Aminoácidos ......................................................... 804L-Glutamina .......................................................... 257Polipéptidos .......................................................... 189Vitaminas ............................................................... 61Desoxirribonucleósidos ........................................... 35Ribonucleósidos ..................................................... 35Piruvato de Sódio ................................................... 97Outros Componentes ............................................... 9Hormonas Esteróides ...................................... 0.0009Proteínas de Soro Bovino .............................. 12% v/vVermelho de Fenol .................................................. 10

PRECAUÇÕES E AVISOSEste dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados em procedimentos aos quais se destina.

Não use nenhum frasco em que o embalamento esterilizado tenha sido comprometido.

PREPARAÇÃO DO PRODUTO 1. Descongelar o CHANG Medium D rapidamente pondo

o recipiente em banho Maria a 37ºC e agitando com movimentos circulares.

2. Se desejar, pode adicionar antibióticos.

PARA ALIQUOTAR O CHANG MEDIUM D 1. Descongelar o CHANG Medium D de acordo com as

instruções.2. Em condições de esterilidade, distribuir em alíquotas

de tamanho conveniente, e recongelar.3. Descongelar as alíquotas em banho Maria a 37°C no

momento de utilização.

INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃOO pH do meio utilizado deve estar entre 6.8 e 7.2 (o meio deve apresentar uma coloração ligeiramente cor de salmão). O pH pode ajustar-se facilmente colocando o meio numa incubadora a 5% - 8% CO2, com a tampa ligeiramente desenroscada durante 30 minutos.

ΕΛΛΗΝΙΚΆ

ΕΠΙΔΙΩΚΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το CHANG Medium D μπορεί να χρησιμοποιηθεί στις παρακάτω εφαρμογές: 1. την πρωτογενή καλλιέργεια κυττάρων αμνιακού υγρού 2. την ανάπτυξη κυττάρων διόδου αμνιακού υγρού 3. την καλλιέργεια κυττάρων μυελού των οστών 4. την δειγματοληψία συμπαγούς ιστού αμνίου από

χοριακές λάχνες

Το παρόν μέσο έχει σχεδιαστεί για χρήση σε επωαστήρες CO2 (καλλιέργειες ισορροπημένες με ατμόσφαιρα 5%-8% CO2).

Προσοχή: Μην χρησιμοποιείτε το CHANG Medium D πέραν της ημερομηνίας λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα.

ΠΕΡΙΓΡΆΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Το CHANG Medium® D δημιουργήθηκε για την πρωτογενή καλλιέργεια ανθρώπινων κυττάρων αμνιακού υγρού, για χρήση σε καρυοτυποποίηση και άλλες προγεννητικές γενετικές εξετάσεις. Η παρούσα σύνθεση έχει βελτιστοποιηθεί τόσο για μεθοδολογίες φιαλιδίου όσο και μεθοδολογίες in situ.

ΦΥΛΆΞΗ ΚΆΙ ΣΤΆΘΕΡΟΤΗΤΆΦυλάσσετε το CHANG Medium D κατεψυγμένο στους -10°C. Προϊόν CHANG Medium D που δεν έχει χρησιμοποιηθεί, μπορεί να καταψυχθεί εκ νέου ή να φυλαχτεί σε θερμοκρασία 2°C έως 8°C.

Προστατεύετε από το φως φθορισμού.

Βλ. Ετικέτα φιάλης για συγκεκριμένη ημερομηνία λήξης. Το CHANG Medium D μπορεί να ψυχθεί εκ νέου για μέγιστο 2 φορών και να φυλαχτεί αποψυγμένο σε θερμοκρασία 2°C έως 8°C για 14 ημέρες χωρίς να επηρεαστεί η λειτουργία του. Φύλαξη για περισσότερες από 14 ημέρες δεν συστήνεται.

ΥΣΤΆΤΙΚΆ mg/LΆλατα …………………………………………………. 8515Δεξτρόζη ………………………………………………. 880Αμινοξέα…………………………………………………. 804L-Γλουταμίνη ……………………………………………. 257Πολυπεπτίδια …………………………………………. 189Βιταμίνες…………………………………………………. 61Δεοξυριβονουκλεοζίτες …………………………………. 35Ριβονουκλεοζίτες …………………………………………. 35Πυροσταφιλικό Νάτριο …………………………………. 97Λοιπά Συστατικά …………………………………………. 9Στεροειδείς ορμόνες…………………………………. 0.0009Ορός Εμβρυϊκού Βοοειδούς ……………………. 12% v/vΕρυθρό Φαινόλης ………………………………………. 10

ΔΙΆΣΦΆΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΆΣΗ συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται η συσκευή.

Μη χρησιμοποιείτε οποιεσδήποτε φιάλες των οποίων η συσκευασία έχει διακυβευτεί.

ΠΡΟΕΤΟΙΜΆΣΙΆ ΧΡΗΣΗΣ 1. Αποψύξτε το CHANG Medium D γρήγορα,

στροβιλίζοντας τη φιάλη σε λουτρό νερού θερμοκρασίας 37°C.

2. Μπορείτε να προσθέσετε αντιβιοτικά, αν το επιθυμείτε.

ΔΙΆΜΟΙΡΆΣΜΟΣ ΣΕ ΥΠΟΠΟΛΛΆΠΛΆΣΙΆ ΤΟΥ CHANG MEDIUM D 1. Αποψύξτε το CHANG Medium D σύμφωνα με τις

οδηγίες. 2. Διανείμετε ασηπτικά σε πρακτικού μεγέθους

υποπολλαπλάσια και καταψύξτε ξανά. 3. Αποψύξτε τα υποπολλαπλάσια σε υδατολουτρό

θερμοκρασίας 37°C όταν είστε έτοιμοι να τα χρησιμοποιήσετε.

ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Το pH του μέσου που χρησιμοποιείται για

ČESKY

,URČENÉ POUŽITÍ CHANG Medium D lze použít k následujícím činnostem: 1. primární kultivace buněk z plodové vody 2. množení pasážovaných buněk z plodové vody 3. kultivace buněk kostní dřeně 4. odběr vzorků pevné amniotické tkáně z choriových klků.

Toto médium je určeno k použití v CO2 inkubátory (kultivace v atmosféře s 5-8 % CO2).

Upozornění: Nepoužívejte médium po uplynutí doby použitelnosti uvedené na štítku.

POPIS VÝROBKU CHANG Medium® D bylo vyvinuto k primární kultivaci lidských buněk z plodové vody pro účely karyotypizace a jiných genetických testů. Složení přípravku bylo optimalizováno pro kultivaci v lahvích i in situ.

UCHOVÁNÍ A STABILITA CHANG Medium D uchovávejte zmrazené při -10. Nespotřebovaný materiál lze znovu zmrazit nebo uchovávat při teplotě 2-8 °C.

Chraňte před fluorescenčním světlem.

Konkrétní datum použití najdete na štítku lahvičky. CHANG Medium D lze maximálně 2 x znovu zmrazit a rozmrazené skladovat při teplotě 2 až 8 °C po 14 dní bez zhoršení jeho funkčnosti. Skladování déle než 14 dní se nedoporučuje.

SLOŽKY mg/lSoli ……………………………………………………. 8515Glukóza …………………………………………………. 880Aminokyseliny …………………………………………….804L-glutamin ………………………………………………. 257Polypeptidy ……………………………………………. 189Vitamíny …………………………………………………….61Deoxyribonukleosidy ……………………………………. 35Ribonukleosidy……………………………………………. 35Pyruvát sodný ……………………………………………. 97Jiné složky …………………………………………………. 9Steroidní hormony …………………………………. 0,0009Hovězí sérové proteiny …………………………. 12 % obj.Fenolčerveň ………………………………………………. 10

BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ A VAROVÁNÍ Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou je zařízení určeno.

Nepoužívejte žádnou lahev s poškozeným sterilním balením.

PŘÍPRAVA K POUŽITÍ 1. Rychle médium rozmrazte kroužením lahví ve vodní

lázni vyhřáté na 37 °C. 2. V případě potřeby lze přidat antibiotika.

DÁVKOVÁNÍ MÉDIA 1. Médium rozmrazte podle pokynů. 2. Asepticky rozdělte do alikvotů o vhodné velikosti a

znovu zmrazte. 3. Před použitím alikvoty rozmrazte ve vodní lázni vyhřáté

na 37 °C.

POKYNY K POUŽITÍ pH média používaného k doplnění živin musí být v rozmezí 6,8–7,2 (médium tedy musí mít mírně nažloutlou lososovou barvu). pH lze snadno upravit vložením média s mírně povolenou čepičkou asi na 30 minut do inkubátoru s atmosférou 5-8 % CO2.

Výsledné pH musí být v rozmezí 6,8-7,2. Viz bod Pokyny k použití.

Použití média k primární kultivaci: kultivace in situ

1. Odstřeďte plodovou vodu při nízkých otáčkách a koncentrujte tak buňky.

2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodové

DANSK

ANVENDELSECHANG Medium D kan anvendes til følgende applikationer: 1. Primær dyrkning af amnionvæskeceller 2. Dyrkning af passerede amnionvæskeceller 3. Dyrkning af knoglemarvsceller 4. Solidt amnionvæv fra chorionvilliprøver

Dette medium er fremstillet til brug i CO2-inkubatorer (kulturer der er ti lpasset en atmosfære på 5-8 % CO2).

Forsigtig: CHANG Medium D må ikke anvendes efter udløbsdatoen på etiketten.

PRODUKTBESKRIVELSE CHANG Medium® D blev udviklet til primær dyrkning af humane amnionvæskeceller til karyotypebestemmelse og anden antenatal genetisk testning. Denne formulering er blevet optimeret til metodologier til såvel kolbe som in situ.

OPBEVARING OG STABILITET CHANG Medium D skal opbevares frossent ved -10 °C. Ubrugt CHANG Medium D kan nedfryses igen eller opbevares ved 2-8 °C.

Beskyttes mod fluorescerende lys.

Se udløbsdatoen på flaskens etiket. CHANG Medium D kan nedfryses højest 2 gange efter optøning og opbevares optøet ved 2-8 °C i 14 dage uden, at det påvirker dets virkning. Det anbefales ikke at opbevare det længere end 14 dage.

KOMPONENTER mg/l Salte ……………………………………………………. 8515Dekstrose ………………………………………………. 880Aminosyrer ………………………………………………. 804L-glutamin ………………………………………………. 257Polypeptider ……………………………………………. 189Vitaminer …………………………………………………. 61Deoxyribonukleosider ……………………………………. 35Ribonukleosider …………………………………………. 35Natriumpyruvat …………………………………………. 97Andre komponenter ………………………………………. 9Steroidhormoner ……………………………………. 0,0009Bovine serumproteiner ………………………. 12 % vol/volFenolrødt …………………………………………………. 10

FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.

Anvend ikke nogen flasker, hvor den sterile emballage er blevet kompromitteret.

FORBEREDELSE 1. Optø hurtigt CHANG Medium D ved at hvirvle flasken

i et 37 °C vandbad. 2. Antibiotika kan eventuelt tilsættes.

AFMÅLING AF CHANG MEDIUM D I MINDRE MÆNGDER 1. Optø CHANG Medium D ifølge vejledningen. 2. Fordel mediet aseptisk i mængder af passende størrelse

og nedfrys dem. 3. Optø de opdelte mængder i et 37 °C vandbad, når de

skal bruges.

BRUGSANVISNING pH-værdien af det medium, der anvendes til kulturerne, skal være 6,8-7,2 (dvs. at mediet skal have en let gullig laksefave). pH-værdien kan let justeres ved at anbringe mediet i en inkubator med 5-8 % CO2 med låget løsnet let i ca. 30 minutter.

Den endelige pH-værdi skal ligge på 6,8-7,2. Se brugsanvisningen.

SUOMI

KÄYTTÖSUOSITUSCHANG Medium D:tä voidaan käyttää seuraaviin sovellutuksiin: 1. amnionnesteen solujen primääriviljely 2. viljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujen

kasvatus 3. luuydinsolujen viljely 4. kiinteä amnionkudos korionvillusnäytteistä.

Tämä elatusaine on tarkoitettu käytettäväksi CO2-soluviljelykaapeissa (viljelmät tasapainotettu 5 % – 8 % CO2-ilmakehässä).

Varoitus: Älä käytä CHANG Medium D -elatusainetta etiketissä annetun viimeisen käyttöpäivän jälkeen.

TUOTTEEN KUVAUS CHANG Medium® D kehitettiin ihmisen amnionnesteen solujen primääriseen viljelyyn karyotyypitystä ja muuta antenataalista geneettistä testausta varten. Tämä koostumus on optimoitu sekä pullossa suoritettavia että in situ menetelmiä varten.

SÄILYTYS JA STABIILIUS Säilytä CHANG Medium D pakastettuna -10 °C. Käyttämätön CHANG Medium D voidaan pakastaa uudelleen tai säilyttää 2 °C – 8 °C.

Suojaa fluoresoivalta valolta.

Katso viimeinen käyttöpäivä pullon etiketistä. CHANG Medium D voidaan pakastaa uudelleen korkeintaan 2 kertaa ja sitä voidaan säilyttää sulaneena lämpötilassa 2 °C – 8 °C 14 päivää ilman että sen toiminta muuttuisi. Yli 14 päivän säilytystä ei suositella.

AINEOSATmg/l

Suolat …………………………………………………. 8515Dekstroosi ………………………………………………. 880Aminohapot ……………………………………………. 804L-glutamiini ………………………………………………. 257Polypeptidit ……………………………………………. 189Vitamiinit …………………………………………………. 61Deoksiribonukleosidit ……………………………………. 35Ribonukleosidit …………………………………………. 35Natriumpyruvaatti ………………………………………. 97Muut aineosat ……………………………………………. 9Steroidihormonit ……………………………………. 0,0009Naudan seerumiproteiinit ………………………. 12 % v/vFenolipuna ………………………………………………. 10

VAROTOIMET JA VAROITUKSET Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.

Pulloa ei saa käyttää, jos sen steriili pakkaus on vahingoittunut.

VALMISTELU KÄYTTÖÄ VARTEN 1. Sulata CHANG Medium D nopeasti pyörittämällä pulloa

37 °C:n vesihauteessa. 2. Muita antibiootteja voidaan lisätä haluttaessa.

CHANG MEDIUM D:n JAKAMINEN ERIIN 1. Sulata CHANG Medium D ohjeiden mukaan. 2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin)

ja pakasta uudelleen. 3. Sulata alikvootit 37 °C:n vesihauteessa kun olet valmis

käyttämään niitä.

KÄYTTÖOHJEET Vi l j e l m i e n r u o k k i m i s e e n k ä y t e t y n elatusaineen pH:n on oltava välillä 6,8–7,2 (eli elatusaineen on oltava väriltään hieman kellertävän lohenpunainen). pH:ta voidaan säätää helposti sijoittamalla elatusaine 5 % – 8 % CO2 soluviljelykaappiin noin 30 minuutiksi niin että korkki on hieman löysällä.

Lopullisen pH:n on oltava 6,8–7,2. Katso käyttöohjeet.

CHANG Medium D:n käyttö primääriviljelmiin: in situ menetelmät

O pH final deve ser entre 6.8 - 7.2.

Utilização de CHANG Medium D em culturas primárias: Metodologia In Situ.

1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade para concentrar as células.

2. Ressuspender o precipitado de células num volume pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando 0.5 mL de líquido, e ressuspender. Adicionar suficiente CHANG Medium D à suspensão concentrada de células para alcançar um volume de cultura final de 0.5 mL por lamela (num total de 4 lamelas), ou 2 mL por recipiente.

3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numa atmosfera de 5% - 8% CO2.

4. No dia 2 de cultura, adicionar 2 mL de CHANG Medium D.

5. Após 4 ou 5 dias, comprovar o crescimento das culturas. Uma vez que se observe crescimento, aspirar todo o meio de cultura e adicionar 2 mL de CHANG Medium D fresco. A partir deste momento, é recomendável mudar o meio de cultura de 2 em 2 dias.

6. Verificar o crescimento das culturas durante ou depois do quinto dia, e colher quando se observem números suficientes de colónias.

7. Obtém-se melhores resultados quando se muda o meio com CHANG Medium D no dia anterior à colheita.

Utilização de CHANG Medium D em culturas primárias: Metodologia em recipiente.


2. Ressuspender o precipitado de células num volume pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando 1 mL de líquido e ressuspender. Adicionar 4 mL de CHANG Medium D para obter um volume total de 5 mL por recipiente.


4. Verificar o crescimento ao dia 5. Mudar o meio por CHANG Medium D fresco e colher a cultura se observar um crescimento suficiente .

5. Verificar o crescimento das culturas e mudar completamente o meio todos os dias daqui para a frente até observar um número suficiente de colónias para colheita.


Utilização De CHANG Medium D Na Cultura De Células Do Líquido Amniótico Derivadas De Culturas Primárias.

Para passar as células cultivadas, tratar as culturas com tripsina (ou pronase, etc.) tal como se tratam normalmente as células num meio convencional. Contudo, o tratamento com pronase deve ser monitorizado cuidadosamente. Os amniócitos cultivados em Meio CHANG D tendem a ser mais sensíveis ao tratamento com proteases que os cultivados em meios convencionais. Tendo este aspecto em conta, pode ser por vezes necessário reajustar o protocolo.

Nota: É possível a formação de Cristais de Oxalato de Cálcio no CHANG Medium D. Não está demonstrado que a presença destes cristais altere o funcionamento deste produto.

CONTROLO DE QUALIDADEESTERILIDADEO soro utilizado na produção de CHANG Medium D foi testado para a contaminação viral de acordo com a norma CFR capítulo 9, parte 113.53. Foi também testado para a contaminação por Micoplasma. O CHANG Medium D é esterilizado por filtração com filtros de 0.1 micras. As amostras de CHANG Medium D foram testadas para a possível contaminação bacteriológica seguindo os protocolos de esterilidade descritos no teste de esterilidade actual da USP <71>.

CHANG Medium® é uma marca registada da Irvine Scientific.

τροφή των καλλιεργειών πρέπει να είναι 6.8–7.2 (δηλαδή το μέσο θα πρέπει να έχει ελαφρώς κίτρινο χρώμα σολομού). Το pH μπορεί να προσαρμοστεί εύκολα, τοποθετώντας το μέσο σε επωαστήρα 5%-8% CO2 με το πώμα ελαφρώς χαλαρό για περίπου 30 λεπτά.

Το τελικό pH πρέπει να είναι 6.8-7.2 Παρακαλούμε βλ.

Χρήση CHANG Medium D για Πρωτογενείς Καλλιέργειες: in situ Μεθοδολογίες

1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό σε χαμηλή ταχύτητα για συμπύκνωση των κυττάρων.

2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σε μικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Για παράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό των 10 mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε 0.5 mL πάνω από το κυτταρικό συσσωμάτωμα και ανα-αιωρείστε. Προσθέστε επαρκές CHANG Medium D στο συμπυκνωμένο κυτταρικό αιώρημα για να επιτρέψτε τελικό όγκο καλλιέργειας 0.5 mL ανά καλυπτρίδα (σύνολο 4 καλυπτρίδα) ή 2 mL ανά φιάλη.

3. Επωάστε τις καλλιέργειες χωρίς ταραχή στους 37°C 5%-8% CO2 ατμόσφαιρα.

4. Flood τις καλλιέργειες την 2η ημέρα, προσθέτοντας 2 mL CHANG Medium D.

5. Μετά από 4 έως 5 ημέρες, ελέγξτε την ανάπτυξη των καλλιεργειών. Οι καλλιέργειες πρέπει να θρέφονται αφού παρατηρηθεί ανάπτυξη. Θρέψτε τις καλλιέργειες αφαιρώντας όλο το υπερκείμενο υγρό και αντικαθιστώντας με 2 mL φρέσκου CHANG Medium D. Συστήνεται οι καλλιέργειες να θρέφονται κάθε 2 ημέρες μετά από αυτό.

6. Ελέγχετε την ανάπτυξη των καλλιεργειών στην / μετά την 5η ημέρα και συλλέξτε όταν παρατηρηθούν επαρκείς αποικίες.

7. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται όταν οι καλλιέργειες θρέφονται με CHANG Medium D την ημέρα πριν τη συλλογή.

Χρήση CHANG Medium D για Πρωτογενείς Καλλιέργειες: Μεθοδολογίες Προχοϊδών

1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό, σε χαμηλή ταχύτητα, για συμπύκνωση των κυττάρων.

2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σε μικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Για παράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό των 10 mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε 1 mL πάνω από το κυτταρικό συσσωμάτωμα και ανα-αιωρείστε. Προσθέστε 4 mL CHANG Medium D για συνολικό όγκο 5 mL ανά φιαλίδιο.

3. Επωάστε τις καλλιέργειες αδιατάρακτες στους 37°C 5%-8% CO2 ατμόσφαιρα.

4. Ελέγξτε την ανάπτυξη την 5η ημέρα. Αλλάξτε το μέσο με φρέσκο CHANG Medium D και συλλέξτε αν παρατηρείται επαρκής κυτταρική ανάπτυξη.

5. Ελέγξτε την ανάπτυξη των καλλιεργειών και αλλάξτε πλήρως το μέσο κάθε μέρα μέχρι να παρατηρηθούν επαρκείς αποικίες και να είναι έτοιμες για συλλογή.


Χρήση CHANG Medium D για Ανάπτυξη Κυττάρων Διόδου Αμνιακού Υγρού:

Για να σχηματίσετε διόδους στα κύτταρα, χορηγήστε στις καλλιέργειες θρυψίνη (ή προνάση, κλπ.) όπως θα κάνατε με κύτταρα που αναπτύσσονται σε συμβατικό μέσο. Ωστόσο, η χορήγηση πρωτεάσης θα πρέπει να ελέγχεται προσεκτικά. Τα κύτταρα αμνιακού υγρού που αναπτύσσονται σε CHANG Medium D τείνουν να είναι περισσότερο ευαίσθητα στην χορήγηση πρωτεάσης απ’ ότι τα κύτταρα αμνιακού υγρού που αναπτύσσονται σε συμβατικά μέσα. Μπορεί να χρειαστεί να τροποποιήσετε το πρωτόκολλό σας για να λάβετε υπόψη τα παραπάνω.

Σημείωση: Στο CHANG Medium D χρησιμοποιούνται συχνά κρύσταλλοι Οξαλικού Ασβεστίου. Η παρουσία αυτών των κρυστάλλων δεν έχει αποδειχθεί ότι έχει αρνητικές επιδράσεις στην απόδοση του προϊόντος.

vody stejné pacientky. Například odsajte supernatant z 10 ml plodové vody a ponechte jen 0,5 ml nad peletou. Poté znovu rozpusťte. Ke koncentrované buněčné suspenzi přidejte dostatečné množství CHANG Medium D, abyste měli 0,5 ml suspenze na jedno krycí sklíčko (celkem 4 krycí sklíčka) nebo 2 ml na kultivační lahvičku.

3. Inkubujte kultury v klidu při teplotě 37 °C a atmosféře 5-8 % CO2.

4. Druhý den kultury zalijte 2 ml přípravku CHANG Medium D.

5. Po 4 – 5 dnech zkontrolujte růst kultur. Jakmile začnou růst, je třeba dodat živiny. Odstraňte proto veškerý supernatant a nahraďte 2 ml čerstvého CHANG Medium D. Poté doporučujeme doplňovat živiny každé 2 dny.

6. Dále růst kultury kontrolujte průběžně a odeberte materiál, jakmile se vytvoří dostatek kolonií.

7. Optimálních výsledků dosáhnete odebráním materiálu den po přidání čerstvého média.

Použití média k primární kultivaci: kultivace v lahvích


2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodové vody stejné pacientky. Například odsajte supernatant z 10 ml plodové vody a ponechte jen 1 ml nad peletou. Poté znovu rozpusťte. Přidejte 4 ml přípravku CHANG Medium D do celkového objemu 5 ml na láhev.


4. Zkontrolujte růst 5. den. Vyměňte médium za čerstvé CHANG Medium D, a pokud je kultura dostatečně narostlá, odeberte materiál.

5. Poté denně kontrolujte růst kultury a zcela vyměňujte médium, dokud se nevytvoří dostatek kolonií a nejsou připraveny k použití.


Použití k množení pasážovaných buněk z plodové vody:

Chcete-li buňky pasážovat, ošetřete kulturu trypsinem (nebo pronázou atd.), jak to normálně provádíte u buněk pěstovaných v konvenčním médiu. Průběh ošetření proteázou však pečlivě monitorujte. Buňky z plodové vody kultivované v přípravku CHANG Medium D bývají citlivější na ošetření proteázou než buňky z konvenčního média. Možná bude nutné v tomto smyslu upravit protokol.

Poznámka: V médiu se běžně tvoří krystalky oxalátu vápenatého. Přítomnost krystalků není podle všeho na závadu funkci přípravku.

KONTROLA KVALITY STERILITA Sérum použité k produkci média bylo testováno na možnou virovou kontaminaci dle amerického předpisu CFR Title 9 Part 113.53. Byl proveden také screening možné kontaminace mykoplazmaty. Médium je sterilizováno filtrací přes 0,1µm filtry. Vzorky média jsou kontrolovány s ohledem na možnou kontaminaci, a to podle protokolu pro test sterility popsaného v aktuálním znění testu USP Sterility <71>.

CHANG Medium® je registrovaná ochranná známka společnosti Irvine Scientific.

Anvendelse af CHANG Medium D til primære kulturer: Metodologi in situ

1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for at koncentrere cellerne.

2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af patientens egen amnionvæske. Aspirer fx supernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til 0,5 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilsæt nok CHANG Medium D til den koncentrerede cellesuspension for at få en endelig volumen på 0,5 ml pr. dækglas (i alt 4 dækglas) eller 2 ml pr. ampul.

3. Inkubér kulturerne uforstyrret ved 37 °C i en atmosfære med 5-8 % CO2.

4. Skyl kulturerne på dag 2 ved at tilsætte 2 ml CHANG Medium D.

5. Efter 4-5 dage skal kulturernes vækst kontrolleres. Kulturerne skal forsynes med nyt medium, når vækst observeres. Dette gøres ved at fjerne hele kultursupernatanten og tilsætte 2 ml friskt CHANG Medium D. Det anbefales, at kulturerne forsynes med friskt medium hver 2. dag herefter.

6. Kontroller kulturernes vækst på/eller efter dag 5 og høst, når der kan observeres nok kolonier.

7. De bedste resultater opnås, hvis kulturerne forsynes med CHANG Medium D dagen inden, at de høstes.

Anvendelse af CHANG Medium D til primære kulturer: Metodologi med kolbe


2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af pa t ien tens egen amnionvæske. Asp i re r fx supernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til 1 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilsæt 4 ml CHANG Medium D, så den totale volumen er 5 ml pr. kolbe.


4. Kontroller væksten på dag 5. Udskift mediet med friskt CHANG Medium D og høst, hvis tilstrækkelig cellevækst kan observeres.

5. Kontroller kulturernes vækst og udskift mediet fuldstændigt hver dag herefter, indtil nok kolonier kan observeres, som er klar til at blive høstet.


Anvendelse af CHANG Medium D til dyrkning af passerede amnionvæskeceller:

Passage af cellerne opnås ved at behandle kulturerne med trypsin (eller pronase m.m.) som ved celler, der dyrkes i konventionelt medium. Proteasebehandling skal imidlertid overvåges nøje. Amnionvæskeceller, der dyrkes i CHANG Medium D, har en tendens til at være mere sensitive over for proteasebehandling end amnionvæskeceller, der dyrkes i konventionelt medium. Det kan være nødvendigt at ændre protokollen for at tage hensyn hertil.

Bemærk: Der dannes ofte kalciumoxalatkrystaller i CHANG Medium D. Tilstedeværelsen af disse krystaller lader ikke til at forårsage nogen skadelig effekt på produktets performance.

KVALITETSSIKRINGSTERILITET Det serum, der er anvendt til fremstilling af CHANG Medium D, er blevet testet for viruskontamination ifølge CFR Title 9 Part 113.53. Det er også blevet screenet for mykoplasmakontamination. CHANG Medium D er steriliseret vha. filtrering gennem et filter på 0,1 mikron. Prøver af CHANG Medium D er blevet testet for potentiel bakteriologisk kontaminering ifølge protokollen for sterilitetstesting som beskrevet i den aktuelle USP sterilitetstest <71>.

CHANG Medium® er et registreret varemærke tilhørende Irvine Scientific.

1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujen konsentroimiseksi.

2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen potilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi ime sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti 0,5 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoi uudelleen. Lisää riittävästi CHANG Medium D:tä konsentroituun solusakkaan, jotta lopul l inen maljaustilavuus on 0,5 ml per peitinlasi (kaikkiaan 4 peitinlasia) tai 2 ml per pieni pullo.

3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa 5 % – 8 % CO2-ilmakehässä.

4. Täytä viljelmät päivänä 2 lisäämällä 2 ml CHANG Medium D:tä.

5. Viljelmien kasvu tulee tarkistaa 4–5 päivän kuluttua. Viljelmiä on ruokittava kun kasvua on havaittu. Ruoki viljelmiä poistamalla kaikki viljelmän supernatantti ja vaihtamalla tilalle 2 ml tuoretta CHANG Medium D:tä. Suositellaan, että viljelmiä ruokitaan tämän jälkeen joka toinen päivä.

6. Tarkista viljelmien kasvu päivänä 5 tai sen jälkeen ja kerää solut, kun havaitset riittävän määrän pesäkkeitä.

7. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan CHANG Medium D:llä keräämistä edeltävänä päivänä.

CHANG Medium D:n käyttö primääriviljelmiin: pullossa suoritettavat menetelmät


2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen potilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi ime sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti 1 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoi uudelleen. Lisää 4 ml CHANG Medium D:tä niin, että kokonaistilavuus on 5 ml per pullo.


4. Tarkista kasvu päivänä 5. Vaihda elatusaine tuoreeseen CHANG Medium D:hen ja kerää, jos havaitset riittävää solujen kasvua.

5. Tarkista viljelmien kasvu ja vaihda elatusaine kokonaan joka päivä tämän jälkeen, kunnes riittävästi pesäkkeitä havaitaan ja ne ovat valmiita kerättäviksi.


CHANG Medium D:n käyttö viljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujen kasvattamiseksi:

Kun haluat antaa solujen jakautua viljelmässä, käsittele viljelmiä trypsiinillä (tai pronaasilla jne.), kuten normaalisti tekisit silloin kun soluja kasvatetaan tavanomaisessa elatusaineessa. Proteaasikäsittelyä on kuitenkin seurattava huolellisesti. Amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan CHANG Medium D:llä, on taipumus olla herkempiä proteaasikäsittelylle kuin amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan tavanomaisessa elatusaineessa. Protokollan muuttaminen tämän ottamiseksi huomioon saattaa olla tarpeen.

Huomaa: CHANG Medium D:hen muodostuu usein kalsiumoksalaattikiteitä. Näiden kiteiden läsnäolon ei ole osoitettu aiheuttavan mitään haitallista vaikutusta tuotteen suorituskykyyn.

LAADUNVARMISTUSSTERIILIYS CHANG Medium D:n tuotantoon käytettävästä seerumista on testattu viruskontaminaatio CFR Title 9 Part 113.53:n mukaisesti. Sille on myös tehty mykoplasmakontaminaatiota koskeva seulontatutkimus. CHANG Medium D steriloidaan suodattamalla 0,1 mikronin suodattimen läpi. CHANG Medium D -elatusaineen näytteistä testataan mahdollinen bakteriologinen kontaminaatio steriiliystestausprotokollan mukaisesti, joka on kuvattu nykyisessä USP-steriiliystestissä <71>.

CHANG Medium® on Irvine Scientificin rekisteröity tavaramerkki.

ΔΙΆΣΦΆΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΆΣΑΠΟΣΤΕΙΡΩΣΗ Ο ορός που χρησιμοποιείται στην παραγωγή CHANG Medium D έχει ελεγχθεί για ιογενή μόλυνση σύμφωνα με το CFR Title 9 Part 113.53. Έχει επίσης ελεγχθεί για μόλυνση μυκοπλάσματος. Το CHANG Medium D έχει αποστειρωθεί μέσω διήθησης με φίλτρο 0.1 εκατομμυριοστόμετρων. Δείγματα του CHANG Medium D ελέγχονται για πιθανή βακτηριολογική μόλυνση, ακολουθώντας το πρωτόκολλο ελέγχου στειρότητας που περιγράφεται στην τρέχουσα εξέταση Στειρότητας <71> της συνθήκης Φαρμακοποϊίας των ΗΠΑ.

Το CHANG Medium® είναι σήμα κατατεθέν της Irvine Scientific.


Catalog No. T105

ENGLISH

















DEUTSCH


















ITALIANO








COMPONENTImg/L












ESPAÑOL



coriónicas.








COMPONENTESmg/L












FRANÇAIS



choriales.














l’emploi.






























































































































0050

Storage Temperature


(filtration)

Catalog Number


Lot Number


CE Mark


The Netherlands




PORTUGUÊS










COMPONENTES












ΕΛΛΗΝΙΚΆ




















ČESKY















na 37 °C.






DANSK















skal bruges.



SUOMI









AINEOSATmg/l

















































































































Catalog No. T105

ENGLISH

















DEUTSCH


















ITALIANO








COMPONENTImg/L












ESPAÑOL



coriónicas.








COMPONENTESmg/L












FRANÇAIS



choriales.














l’emploi.






























































































































0050

Storage Temperature


(filtration)

Catalog Number


Lot Number


CE Mark


The Netherlands




PORTUGUÊS










COMPONENTES












ΕΛΛΗΝΙΚΆ




















ČESKY















na 37 °C.






DANSK















skal bruges.



SUOMI









AINEOSATmg/l

















































































































Catalog No. T105

ENGLISH

















DEUTSCH


















ITALIANO








COMPONENTImg/L












ESPAÑOL



coriónicas.








COMPONENTESmg/L












FRANÇAIS



choriales.














l’emploi.






























































































































0050

Storage Temperature


(filtration)

Catalog Number


Lot Number


CE Mark


The Netherlands




PORTUGUÊS










COMPONENTES












ΕΛΛΗΝΙΚΆ




















ČESKY















na 37 °C.






DANSK















skal bruges.



SUOMI









AINEOSATmg/l

















































































































Catalog No. T105

ENGLISH

















DEUTSCH


















ITALIANO








COMPONENTImg/L












ESPAÑOL



coriónicas.








COMPONENTESmg/L












FRANÇAIS



choriales.














l’emploi.






























































































































0050

Storage Temperature


(filtration)

Catalog Number


Lot Number


CE Mark


The Netherlands




PORTUGUÊS










COMPONENTES












ΕΛΛΗΝΙΚΆ




















ČESKY















na 37 °C.






DANSK















skal bruges.



SUOMI









AINEOSATmg/l
















































































































NEDERLANDS

BEDOELD GEBRUIKCHANG Medium D kan worden gebruikt voor de volgende toepassingen: 1. de primaire kweek van vruchtwatercellen 2. groeiende gepasseerde vruchtwatercellen 3. de kweek van beenmergcellen 4. vast amnionweefsel uit chorion villi-monsters.

Dit medium is bestemd voor gebruik in CO2-incubators (kweken die zijn geëquilibreerd met 5%-8% CO2-atmosfeer).

Voorzichtig: gebruik CHANG Medium D niet na de vervaldatum die op de sticker is vermeld.

PRODUCTBESCHRIJVING CHANG Medium® D werd ontwikkeld voor de primaire kweek van humane vruchtwatercellen voor gebruik bij karyotypering en ander prenataal genetisch onderzoek. Deze formule werd geoptimaliseerd voor zowel fles- als in situ-methoden.

BEWAREN EN STABILITEIT Bewaar CHANG Medium D bevroren bij -10 °C. Niet gebruikt CHANG Medium D kan opnieuw worden ingevroren of bewaard bij 2 °C tot 8 °C.

Beschermen tegen fluorescerend licht.

Zie flessticker voor de specifieke vervaldatum. CHANG Medium D mag maximaal 2 keer opnieuw worden ingevroren en ontdooid worden bewaard bij 2 °C tot 8 °C gedurende 14 dagen, zonder dat dit de werking beïnvloedt. Bewaren gedurende meer dan 14 dagen wordt afgeraden.

COMPONENTEN mg/lZouten …………………………………………………. 8515Dextrose …………………………………………………. 880Aminozuren ……………………………………………. 804L-glutamine ……………………………………………. 257Polypeptiden ……………………………………………. 189Vitaminen …………………………………………………. 61Deoxyribonucleosiden …………………………………. 35Ribonucleosiden …………………………………………. 35Natriumpyruvaat …………………………………………. 97Andere componenten ……………………………………. 9Steroïdehormonen …………………………………. 0,0009Runderserumeiwitten ……………………………. 12% v/vFenol rood ………………………………………………. 10

VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.

Een fles/Flessen waarvan de steriele verpakking beschadigd of op enige wijze in gevaar werd gebracht mag/mogen niet gebruikt worden.

VOORBEREIDING OP GEBRUIK 1. Ontdooi CHANG Medium D snel door de fles in een

37°C waterbad rond te draaien. 2. Antibiot ica kunnen, indien gewenst, worden

toegevoegd.

OPDELEN VAN CHANG MEDIUM D 1. Ontdooi CHANG Medium D volgens de aanwijzingen. 2. Verdeel het op aseptische wijze in gemakkelijk

hanteerbare delen en vries deze opnieuw in. 3. Ontdooi de delen in een 37 °C waterbad voordat u deze

gebruikt.

GEBRUIKSAANWIJZING De pH van het medium dat wordt gebruikt om de kweken te voeden moet liggen tussen 6,8 en 7,2 (d.w.z. het medium moet een lichtgele zalmkleur hebben). De pH kan iets worden aangepast door het medium met iets losgedraaide dop in een 5%-8% CO2-incubator te zetten gedurende 30 minuten.

De definitieve pH moet liggen tussen 6,8 en 7,2. Zie gebruiksaanwijzing.

POLSKI

ZASTOSOWANIEPożywka CHANG Medium D może być używana w następujących procedurach: 1. hodowla pierwotna komórek ludzkiego płynu

owodniowego 2. rosnące pasażowane komórki plynu owodniowego 3. hodowla komórek szpiku kostnego 4. biopsja stałej tkanki owodni z kosmówki.

Pożywka ta została wyprodukowana do użycia w inkubatorach CO2 (pożywki doprowadzone do równowagi w 5%-8% atmosferze CO2).

Środki ostrożności: Nie stosować CHANG Medium D po upływie daty ważności podanej na etykiecie.

OPIS PRODUKTU Pożywka CHANG Medium® C została wyprodukowana dla hodowli pierwotnej komórek ludzkiego płynu owodniowego do kariotypowania i przeprowadzania innych przedporodowych testach genetycznych. Ta procedura została zoptymalizowana zarówno dla metodologii in situ i zlewek.

PRZECHOWYWANIE I STABILNOŚĆ Przechowywać pożywkę CHANG Medium D zamrożoną w temperaturze od -10°C. Niezużytą część pożywki CHANG Medium D można zamrożić lub przechowywać w temperaturze od 2°C do 8°C.

Chronić przed światłem fluorescencyjnym.

Data ważności znajduje się na etykiecie butelki. Pożywka CHANG Medium D może być powtórnie zamrożona maksymalnie 2 razy lub przechowywana rozmrożona w temperaturze od 2°C do 8°C przez 14 dni bez negatywnego wpływu na jej działanie. Nie zaleca się przechowywania dłużej niż 14 dni.

SKŁADNIKI mg/lSole ……………………………………………………. 8515Dekstroza ……………………………………………… 880Aminokwasy …………………………………………… 804L-glutamina ……………………………………………… 257Polipeptydy ……………………………………………… 189Witaminy ………………………………………………… 61Dezoksyrybonukleozydy ………………………………… 35Rybonukleozydy ………………………………………… 35Pirogronian sodu ………………………………………… 97Inne składniki ……………………………………………… 9Hormony steroidowe ……………………………… 0.0009Białka surowicy bydlęcej ………………………… 12% v/vFenol Red ………………………………………………… 10

ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest przeznaczone.

Nie używać żadnej butelki, w której doszło do naruszenia jałowego opakowania.

PRZYGOTOWANIE DO UŻYCIA 1. Szybko rozmrozić CHANG Medium D przez obracanie

butelki w łaźni wodnej o temperaturze 37°C. 2. W razie potrzeby można zastosować dodatkowe

antybiotyki.

ROZDZIAŁ CHANG MEDIUM D NA ALIKWOTY 1. Rozmrozić CHANG Medium D zgodnie z instrukcjami. 2. Rozdzielić aseptycznie na odpowiednie wielkościowo

alikwoty i ponownie zamrozić. 3. Rozmrozić alikwoty w łaźni wodnej o temperaturze

37°C, gdy są gotowe do użycia.

INSTRUKCJE UŻYCIA pH pożywki używanej do odżywiania posiewów musi mieścić się w granicach 6,8 – 7,2 (tzn. kolor pożywki musi być lekko żółtawo-różowy). pH można łatwo dostosować przez umieszczenie pożywki przez około 30 minut w inkubatorze 5%-8% atmosferze CO2 z lekko poluzowaną zatyczką.

ROMÂNĂ

INDICAŢIILE UTILIZĂRII MEDIULUI CHANG Medium D poate fi utilizat pentru următoarele aplicaţii: 1. Cultura primară de lichidul de celule amniotice 2. Tranziţia celulelor lichidului amniotic în creştere 3. Cultura celulelor măduvei osase 4. Ţesutul solid de amniotic din mostrele chorionic villi

Acest mediu este destinat pentru folosirea în incubatorul CO2 (culturile echilibrate cu 5% -8 % CO2 atmosferic).

Precauţiunii: A nu se utiliza CHANG Medium D după data expirări indicate pe etichetele individuale.

DESCRIEREA PRODUSULUI CHANG Medium® D este destinat pentru culturile primare de celule din lichidul amniotic uman pentru utilizarea în cariotipuri şi alte analize prenatale genetice. ACEASTĂ FORMULĂ ESTE DESTINATĂ PENTRU AMBELE METODE flacon şi in situ.

MODUL DE PĂSTRARE ŞI TERMEN DE VALABILITATE Pastraţi CHANG Medium D congelat între -10 °C. CHANG Medium D nefolosit poate fi recongelat sau păstrat între 2 °C şi 8 °C.

Feriţi de lumina fluorescentă.

Vezi eticheta sticlei pentru data specifică a expirării. CHANG Medium D poate fi recongelat maximum de două ori şi păstrat decongelat între 2 °C şi 8 °C pentru 14 zile fără să afecteze proprietăţile. Nu se recomandă păstrarea peste 14 zile.

COMPONENŢIImg/L

Săruri............................................................................. 8515 Dextroză .......................................................................... 880 Aminoacizi ....................................................................... 804 Glutamine-L.................................................................... 257 Polipeptide ...................................................................... 189 Vitamine ............................................................................ 61 Dezoxiribonucleotide ......................................................... 35 Ribonucleotide .................................................................. 35 Piruvat de Sodiu .................................................................. 97 Alte Componente ................................................................ 9 Hormoni Steroizi ......................................................... 0.0009 Ser de Bovină fetală .................................................... 12% v/v Fenol Roşu ....................................................................... 10

AVERTISMENTE ŞI PRECAUŢIUNI Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru care a fost creat dispozitivul.

Nu utilizaţi niciun flacon al cărui ambalaj steril a fost compromis.

PREPARAREA PENTRU UTILIZARE 1. Decongelaţi CHANG Medium D repede prin învârtirea

flaconului în baie de apă la 37 ºC. 2. Antibiotice pot fi adăugate dacă doriţi.

ALICOTAREA CHANG MEDIUM D 1. Decongelaţi CHANG Medium D în conformitate cu

instrucţiunile. 2. Distribuiţi aseptic în porţiuni corespunzătoare de alicot

şi recongelaţi. 3. Decongelaţi alicotul în baie de apă la 37 °C când sunteţi

gata să utilizaţi.

INSTRUCŢIUNI PENTRU UTILIZARE Ph –ul MEDIULUI UTILIZAT SĂ HRĂNIŢI CULTURILE TREBUIE SĂ FIE ÎNTRE 6.8—7.2 (de exemplu mediul trebuie sĂ fie galben roz-portocaliu în culoare). pH-ul poate fi ajustat prin amplasarea mediului în 5% - 8% incubator CO2 cu capacul puţin slăbit.

Ph –ul final trebuie să fie între 6.8- 7.2.

SVENSKA

AVSEDD ANVÄNDNINGCHANG Medium D kan användas för följande tillämpningar: 1. primärodling av celler i amnionvätska2. odling av celler från amnionvätska i efterföljande

passage3. odling av benmärgsceller4. för fast vävnad från chorionvilli-prov.

Detta medium har tagits fram för användning i en CO2-inkubator (kulturerna ekvilibreras i en atmosfär med 5-8 % CO2) .

Obs! Använd inte CHANG Medium D efter det utgångsdatum som anges på etiketten.

PRODUKTBESKRIVNINGCHANG Medium® D har utvecklats för primärodling av celler i human amnionvätska för karyotypbestämning och andra antenatala genetiska tester. Denna näringslösning har optimerats för användning både i flaska och för in situ-metoder.

FÖRVARING OCH HÅLLBARHETCHANG Medium D skall förvaras fryst vid –10 °C. Oanvänt CHANG Medium D kan frysas på nytt eller förvaras vid 2-8 °C.

Skyddas från fluorescerande ljus.

Se flasketiketten för specifikt utgångsdatum. CHANG Medium D kan frysas ned igen högst 2 gånger och förvaras upptinat vid 2–8 °C i 14 dagar utan att dess funktion påverkas. Förvaring under längre tid än 14 dagar rekommenderas ej.

KOMPONENTER mg/L Salter …………………………………………………. 8515Dextros …………………………………………………. 880Aminosyror ………………………………………………. 804L-glutamin ………………………………………………….257Polypeptider ……………………………………………. 189Vitaminer …………………………………………………. 61Deoxiribonukleosider ……………………………………. 35Ribonukleosider …………………………………………. 35Natriumpyruvat …………………………………………. 97Andra komponenter ………………………………………. 9Steroider ……………………………………………. 0,0009Bovina serumproteiner ………………. 12 % volym/volym Fenolrött …………………………………………………. 10

FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH VARNINGARDenna produkt är avsedd att användas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade tillämpning för vilken produkten är avsedd.

Använd aldrig en flaska vars sterila förpackning inte är helt intakt.

BEREDNING FÖR ANVÄNDNING1. Tina CHANG Medium D snabbt genom att snurra

flaskan i ett 37 °C vattenbad. 2. Antibiotika kan tillsättas om så önskas.

ALIKVOTERING AV CHANG MEDIUM D 1. Tina CHANG Medium D enligt anvisningarna. 2. Fördela mediet aseptiskt i alikvoter av lämplig storlek

och frys ner dem på nytt. 3. Tina alikvoterna i ett 37 °C vattenbad när de skall

användas.

BRUKSANVISNINGpH i det medium som används för näringstillförsel till kulturerna måste vara mellan 6,8–7,2 (dvs. mediet måste ha svagt gulaktig-laxfärg). pH kan enkelt justeras genom att mediet placeras i en 5–8 % CO2-inkubator med locket lätt lossat i cirka 30 minuter.

Det slutliga pH måste vara 6,8–7,2. Se bruksanvisningen.

EESTI

KASUTUSVALDKOND Söödet CHANG Medium D võib kasutada järgmisteks rakendusteks:1. amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimine 2. passaaži läbinud amnionivedeliku rakkude kasvatamine 3. luuüdirakkude kultiveerimine4. kõldkestahattudest tahkete amnioni kudede proovide

võtmine.

See sööde on koostatud kasutamiseks CO2-inkubaatoris (5%...8% CO2-atmosfääris tasakaalustatud kultuurid).

Ettevaatust: Ärge kasutage söödet CHANG Medium D pärast etiketile märgitud kõlblikkusaja lõppu.

TOOTE KIRJELDUS Sööde CHANG Medium® D arendati välja inimese amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimiseks karüotüübi määramise otstarbel ja muuks antenataalseks geneetiliseks testimiseks. Segu on optimeeritud nii kolbi kui ka in situ meetodis kasutamiseks.

SÄILITAMINE JA STABIILSUS Hoidke sööde CHANG Medium D külmutatult temperatuuril -10°C. Kasutamata söödet CHANG Medium D võib uuesti külmutada või hoida temperatuuril 2°C...8°C.

Kaitske fluorestsentsvalguse eest.

Selle söötme kõlblikkusaeg on märgitud pudeli etiketile. Söödet CHANG Medium D võib kuni 2 korda uuesti külmutada ja hoida sulatatult 14 päeva temperatuuril 2°C...8°C selle funktsiooni kahjustamata. Hoidmine rohkem kui 14 päeva ei ole soovitatav.

KOMPONENDID mg/LSoolad …………………………………………………. 8515Dekstroos ……………………………………………… 880Aminohapped ………………………………………… 804L-glutamiin …………………………………………… 257Polüpeptiidid ………………………………………… 189Vitamiinid ………………………………………………… 61Desoksüribonukleosiidid …………………………… 35Ribonukleosiidid ……………………………………… 35Naatriumpüruvaat ……………………………………… 97Muud komponendid …………………………………… 9Steroidhormoonid ………………………………… 0,0009Veise seerumi valgud ………………………… 12% v/vFenoolpunane ………………………………………… 10

ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal.

Ärge kasutage ühtegi pudelit, mille steriilne pakend on kahjustunud.

ETTEVALMISTAMINE KASUTAMISEKS 1. Kiirelt sulatage sööde CHANG Medium D pudelit 37°C

vesivannis keerutades. 2. Soovi korral võib lisada antibiootikume.

SÖÖTME CHANG MEDIUM D ALIKVOODI VÕTMINE1. Sulatage sööde CHANG Medium D vastavalt juhistele. 2. Jagage aseptiliselt sobiva suurusega alikvootideks ja

külmutage uuesti. 3. Kui olete valmis alikvoote kasutama, sulatage need

37°C vesivannis.

KASUTUSJUHISED Kultuuride söötmiseks kasutatava söötme pH peab olema 6,8...7,2 (st sööde peab olema kergelt kollakat lõhevärvi). pH-d saab kergesti korrigeerida lõdvalt korgistatud söötme asetamisega umbes 30 minutiks 5%...8% CO2 inkubaatorisse.

Lõplik pH peab olema 6,8...7,2.

Söötme CHANG Medium D kasutamine tüvikultuuride kultiveerimiseks: in situ meetod

1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakud

Gebruik van CHANG Medium D voor primaire kweken: in situ-methode 1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om de

cellen te concentreren. 2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheid

van het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld: aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerd vruchtwater tot 0,5 ml boven het celpellet en resuspendeer. Voeg voldoende CHANG Medium D toe aan de geconcentreerde celsuspensie zodat er een eindvolume van 0,5 ml per afdekplaatje (in totaal 4 afdekplaatjes) of 2 ml per fles beschikbaar is.

3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en 5%-8% CO2-atmosfeer.

4. Bedek de kweken op dag 2 volledig door 2 ml CHANG Medium D toe te voegen.

5. Na 4 tot 5 dagen moet de groei van de kweken worden gecontroleerd. De kweken moeten worden gevoed als eenmaal is vastgesteld dat zij groeien. Voed de kweken door al het kweeksupernatant te verwijderen en te vervangen door 2 ml vers CHANG Medium D. Het verdient aanbeveling de kweken daarna om de 2 dagen te voeden.

6. Controleer de kweken op groei op/na dag 5, en oogst als voldoende kolonies worden waargenomen.

7. De beste resultaten worden verkregen als de kweken worden gevoed met CHANG Medium D op de dag vóór het oogsten.

Gebruik van CHANG Medium D voor primaire kweken: flesmethode 1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om de


van het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld: aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerd vruchtwater tot 1 ml boven het celpel let en resuspendeer. Voeg 4 ml CHANG Medium D toe zodat het totaalvolume per fles 5 ml bedraagt.


4. Controleer op groei op dag 5. Vervang het medium door vers CHANG Medium D en oogst als voldoende celgroei wordt waargenomen.

5. Controleer of de kweken groeien en vervang het medium volledig elke dag daarna totdat voldoende kolonies worden waargenomen en kunnen worden geoogst.


Gebruik van CHANG Medium D voor groeiende gepasseerde vruchtwatercellen:

Om de cellen te passeren, behandel de kweken met trypsine (of pronase etc.) zoals u dat normaal gesproken zou doen als cellen groeien in een traditioneel medium. De proteasebehandeling dient echter zorgvuldig in de gaten te worden gehouden. Vruchtwatercellen die gekweekt zijn in CHANG Medium D hebben de neiging gevoeliger te zijn voor proteasebehandeling dan vruchtwatercellen die zijn gekweekt in een traditioneel medium. Het kan noodzakelijk zijn om uw protocol te wijzigen om hiermee rekening te houden.

Opm.: meestal vormen er zich calciumoxalaatkristallen in CHANG Medium D. Uit onderzoek blijkt dat de aanwezigheid van deze kristallen geen nadelige invloed heeft op de prestatie van het product.

KWALITETISBORGINGSTERILITEIT Het serum dat is gebruikt bij de productie van CHANG Medium D is getest op virale besmetting volgens CFR Title 9, Part 113.53. Het is ook getest op mycoplasmabesmetting. CHANG Medium D is gesteriliseerd middels filtratie met een 0,1 micron filter. CHANG Medium D-monsters zijn getest op mogelijke bacteriologische besmetting volgens het steriliteitstestprotocol zoals beschreven in de huidige USP-steriliteitstest <71>.

CHANG Medium® is een gedeponeerd handelsmerk van Irvine Scientific.

Końcowe pH musi być 6,8 – ,7,2. Zob. Wskazówki Użycia.

Użycie CHANG Medium D do hodowli pierwotnych: metodologie in situ. 1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach, aby

spowodować skupienie komórek. 2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnego

płynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać 10 ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do 0,5 ml peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić. Dodać wystarczającą ilość pożywki CHANG Medium D do stężonej zawiesiny komórek, aby zapewnić ostateczną objętość posiewu bakterii na pożywce stałej wynoszącą 0,5 ml na szkiełko nakrywkowe (razem 4 szkiełka nakrywkowe) lub 2 ml na kolbkę.

3. Inkubować hodowle nienaruszone w temperaturze 37°C, 5%-8% atmosferze CO2.

4. W drugim dniu przepłukać hodowle poprzez dodanie 2 ml CHANG Medium D.

5. Po 4 do 5 dniach należy sprawdzić wzrost hodowli. Hodowle należy odżywiać po zaobserwowaniu wzrostu. Odżywiać hodowle poprzez odebranie wszystkich nadsączy i wymianę z 2 ml świeżej pożywki CHANG Medium D.

6. Sprawdzić wzrost hodowli w piątym dniu lub póżniej i zebrać je jeśli zaobserwowano wystarczającą ilość kolonii.

7. Najlepsze wyniki otrzymywano, gdy hodowle były odżywiane pożywką CHANG Medium D na dzień przed zebraniem.

Użycie CHANG Medium D do hodowli pierwotnych: metodologie dla kolb 1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach aby


płynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać 10 ml nadsączu wirowanego płynu owodniowego do 1 ml peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić. Dodać 4 ml CHANG Medium D do całkowitej objętości 5 ml na kolbę.


4. Sprawdzić wzrost dnia 5-ego. Jeżeli zaobserwowano wystarczający wzrost, zmienić pożywkę na świeżą CHANG Medium D i zebrać.

5. Sprawdzić wzrost hodowli i całkowicie zmieniać pożywkę codziennie do zaobserwowania wystarczającej ilości kolonii, gotowej do zbioru.


Użycie CHANG Medium D do posiewów wzrastających pasażowanych komórek płynu owodniowego:

W celu pasażowania komórek poddać hodowle działaniu trypsyny (lub pronazy, itd.), tak jak postępuje się w przypadkach gdy komórki wzrastają na konwencjonalnej pożywce. Jednakże, działanie proteazy należy dokładnie monitorować. Komórki płynu owodniowego rosnące na pożywce CHANG Medium D są bardziej czułe na działanie proteazy niż komórki płynu owodniowego rosnące na pożywce konwencjonalnej. Jeśli wziąć to pod uwagę może być konieczna modyfikacja protokołu.

Uwaga: W pożywce CHANG Medium D często tworzą się kryształy szczawianu wapnia. Nie wykazano, aby obecność tych kryształów wpływała w szkodliwy sposób na wydajność produktu.

KONTROLA JAKOŚCISTERYLNOŚĆ Surowica używana do produkcji CHANG Medium D została przetestowana na zanieczyszczenia wirusowe, zgodnie z CFR Title 9 Part 113.53. Pożywka ta była też badana przesiewowo na obecność zanieczyszczeń mykoplazmą. Pożywka CHANG Medium D jest sterylizowana przez filtrację przy zastosowaniu filtra o wielkości porów 0,1 mikrona. Próbki CHANG Medium D zostały przetestowane na obecność zanieczyszczenie bakteriologiczne zgodnie z protokołem testowania sterylności, opisanym w bieżącym teście sterylności USP <71>.

CHANG Medium® jest zarejestrowanym znakiem towarowym Irvine Scientific.

Utilizaţi CHANG Medium D pentru Culturi Primare: Metodologia in situ

1. Centrifugaţi lichidul amniotic la viteză joasă pentru a concentra celulele.

2. Resuspendaţi celula pelată într-un volum mic de lichid amniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi supernatantul de 10 mL de lichid amniotic la 0.5 mL deasupra celulei pelate şi resuspendaţi. Adaugaţi suficient CHANG Medium D la concentratul de celulă suspensie pentru a permite acoperirea finală a volumului de 0.5 mL pe lamela (total 4 lamele) sau 2 mL pe flaconaşe.

3. Incubaţi culturile nedistribuite la 37 °C 5%-8% CO2 atmosferic.

4. Inundaţi culturile în ziua doua prin adăugarea de 2mL de CHANG Medium D.

5. După 4 -5 zile, trebuie verificată dezvoltarea culturilor. Culturile trebuie să fie hrănite odată ce se obsearvă dezvoltarea. Hrăniţi culturile prin eliminarea totală a supernatantului şi înlocuiţi cu 2 mL de CHANG Medium D proaspăt. Este recomandat ca culturile să fie hrănite la fiecare două zile.

6. Verificaţi dezvoltarea culturilor în/sau după ziua 5, şi recoltaţi când sunt observate colonii suficiente.

7. Cele mai bune rezultate sunt obţinute când culturile sunt hrănite cu CHANG Medium D în ziua înainte de recoltare.

Utilizaţi CHANG Medium D pentru Culturi Primare: Metodologia Flacon


2. Resuspendaţi celula pelată într-un volum mic de lichid amniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi supernatantul de 10 mL de lichid amniotic la 1 mL deasupra celulei pelate şi resuspendaţi. Adaugaţi 4 mL de CHANG Medium D la volumul total de 5 mL pe flacon.


4. Verificaţi dezvoltarea în ziua a 5-a. Schimbaţi mediul cu CHANG Medium D proaspăt şi recoltaţi dacă sunt observate celule suficiente dezvoltate.

5. Verificaţi dezvoltarea culturilor şi schimbaţi complet mediul la două zile după acea până când sunt observate colonii suficiente gata pentru recoltare.


Utilizarea CHANG Medium D pentru celule de tranziţie de lichid Amniotic:

Pentru a transfera celulele, trataţi culturile cu tripsină (sau pronase, etc.) aşa cum aţi face normal când celulele se dezvoltă în mediu convenţional. Oricum, tratamentul de protează trebuie să fie supravegheat cu mare atenţie. Lichid amniotic dezvoltat in CHANG Medium D au tendinţa să fie mai sensible la tratamentul de protează decât cele dezvoltate în mediul convenţional. Poate fi necesară modificarea protocolului D-voastră.

Notă: Cristale Oxilatului de Calciu se formează în CHANG Medium D. Nu a fost demonstrată scăderea calităţii produsului datorită prezenţei acestor cristale.

ASIGURAREA CALITĂŢIISTERILITATE Serul utilizat la producţia de CHANG Medium D a fost testat pentru contaminări virale pe baza CFR titlul 9 partea 113.53. Deasemenea a fost verificat pentru contaminare cu mycoplasma. CHANG Medium D este sterilizat prin filtrare cu un filtru de 0.1 microni. Mostre de CHANG Medium D a fost testate pentru posibilitatea contaminări bacteriologice urmând protocolul curent pentru testul de sterilizare descris în USP -ul <71> test de sterilitate.

CHANG Medium® este o marcă înregistrată de către Irvine Scientific.

Användning av CHANG Medium D för primärodling: in situ-metodik

1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så att cellerna koncentreras.

2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientens egen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten från 10 mL centrifugerad amnionvätska till 0,5 mL ovanför cellpelleten och resuspendera pelleten. Tillsätt tillräckligt med CHANG Medium D till den koncentrerade cellsuspensionen för att möjliggöra en slutlig utstryksvolym av 0,5 mL per täckglas (totalt 4 täckglas) eller 2 mL per flaskett.

3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5–8 % CO2-atmosfär.

4. Flöda kulturerna på dag 2 genom att tillsätta 2 mL CHANG Medium D.

5. Efter 4–5 dagar bör kulturerna kontrolleras med avseende på växt. När växt har observerats bör kulturerna tillföras näring. Tillför näring till kulturerna genom att avlägsna all supernatant och ersätta den med 2 mL färskt CHANG Medium D. Det rekommenderas att därefter tillföra näring till kulturerna varannan dag.

6. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på/efter dag 5 och skörda dem när tillräckligt med kolonier observeras.

7. Bästa resultat erhålls när kulturerna tillförs näring med CHANG Medium D dagen innan de skördas.

Användning av CHANG Medium D för primärodling: Metod med flaska


2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientens egen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten från 10 mL centrifugerad amnionvätska till 1 mL ovanför cellpelleten och resuspendera pelleten. Tillsätt 4 mL CHANG Medium D till en total volym på 5 mL per flaska.

3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5-8 % CO2-atmosfär.

4. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på dag 5. Byt till färskt CHANG Medium D och skörda om tillräcklig cellväxt observeras.

5. Kontrollera kulturerna med avseende på växt och byt därefter ut mediet varje dag tills tillräckligt med kolonier observeras och är klara att skördas.


Användning av CHANG Medium D för odling av celler från amnionvätska i efterföljande passage:

För passage av cellerna behandlas kulturerna med trypsin (eller pronas, etc.) på normalt sätt som vid odling av celler i konventionellt medium. Proteasbehandlingen bör dock noga övervakas. Celler från amnionvätska som odlas i CHANG Medium D tenderar att vara känsligare för proteasbehandling än celler från amnionvätska som odlas i konventionellt medium. Laboratoriets protokoll kan behöva modifieras för att ta hänsyn till detta faktum.

Obs! Kalciumoxalatkristaller bildas ofta i CHANG Medium D. Närvaro av dessa kristaller har inte visats utöva någon negativ effekt på produktens funktion.

KVALITETSSÄKRINGSTERILITETDet serum som används vid framställningen av CHANG Medium D har testats för viral kontamination enligt CFR titel 9 del 113.53. Det har också screenats för kontamination av mykoplasma. CHANG Medium D har steriliserats genom filtrering genom ett 0,1 mikron-filter. Stickprover av CHANG Medium D testas för för bakteriell kontamination enligt det sterilitetstestningsprotokoll som beskrivs i aktuell USP Sterility test <71> (sterilitetstest enligt United States Pharmacopeia).

CHANG Medium® är ett registrerat varumärke som tillhör Irvine Scientific.

kontsentreeruks. 2. Resuspendeerige rakukämp väheses patisendi oma

amnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud 10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda on rakukämbu kohale jäänud 0,5 mL ja resuspendeerige. Lisage kontsentreeritud rakususpensioonile küllalt söödet CHANG Medium D, et see lubab lõpuks esemeklaasi iga katteklaasi (kokku 4 katteklaasi) alla kanda 0,5 mL ehk 2 mL kolbikese kohta.

3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5...8% CO2-atmosfääris temperatuuril 37 °C.

4. Loputage kultuurid 2. päeval, kasutades selleks 2 mL söödet CHANG Medium D.

5. 4 kuni 5 päeva möödudes kontrollige kultuuride kasvu. Kasvu täheldamisel tuleb kultuure hakata söötma. Söötke kultuurid kogu kultuuri supernatandi eemaldades ja seda asendades 2 mL värske söötmega CHANG Medium D. Pärast seda on soovitatav kultuuride söötmine iga 2 päeva tagant.

6. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval või pärast seda ja piisaval arvul kolooniate tekkimise korral koguge need kokku.

7. Parimad tulemused saate siis, kui söödate kultuure söötmega CHANG Medium D päev enne nende kokku kogumist.

Söötme CHANG Medium D kasutamine tüvikultuuride kultiveerimiseks: kolbi meetod

1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakud kontsentreeruks.

2. Resuspendeerige rakukämp vähese patsiendi oma amnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud 10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda on rakukämbu kohale jäänud 1 mL ja resuspendeerige. Lisage 4 mL söödet CHANG Medium D et igas kolbis oleks vedeliku lõplik kogus 5 mL.

3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5%...8% CO2-atmosfääris temperatuuril 37 °C.

4. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval. Kui täheldate piisavat rakkude kasvu, vahetage sööde välja värske söötme CHANG Medium D vastu ja koguge rakud.

5. Kontrollige kultuuride kasvu ja vahetage sööde täielikult välja iga päev pärast seda kuni täheldate piisaval arvul kolooniaid ja need on kogumiseks valmis.


Söötme CHANG Medium D kasutamine passaaži läbinud amnionivedeliku rakkude kultiveerimiseks:

Rakkude passaaži teostamiseks töödelge kultuurid trüpsiiniga (või proteinaasi vms) nagu rakkude harilikult konventsionaalses söötmes kasvatamise puhul. Töötlemist proteinaasiga tuleb aga hoolikalt jälgida. Söötmes CHANG Medium D kasvatatud amnionivedeliku rakud kipuvad olema tundlikumad proteinaasiga töötlemisele kui tavalises söötmes kasvatatud amnionivedeliku rakud. Seda arvesse võttes võib protokolli muutmine osutuda vajalikuks.

Märkus: Kaltsiumoksalaadi kristallide moodustumine söötmes CHANG Medium D on tavaline. Nende kristallide olemasolu puhul ei ole täheldatud toote efektiivsuse kahjustumist.

KVALITEEDI GARANTIISTERIILSUS Söötme CHANG Medium D tootmisel kasutatud seerum on testitud viirusega kontaminatsiooni suhtes vastavalt koodeksi CFR 9. peatüki osale 113.53. Seda on skriinitud ka mükoplasmaga kontaminatsiooni suhtes. Sööde CHANG Medium D on steriliseeritud kasutades 0,1 mikronilist filtrit. Söötme CHANG Medium D proovid on testitud võimaliku bakteriaalse saastatuse suhtes järgides kehtivas USP steriilsuse testis <71> toodud steriilsuse kontrollimise protokolli.

CHANG Medium® on firma Irvine Scientific registreeritud kaubamärk.

MAGYAR

RENDELTETÉSA CHANG Medium D használható a következő alkalmazásokban: 1. magzatvíz sejtjeinek primer tenyészete 2. passzált magzatvíz sejtek növekedése 3. csontvelő sejtek tenyészete 4. szilárd amnionszövet a chorionboholy mintájából

Ezt a médiumot CO2 inkubátorban való használatra tervezték (tenyészetek ekvilibrálva 5%-8% CO2 atmoszférával).

Figyelmeztetés: Ne használja a CHANG Medium D-t a címkén feltüntetett lejárati határidőn túl.

TERMÉKLEÍRÁS A CHANG Medium® D-t a humán magzatvíz sejtek primer tenyészetéhez fejlesztették ki, a kariotipizálásban és más antenatális genetikai vizsgálatban való alkalmazásra Ezt a formulát optimalizálták a lombikokban és az in situ módszerekben való alkalmazásra is.

TÁROLÁS ÉS STABILITÁS Tárolja a CHANG Medium D-t fagyasztott állapotban -10°C között. A fel nem használt CHANG medium D újra lefagyasztható, vagy 2°és 8°C között tárolható.

Védje a fluoreszcens fénytől.

Nézze meg az üveg címkéjén a specifikus lejárati időpontot. A CHANG Medium D maximum kétszer fagyasztható újra, és maximum 14 napig tárolható felengedve 2°C -8°C között anélkül hogy az hatással lenne a működésére. 14 napon túli tárolása nem javasolt.

ALKOTÓK mg/mlsók ………………………………………………………. 8515dextróz …………………………………………………. 880aminosavak ……………………………………………. 804L-glutamin ………………………………………………. 257polipeptidek ……………………………………………. 189vitaminok …………………………………………………. 61dezoxi-ribonukleiozidok …………………………………. 35ribonukleozidok …………………………………………. 35nátrium-piruvát ……………………………………………. 97más alkotók ………………………………………………. 9szteroid hormonok …………………………………. 0.0009marhaszérum fehérjék ……………………………. 12% v/vfenolvörös …………………………………………………. 10

ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban kiképzett személyzet által történjen.

Ne használjon olyan üveget, amelyben a steril csomagolás veszélybe került.

ELŐKÉSZITÉS A HASZNÁLATRA 1. Olvassza fel a CHANG Medium D-t gyorsan, az üveget

37° C-os vízfürdőben mozgatva. 2. Szükség szerint antibiotikum adható hozzá.

CHANG MEDIUM D SZÉTOSZTÁSA ALIQUOTOKRA 1. Engedje fel a CHANG Medium D-t az utasításoknak

megfelelően. 2. Ossza szét aszeptikusan megfelelő méretű aliquotokra

és fagyassza le újra. 3. Olvassza fel az aliquotokat 37°C-s vízfürdőben, ha kész

a felhasználására.

HASZNÁLATI UTASITÁS A tenyészet táplálására használt médium pH-ja 6,8-7,2 között (azaz a médium halvány sárgás-lazacszínű) kell, hogy legyen. A pH könnyen beállítható a médiumot egy 5%-8% CO2-s inkubátorba téve 30 percre úgy, hogy a tetejét kissé meglazítja.

A végső pH 6,8-7,2 között kell, hogy legyen.

A CHANG Medium D alkalmazása primer tenyészeteknél: in situ módszere:

LIETUVIŲ K.

NUMATYTOJI PASKIRTISCHANG Medium D terpė gali būti naudojama pagal tokią paskirtį: 1. pirminės vaisiaus vandenų ląstelių kultūros auginimas 2. vaisiaus vandenų persėtos kultūros ląstelių auginimas 3. kaulų čiulpų ląstelių kultūros auginimas 4. kietųjų amniono audinių kultūrų auginimas iš chorionų

gaurelių mėginių.

Ši terpė yra skirta naudoti CO2 inkubatoriuose (kultūros pusiausvirinamos 5%–8% CO2 atmosferoje).

Perspėjimas: CHANG Medium D terpės naudoti negalima pasibaigus etiketėje nurodytam tinkamumo laikui.

PRODUKTO APRAŠYMAS CHANG Medium® D terpė buvo sukurta pirminės žmogaus vaisiaus vandenų ląstelių kultūros auginimui atliekant kariotipavimo ir kitus antenatalinius genetinius tyrimus. Reagento sudėtis yra optimizuota tiek kultivavimui flakonuose, tiek in situ metodais.

LAIKYMAS IR STABILUMAS CHANG Medium D terpę laikyti užšaldytą nuo -10 °C temperatūroje. Nesunaudotą CHANG Medium D terpę galima pakartotinai užšaldyti arba laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje.

Saugoti nuo fluorescencinių spindulių.

Specifinis tinkamumo laikas nurodytas butelio etiketėje. CHANG Medium D terpę pakartotinai užšaldyti galima ne daugiau kaip 2 kartus, o 2 °C–8 °C temperatūroje galima laikyti 14 dienų nepakenkiant terpės funkcinėms savybėms. Laikyti ilgiau kaip 14 dienų nerekomenduojama.

SUDĖTIS mg/lDruskos ………………………………………………. 8515Dekstrozė ……………………………………………… 880Aminorūgštys …………………………………………… 804L-glutaminas …………………………………………… 257Polipeptidai ……………………………………………… 189Vitaminai ………………………………………………… 61Deoksiribonukleozidai …………………………………… 35Ribonukleozidai ………………………………………… 35Natrio piruvatas ………………………………………… 97Kiti sudėtiniai komponentai ……………………………… 9Steroidiniai hormonai ……………………………… 0,0009Galvijų serumo baltymai ………………………… 12% v/vFenolio raudonasis ……………………………………… 10

ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams, apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso taikymu pagal numatytą paskirtį.

Nenaudokite buteliuko, jeigu sterili pakuotė buvo pažeista.

PARUOŠIMAS NAUDOJIMUI 1. CHANG Medium D terpę greitai atitirpinkite sukiodami

butelį 37 °C vandens vonelėje. 2. Pageidaujant galima pridėti antibiotikų.

CHANG MEDIUM D DALIJIMAS Į PORCIJAS 1. Atitirpinkite CHANG Medium D terpę pagal nurodymus. 2. Aseptiniu būdu išpilstykite reikiamo dydžio alikvotinėmis

dalimis ir vėl užšaldykite. 3. Prieš naudojimą porcijas atšildykite 37 °C vandens

vonelėje.

NAUDOJIMO NURODYMAI Kultūroms maitinti naudojamos terpės rūgštingumas turi būti pH 6,8–7,2 (t. y. terpė turi būti šiek tiek gelsvai lašišinės spalvos). pH galima lengvai pakoreguoti terpę apie 30 minučių palaikant 5%–8% CO2 inkubatoriuje su šiek tiek prasuktu dangteliu.

Galutinė pH reikšmė turi būti 6,8–7,2. Žr. naudojimo nurodymus.

1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtek koncentrálására.

2. Szuszpendál ja újra a pel letet a beteg saját magzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a 10 ml centrifugált magzatvizet sejtpellet felett 0,5 ml-re és szuszpendálja újra. Adjon megfelelő mennyiségű CHANG Medium D-t a koncentrált sejt szuszpenzióhoz, szánjon 0,5 m végtérfogatot a bevonatra fedőlemezenként (összesen 4 fedőlemez) vagy 2 ml-t üvegcsékként.

3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban 37 °C-on, 5%-8% CO2 atmoszférában.

4. Árassza el a tenyészeteket a 2. napon 2 ml CHANG Medium D hozzáadásával

5. 4-5 nap eltelte után a tenyészetek növekedését ellenőrizni kell. A tenyészeteket táplálni kell, ha növekedést tapasztalt. Táplálja a tenyészetet; az összes felülúszó eltávolítása után helyettesítse azt 2 ml friss CHANG Medium D-vel

6. Ellenőrizze a tenyészetek növekedését az 5. napon vagy 5 nap után, és végezze el a begyűjtést, ha a kolóniák megfelelőek.

7. A legjobb eredményt akkor kapja, ha a tenyészetet a begyűjtést megelőző napon táplálta CHANG Mediun D-vel.

A CHANG Medium D alkalmazása primer tenyészeteknél: Lombik módszerek


2. Szuszpendál ja újra a pel letet a beteg saját magzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a 10 ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 1 ml-re és szuszpendálja újra. Adjon 4 ml CHANG Medium D-t , lombikonként 5 ml össztérfogatra.


4. Az 5. napon ellenőrizze a növekedést. Cserélje ki a közeget friss CHANG Medium D-vel és végezzen begyűjtést, ha a sejtnövekedés megfelelő.

5. Ellenőrizze a tenyészetek növekedését, teljesen cserélje ki a közeget minden nap ezután addig, amíg megfelelő kolóniákat nem talál, és kész a begyűjtésre.

6. A legjobb eredményt akkor kapja, ha a tenyészeteket a begyűjtést megelőző napon tálplálta CHANG Medium D-vel.

A CHANG Medium D alkalmazása passzált magzatvíz sejtek növekedésénél:

A sejtpasszáláshoz kezelje a kultúrát tripszinnel (vagy pronázzal, stb.) ahogy normálisan teszi, amikor hagyományos közegben tenyészti a sejteket. A proteáz kezelést azonban szigorúan monitorozni kel l . A CHANG Medium D-ben növekedett magzatvíz sejtek érzékenyebbeknek tűnnek a proteáz kezelésre, mint a konvencionális közegben tenyésztett magzatvíz sejtek. Lehetséges, hogy meg kell változtatnia a protokollját ennek figyelembevételére.

Megjegyzés: Kalcium-oxalát kristályok képződése gyakori a CHANG Medium D-ben. E kristályok jelenléte nem tűnik úgy, hogy bármilyen káros hatást okozna termék teljesítményére.

MINŐSÉGBIZTOSITÁSSTERILITÁS A CHANG Medium D készítésénél használt szérumot levizsgálták vírus-szennyezésre CFR 9. /113.53 szerint. Ellenőrizték Mycoplasma szennyezére is. A CHANG Medium D sterilizált, szűrve van 0,1 mikronos szűrőn. A CHANG Medium D mintáit vizsgálták lehetséges baktérium szennyezettségre a jelenlegi USP sterilitási tesztben <71> leirt sterilitási tesztprotokoll szerint.

CHANG Medium® az Irvine Scientific bejegyzett márkaneve.

CHANG Medium D terpės naudojimas pirminėms kultūroms: in situ metodai

1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiu koncentruotai ląstelių masei gauti.

2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliame pačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui, nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenų supernatantą palikdami 0,5 ml virš ląstelių nuosėdų ir resuspenduokite. Į koncentruotą ląstelių suspensiją pridėkite pakankamai CHANG Medium D terpės, kad galutinis po kiekvienos plokštelės dengiamuoju stikleliu tenkantis tūris būtų 0,5 ml (iš viso 4 dengiamieji stikleliai) arba po 2 ml vienam flakonėliui.

3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje 5%–8% CO2 atmosferoje.

4. 2 dieną ant kultūrų užliekite po 2 ml CHANG Medium D terpės.

5. Praėjus 4–5 dienoms, reikia patikrinti kultūrų augimą. Pastebėjus augimą, kultūras reikia pamaitinti. Kultūras maitinkite nusiurbdami visą virš pasėlio susidariusį supernatantą ir jį pakeisdami 2 ml šviežios CHANG Medium D terpės. Po to kultūras rekomenduojama maitinti kas 2 dienas.

6. 5-ą dieną arba po 5 dienų patikrinkite kultūrų augimą ir aptikę pakankamai kolonijų ląsteles surinkite.

7. Geriausių rezultatų pasiekiama pasėlius CHANG Medium D terpe maitinant dieną prieš kultūros surinkimą.

CHANG Medium D terpės naudojimas pirminėms kultūroms: kultivavimo flakonuose metodai 1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiu

koncentruotai ląstelių masei gauti. 2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliame

pačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui, nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenų supernatantą palikdami 1 ml virš ląstelių nuosėdų ir resuspenduokite. Pridėkite 4 ml CHANG Medium D terpės, kad bendras tūris flakone būtų 5 ml.


4. 5-ą dieną patikrinkite augimą. Terpę pakeiskite šviežia CHANG Medium D terpe ir pastebėję pakankamai priaugusių ląstelių jas surinkite.

5. Po to kiekvieną dieną, patikrinę kultūrų augimą, visiškai pakeiskite terpę, kol bus priaugę pakankamai kolonijų, kurias galima surinkti.


CHANG Medium D terpės naudojimas vaisiaus vandenų persėtos kultūros ląstelėms auginti:

Norėdami persėti ląsteles, kultūras apdorokite tripsinu (arba pronaze ar kt.), kaip kad paprastai darytumėte augindami ląsteles įprastinėje terpėje. Visgi apdorojimo proteazėmis procesą būtina atidžiai stebėti. CHANG Medium D terpėje augintos vaisiaus vandenų ląstelės turi didesnį polinkį jautriau reaguoti į apdorojimą proteazėmis negu įprastinėje terpėje augintos vaisiaus vandenų ląstelės. Į tai atsižvelgiant gali prireikti pakoreguoti tyrimo metodo protokolą.

Pastaba: CHANG Medium D terpėje dažnai susidaro kalcio oksalato kristalų. Nenustatyta, kad šių kristalų buvimas kaip nors pakenktų produkto funkcinėms savybėms.

KOKYBĖS LAIDAVIMASSTERILUMAS Serumas, naudotas gaminant CHANG Medium D terpę, virusinių užkratų atžvilgiu yra ištirtas pagal 9 CFR kodekso 113.53 dalies standartus. Taip pat patikrinta, ar jis neužkrėstas mikoplazmomis. CHANG Medium D terpė yra sterilizuota filtruojant per 0,1 mikronų filtrus. CHANG Medium D terpės mėginiai yra išbandyti bakteriologinio užkrėtimo rizikai nustatyti pagal šiuo metu patvirtintą Jungtinių Valstijų farmakopėjos (USP) sterilumo bandymų protokolą <71>.

CHANG Medium® yra „Irvine Scientific“ bendrovės registruotas prekės ženklas.

TÜRK

KULLANIM AMACIChang Medium D şu uygulamalar için kullanılabilir:

1. amniyotik sıvı hücrelerinin primer kültürü2. geçitli (passaged) amniyotik sıvı hücreler geliştirme3. kemik iliği hücrelerinin kültürü4. koryon villi örneklemesinden sonra som amniyon doku.

Bu medyum CO2 inkübatörlerinde (%5-8 CO2’li atmosferle dengelenmiş kültürler) kullanım için tasarlanmıştır.

Önlem: Chang Medium D’yi etiket üzerinde belirtilen son kullanım tarihinden sonra kullanmayın.

ÜRÜN TANIMIChang Medium® D, karyotipleme ve diğer antenatal genetik testlerde kullanıma yönelik olarak insan amniyotik sıvı hücrelerinin primer kültürü için geliştirilmiştir. Bu formül hem flask hem de in situ yöntemler için optimize edilmiştir.

SAKLAMA VE STABİLİTEChang Medium® D’yi -10°C’nin altında saklayın. Kullanılmayan Chang Medium® D tekrar dondurulabilir veya 2°-8°C arasında saklanabilir.

Florasan ışığından koruyun.

Spesifik son kullanma tarihi için şişe etiketine bakın. Chang Medium D kullanım öncesinde işlevi bozulmaksızın en fazla 2 kez yeniden dondurulabilir ve 2°-8°C’da 14 gün boyunca erişim halde saklanabilir. 14 günden fazla saklama tavsiye edilmemektedir.

BİLEŞENLER

Tuzlar ..........................................................................8515Dekstroz .......................................................................880Amino Asitler .................................................................804L-Glutamin ....................................................................257Polipeptitler ...................................................................189Vitaminler ........................................................................61Deoksiribonükleositler ....................................................35Ribonükleositler ..............................................................35Sodyum Pirüvat ..............................................................97Diğer bileşenler .................................................................9Steroid Hormonlar ...................................................0.0009Bovin Serum Proteinleri .........................................%12 v/vFenol Kırmızı ..................................................................10

ÖNLEMLER VE UYARILARBu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır.

Steril ambalajlamayla ilgili herhangi bir eksiklik veya sorun taşıyan hiçbir şişeyi kullanmayın.

KULLANIM İÇİN HAZIRLAMA

1. Şişeyi 37°C su banyosunda helezonik bir şekilde hızla sallayarak Chang Medium D’yi çözün.2. İstenirse antibiyotikler eklenebilir.

CHANG MEDIUM D’NiN ALİKOTLANMASI1. Chang Medium D’yi talimatlara göre çözün.2. Aseptik bir şekilde uygun olarak ebatlandırılmış alikotlara bölün ve yeniden dondurun.3. Kullanmaya hazır olduğunuzda alikotları 37°C su banyosunda çözün.

KULLANIM YÖNERGELERİKültürleri beslemek için kullanılacak medyumun pH’ı 6.8 ila 7.2 arasında olmalıdır (yani medyum hafif sarımsı somon renginde olmalıdır). 30 dakika boyunca medyum kapağı hafif gevşek şekilde %5-%8’lik bir CO2 inkübatörü içine konarak pH kolayca ayarlanabilir.

Son pH 6.8-7.2 olmalıdır.

Chang Medium D’nin Primer Kültürler İçin Kullanımı: In Situ Yöntemler

1. Hücreleri konsantre etmek için amniyotik sıvıyı düşük hızla santrifüjleyin.

2. Hücre pelletini hastanın kendi amniyotik sıvısının küçük bir hacmi içinde yeniden süspanse edin. Örneğin inceltilmiş 10 mL amniyotik sıvının üst fazını hücre pelletinin 0.5 mL üstüne çekin ve yeniden süspanse edin. Lamel (toplam 4 lamel) başına 0.5 mL’lik veya flasket başına 2 mL’lik son kaplama hacmi sağlamak için, konsantre hücre süspansiyonuna yeterli miktarda Chang Medium D ekleyin.3. Kültürleri 37°C %5 CO2’lik atmosferde kendi haline bırakarak inkübe edin.4. İkinci günde kültürlere 2 mL Chang Medium D ekleyin.5. 4-5 gün sonra kültürlerin gelişim durumu kontrol edilmelidir. Gelişim gözlenir gözlenmez kültürler beslenmelidir. Kültürleri beslemek için tüm kültür üst fazını atın ve 2 mL yeni Chang Medium D ekleyin. Bunun ardından kültürlerin her 2 günde bir beslenmesi tavsiye edilmektedir.6. Beşinci günde veya sonrasında kültürlerin gelişim durumunu kontrol edin ve yeterince koloni gözlendiğinde hasat yapın.7. En iyi sonuçların elde edilmesi için, kültürler hasattan önceki gün Chang Medium D ile beslenmelidir.

Chang Medium D’nin Primer Kültürler İçin Kullanımı: Flask Yöntemler

1. Hücreleri konsantre etmek için amniyotik sıvıyı düşük hızla santrifüjleyin.2. Hücre pelletini hastanın kendi amniyotik sıvısının küçük bir hacmi içinde yeniden süspanse edin. Örneğin inceltilmiş 10 mL amniyotik sıvının üst fazını hücre pelletinin 1 mL üstüne çekin ve yeniden süspanse edin. Flask başına 5 mL’lik toplam hacmi sağlamak için, 4 mL Chang Medium D ekleyin. 3. Kültürleri 37°C %5 CO2’lik atmosferde kendi haline bırakarak inkübe edin.4. Beşinci gün kültürlerin gelişim durumunu kontrol edin. Medyumu yeni Chang Medium D ile değiştirin ve eğer yeterli hücre gelişimi gözleniyorsa hasat edin. 5. Kültürlerin gelişim durumunu kontrol edin ve bundan sonra yeterli koloni gözlenene ve hasada hazır olana kadar iki günde bir medyumu tamamen değiştirin.6. En iyi sonuçların elde edilmesi için, kültürler hasattan önceki gün Chang Medium D ile beslenmelidir.

Chang Medium D’nin Geçitli Amniyotik Sıvı Hücreleri Yetiştirmek İçin Kullanımı:

Hücreleri geçitlemek için, normalde hücreler normal medyumda yetiştirildiği zaman yaptığınız gibi kültürlere tripsin (veya pronaz vs) uygulayın. Fakat proteaz uygulaması dikkatli bir şekilde gözlenmelidir. Chang Medium D’de yetiştirilen amniyotik sıvı hücreleri, geleneksel medyumda yetiştirilmiş amniyotik sıvı hücreleriyle karşılaştırıldığında proteaz uygulamasına karşı genellikle daha hassastır. Protokolünüzü bunu dikkate alacak şekilde değiştirmeniz gerekebilir.

Not: Chang Medium D’de Kalsiyum Oksalat kristalleri sıkça oluşur. Bu kristallerin varlığının ürün performansı üzerinde herhangi bir olumsuz etki yaptığı kanıtlanmamıştır.KALİTE GÜVENCESİSTERİLİTEChang Medium D üretiminde kullanılan serum, CFR 9’uncu Başlık, 113.53’üncü Bölüm’e uygun olarak viral kontaminasyon için test edilmiştir. Mikoplazma kontaminasyonu için de kontrol edilmiştir. Chang Medium D 0.1 mikronluk bir filtreden geçirilerek sterilize edilmiştir. Chang Medium D’nin temsil örnekleri, güncel USP Sterilite testi <71>’de tanımlanan sterilite test protokolü izlenerek olası bakteriyolojik kontaminasyona karşı test edilmiştir.

Chang Medium® Irvine Scientific’in tescilli bir markasıdır.

LATVISKI

PAREDZĒTĀ IZMANTOŠANACHANG Medium D var lietot turpmāk minētajos gadījumos:1. augļa ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā2. nošķirtu augļa ūdeņu šūnu audzēšanā3. kaulu smadzeņu šūnu kultivēšanā4. kompaktajiem amnija audiem, kas iegūti horija bārkstiņu

parauga izmeklēšanā.

Šī barotne ir paredzēta izmantošanai CO2 inkubatoros (stabilizējot kultūras 5%-8% CO2 vidē ).

Uzmanību: Nelietojiet CHANG Medium D pēc derīguma termiņa, kas norādīts marķējumā.

PRODUKTA APRAKSTSCHANG Medium® D ir izveidots izmantošanai cilvēka augļa ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā, lai veiktu kariotipu noteikšanas un citus antenatālos ģenētiskos testus. Šis sastāvs ir optimizēts gan flakona, gan in situ metodes izmantošanas gadījumiem.

UZGLABĀŠANA UN STABILITĀTEUzglabājiet CHANG Medium D sasaldētu -10° C temperatūrā. Neizlietoto CHANG Medium D var sasaldēt atkārtoti vai uzglabāt 2° C līdz 8° C temperatūrā.

Aizsargāt no fluorescējošas gaismas iedarbības.

Konkrēto derīguma termiņu skatiet pudeles marķējumā. CHANG Medium D var atkārtoti saldēt maksimāli 2 reizes, bet, neiespaidojot funkcijas, uzglabāt atkausētu 2° C līdz 8° C temperatūrā 14 dienas. Šādi nav ieteicams uzglabāt ilgāk par 14 dienām.

SASTĀVDAĻAS mg/lSāļi ……………………………………………………. 8515Dekstroze ………………………………………………. 880Aminoskābes ……………………………………………. 804L-glutamīns ……………………………………………. 257Polipeptīdi ………………………………………………. 189Vitamīni ……………………………………………………. 61Dezoksiribonukleozīdi …………………………………. 35Ribonukleozīdi ……………………………………………. 35Nātrija piruvāts ……………………………………………. 97Citas sastāvdaļas …………………………………………. 9Steroīdhormoni ……………………………………. 0 .0009Liellopu seruma proteīni …………. 12% no kopējā tilpumaFenolsarkanais …………………………………………. 10

PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMIŠo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.Nelietojiet pudeles ar bojātu sterilo iepakojumu.

SAGATAVOŠANA LIETOŠANAI1. Ātri atlaidiniet CHANG Medium D, pagrozot pudeli 37°

C ūdens peldē. 2. Ja vēlams, var pievienot antibiotikas.

CHANG MEDIUM D IEDALĪŠANA DEVĀS1. Atlaidiniet CHANG Medium D saskaņā ar instrukciju.2. Aseptiski iedaliet parocīga lieluma devās un sasaldējiet

atkārtoti.3. Atlaidiniet iedalītās devas 37° C ūdens peldē, kad tās

nepieciešams izmantot.

LIETOŠANAS NORĀDĪJUMITās barotnes pH, kuru izmanto kultūru barības papildināšanā, ir jābūt no 6,8-7,2 (t. i., barotnei jābūt nedaudz iedzeltenā laša krāsā). pH līmeni iespējams vienkārši pielāgot, ievietojot barotnes flakonu ar nedaudz vaļīgāk uzliktu aizbāzni 5%-8% CO2 inkubatorā uz apmēram 30 minūtēm.

Galīgajam pH līmenim ir jābūt 6,8-7,2. Lūdzu, skatiet lietošanas norādījumus.

CHANG Medium D lietošana primārai kultivēšanai: in situ metode

1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu, lai koncentrētu šūnas.

2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumā paša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram, aspirējiet līdz 0,5 ml supernatanta no 10 ml augļa ūdeņu centrifugāta virs šūnas lodītes un suspendējiet no jauna. Pievienojiet koncentrētajai šūnu suspensijai pietiekamu daudzumu CHANG Medium D, lai galīgajam uzklāšanas daudzumam paredzētu 0,5 ml uz katru segstikliņu (pavisam 4 segstikliņi) vai 2 ml uz flakonu.

3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37° C temperatūrā 5%-8% CO2 vidē.

4. 2. dienā uzpludiniet kultūras, pievienojot 2 ml CHANG Medium D.

5. Pēc 4 līdz 5 dienām jāpārbauda kultivēto šūnu augšana. Tiklīdz tiek novērota kultūru augšana, tām jāveic barības papildināšana. Veiciet barības papildināšanu, noņemot no kultūras visu supernatantu un aizvietojot to ar 2 ml svaiga CHANG Medium D. Pēc tam ieteicams kultūrām pievienot barotni katru 2. dienu.

6. Pārbaudiet kultūru augšanu 5. dienā/pēc 5. dienas un veiciet ievākšanu, kad var novērot pietiekama apjoma kolonijas.

7. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrām CHANG Medium D barotni iepriekšējā dienā pirms ievākšanas.

CHANG Medium D lietošana primārai kultivēšanai: flakona metode


2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumā paša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram, aspirējiet līdz 1 ml supernatanta no 10 ml augļa ūdeņu centrifugāta virs šūnas lodītes un suspendējiet no jauna. Pievienojiet 4 ml CHANG Medium D, lai kopējais daudzums katrā flakonā būtu 5 ml.


4. 5. dienā pārbaudiet augšanu. Aizvietojiet barotni ar svaigu CHANG Medium D un veiciet ievākšanu, ja novērojama pietiekami efektīva šūnu augšana.

5. Pēc tam pārbaudiet kultūru augšanu un katru dienu pilnībā nomainiet barotni, līdz var novērot pietiekama apjoma kolonijas, kas gatavas ievākšanai.


CHANG Medium D lietošana nošķirtu augļa ūdeņu šūnu audzēšanā:

Lai nošķirtu šūnas, apstrādājiet kultūras ar tripsīnu (vai pronāzi, u. c.), kā Jūs parasti darītu, ja šūnas tiktu audzētas standarta barotnē. Tomēr, apstrādājot ar proteāzi, jāveic uzmanīga novērošana. Augļa ūdeņu šūnām, kas audzētas CHANG Medium D, ir nosliece uz lielāku jutīgumu pret apstrādi ar proteāzi nekā augļa ūdeņu šūnām, kas audzētas standarta barotnē. Var būt nepieciešams pārveidot protokolu, lai ņemtu vērā šo faktu.

Piezīme: Parasti veidojas kalcija oksalāta kristāli. Nav novērots, ka šie kristāli radītu jebkādu iedarbību uz produkta funkcijām.

KVALITĀTES NODROŠINĀŠANASTERILITĀTECHANG Medium D ražošanā izmantotais serums ir ticis testēts attiecībā uz kontamināciju ar vīrusiem saskaņā ar Federālā noteikumu kodeksa (CFR) 9. nodaļas, sadaļas 113.53 nosacījumiem. Barotne tikusi arī rūpīgi testēta attiecībā uz piesārņojumu ar mikoplazmu. CHANG Medium D ir sterilizēts, filtrējot caur 0,1 mikronu filtru. CHANG Medium D paraugi ir pārbaudīti, lai noteiktu iespējamo bakterioloģisko piesārņojumu, ievērojot sterilitātes testēšanas protokolu, kas aprakstīts pašreizējos ASV Farmakopejas (USP) noteikumos par sterilitātes testēšanu <71>.

CHANG Medium® ir reģistrēta Irvine Scientific preču zīme.

NEDERLANDS













toegevoegd.



gebruikt.



POLSKI














antybiotyki.





ROMÂNĂ








COMPONENŢIImg/L












SVENSKA
















användas.



EESTI


võtmine.














37°C vesivannis.









































































































MAGYAR




















LIETUVIŲ K.
















vonelėje.










































TÜRK









BİLEŞENLER


















LATVISKI






































NEDERLANDS













toegevoegd.



gebruikt.



POLSKI














antybiotyki.





ROMÂNĂ








COMPONENŢIImg/L












SVENSKA
















användas.



EESTI


võtmine.














37°C vesivannis.









































































































MAGYAR




















LIETUVIŲ K.
















vonelėje.










































TÜRK









BİLEŞENLER


















LATVISKI






































NEDERLANDS













toegevoegd.



gebruikt.



POLSKI














antybiotyki.





ROMÂNĂ








COMPONENŢIImg/L












SVENSKA
















användas.



EESTI


võtmine.














37°C vesivannis.









































































































MAGYAR




















LIETUVIŲ K.
















vonelėje.










































TÜRK









BİLEŞENLER


















LATVISKI






































Documents

CHANG Medium For Human Amniotic Fluid Cells€¦ · aplicaciones: 1. Cultivo primario de células de líquido amniótico. 2. Cultivo de células del líquido amniótico derivadas