16
BAB III
METODE PRAKTIKUMA. Sterilisasi Alat Diagnostik1. Alat dan
Bahan
a. Alat
1) Diagnostic set
2) Cotton buds steril3) Tabung reaksi4) Rak tabung reaksi5)
Mikropipet (1-1000 l dan 10-100 l)
6) Cawan petri7) Drugalsky8) Vortex mixer9) Inkubator10)
Bunsen11) Isolasi12) Spidol
b. Bahan1) Alkohol2) Larutan fisiologis (NaCl)3) Aquadest
steril.2. Cara Kerjaa. Persiapkan alat dan bahan yang dibutuhkanb.
Praktikan mensterilkan diri terlebih dahulu sebelum praktikum,
kemudian menggunakan alat perlindungan diri seperti sarung tangan
dan masker
c. Sterilkan tempat yang digunakan sebagai alas praktikum dengan
menggunakan alkohold. Diagnostik set disterilisasi dengan
menggunakan autoklaf terlebih dahulue. Selanjutnya dilakukan swab
menggunakan cotton buds steril pada diagnostik set, kemudian
dimasukan ke dalam tabung reaksi berisi aquadest steril untuk
dilakukan pengenceran 10-1f. Tabung reaksi pengenceran 10-1
dilakukan pencampuran antara bakteri dan larutan NaCl dengan
menggunakan vortex mixerg. Diambil 0,1 ml dari pengenceran 10-1
dengan menggunakan mikropipet, lalu diteteskan ke dalam cawan petri
berisi NA padath. Lakukan kerja asesptis dengan selalu melakukan
kerja di dekat api pada bunseni. Drugalsky disemprot alkohol,
kemudian keringkan di dekat api pada bunsenj. Tunggu hingga
drugalsky tidak terasa panas dengan menempelkan ujung drugalsky
pada bagian penutup cawan petrik. Raba pada bagian atas penutup
cawan petri dan pastikan sudah tidak teraba panasl. Setelah tidak
teraba panas, ratakan suspensi yang telah diteteskan di atas NA
padat pada cawan petri dengan menggunakan drugalskym. Isolasi cawan
petri hingga dipastikan tertutupn. Inkubasi dengan suhu 37oC selama
2x24 jam didalam inkubator dengan posisi cawan petri terbalik.B.
Sterilisasi dengan Zat Kimia / Antiseptik1. Alat dan Bahana.
Alat
1) Cotton buds steril2) Tabung reaksi3) Rak tabung reaksi4)
Cawan petri5) Drugalsky6) Mikropipet (1-1000 l dan 10-100 l)7)
Vortex mixer8) Inkubator9) Bunsen10) Isolasi
11) Spidol
b. Bahan1) Alkohol2) Sabun antiseptik (Dettol)3) Larutan
fisiologis (NaCl)4) Aquadest steril
2. Cara Kerjaa. Persiapkan alat dan bahan yang dibutuhkanb.
Praktikan mensterilkan diri terlebih dahulu sebelum praktikum,
kemudian menggunakan alat perlindungan diri seperti sarung tangan
dan maskerc. Sterilkan tempat yang digunakan sebagai alas praktikum
dengan menggunakan alkohold. Dilakukan pengenceran kontrol terlebih
dahulu lalu kemudian perlakuan.
Kontrol :a. Telapak tangan probandus diswab dengan menggunakan
cotton buds steril 1 arah dan menyeluruhb. Cotton buds yang telah
diswab dimasukan ke dalam tabung reaksi berisi larutan fisiologis
(NaCl) yang merupakan seri pengenceran 10-1c. Tabung reaksi pertama
merupakan seri pengenceran 10-1 dilakukan pencampuran antara
bakteri dan larutan NaCl dengan menggunakan vortex mixerd. Diambil
1ml dengan menggunakan mikropipet, kemudian dimasukkan ke dalam
tabung reaksi kedua yang berisi larutan NaCl 9ml (seri pengenceran
10-2)e. Tabung reaksi kedua yang merupakan seri pengenceran 10-2
dilakukan pencampuran antara bakteri dan larutan NaCl dengan
menggunakan vortex mixerf. Diambil 1ml dengan menggunakan
mikropipet, kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi ketika yang
berisi larutan NaCl 9ml (seri pengenceran 10-3)
1 ml
1 ml
9 ml NaCl 9 ml NaCl 9ml NaCl10-1
10-2
10-3g. Sebelumnya dilakukan pemberian nama terlebih dahulu pada
setiap cawan petri sesuai dengan pengencerannya (10-2 dan 10-3)
h. Diambil 0,1 ml dari seri pengenceran 10-2 dan 10-3 dengan
menggunakan mikropipet, lalu diteteskan kedalam cawan petri berisi
NA padat masing-masing sesuai penamaan i. Lakukan kerja asesptis
dengan selalu melakukan kerja di dekat api pada bunsenj. Drugalsky
disemprotkan alkohol, kemudian keringkan di dekat api pada bunsenk.
Tunggu hingga drugalsky tidak terasa panas dengan menempelkan ujung
drugalsky pada bagian penutup cawan petril. Raba pada bagian atas
penutup cawan petri dan pastikan sudah tidak teraba panasm. Setelah
tidak teraba panas, ratakan suspensi yang telah diteteskan di atas
NA padat pada cawan petri dengan menggunakan drugalskyn. Isolasi
cawan petri hingga dipastikan tertutup o. Inkubasi dengan suhu 37oC
selama 2x24 jam didalam inkubator dengan posisi cawan petri
terbalikPerlakuan :a. Telapak tangan probandus yang sama
disterilkan dengan sabun antiseptik (Dettol), kemudian diswab
dengan menggunakan cotton buds steril 1 arah dan menyeluruhb.
Cotton buds yang telah diswab dimasukan ke dalam tabung reaksi
berisi larutan fisiologis (NaCl) yang merupakan seri pengenceran
10-1c. Tabung reaksi pertama merupakan seri pengenceran 10-1
dilakukan pencampuran antara bakteri dan larutan NaCl dengan
menggunakan vortex mixerd. Diambil 1ml dengan menggunakan
mikropipet, kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi kedua yang
berisi larutan NaCl 9ml (seri pengenceran 10-2)e. Tabung reaksi
kedua yang merupakan seri pengenceran 10-2 dilakukan pencampuran
antara bakteri dan larutan NaCl dengan menggunakan vortex mixerf.
Diambil 1ml dengan menggunakan mikropipet, kemudian dimasukkan ke
dalam tabung reaksi ketika yang berisi larutan NaCl 9ml (seri
pengenceran 10-3) 1 ml
1 ml
9 ml NaCl 9 ml NaCl 9ml NaCl10-1
10-2
10-3g. Sebelumnya dilakukan pemberian nama terlebih dahulu pada
setiap cawan petri sesuai dengan pengencerannya (10-2 dan 10-3)
h. Diambil 0,1 ml dari seri pengenceran 10-2 dan 10-3 dengan
menggunakan mikropipet, lalu diteteskan ke dalam cawan petri berisi
NA padat masing-masing sesuai penamaani. Lakukan kerja asesptis
dengan selalu melakukan kerja di dekat api pada bunsenj. Drugalsky
disemprot alkohol, kemudian keringkan di dekat api pada bunsenk.
Tunggu hingga drugalsky tidak terasa panas dengan menempelkan ujung
drugalsky pada bagian penutup cawan petril. Raba pada bagian atas
penutup cawan petri dan pastikan sudah tidak teraba panasm. Setelah
tidak teraba panas, ratakan suspensi yang telah diteteskan di atas
NA padat pada cawan petri dengan menggunakan drugalskyn. Isolasi
cawan petri hingga dipastikan tertutupo. Inkubasi dengan suhu 37oC
selama 2x24 jam didalam inkubator dengan posisi cawan petri
terbalik.
