Upload
alex-dinu
View
261
Download
1
Embed Size (px)
Citation preview
7/27/2019 Algoritm virusologic
1/44
VIRUSOLOGIE
Lucrari practice
Prepar. Univ Dr. Aura Temereanca
Asist. Univ dr. Cornel Popescu
Sef Lucrari Univ. dr. Camelia Sultana
7/27/2019 Algoritm virusologic
2/44
ALGORITMUL
DIAGNOSTICULUI
IN VIROZE
7/27/2019 Algoritm virusologic
3/44
Etapele diagnosticului
virusologic
Orientarea diagnosticului (suspiciunea
de viroz)
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice Direciile diagnosticului virusologic
7/27/2019 Algoritm virusologic
4/44
Etapele diagnosticului
virusologic
Orientarea diagnosticului Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
7/27/2019 Algoritm virusologic
5/44
Formular de trimitere pentru diagnostic
virusologicAdresa spitalului/policlinicii/
cabinetului ce trimite produsul
patologic
Medicul caruia i se va
comunica rezultatul (tel, fax, e-
mail)
Nume, prenume pacient Sex, Varsta
Date clinice, suspiciunediagnostic
Data debutuluisimptomatolgiei
Tipul produs patologic Data, ora recoltarii
Tipul tratamentului administrat
in prealabil
Date epidemiologice (contact
cu boli infectioase
transmisibile, vectori, calatoriiin zone endemice pt o anumita
boala, vaccinari)
Analiza solicitata
Semnatura, parafa medicului
7/27/2019 Algoritm virusologic
6/44
V. Varicela - Zoster
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/dc/Herpes_zoster_neck.pnghttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/0/03/Child_with_chickenpox.jpghttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/dc/Herpes_zoster_neck.png7/27/2019 Algoritm virusologic
7/44
Etapele diagnosticului
virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsuluipatologic
Transportul produselor patologice Direciile diagnosticului virusologic
7/27/2019 Algoritm virusologic
8/44
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE
S T E R I L !!!
7/27/2019 Algoritm virusologic
9/44
Conteinere sterile pentru recoltarea si transportul
produselor patologice
7/27/2019 Algoritm virusologic
10/44
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE
S T E R I L ! ! !
7/27/2019 Algoritm virusologic
11/44
Recoltarea probelor- locul & timpul potrivit
POLIO (enterovirusuri)
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/77/Polio_EM_PHIL_1875_lores.PNGhttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/57/Polio_lores134.jpg7/27/2019 Algoritm virusologic
12/44
Recoltarea produselor patologice
7/27/2019 Algoritm virusologic
13/44
PRODUSE PATOLOGICE Snge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant.
Virusur i frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici aifebrelor hemoragice.
Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitateaenterovirusurilor).
Virusur i frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai raradenovirusuri enterice.
Secretii nazo faringiene
a)spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu
coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior.b) aspiratul nazofaringian se obtinefolosind un speculum nazal prin
administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub deplastic.
c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii specialede catre personal calificat
Virusur i frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale,adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial,v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian.
Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte deinceperea tratamentului.
Virusur i frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.
7/27/2019 Algoritm virusologic
14/44
PRODUSE PATOLOGICE Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril.
Frecventeste limitata la diagnosticul infectiei rabice.
Lichid vezicular- Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se facedupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeazavezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul uneipipete.
Virusur i frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV.
Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune
timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic.Virusur i frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos.
Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelulcolului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile,respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabilaa regiunii.
Virusur i frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic
BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale. Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate n ctiva ml de solutie
salina + ser de vitel 10% + antibiotice n concentratiile folosite n culturile decelule.
7/27/2019 Algoritm virusologic
15/44
Etapele diagnosticului
virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor
patologice Direciile diagnosticului virusologic
7/27/2019 Algoritm virusologic
16/44
Transportul probelor recoltate
Rapid
La rece
Sigur ambalare riguros corecta
etichetarea cu semn biorisc
documentatie in legatura cuagentul biologic transportat
7/27/2019 Algoritm virusologic
17/44
Etapele diagnosticului
virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticuluivirusologic
7/27/2019 Algoritm virusologic
18/44
DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC1. Izolarea viral
2. Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale
3. Diagnosticul serologic
7/27/2019 Algoritm virusologic
19/44
Izolarea
virusurilor
7/27/2019 Algoritm virusologic
20/44
Izolarea virusurilor
3 sisteme de izo larefolosite n virusologie
Culturi de celule
Ou de gin embrionat
Animalul de laborator
7/27/2019 Algoritm virusologic
21/44
Izolarea virusurilor
in culturi de celule
7/27/2019 Algoritm virusologic
22/44
HEK 293 HeLa BSC-40
Infectate cu v. variolic
Neinfectate
Izolarea pe culturi de celule
= EFECTE CITOPATICE
7/27/2019 Algoritm virusologic
23/44
RABIE
Sus- neuron fara
incluzii NegriJos neuron cu incluzii
Negri (col HE)
7/27/2019 Algoritm virusologic
24/44
Izolarea virala
prininoculare la
animalul delaborator
7/27/2019 Algoritm virusologic
25/44
RABIEmodificari
patognomonice in SNC
Infiltrat mononuclear perivascular-sus
Focare de infiltratie limfocitare in
celulele gliale -jos
7/27/2019 Algoritm virusologic
26/44
Pocks-uri pe Membrana Chorio-alantoindiana OGE - v. variolic
Izolarea virala prin inoculare pe OGE
7/27/2019 Algoritm virusologic
27/44
DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC1. Izolarea viral
2. Demonstrarea prezeneivirusului / componentelor sale
3. Diagnosticul serologic
7/27/2019 Algoritm virusologic
28/44
Detectia directa
a particulei
virale
7/27/2019 Algoritm virusologic
29/44
Microscopia electronica
Coloratia negativa
acetat de uranil
acid fosfotungstic
Metode care cresc sensibilitatea
(106-108 particule/ml)
Metode de concentrare: ultracentrifugare
difuzia in agar
centrifugare directa pe grila de ME
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/6e/Elektronenmikroskop.jpg7/27/2019 Algoritm virusologic
30/44
Microscopie electronica
Coloratie negativa
vaccinia
7/27/2019 Algoritm virusologic
31/44
Microscopie electronica
Coloratie negativa
variola
7/27/2019 Algoritm virusologic
32/44
Electron micrographs of hepatitis C virus purified from cell culture.
Scale bar is 50 nanometers.
7/27/2019 Algoritm virusologic
33/44
Detectia directa acomponentelor
viraleAcid nucleic
Antigene virale
7/27/2019 Algoritm virusologic
34/44
Detectia directa a acidului
nucleic viral - PCR
7/27/2019 Algoritm virusologic
35/44
Thermocycler
7/27/2019 Algoritm virusologic
36/44
Detectia directa a antigenelor
viraleELISA (test imuno-enzimatic)
7/27/2019 Algoritm virusologic
37/44
sandwich ELISA. (1) Plate is coated with a capture antibody; (2) sample is added,
and any antigen present binds to capture antibody; (3) detecting antibody is added,
and binds to antigen; (4) enzyme-linked secondary antibody is added, and binds to
detecting antibody; (5) substrate is added, and is converted by enzyme to
detectable form.
http://en.wikipedia.org/wiki/ELISAhttp://en.wikipedia.org/wiki/ELISA7/27/2019 Algoritm virusologic
38/44
Detectia directa a antigenelor virale
reactia de imunofluorescenta (IF)(test rapid de detectie a Ag)
7/27/2019 Algoritm virusologic
39/44
Identificarea virusurilor prin neutralizarea
efectului citopatogen
Reactia de Seroneutralizare
- Identificarea Enterovirusurilor
RSN
7/27/2019 Algoritm virusologic
40/44
Identificarea virusurilor prin inhibarea efectului viral
Matrice
Nucleocapsida helicoidala
ARNss
HA - hemaglutinina
transcriptaza
anvelopa
NA - neuraminidaza
Reactia de Hemaglutinoinhibare
-Identificarea virusurilor gripale
RHAI
7/27/2019 Algoritm virusologic
41/44
DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC1. Izolarea viral
2. Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale
3. Diagnosticul serologic
7/27/2019 Algoritm virusologic
42/44
Raspuns
imun
primar
Raspuns
imun
secundar
Diagnosticul serologic in infectiile virale
7/27/2019 Algoritm virusologic
43/44
Diagnosticul serologic pe prob unic de ser- anticorpi antivirali de
tip IgM (rspunsul imun primar) - ELISA decaptur
pe probe pereche de ser- proba I - la debut- proba II - la 2-3 sptmni
ELISA tehnica indirect sau de competiie
seroconversia In proba I nu exist anticorpi In proba II apar anticorpi specifici virusului de detectat
creterea semnificativ a titrului de anticorpi ntrecele 2 probe (de minim 4 ori)
7/27/2019 Algoritm virusologic
44/44
Etapele diagnosticului virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
Izolarea viral
Dem. virusului/
componente
Diagnosticul
serologic