1RIESGO BIOLGICO = BIOHAZARD

Biohazard are infectious agents or hazardous biological materials that present a risk or potential risk to the health of humans or animals. The risk can be direct through infection or indirect through damage to the environment

Unlike chemical hazards, infectious agents have the ability to replicate and to give rise to large numbers or organims when small numbers are released from a controlled situation

CONTENCIN AISLAMIENTO - ELIMINACIN

Lawrence Livermore Laboratory Biosafety Manual

RIESGO

Por qu medidas de seguridad?

Para proteger :

A los investigadores A los productos A los colaboradores Al personal de mantenimiento y limpieza Al medio ambiente

BIOSEGURIDAD EN LA MANIPULACIN DE AGENTES BIOLGICOS

Barreras primariasProcedimientos de trabajoEquipos de seguridadLimpieza, desinfeccin y esterilizacin

Barreras secundarias:Instalacin, diseo del laboratorio y ubicacinEliminacin de residuosEnvio de material biolgico

2BIOSEGURIDAD EN LA MANIPULACIN DE AGENTES BIOLGICOS

Identificacin del RiesgoInfeccin adquirida en el laboratorio (IAL)EpidemiologiaMecanismos de transmisin

Evaluacin del RiesgoFactores humanosFactores microbianosGrupos de riesgo de microorganismos

Control del RiesgoBarreras primarias: entre AB y personas y ambiente del laboratorioBarreras secundaries (3 y 4): entre AB y el ambiente externo

Gua tcnica para la evaluacin yPrevencin de los riesgos relacionadosCon la exposicin a agentes biolgicos

RD 664/1997 de 12 de mayo

3Infeccin adquirida en el laboratorio : Enfermedad infecciosa que se adquiere como consecuencia del trabajo directo con agentesbiolgicos o al realizar actividades en el laboratorio.

- Si el microorganismo NO se encuentra en la comunidad- Si se ha producido un accidente- Si hay datos clnicos que ayudan, como una ruta de entrada no habitual o diferncias en los tiempos de incubacin. -Epidemiologia: casos repetidos en un tiempocorto

-Si el microorganismo se encuentra en la comunidad y en el laboratorio- Si es consecuencia de un accidente no renocido- Si los tiempos de incubacin son muyprolongados

?

Identificacin del Riesgo : IAL

Fcil de reconocer Difcil de reconocer

- Hay una clara falta de informacin sobre casos reales- Por un cierto desnters en el problema- Por que habitualmente se asocia con un trabajo mal hecho- Faltan publicaciones y recopilaciones

Sulkin i Pike 1949, 1951, Pike, 19791980 Descripcin del HIV: Aceptacin de las NORMAS UNIVERSALES

-Harding i Byers (2000): Revisin publicacions 1979-1999

-Tipo de microorganismo Tipo de laboratorio Ncasos/poblacin de riesgoBacterias 40% Lab diagnstico 44,9 4,1 IAL/ 1000 empleatsVirus 41,2% Lab investigacin 50%Rickettsias 14,4% Lab. Docncia 0,8%Hongos 0,4% Lab Produc. Biolog. 3,5%Parsitos 3,7%

Epidemiologa de la IAL : Suconocimiento nos permitirconocer las formas de transmisiny reducir el riesgo

Identificacin del Riesgo : IAL

82% IAL No se conoce el accidente que ha provocado la infeccin, tan solo se conoce : que la persona ha tenido contacto con el agente biolgico o que ha trabajado en el laboratorio o que ha estado expuesta a animales infectados

18% IAL Se asocian con un accidente conocido27% Vertido con formacin de aerosoles25% Pinchazos con agujas16% Cortes con objetos punzantes13% Mordeduras y araazos de animales13% Contacto con ectoparsitos

4Vas de transmisin de las IAL

Va parenteral Va digestiva Va respiratoria Va drmica

Identificacin del Riesgo : Vas de transmisin

Va parenteral :

Accidente : PinchazoAraazo o mordisco de animales

Tipo de agente : cualquier agente que acceda a la sangre puede provocar infeccin

Prevencin : Precaucin con agujas (no encapuchar) : chemo-boxRecoger materiales punzantes y cristales con precaucinTrabajar con guantes en la manipulacin de animales

Vas de transmisin de las IAL

Va parenteral Va digestiva Va respiratoria Va drmica

Identificacin del Riesgo : Vas de transmisin

Va digestiva :

Accidente : Movimientos inconscientes mano-boca con lpices contaminadosComerse las uasNo seguir normas bsicas del laboratorio : no comer, beber,... No lavarse las manos con frecuencia y antes de salir del laboratorioPrcticas incorrectas : pipetear con la boca

Tipo de agente : enteropatgenos (dosis infectiva mnima baja)

Prevencin : Seguir normas bsicas de comportamiento del laboratorio(No ponerse nada en la boca)

5Vas de transmisin de las IAL

Va parenteral Va digestiva Va respiratoria Va drmica

Identificacin del Riesgo : Vas de transmisin

Va respiratoria :

Accidente : Inhalacin de microorganismos que se encuentran en el aire por formacin de aerosoles como consecuencia de vertidos, centrifugacin, vortexy sonicadores, salpicaduras, obertura de tubos, incineracin de asas de siembra, ... Formacin de ncleos de gotas 5 m que se evaporan y pueden inhalarsey llegar a los pulmones

Tipo de agente : Patgenos habituales del tracto respiratorio (Mycobacterium tuberculosis) Patgenos no habituales del tracto respiratorio (su manipulacin en concentraciones elevadas puede provocar patologas

Prevencin : Evitar la formacin de aerosolesCrear barreras a la dispersin de ncleos de gotas

Vas de transmisin de las IAL

Va parenteral Va digestiva Va respiratoria Va drmica

Identificacin del Riesgo : Vas de transmisin

Va drmica :

Accidente : Exposicin de la piel no intacta o de mucosas a superficies o material contaminado : salpicaduras en los ojos o en la cavidad nasal, tocarse la cara o los ojos con la mano

Tipo de agente : muchos tipos

Prevencin : Cubrir las lesionesProteger las mucosasLavado y desinfeccin de las manos

6Riesgo : Probabilidad de que se produzca un dao, lesin o enfermedad

Antes de iniciar cualquier proyecto o actividad el Director del laboratorio o del proyecto ha de :

EVALUAR EL RIESGO

Finalidad: Reducir al mnimo el riesgo derivado de la exposicin a agentes biolgicos

Evaluacin del Riesgo

Factores a tener en cuenta en la evaluacin :

- Factores Humanos: Nivel de saludConocimientos del investigadorTipo de trabajo a realizar (tipo de exposicin)

- Factores microbianos : Caractersticas de los agentes biolgicos

Trabajo directo con el agente biolgico- Lab Microbiologa- Lab. Investigacin- Lab. Farmacetico (produccin de antibiticos, enzimas..)- Indus. Alimentaria (cerveza, quesos, yogurts,...)

Sin manipulacin directa del agente biolgico- Trabajo con animales o productos de origen animal- Trabajo en Lab. anlisis, veterinarios, investigacin- Eliminacin de residuos- Depuracin de aguas

============================================ No derivada de la actividad laboral

- Enfermedad infecciosa contagiada por otro trabajador

Evaluacin del Riesgo : tipo de exposicin

7Las caractersticas que se tienen en cuenta para agrupar los agentes biolgicos en los GRUPOS DE RIESGO son :

Evaluacin del Riesgo : caractersticas de los agentes biolgicos

Capacidad de provocar enfermedadesPeligrosidad para los trabajadoresCapacidad de contagioExistencia de profilaxis o tratamiento eficaz

CDC : Forma de transmisin

Puncin, ingestin, piel y mucosas

+ va respiratoria

desconocida

CDC : va transmisin

RD664/1997 / Gua Tcnica para la Evaluacin de los riesgos derivados de la Exposicin a Agentes Biolgicos

Anexo II: CLASIFICACIN DE LOS AGENTES BIOLGICOS

Evaluacin del Riesgo : caractersticas de los agentes biolgicos

RD664/1997

Notas : (1) Clasificacin hecha para individuos sanos(2) De algunos agentes se dispone de informacin adicional (T, toxina; V, existe vacuna;...)(3) La no inclusin de un agente no lo clasifica como GR-1 sino que :

(1) Se ha de identificar y clasificar de acuerdo a los grupos de riesgo(2) Ante la duda, tratarlo como del mximo grupo de riesgo posible

(4) Los virus no includos en la lista son mnimo del GR-2(5) Las cepas atenuadas bien caracterizadas no han de ser manipuladas con el mismo nivel de contencin

que la cepa madre(6) Los organismos genticamente modificados tienen un riesgo superior (RD178/2004, Ley 9/2003)

8sustituirlo por

Control del Riesgo : Normas y niveles de Bioseguridad

Principios bsicos de la Bioseguridad :

(1) Primera Norma de la Bioseguridad : Sustitucin de Agentes Biolgicos de Riesgo por los de un Riesgo Inferior

(2) Revisar los procesos en el laboratorio evaluando los riesgos. Tener presente que hacer un proceso como siempre no es necesariamente seguro.

(3) Frente a cualquier duda aplicar siempre las mximas precauciones posibles

Agente Biolgico con menor riesgo para el trabajador

Elementos de un programa de seguridad frente a la exposicin a agentes biolgicos-------------------------------------------------------------------------------------------Agentes Tipos de agentes biolgicos-------------------------------------------------------------------------------------------Procedimientos - Responsable - Investigadoresde trabajo - Acceso - Prcticas de laboratorio

- Manual de Bioseguridad - Control mdico- Control ambiental

------------------------------------------------------------------------------------------Barreras - Equipo de protecci individual (EPI)primarias - Cabinas seguridad biolgica------------------------------------------------------------------------------------------Barreras 2es - InstalacionesBarreras 3es - Ubicacin del laboratorio en el edificioBarreras 4es - Ubicacin del edificio

Control del Riesgo : Normas y niveles de Bioseguridad

LSB 1 / LSB 2 / LSB 3 / LSB 4

9Criterios del Nivel de Bioseguridad de los laboratorios

www.cdc.gov/od/ohs/biosfty/biosfty.htm

Conjunto de normas que han de cumplir los laboratorios en los que se manipulan microorganismos infecciosos, muestras de tejidos humanos o animales de laboratorio. Definen las combinaciones de : equipos de proteccin (barreras primarias), instalaciones del laboratorio (barreras secundarias) y de contencin del edificio (barreras terciarias), ms adecuadas para la manipulacin de los agentes biolgicos de riesgo.

Se definen 4 niveles de bioseguridad :

Nivel 1- Manipulacin de agentes que no producen enfermedad en adultos sanos

Nivel 2- Agentes patgenos en el hombre (riesgo = dao percutneo, ingestin, mucosas)

Nivel 3- Agentes patgenos con potencial de transmisin por aerosol

Nivel 4- Agentes peligrosos o patgenos con un alto riesgo de enfermedad, con transmisin por aerosol o por medios desconocidos.

LSB

1 :

Labo

rato

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e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 1

Agente : Agentes biolgicos bien caracterizados no causantes de enfermedades en adultos y con un riesgo mnimo para el personal del laboratorio y el medio ambiente, por ejemplo Bacillus subtilis, Eschericha coli, Naegleria gruberi, virus de la hepatitis infecciosa canina.

Procedimientos de trabajo : 1. Responsable : Cientfico capacitado (formacin microbiolgica, seguridad, ... )2. Investigadores : Estudiantes de secundaria y universitarios, personal con capacitacin profesional3. Acceso : limitado durante las horas de trabajo (puerta cerrada)4. Procedimientos : microbiolgicos estndard, seguridad laboral

Barreras primarias : 1. No se exige ningn tipo de equipo de

proteccin personal (EPI), se recomienda uso de guantes si hay lesiones en las manos, y de gafas si hay riesgo de salpicaduras

Barreras secundarias : 1. Lavabo disponible2. Mesas impermeables / resistentes a compuestos

qumicos y a calor moderado y de fcil limpieza3. Ventanas con proteccin anti-insectos

Barreras terciarias y cuaternarias :No aplica

Pueden actuar como patgenos oportunistas, produciendo infeccin en individuos jvenes, mayores inmunodeficientes o inmunodeprimidos

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LSB

1 :

Labo

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Niv

el 1

Prcticas de Laboratorio / Procedimiento Microbiolgico Estndard

1. Signo de riesgo biolgico en el exterior2. Prohibido beber, fumar, comer,... El alimento se guarda en neveras separadas3. Recomendada bata para la proteccin de la ropa de calle4. Prohibido pipetear con la boca5. Cuidado con los objetos punzantes, recogerlos en Chemo-Box6. Reduccin de aerosoles y salpicaduras7. Descontaminacin de la superficie de trabajo despus del trabajo y de un accidente8. Autoclavado del material antes de su descarte / eliminacin.9. Lavado de manos antes de salir y siempre que sea necesario

Elementos de riesgo en LSB-1:

1. Uso de mecheros bunsen2. Agujas y material cortante3. Pipetas4. Uso de centrfugas5. Rellenado y vaciado de tubos (aerosoles)

LSB

1 :

Labo

rato

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de

Niv

el 1

Elementos de riesgo en uso de LSB-1 : uso de mecheros Bunsen

Uso : esterilizacin de asas de siembra antes y despus de su uso creacin de una zona de aire caliente que dificulta la caida de partculas

Riesgo : Peligro de incendio y de fugas de gas Generacin de aerosoles En una cabina de seguridad biolgica : distorsiona el flujo laminar y puede daar filtro HEPA

Medidas a adoptar para mejorar la seguridad : sustituir el bunsen en la esterilizacin de asas de siembra por incineradores elctricos uso de bunsen protegido o piezoelctricos uso de asas de siembra de un solo uso

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LSB

1 :

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rato

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de

Niv

el 1

Elementos de riesgo en uso de LSB-1 : agujas y material cortante / punzante

Agujas y jeringuillas : slo cuando sea imprescindible, nunca encapuchar la aguja de nuevo no usar como pipetas eliminar la aguja en Chemo-Box evitar la formacin de aerosoles : no eliminar burbujas al aire sino sobre material absorvente, ni usarlas para mezclar lquidos

LSB

1 :

Labo

rato

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Niv

el 1

Elementos de riesgo en uso de LSB-1 : uso de pipetas

Pipetas : utilizarlas adecuadamente

1. Prohibido pipetear con la boca (ingestin oral)2. Evitar salpicaduras : comprobar correcto funcionamiento para

evitar goteo, uso de pipetas de doble enrase y de hojas de papelabsorbente

3. Evitar aerosoles : no expulsar violentamente los lquidos y no usar las pipetas para mezclar soluciones

Despus de su uso : Eliminarlas en contenedores de paredes duras o Chemo-Box Pipetas de cristal o reutilizables : sumergirlas en lejia(1/10), lavar y esterilizar Micropipetas o peras de goma : protegerlas con filtros Elegir dentro de lo posible micropipetas esterilizables Descontaminar, limpiar y calibrar peridicamente las micropipetas : externamente y el cilindro de entrada con alcohol etlico

12

Elementos de riesgo en uso de LSB-1 : uso de centrfugas

Riesgos asociados al uso de centrfugas :1. Riesgo de dao mecnico2. Riesgo por operacin incorrecta : mal equilibrado de tubos, rotor mal fijado, tubo rotos3. Generacin de aerosoles (cmara de centrfuga sucia o llena de lquidos de condensacin)

Seleccin de tubos para uso en centrfugas1. Tubos irrompibles, que se han de revisar antes de usar2. Conocer las propiedades antes de usar (polipropileno-policarbonato, esterilizables,... ) descartando

los tubos frgiles o de materiales peligrosos como los de nitrato de celulosa que son inflamables y estallan bajo presin

3. Usar los adaptadores adecuados para cada tipo de tubo4. En el caso de agentes biolgicos de riesgo las cestillas del rotor han de ser estancas as como la

cmara de la centrfuga.

LSB

1 :

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rato

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gurid

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Niv

el 1

Elementos de riesgo en uso de LSB-1 : rellenado y vaciado de tubos

LSB

1 :

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Niv

el 1

Rellenado de los tubos : Llenado de tubos en la cabina de seguridad biolgica Descontaminacin de la superficie externa con desinfectante Se puede poner un poco de desinfectante en el fondo del agujero del rotor

Vaciado de tubos : Eliminar el sobrenadante mediante aspiracin por vaco y uso de trampas (protegido) Resuspensin de precipitados por sistemas rotatorios (no violentos) Antes de abris un tubo esperar en resposo de 1 a 2 minutos.

Todos los procesos que generan aerosoles se pueden realizar en el interior de la Cabina de Seguridad Biolgica, incluso las microcentrfugas se pueden colocar en el interior de la cabina.

Otros procedimientos que pueden formar aerosoles : agitacin con vrtex (siempre con tubos cerrados) apertura de tubos (procurar no mojar los tapones, esperar a que sedimente el medio lquido, abrir con papel absorbente mojado en desinfectante, trabajar en cabina de seguridad biolgica,...) rotura de clulas mediante ultrasonidos, desintegracin mecnica, prensa de French... : trabajo en cabina de seguridad biolgica y descontaminacin del aparato despus de su uso.

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LSB

1 :

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Niv

el 1

Ejemplo 1 : instalacin bsica de cultivo celular : laboratorio 22 de Facultad de Biologia (LSB-1)

LSB-1Laboratorio 22Facultad de Biologia

CSB tipo I

CSB tipo IIA

Equipamiento : Cabinas de seguridad biolgica de tipo I y IIAIncubadores de CO2MicroscopiosCentrfugas y pequeo equipo

Instalaciones :Instalacin abierta

Procedimientos :Limpieza de superficies en las reas de contencinLimpieza de incubadoresRecogida selectiva de materiales : papel, plstico contaminado, slidos y lquidosDescontaminacin de residuos mediante autoclavadoLneas de vaco no filtradas

rea limpia

Incubadores de CO2

Area limpia : CSB I y IIA

Utilizacin de la instalacin :

Cultivo de lnea NRK (fibroblastos de rata)Cultivo de corta duracin (72 h)Formacin de estudiantes

Protecciones personales bsicas : bata de uso en el laboratorio, guantes, gafas, ...

LSB

1 :

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Niv

el 1

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LSB

2 :

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Niv

el 2

Agente : Agentes biolgicos que pueden provocar enfermedades y constituir un peligro serio para los trabajadores, pero para las que existe un tratamiento preventivo y paliativo (numerosos agentes biolgicos, fluidos corporales y sangre).

CDC : transmisin del agente por puncin, oral y drmica.

Procedimientos de trabajo : 1. Responsable : Cientfico competente (formacin microbiolgica, seguridad, ... )2. Investigadores : con conocimientos bsicos de trabajo con agentes biolgicos, conocen los riesgos3. Acceso : restringido durante las horas de trabajo (puerta cerrada) : no pueden acceder personas con riesgo de

adquisicin de enfermedades infecciosas o inmunodeprimidos. Signo de seguridad biolgica.4. Procedimientos : las de LSB-1 ms trabajo en cabina se seguridad biolgica en procedimientos de riesgo,

contenedores de seguridad, control de animales (desratizacin / desinsectacin, comunicacin de accidentes y vertidos al responsable de seguridad

Barreras primarias : 1. EPI : uso obligatorio de bata, se recomienda uso de guantes cuando se usa material infeccioso, se

recomienda uso de mascarillas y de gafas cuando hay riesgo de salpicaduras. 2. CSB cuando se trate de cantidades o concentraciones elevadas de agentes biolgicos o exista riesgo de

formacin de aerosoles

Barreras secundarias : 1. Las de LSB-12. Autoclave para todo el material descartado3. Mirilla o ventana para poder ver el trabajo en el interior

Barreras terciarias y cuaternarias :No aplica, se recomienda situar el laboratorio fuera de zonas de paso

2 2 Campylobacter jejuni2 2 Chlamydia trachomatis2 2(3) Clostridium botulinum: T (puede producir toxina) Toxoide pentavalente2 2 Mycobacterium fortuitum2 2(3) Neisseria meningitidis: V (vacuna eficaz disponible)2 2 Salmonella Paratyphi A,B,C : V

2 2 Virus de Norwalk2 2 Cytomegalovirus2 2 Virus influenza A, B, C: V2 2 Virus hepatitis A: V

2 2 Aspergillus fumigatus: A (posibles efectos alrgicos)2 2 Candida albicans: A

Ministeri CDC Microorganisme/caractersticaTreball..

LSB

2 :

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Niv

el 2

Agentes biolgicos en LSB-2

Agentes biolgicos del grupo 2 : aquel que puede causar una enfermedad en el ser humano y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz.

R.D. 664/1997

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LSB

2 :

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Niv

el 2

EPI : Equipos de proteccin individual

Equipo para ser usado individualmente por el trabajador con la finalidad de protegerse de uno o varios riesgos que pueden amenazar su seguridad o salud (NTP571 Nota tcnica de prevencin).

Reducir la exposicin con medidas tcnicas colectivas (p.ej. CSB) es ms seguro que usar numerosas protecciones individuales pues en el primer caso si el sistema falla avisa, cosa que no ocurre en el segundo.

Proteccin de la va respiratoria : mascarillas

Finalidad : evitar la inhalacin de aerosolesTipo de equipo, frente a microorganismos : mscara con filtro P3 (alta eficacia frente a partculas slidas y aerosoles lquidos), las mascarillas quirrgicas no protegen y no se consideran EPI.Uso recomendado al manipular aguas contaminadas, fluidos corporales, sangre,

Barreras primarias : Equipos de proteccin individual / Cabinas de seguridad biolgica

LSB

2 :

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Niv

el 2

Proteccin de la va drmica : guantes

Finalidad : evitar la penetracin de agentes biolgicos a travs de piel y mucosasTipo de equipo : han de cumplir la norma UNE-EN 374-2 (superan los ensayos de resistencia a pinchazos y de ausencia de imperfecciones y poros) barrera efectiva contra riesgos biolgicos.Los guantes mdicos de un solo uso (norma EN455) no protegen de agentes biolgicos (destinados a evitar la contaminacin cruzada entre pacientes)Uso : han de cambiarse al cambiar de actividad despus de una salpicadura despus de rotura o perforacin (comprobar si hay herida) no se ha de salir del rea de trabajo con los guantes puestos lavarse las manos antes de quitarse los guantes no protegen de los pinchazos no sustituyen a las buenas prcticas de laboratorio

Guantes de ltex Guantes de nitrilo o vinilo

Proteccin de la va parenteral : guantes

Finalidad : proteger frente a pinchazos No protegen frente a pinchazos, pero reducen 50% la cantidad de sangre transferida Doble guante reduce tasa de perforacin de 17,5% a 5,5%. Ideal : con malla metlica o un guante de tela entre dos de ltex o nitrilo-vinilo

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LSB

2 :

Labo

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de

Niv

el 2

Proteccin de la va ocular : gafas y pantallas

Finalidad : proteger los ojos y el rostro del riesgo de salpicaduras o aerosoles contaminados

Equipo : gafas de seguridad (proteccin de ojo) / pantallas o viseras faciales (proteccin del rostro)

Qu es una cabina de flujo laminar ?

CONTROLCONTROL

Proteccin al usuario

Proteccin al producto Proteccin al

medioambiente

LSB

2 :

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de

Niv

el 2

Cabinas de flujo laminar Cabinas de seguridad biolgica

Qu tipos de cabinas de flujo laminar hay ?

Cabinas de flujo laminar horizontal

Cabinas de flujo laminar vertical

Cabinas de seguridad microbiologica y citosttica

Barreras primarias : cabinas de seguridad biolgica

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CABINA DE FLUJO LAMINAR HORIZONTAL

proteccin total al producto

No proteccin al usuario

No proteccin al medio ambiente

REA DE TRABAJOREA DE TRABAJO

FIL

TR

O

UsuarioFlujoFlujoLaminarLaminar

PR

E-F

ILTR

O

AireAire de la de la SalaSala

Qu clase de proteccin?

LSB

2 :

Labo

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de

Niv

el 2

PARTES PRINCIPALES

2

4

3

15

66

5

77

Ventilador de alta eficaciacentrfuga

1

Cmara o plenum2

Filtro absoluto HEPA3

rea de trabajo (flujolaminar)

4

Aire de entrada al prefiltro5

Aire de entrada en la Sala6

Aire de extraccin7

4

2

3

1

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

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iol

gica

de

Niv

el 2

18

CABINAS DE FLUJO LAMINAR VERTICAL

. producto + proteccin bsicaal operador + no proteccin al

medio ambiente

rea de Trabajorea de Trabajo

FILTRO

PRE -FILTRO

10% EXPULSIN DE PREFILTRO

30 % EXPULSIN DE FILTRO

FILTRO

. producto + proteccin media al operador + proteccin media

al medio ambiente

FLU

JO

FLU

JO

LA

MIN

AR

LA

MIN

AR

10% 10%

AIRE DE AIRE DE LA SALALA SALA

rea de Trabajorea de Trabajo

FILTRO

FLU

JO

FLU

JO

LA

MIN

AR

LA

MIN

AR

30% 30% AIRE DE AIRE DE LA SALALA SALA

30% EXPULSI30% EXPULSIN: AIRE N: AIRE LIMIPIOLIMIPIO

10% 10% EXPULSIEXPULSINN

Qu tipo de proteccin? Qu tipo de proteccin?

LSB

2 :

Labo

rato

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e Se

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gica

de

Niv

el 2

7

4

23

1

55

6

4

23

1

30% EXPULSI30% EXPULSIN: AIRE N: AIRE LIMPIOLIMPIO10% 10%

EXPULSIEXPULSINN

Ventilador1

Flujo laminar Plenum2Flujo de expulsin del filtro HEPA 143rea de trabajo4

Aire de la sala5Expulsin del flujo del prefiltro

6Expulsin de flujo del filtro HEPA 14

7

DIAGRAMA DE TRABAJO

10% 10% AIRE DE AIRE DE LA SALALA SALA

30% 30% AIRE DE AIRE DE LA SALALA SALA

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

19

CABINAS DE SEGURIDAD MICROBIOLGICA

.producto + operador + medio ambiente

rea de Trabajorea de Trabajo

FILTRO

FILTRO

UsuarioUsuario

FLU

JO

FLU

JO

LA

MIN

AR

LA

MIN

AR

AIRE DE AIRE DE LA SALALA SALA

AIRE LIMPIOAIRE LIMPIO

Qu clase de proteccin?

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

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gurid

ad B

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gica

de

Niv

el 2

Sup

erfic

ie e

str

il

Cortina de aire sucio

LSB

2 :

Labo

rato

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e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

20

CABINAS DE SEGURIDAD CITOSTTICAS

2 producto + 2 operador + 2 medio ambiente

rea de Trabajorea de Trabajo

FILTRO

FILTRO

2 estadosde

filtracinde aire UsuarioUsuario

FLU

JO

FLU

JO

LA

MIN

AR

LA

MIN

AR

FILTRO

AIRE DE AIRE DE LA SALALA SALA

AIRE AIRE LIMPIOLIMPIO

Qu clase de proteccin?

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

CABINAS DE SEGURIDAD MICROBIOLGICA Y CITOSTTICAS- CLASE II

1 Ventilador centrfugo de altaeficacia

2 Cmara o Plenum

3 Filtro absoluto HEPA

4 rea de trabajo

5 Ventilador de expulsin

6 Filtro absoluto HEPA en

la extraccin

561

2

3

4

Aire Limpio

Aire FiltradoAire Mezclado

FiltroVentilador

CABINA DE SEGURIDAD MICROBIOLGICA CITOSTTICA

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

21

MODELOS

AV 100AV 100

SERIESERIE100100

SERIESERIE30/7030/70

MINI VMINI VPCRPCR

VERTICALVERTICAL

BV 100BV 100 BV 30/70BV 30/70

CV 100CV 100 CV 30/70CV 30/70

AV 30/70AV 30/70

SEGURIDAD SEGURIDAD MICROBIOLMICROBIOLGICA GICA

CLASSE iiCLASSE ii

BIOLOGICABIOLOGICA

BIO II A/MBIO II A/M

BIO II A/GBIO II A/G

BIO II ABIO II A

BIO II A/PBIO II A/P BIOSTARBIOSTAR CYTOSTARCYTOSTAR

SEGURIDAD SEGURIDAD CITOSTCITOSTTICATICA

CABINAS TELSTARCABINAS TELSTAR

MH 100MH 100 BH 100BH 100

HORIZONTALHORIZONTAL

AH 100AH 100MINI HMINI H

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

Existen actualmente dos normativas: La norma NSF-49-2002 de USA La norma EN-12469-2000 de Europa

La NSF-49 fue una de las primeras normas (1992) para cabinas de seguridadbiolgica y sirvi de base a la mayora de los fabricantes.

Normativas reguladoras de las CSB

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

CLASIFICACIN (COMN NSF-49 Y EN-12469)

Clase I: Proteccin al usuario y al medio ambiente. No proteccin al producto.

Clase II: Usuario, producto y medio ambiente son protegidos.

Clase III: Mxima proteccin al usuario, al producto y al medio ambiente.

22

La cabina ventilada con presin negativaopera normalmente con el frontal abierto.

Todo el aire de la cabina es expulsado a travs del fitro HEPA tanto en el laboratoriocomo en la salida.

Se disea para trabajar con agentes de riesgo bajo o moderado.

CLASIFICACIN CLASE I

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

0,4 1,0 m/s

Filtro primario

HEPA

Adecuada para la proteccin del usuario y el medio al manipular agentes biolgicos de clase 2 - 3.

Trabajo en presin negativa para proteccin del personal, Filtro HEPA con flujo laminar vertical para la proteccin al producto, y expulsin con filtros HEPA para la proteccin al medio ambiente.

BSCs se clasifican en dos tipos (A y B) segn: Construccin Velocidad de flujo laminar y patrones Sistemas de expulsin

CLASIFICACIN CLASE II

Un ventilador Dos ventiladoresLSB

2 :

Labo

rato

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e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

difusor

Filtr

o pr

ima r

ioFi

ltro

HEP

A

exclusin

Presin negativa

23

Cabina totalmente cerrada. Ofrece el grado ms alto de proteccin al personal y al medio ambiente de los

aerosoles contagiosos.

CLASIFICACIN CLASE III

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

Filtro primario

HEPA

Indicador de presin

Filtro HEPAde entrada

http://www.ductless.com/bio-class3.htm

http://purified.com/gb19.htm

LSB

2 :

Labo

rato

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iol

gica

de

Niv

el 2

24

LSB

2 :

Labo

rato

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e Se

gurid

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iol

gica

de

Niv

el 2

Barreras secundarias :

Autoclaves : descontaminacin de residuos en el laboratorio (control de funcionamiento)

Puertas con mirillas o ventanas para ver el interior

Barreras terciarias y cuaternarias

No aplica, aunque se recomienda instalar el laboratorio fuera de zonas de paso

Ejemplo 2 : instalacin de cultivo celular de investigacin : laboratorio 2 Departamento Biologia Celular, UB (LSB 2)

Sala de cultivos (LSB 2)(sobrepresionada)

-Totalmente estanca (salvo puerta)-Sistema de aire acondicionado y recirculacin independiente con salida filtrada al exterior-Presin positiva-3 cabinas de seguridad biolgica tipo II A con extraccin filtrada-Lineas de vacio filtradas-2 incubadores de CO2-Bao, centrfuga, microscopios, ...

Laboratorio 2

Precmara (sala limpia)neveras, congelador, almacen de productos de plsticoCambio de bataBloqueo de puertas

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

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ad B

iol

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de

Niv

el 2

25

LSB

2 :

Labo

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e Se

gurid

ad B

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gica

de

Niv

el 2

Hepatocitos rata Cordon umbilical humano (aislamiento HUVEC, HAEC)

Migracin celular Angiognesis

LSB

2 :

Labo

rato

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e Se

gurid

ad B

iol

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de

Niv

el 2

26

Procedimientos implementados en la instalacin BSL-2

Procedimientos de mantenimiento de equipos : CSB II-A Control de filtros y chequeo certificacin anualIncubadores de CO2 limpieza y control de CO2 (bimensual)Baos limpieza quincenal

Procedimientos de mantenimiento de instalacionesLmparas germicidasAire acondicionado filtracin

Procedimientos de limpieza y eliminacin de residuos

Procedimientos de esterilizacin de la sala : Diario :

Limpieza de superficies (alcohol)Eliminacin de residuosIrradiacin mediante lmparas germicidas

Ocasional :Formolizacin de cabinas

LSB

2 :

Labo

rato

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Niv

el 2

Ejemplo 3 : instalacin de cultivo celular de investigacin : servicios de cultivo del ParcCientific de Barcelona (LSB 2, 2+)

Sala de preparacin de materiales (CSB IIA), autoclave, neveras, congeladores, agitadores, ...

Autoclave de entrada

SAS : cambio de ropa (bata), gorro, patucos, mascarillaRegistro de entradaNormas de utilizacin y de emergenciaSobrepresin

Pasillo distribuidor y espacio comn con germicidas y sobrepresionado respecto salas de cultivo(neveras / congeladores)

LSB-2+ :Depresin. Filtracin de aire y acondicionamiento, germicida2 CSB II-A, 2 incubadores CO2, bao, centrfuga, microscopioPequeo equipoUso restringido grupo/s investigador/esSalas blancas de 10.000 partculas / m3

Sala de mquinas comunes : ultracentrfuga, microinyector, electroporador, ...

LSB

2 :

Labo

rato

rio d

e Se

gurid

ad B

iol

gica

de

Niv

el 2

27

Entrada en la instalacin

Solo personal autorizadoRegistro de entradaCambio de bata, gorro, patucos y mascarilla

LSB

2 :

Labo

rato

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e Se

gurid

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gica

de

Niv

el 2

Entrada en instalacin

Limpieza de manosAutoclave de entrada

LSB

2 :

Labo

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de

Niv

el 2

Instalacin PCB : video 1

28

CSB-IIA

CSB-IIA

LSB

2 :

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de

Niv

el 2

video 2

LSB

3 :

Labo

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de

Niv

el 3

Agente : pueden causar daos serios o potencialmente letales como consecuencia de exposicin a la va de inhalacin. Ejemplos: M. tuberculosis, St. Louis encephalitis virus, Coxiella burnetii, RetrovirusCDC : microorganismos con transmisin area

Procedimientos de trabajo : 1. Responsable : Cientfico competente con experiencia en la manipulacin del agente biolgico2. Investigadores : con experiencia y instrucciones especficas para la manipulacin del agente biolgico 3. Acceso : restringido, con control de acceso a los trabajadores (registro) y el responsable de seguridad controla el

acceso del personal de mantenimiento. Signo de seguridad biolgica.4. Procedimientos : las de LSB-2 ms procedimientos documentados de manipulacin y seguridad, uso de

contenedores especiales (estancos) para el transporte de material contaminado, procedimientos estrictos de descontaminacin despus del trabajo con material infeccioso. Necesario un MANUAL DE SEGURIDAD y el SEGUIMIENTO DEL ESTADO DE LA SALUD de los trabajadores (control serolgico peridico, al menos anual...)

Barreras primarias Las de LSB-2 adems de : 1. EPI : uso obligatorio de ropa especial para el laboratorio, que ser descontaminada antes de

lavar, uso obligatorio de guantes, mascarillas, etc... 2. Todas las manipulaciones de agentes infecciosos se han de hacer en CSB3. Sistemas de centrifugacin de seguridad

Barreras secundarias Las de LSB-2 adems de : 1. Las de LSB-22. Cierre de puertas durante el trabajo, recomendado el acceso por

doble puerta (esclusa)3. Lneas de vaco filtradas4. Presin negativa5. Salida de aire directa al exterior a travs de filtro HEPA sin

recircularizacin6. Controles peridicos de funcionamiento de la instalacin

Barreras terciarias y cuaternarias :Laboratorio separado de todas las actividades que se hacen en el edificio

29

Ministerio CDC Microorganism0/ caractersticas

3 2(3) Brucella melitensis3 2(3) Chlamydia psittaci3 2 Escherichia coli verotoxignica=: normalmente no infecciosa por aire, T3 2(3) Francisella tularensis: V3 3 Mycobacterium tuberculosis3 3 Rickettsia prowazekii3 2(3) Salmonella Typhi: =, T3 2 Shigella dysenteriae (tipo 1): =, T

3 2 Virus hepatitis E: =3 2 Virus hepatitis C: =, Conservar historial trabajador 40 aos3 2 Virus hepatitis B: =, V, Conservar historial trabajador 40 aos3 2 Virus hepatitis D: = Conservar historial trabajador 40 aos3 2(3) HIV: =, Conservar historial trabajador 40 aos

3 2(3) Coccidiodes immitis3 2(3) Histoplasma capsulatum

3 2 Leismania donovani: = (normalment no infeccioso por el aire)los niveles de contencin no tendrn que ser tan rigurosos

LSB

1 :

Labo

rato

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e Se

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gica

de

Niv

el 3

Agentes biolgicos del grupo 3 : aquel que puede causar una enfermedad grave en el ser humano y presenta un serio peligro para los trabajadores con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz.

R.D. 664/1997

Ejemplo 4 : instalacin de cultivo celular de Advancell, Parc Cientific de Barcelona, (LSB 2+, 3)

Laboratorio Advancell

Sala 2 Sala 1

CBS-II-A

CBS-II-ACBS-II-A

Caractersticas de la instalacin :

1. Unidad autosuficiente, aislada completamente del laboratorio, con lneas de aire filtrado y acondicionado propias.

2. Precmara con puertas bloqueables (esclusa) sobrepresionada respecto a las salas de cultivo y al laboratorio : esclusa de presin

3. Salas 1 y 2 independientes en filtracin y acondicionamiento de aire, y lneas de vaco filtradas

4. Salas blancas con nivel 10.000 partculas / m35. Salas de cultivo con 3 CSB-IIA, 2 incubadores, microscopio, baos y

pequeo equipo6. Sala 1 es instalacin radiactiva

Control de depresin de la sala 2

LSB

3 :

Labo

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de

Niv

el 3

30

Procedimientos implementados (ISO 9001/2000)/GLP:

1. Procedimientos de limpieza y mantenimiento de todos los equipos y de la instalacin.

2. Registro diario de temperaturas en salas, gradiente de presin, temperaturas y concentracin de CO2 en incubadores, de temperatura en neveras y congeladores, ...

3. Formacin de personal en reas de seguridad biolgica. Autorizacin por el responsable de la instalacin.

4. Normativa de uso de la instalacin (PNT) y de los equipos

5. Control de contaminacin ambiente (PNT) y registro de incidencias

Usos de la instalacin

Cultivos celulares primarios humanos y primatesCultivos celulares primarios no humanos no primatesCultivos celulares estables humanos y primatesCultivos celulares estables no humanos y primatesCultivos celulares modificados genticamenteProduccin adenovirus, infeccin adenovirusTransfeccin celular (OMG)

Limpieza cabina y lnea vaco

LSB

3 :

Labo

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e Se

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de

Niv

el 3

Instalaciones Procedimientos

Personal tcnico / cientfico

Supervisor

Formacin

PNTProtocolosBPL

31

Agente : Provocan enfermedades graves y constituyen un peligro grave para los trabajadores

Procedimientos de trabajo : 1. Responsable : Cientfico con experiencia reconocida2. Investigadores : con experiencia y entrenamiento especfico, son supervisados continuamente en su trabajo 3. Acceso : completamente restringido a las personas autorizadas, medidas de seguridad.4. Procedimientos : las de LSB-3 ms procedimientos documentados de manipulacin, seguridad,

descontaminacin y seguridad, redactados y ensayados por el personal en ausencia del agente biolgico. Necearioun MANUAL DE SEGURIDAD y el SEGUIMIENTO DEL ESTADO DE LA SALUD de los trabajadores (control serolgicoperidico, al menos anual...)

Barreras primarias Las de LSB-3 adems de : 1. EPI : cambio de ropa a la entrada, ropa de laboratorio y vestidos hermticos de presin

positiva, descontaminacin, cambio de ropa y ducha obligatoria a la salida2. Todas las manipulaciones de agentes infecciosos se han de hacer en CSB III o II con traje hermtico de

presin positiva3. El material ha de salir del laboratorio autoclavado o en un doble contenedor hermtico irrompible4. Suministro de material por autoclave de doble puerta.

Barreras secundarias Las de LSB-3 adems de : 1. Laboratorio sellado, en presin negativa2. Salidas de aire y agua conectadas a equipos de almacenamiento y

descontaminacin (filtros HEPA, radiacin UV, formalizacin,...)3. Lneas de vaco filtradas4. Presin negativa5. Salida de aire directa al exterior a travs de filtro HEPA sin

recircularizacin6. Controles continuos de funcionamiento de la instalacin

Barreras terciarias y cuaternarias :Laboratorio separado de todas las actividades que se hacen en el edificio o en un edificio aislado situado en un entorno poco habitado

LSB

4 :

Labo

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de

Niv

el 4

LSB

4 :

Labo

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gica

de

Niv

el 4

Agentes biolgicos del grupo 4 : aquel que causando una enfermedad grave en el ser humano supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista una profilaxis o tratamiento eficaz.

Ejemplos : Bacillus anthracis Virus de fiebres hemorrgicas

Ebola virus

Marburg virus

Bacillus anthracis

32

LSB

4 :

Labo

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e Se

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gica

de

Niv

el 4

LSB

4 :

Labo

rato

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iol

gica

de

Niv

el 4

Centro de Control en Sanidad Animal (CISA)Valdeolmos (Madrid)

Center for Disease Control, Atlanta, EE.UU

33

Riesgos en el Uso de las Clulas Eucariotas (en cultivo)

34

Reinheinsgebot (Ley de pureza, s XVI)

Mantenimiento de poblaciones mixtas de levaduras que garantizaran la calidad de la cerveza producida

Microscopio (s. XVII) Clulas

Microorganismos como patgenos Koch (tuberculosis) / Pasteur (antrax)

Vacunacin (Jenser) viruela...

Progreso civilizacin Avances Nuevos riesgos

Bioseguridad de productos comerciales basados en clulas

EpiAirWay

No know method can offer complete assurance that the cells are pathogen free

...agent that requires handling atBiosafety Level 2 containment

This line has NOT been screened for Hepatitis B, human immunodeficiency viruses or otheradventitious agents

35

Cual es la naturaleza del riesgo asociado al uso de cultivos celulares?

Los cultivos celulares no contaminados generalmente no presentan un riesgo significativo, y an la inoculacin drmica origina slo una inflamacin local. Sin embargo, estos cultivos pueden contribuir sustancialmente al riesgo de exposicin a agentes biolgicos ya que pueden actuar como la base o ayudar a la supervivencia y/o la replicacin de agentes oportunistas, o ser origen de otros riesgos potenciales.Gua Tcnica para la Evaluacin y Prevencin de los Riesgos relacionados con la exposicin a Agentes Biolgicos Ministerio de Trabajo y Asuntos Sociales

Potential biological hazards associated with cell culture arise from the possibility that they might contain or transmit infectious agents. It is prudent to consider all primary cells and cell lines to be potentially infectious, specially cells of primate origin (Berkeley University Biosafety Manual)

a. Carga patognicaa. Bacteriasb. Hongosc. Micoplasmasd. Virus

b. Capacidad alergnicaalrgenosc. Capacidad txica toxinasd. Capacidad oncognica (GMOs)e. Capacidad txica intrnseca

a. Carga patognicaa. Bacteriasb. Hongosc. Micoplasmasd. Virus

b. Capacidad alergnicaalrgenosc. Capacidad txica toxinasd. Capacidad oncognica (GMOs)e. Capacidad txica intrnseca

Fciles de detectar, usando medios libres de antibiticos por su capacidad de crecer superior a la del cultivo celular

Fciles de prevenir mediante uso de tcnica asptica y antibiticos -antifngicos:

-Penicilina / Estreptomicina / Fungizona- Gentamicina / Fungizona

Lactobacillus sp.

Penicillium sp.

36

a. Carga patognicaa. Bacteriasb. Hongosc. Micoplasmasd. Virus

b. Capacidad alergnicaalrgenosc. Capacidad txica toxinasd. Capacidad oncognica (GMOs)e. Capacidad txica intrnseca

Mollicutes (Mycoplasmas) son un grupo de pequeas bacterias que colonizan a su husped en una relacin comensal que puede derivar en patognica. Reconocidos en humanos, animales y plantas.

Infeccin debida a :

-kind gift de otro laboratorio (lineas contaminadas) troyano-Infeccin desde el personal del laboratorio-Entrada a partir de un cultivo primario establecido a partir de un animal infectado-Uso de suplementos de cultivo contaminados (suero, citokinas, ...) o tripsina.

Riesgos :

a. Patognicos. M. gallisecticum (clase 3 para animales), M. hyorhinis (clase 2 animales), M. pneumoniae (clase 2 humanos)b. No patognicos. M. arginini, M. orale, M. pirum, M. fermentans

ALTERACION DE LAS PROPIEDADES CELULARES, METABLICAS, DE REPRODUCCIN, DE ADHESIN, EXPRESIN GNICA, ETC...

Deteccin : tincin DAPI, cultivo en agar, PCR

Eliminacin :

-Tratamiento antibitico o con drogas (5-bromouracil)-Paso por animales nude-Eliminacin del cultivo

Tincin DAPI

Cultivo en agar

PCR

a. Carga patognicaa. Bacteriasb. Hongosc. Micoplasmasd. Virus

b. Capacidad alergnicaalrgenosc. Capacidad txica toxinasd. Capacidad oncognica (GMOs)e. Capacidad txica intrnseca

La ms grave pues puede ser latente y no ponerse de manifiesto mediante efectos citopticos.

Tipos de virus:

-En cultivos de clulas humanas y de primates : -hepatitis B y C (HBV, HCV), -human T-cell lymphotropic virus (HTLV), -herpesvirus (EBV, CMV, HSV-1 y 2,...), -Retrovirus, HIV

-En cultivos de clulas animales no humanas no primates : lymphocitic choriomeningitis virus (LCMV), Haantan virus (hemorrhagic fever with renal syndrom), Sendai virus (murineparainfluenza virus 1),...

Deteccin

MAP (Mouse antibody production assay), HAP (Hamster antibodyproduction assay), inoculacin en huevos embrionadosInoculacin de lneas celulares sensibles (de 4 a 6, MRC5 y Vero)Ensayos especficos (hibridacin DNA, PCR,...) para cada virus

Eliminacin

Eliminacin del cultivo

El riesgo de manifestacin de virus latentes se incrementa con las modificaciones gnicas (GMO) y los cambios en las condiciones de cultivo

Hepatitis C virus

Adenovirus

37

a. Carga patognicaa. Bacteriasb. Hongosc. Micoplasmasd. Virus

b. Capacidad alergnicaalrgenosc. Capacidad txica toxinasd. Capacidad oncognica (GMOs)e. Capacidad txica intrnseca

Capacidad de inducir la formacin de neoplasias (tumores) en el organismo humano

Capacidad txica intrnseca

En ningn caso el trabajador que realice los cultivos celulares podr utilizar sus propias clulas para el desarrollo in vitro. Las clulas humanas para cultivo debern obtenerse solamente de individuos que no tengan relacin con el trabajo experimentalGuia Tcnica para la Evaluacin y Prevencin de los riesgos relacionados con la Exposicin a Agentes Biolgicos, Ministerio de Trabajo y Asuntos Sociales

Modificaciones genticas GMO (organismos genticamente modificados)

-Cambio de las propiedades del cultivo : liberacin de agentes adventicios-Cambios en el vector empleado (por ej. Virus) con posibilidad de cambio de propiedades de replicacin, rango de huspedes, etc..-Aparicin de agentes portadores de secuencias oncognicas naturales o modificadas (retrovirus)

Riesgo :

Tendr en cuenta : -Naturaleza del husped-Naturaleza del vector-Naturaleza del donador de DNA/RNA-Tipo de secuencia : natural / modificada, conocida / desconocida, oncognica / no oncognica,...

Y adoptar las mximas medidas de contencin

REAL DECRETO 178/2004 de 30 de Enero 2004

Cmo determinamos el riesgo de un cultivo celular?

Hay que tener presente :

El origen de la lnea celular y de la poblacin de procedencia

El tejido de origen

Tipo de lnea celular

Tipo de manipulacin

Sanguinea / linfoide >> epidrmico

Normal / patognicoGrupo de riesgoHumano primate / no humano

Lnea estable

Cultivo primario

B95-8 EBVMT4 HTLVCultivo corto / largo

Concentracin patgenoAmplificacinModificacin gentica Ln

ea pr

imaria

38

las clulas son de origen humano o primate?

estn las clulas bien caracterizadas?

tienen un riesgo superior por haber sido modificadas genticamente o

infectadas con patgenos?

Clase de riesgo 1nivel de contencin 1

uso de BSC II

libres de patgenos?

tienen un riesgo superior por haber sido modificadas genticamente o

infectadas con patgenos?

tienen un riesgo superior por haber sido modificadas genticamente o

infectadas con patgenos?

Clase de riesgo mnima 2Mnimo nivel de contencin 2

Uso de BSC II

Clase de riesgo y nivel de contencin dependern del

agente patgeno o de la modificacin gentica

Clase de riesgo 1nivel de contencin 1

uso de BSC II no obligatorio

SI

SISI

SI

SI

SI

NO

NO

NO

NO

Guia Tcnica para la Evaluacin y Prevencin de los riesgos relacionados con la Exposicin a Agentes Biolgicos, Ministerio de Trabajo y Asuntos Sociales

39

las clulas son de origen humano o primate?

estn las clulas bien caracterizadas?

tienen un riesgo superior por haber sido modificadas genticamente o

infectadas con patgenos?

Clase de riesgo 1nivel de contencin 1

uso de BSC II

libres de patgenos?

tienen un riesgo superior por haber sido modificadas genticamente o

infectadas con patgenos?

tienen un riesgo superior por haber sido modificadas genticamente o

infectadas con patgenos?

Clase de riesgo mnima 2Mnimo nivel de contencin 2

Uso de BSC II

Clase de riesgo y nivel de contencin dependern del

agente patgeno o de la modificacin gentica

Clase de riesgo 1nivel de contencin 1

uso de BSC II no obligatorio

SI

SISI

SI

SI

SI

NO

NO

NO

NO

CARACTERIZACIN

CONTAMINACIN CRUZADA

Caracterizacin de las clulas

Problema : cmo determinar el origen de una clula?cmo controlar su linaje?

Atala, Lanz (2002) Methods of Tissue Engineering, Academic Press, p. 62

Cmo evitar la contaminacin cruzada / o los errrores de identificacin ?

Colecciones internacionales de lneas celulares (ATCC, ECACC, NIH,...)

Obtener siempre los stocks semilla de los cultivos de fuentes reconocidas que certifiquen el origen

Bancos locales o regionales : (eucellbank@ub.edu)

Manipular slo una lnea celular a la vez

No compartir medios de cultivo entre diferentes lneas celulares

Manipular las lneas celulares con mayor capacidad de proliferacin las ltimas

En el caso de cultivos de larga duracin : verificar peridicamente las propiedades del cultivo

Establecer un programa adecuado de almacenamiento de la lnea celular

No aceptar cultivos no-seguros, poco caracterizados o sin referencia... o tratarlos en consonancia

Cultivar las clulas correctamente

40

Mantenimiento de lneas celulares : stock semilla vs stock trabajo

Lneas celulares obtenidas, caracterizadas y libres de contaminacin Seed stock

ProtegidoNo disponible para uso generalexpansin

Using stock

Coleccin de alicuotas registradas

Usuario ocasional Usuario frecuente Personal stock

Colecciones internacionales o locales de lneas celulares

Registro de la lnea celular : alcuotas semilla y derivadas - TRAZABILIDAD

41

Resumen

1. El riesgo del cultivo celular es debido esencialmente a su carga patognica, que puede determinarse en la mayor parte de los casos.

2. El nivel de contencin y de manipulacin depender del riesgo del cultivo y por ello de su carga patognica. Como mnimo ser de tipo 2 salvo cultivos muy bien caracterizados y de corta duracin

3. El riesgo se minimiza siguiendo estrictamente los procedimientos establecidos en la instalacin de seguridad biolgica, desde la manipulacin, la limpieza, el mantenimiento y la descontaminacin.

4. Es de enorme trascendencia la correcta trazabilidad de los cultivos, el registro de los procesos y de los incidentes.

5. Todo el personal que emplea cultivos celulares ha de conocer en detalle, aceptar y aplicar los procedimientos establecidos que garantizan su seguridad y la del entorno

6. La determinacin del nivel de seguridad y contencin de un cultivo es en ltimo extremo responsabilidad del investigador responsable del proyecto que es quien mejor ha de conocer la naturaleza del cultivo empleado y los riesgos asociados.