Obtención de placas mitóticas en tejido intestinal Microlophus peruvianus. (Squamata: Tropiduridae)

Obtaining mitotic plates in intestinal tissue of Microlophus peruvianus. (Squamata: Tropiduridae)

M. Isabel. Hurtado1, R. Jaemy Romero1 y E. Adrian Torres1.

1 Laboratorio de Anatomía y Farmacognosia Vegetal. Departamento de Botánica. Facultad de Ciencias Biológicas.

Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Email: ge.qhura@gmail.com

Resumen.

El estudio citogenético de la lagartija costera Microlophus peruvianus en tinción con Giemsa 4% puede ser una alternativa para determinar las características de los cromosomas mitóticos. En el presente estudio se trabajo con tejido del epitelio intestinal de la especie en mención, tratado con un protocolo experimental.

Palabras clave: lagartija, Microlophus peruvianus, mitótico, cromosomas, intestino.

Abstract.

The cytogenetic study of coastal lizard Microlophus peruvianus in 4% Giemsa staining may be an alternative to determine the characteristics of mitotic chromosomes. In this study we worked with intestinal epithelial tissue of the species in question, treated with an experimental protocol.

Key words: lizard, Microlophus peruvianus, mitotic, chromosomes, intestine.

Introducción.

La lagartija de las playas Microlophus peruvianus Lesson 1826, es una de las especies más abundantes del Desierto Costero peruano (Dixon y Wright 1975; Pérez & Balta 2007), y su amplia distribución abarca casi todo el litoral peruano desde Piura hasta Arequipa (Carrillo & Icochea 1995, Zeballos et al. 2004). Debido a esta considerable amplitud en el nicho trófico, la lagartija de las playas M. peruvianus es considerada una especie con dieta de tipo

generalista (Péfaur y López-Tejeda 1983; Pérez y Balta 2007) y oportunista (Pérez y Balta 2007). Esta lagartija consume principalmente artrópodos (Péfaur y López-Tejeda 1983; Pérez y Jhancke 1998; Pérez y Balta 2007), también consume material vegetal (Péfaur y López-Tejeda 1983; Pérez y Balta 2007), e inclusive individuos juveniles de su propia especie (Pérez 2005a).

No se registran datos sobre la información genética de esta especie, lo cual nos muestra el largo camino por recorrer para conocer este particular ser.

Materiales y métodos:

Material biológico. Se utilizo una lagartija de la playa Santa Rosa de Ancón, Microlophus peruvianus es uno de los saurios más visibles del desierto costero peruano (Pérez y Balta, 2007). La captura se realizo el jueves 24 de mayo, se observo el espécimen sobre una piedra frente al mar, el método de captura fue realizado manualmente, entre las horas en las cuales las lagartijas toman el sol, entre las 10 a 15 horas, pues así aumenta la probabilidad de observarlas, luego se la guardo en una caja de madera hasta la universidad. El 25, se la peso, 48,3 g y se preparo la solución de Colchicina 0,25%. Los métodos de trabajo se basan en la Declaración de Helsinki de 1975 y a las leyes peruanas vigentes (Ley 27265).

Tratamiento. Se siguió el protocolo indicado por la  Blga. María Siles.

Inocular intraperionalmente colchicina 0,025% (por lo cual se diluyo en 2mL una pastilla de colchicina del laboratorio farmaindustria de 0,5mg). La dosis fue 0,012 ml/g; así q se inyecto 0,58 ml de solución. Luego de transcurridas las dos horas, se sacrifico al animal, haciendo que este inhale cloroformo dentro de una cámara; se disectó y se extrajo el intestino delgado. Después se abrió, limpio y lavo con agua de la grifería y agua destilada, tres veces, para evitar que la muestra se procese contaminada. Colocar el tejido en KCl para hipotonizar, al 4% por 20 minutos a 50°C en baño maría, luego enjuagar con agua destilada, tres veces. Por último se fijo el intestino en Carnoy I (3:1) en un frasco ámbar.

Obtención de placas. Colocar una pequeña porción del tejido, de preferencia 1 cm2, sobre una placa petri

inclinada. Luego agregar 1 gota de acido acético 50% por un minuto y disgregar las células hasta obtener una suspensión. Poner una gota de suspensión sobre portaobjeto apoyado sobre plancha térmica a 50ºC (es el squash, debe hacerse desde una altura mínima de 40 cm), pero nosotros pusimos a una altura de 2 metros aproximadamente. Al final se tiñe en Giemsa 4% por unos 7 a 8 min, observar y fotografiar.

Resultados

Los núcleos de las células del epitelio intestinal de Microlophus peruvianus se muestran deformadas por la acción física ejercida mecánicamente. Los núcleos en su mayoría se encuentran en interfase, otros pocos se observan en profase y algunos menos están con la membrana nuclear estallada dejando escapar pequeños corpúsculos que teóricamente serian cromosomas mitóticos.

Discusión.

La poca presencia de placas metafásicas se debe a que la Colchicina no actuó efectivamente, ya que el tiempo de acción preestablecido para el protocolo no fue el más adecuado. Posiblemente un mayor tiempo de acción de la Colchicina, aproximadamente 6 horas, como indica Gonzales et al. (2011)sería más adecuado.

Se pueden ver corpúsculos saliendo del interior de las membranas nucleares que han estallado por acción física mecánica. Se plantea la hipótesis que estos corpúsculos son cromosomas mitóticos del epitelio intestinal. Se dejan abiertas las posibilidades para futuros estudios sobre estos corpúsculos nucleares.

Conclusiones.

Finalmente podemos concluir que el protocolo efectuado en el presente estudio no es el adecuado para tratar el tejido del epitelio intestinal de Microlophus peruvianus, ya que presenta ciertas deficiencias que se deben ajustar, como por ejemplo el tiempo de acción de la Colchicina.

Recomendaciones.

Se recomienda ajustar los siguientes puntos que muestran más falencias:

Tiempo de acción de la Colchicina. Elegir un tejido con mayor resolución. Ajustar altura para ruptura de membrana nuclear

mediante acción mecánica.

Bibliografía:

a. Carrillo N. & J. Icochea. 1995. Lista taxonómica preliminar de los Reptiles vivientes del Perú. Publicaciones del Museo de Historia Natural Universidad Nacional Mayor de San Marcos (A) 49:1-27.

b. Dixon J. & J. Wright. 1975. A review of the lizards of the iguanid genus Tropidurus in Peru. Contribution in Science of Los Angeles County Museum. 271: 1-39.

c. Gonzales L.A. et al. 2011. Cariotipo de lagarto Tropirus hispidus (Sauria: Tropidurudae) en el oriente de Venezuela. Facultad de ciencias, Universidad Central de Venezuela. Caracas, Venezuela. Acta biol. Colomb, Vol 16 N°2: 121-134.

d. Kasahara S. et al. 1996. Comparative cytogenetic studies of eleven species of the Tropidurus torquatus group (Sauria, Tropeduridae), with bandaing patterns. Hereditas 125: 37-46

e. Machado K.C. et al. 1994. Citogenetic studies in six species of tropiduridae (sauria). Rev. Brasil. Genet. 17 (4): 401-408

f. Quispitúpac, E & J. Pérez. 2009. Dieta de la lagartija de las playas Microlophus peruvianus (Reptilia: Tropiduridae) en la playa Santo Domingo, Ica, Perú. Revista Peruana de Biología. 15(2): 129- 130.

g. Pefaur J. & E. López-Tejeda. 1983. Ecological notes on the lizard Tropidurus peruvianus in southern Peru. Journal of Arid Environmnets 6:155-160.

h. Pérez, J. & K. Balta. 2007. Ecología de la comunidad de saurios diurnos de la Reserva Nacional de Paracas. Revista Peruana de Biología 13(3): 169-176.

i. Pérez, J. & J. Jhancke. 1998. Saurios como consumidores de ectoparásitos de aves guaneras. Boletín del Instituto del Mar de Perú. 81-86.

j. Pérez, J. 2005a. Microlophus peruvianus. Cannibalism. Herpetological Review 36 (1): 63.

k. Zeballos P. et al. 2004. Distribución de los reptiles de Arequipa, sur del Perú. Dilloniana 4 (2).

Anexo 1

Figura 3.1. Se observa a Microlophus peruvianus en A. Vista lateral y B. Vista dorsal

A B

Anexo 2

Figura 3.2. Núcleos de las células de tejido intestinal de Microlophus peruvianus teñidos en Giemsa 4%. A.- Detalle de la dispersión de los núcleos en la lamina tratada. B.- Núcleo en profase mitótica. C, D.- Corpúsculos que provienen del interior de los núcleos explotados mecánicamente (posiblemente cromosomas).