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DRA. ALMA SERAFIN MUÑOZ 1 de Diciembre 2014 Morelia Michoacán, México.
I REUNIÓN NACIONAL DE LA RED TEMÁTICA DE BIOENERGÍA
X REUNIÓN NACIONAL DE LA REMBIO
Curso Escalamiento Industrial Sustentable de Bioenergía
3. ESQUEMAS DE ESCALAMIENTO INDUSTRIAL DE BIOENERGÉTICOS
BAJO LA PERSPECTIVA DE BIORREFINERIAS
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• Escalamiento:
Proceso donde se desarrollan criterios
y reglas de asignación numéricas con
el objetivo de determinar las unidades de medida significativa.
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Planta Piloto
Nivel Laboratorio
Integrada por partes específicas para
reproducir a escalas los procesos productivos
Modelos matemáticos
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Fenomenológico
Empírico
Similaridad
Geométrica
Mecánica
Térmica
Química
Modelos de
Escalamiento
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Curso Escalamiento Industrial Sustentable de Bioenergía
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ANALISIS DIMENSIONAL Herramienta para detectar errores en
cálculos
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Análisis de Polisácaridos
Serafin Muñoz A.H., Molina Guerrero C.E. ;Hernández Escoto H.,2009.
ESTUDIOS DE ESTIMACION DE RESIDUOS FORESTALES Y AGRICOLAS
ESTUDIOS DE SUSTENTABILIDAD SOCIO ECONOMICA
RESIDUOS AGRICOLAS ,FORESTALES, URBANOS (ORGANICOS, RESIDUOS PET)
MATERIAL PARA CONSTRUCCION
CASO DE ESTUDIO : BIOENERGETICOS
FTIR y OEM Characterization
Wheat Straw
Milling
ALKOX Pretreatment
Filtering
Washing and pH adjustment
Enzymatic Hydrolysis
Glucose Fermentation
For example: Ethanol
Solid Phase (Cellulose) Liquid Phase
Acid Ethanol precipitation
Filtering
Enzymatic Hydrolysis
Xylose Fermentation
For example: Ethanol
7 days oven heating for total Water Removal
Low Molecular Weight Phenolyc Compounds
and Salts
Liquid Phase (Lignin) Solid Phase (Hemicelluloses)
Sun R,. (2010), Cereal Straw as a Resource for Sustainable Biomaterials and Biofuels. Gould M, (1985), Studies on the Mechanism of Alkaline Peroxide Delignification of Agricultural Residues.
FTIR, SEM y OEM Characterization
•H2O2 al 2% (v/v) •NaOH Solution (50% w/v) to adjust initial pH •5N HCl Solution to maintain constant the pH at 11.5 •Wheat Straw at 6% •3mm approximate pw/particle size •Reaction time of 5 hours
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2. Etapa Experimental.
Micro-reactor
0.01 g de Paja deslignificada 60.9% Celulosa 21.6% Hemicelulosa 5.37% Lignina
Paja deslignificada Azúcares reductores Celulosa Hemicelulosa Lignina
Frontera del sistema
RENDIMIENTO DEL PROCESO
VELOCIDAD ESPECÍFICA DE REACCIÓN
-
Diagrama de causa y efecto para el análisis
• Las pruebas se realizaron en tubos eppendorf de 1.5 mL.
Método de ensayo
50
C 750 rpm
Solución con sustrato
500 µL de solución +
499 µL de buffer
1 µL de Accellerase 1500
Espectrofotómetro 540 nm
Cinética enzimática
Técnica de DNS
Se tomaron muestras en los
tiempos de:
1, 3, 5, 7, 10, 20, 40 min
Cinética de producción de azucares reductores Prueba de fibra de agave con 1 y 5 µL
Inhibición enzimática por glucosa
Inhibición por concentración de glucosa
Cálculo de actividad
específica de reacción
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
0 100 200 300 400 500 600
Concentr
acio
n d
e A
zucare
s r
educto
res (
mg/m
L)
Tiempo (min)
Se reporta en unidades internacionales por mg de proteína: U/mg (µmol/ mg min) La cantidad de enzima que es capaz de producir 1 μmol de azúcares reductores como glucosa en la mezcla de reacción por minuto bajo las condiciones especificadas.
Resultados actividad específica
Se ensayaron temperaturas de 45, 50, 57, 60 y 65
C
• Diseño experimental: Diseño factorial completo (FFD)
de 3 factores con 3 niveles cada uno, realizados por triplicado.
• pH: 4, 4.5 y 5 • T: 45, 50 y 55°C • Relación enzima sustrato 0.1, 0.3 y 0.5 ml/g de
celulosa.
•
Diseño experimental
Experimentos micro-reacción.
Preparación de sacarificación
Termomixer 750 rpm
Reacción (DNS, Megazyme) Espectrofotómetro
Progreso de la sacarificación.
Resultados
Los resultados se analizan utilizando el software estadístico JMP 9.0.
Deben probarse los supuestos estadísticos de: Normalidad Homogeneidad Independencia
Normalidad
Los datos se ajustan a una distribución normal
Homogeneidad
Homogeneidad
Homogeneidad
Análisis de varianza
Si Prob >F es menor a 0.05 el parámetro afecta significativamente al proceso
Cinética de Crecimiento de microorganismos
• Actores principales:
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La biomasa • Materiales esenciales para la
estructura y la reproducción de un organismo vivo.
• La biomasa se expresa a menudo como una concentración, por ejemplo,
g-biomasa/L-cultura.
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Cinética de Crecimiento
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¿Por qué es necesario conocer la cinética de crecimiento microbiano?
interpretación de los datos…..
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Para la optimización del crecimiento y la formación de producto.
SUSTRATOS (Si)
BIOMASA (X) PRODUCTOS
(Pi)
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Biocinética y Bioreactores
• Similitudes entre un reactor “convencional” y uno biológico:
Ecuaciones de diseño (derivadas del balance de masa),
Términos de producción que derivamos de leyes cinéticas,
El proceso matemático y
El propósito.
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Biocinética y Bioreactores
• Diferencias entre el reactor biológico y el “convencional”:
Expresiones cinéticas, ya que los modelos cinéticos vistos no reproducen aceptablemente el comportamiento de reacciones biológicas.
Un bioreactor trabaja con organismos vivos o con partes de organismos vivos (enzimas) que poseen características muy particulares.
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• MODELO MICHAELIS-MENTEN PARA CINÉTICA ENZIMÁTICA
Es el modelo más característico de una reacción bioquímica.
describe la velocidad de reacción de muchas reacciones enzimáticas
Todas las reacciones bioquímicas son mediadas por enzimas. Las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores, pues posibilitan las reacciones pero no se involucran en ellas como reactivos.
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Podemos empezar a diseñar reactores. Ejemplo, reactor enzimático; Que es operado en forma batch, donde el sustrato glucosa se convierte en fructosa Al no entrar ni salir sustrato, el balance, como en un reactor batch convencional, solo incluye los términos de acumulación y producción.
Como evaluar los parámetros cinéticos de la ecuación, rmax y Km.
Tres formas de linearización de la ecuación de Michaelis-Menten (M-M) son comunes:
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Estos parámetros cinéticos los podemos encontrar a través de los valores de la pendiente y la intersección con la abscisa.
Por ejemplo, La intersección de esta línea recta con la abcisa sería el inverso del valor de rmax. Ya teniendo este podemos calcular también el valor de Km, puesto que el valor de pendiente de la recta es precisamente Km/rmax. Se han calculado los siguientes datos de velocidad inicial de conversión de glucosa a fructosa:
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Supongamos que queremos calcular el tiempo que deberemos procesar una solución de glucosa de 10 mmol/lt hasta un 90% de conversión en un reactor batch. El balance de materia sería:
Y para un reactor tanque la ecuación de balance sustrato
Suponiendo densidad constante, v0 = v
Considerando estado estacionario, el término de acumulación se elimina:
El factor (v0/V) es el inverso del tiempo espacial (τ), también conocido como velocidad espacial (s), entonces:
que sería la ecuación de diseño para un reactor enzimático continuo.
Pero en situaciones practicas utilizamos todo un microorganismo vivo y ahora el biocatalizador no es una enzima sino toda una célula, la concentración del biocatalizador puede variar con respecto al tiempo. Para el bioreactor batch donde estamos creciendo células, el balance sobre la biomasa (X) se vería así:
Nótese que si [X] tiene unidades de g células/mL, y t unidades de s, entonces µ tiene unidades de 1/s
Si suponemos que todo el funcionamiento de la célula depende de enzimas, y que es la más lenta de estas la que determina la tasa de crecimiento, entonces podemos pensar en que µ tenga la forma de una ecuación M-M. De hecho, esa suposición es ampliamente utilizada. La ecuación (18) es llamada ecuación de Monod, y es análoga a la ecuación de Michaelis-Menten:
Desde luego este es solo uno de los balances pertinentes al análisis de un reactor celular. Podríamos, y en muchas instancias debemos, formular ecuaciones de cambio para el sustrato (o sustratos), el producto (o productos), etc.
Optimización del proceso de sacarificación en microreacción por
medio de la metodología de superficie de
respuesta.
Metodología de superficie de respuesta (MSR)
Después de una primera etapa experimental
Desplazar la región experimental
Explorar en forma mas detallada
región experimental inicial
Metodología de superficie de
respuesta
MSR
MSR
Box and Wilson 1951
Debido al avance computacional, se ha incrementado en los últimos 30 años.
Myers and Montgomery (1995) Box and Draper (1987) Khuri and Cornell (1987) Cornell (2002)
Realizar una serie de experimentos donde se pueda realizar una adecuada y segura medición de la respuesta de interés.
Desarrollar un modelo matemático de superficie de respuesta de segundo orden con el mejor ajuste
Determinar el conjunto optimo de parámetros experimentales que producen un valor máximo o mínimo de respuesta
Representar los efectos directos y la interacción de los parámetros del proceso a través de gráficos en 2 y 3 dimensiones
Diseño de composito central
Clase mas utilizada para modelos ajustados de segundo orden
Permite estudiar los efectos lineales y las interacciones
Se emplea cuando se cree que el punto óptimo está dentro de la región
experimental
• Polinomio de segundo orden
Modelo de superficie de respuesta
de segundo orden
Donde
βo termino independiente β i…k coeficientes lineares β ii…kk coeficientes de términos cuadráticos β ij son los coeficientes de interacción ε es el error total
• Se generaron 50 experimentos para la obtención de la superficie de respuesta.
• Valores ensayados:
• T: 45, 48, 55, 62, 65
• pH: 4, 4.3, 5, 5.7, 6
• Accellerase (ml): 0.6, 2, 5.4, 8.8, 10.8.
GENERACION DE SUPERFICIE DE RESPUESTA
Diseño experimental
• Para la obtención de las superficies de respuesta, se tomo solamente el valor final de azúcares obtenidos después de hrs
de reacción.
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
0 100 200 300 400 500 600
mg
de
AR
/ m
l d
e s
olu
ció
n
Tiempo (min)
Microreacción pH 5, T 55 C, 5.4 µL de Accellerase 1500 / gramo de celulosa
• Las respuestas a optimizar fue el rendimiento Y p/s y la velocidad especifica de reacción.
Respuestas a optimizar
Donde
PAR azúcares reductores al final del proceso
PARt azúcares reductores teóricos
Donde
PARffe azúcares reductores al final de la fase exponencial
P: cantidad de proteína t es el tiempo
Resultados
Optimización del rendimiento
El modelo matemático de regresión que muestra el comportamiento de la respuesta en función del pH, la temperatura y la Re/s es:
Los resultados del rendimiento oscilan entre 4.08
0.57 y 47.58
3.92 % para los experimentos 7 y 2 respectivamente
El valor óptimo de Yp/s, predicho por el modelo, es de 45.74% y los valores de pH, temperatura y Re/s son de 4.55, 52.51
C y 2.34 ml/g respectivamente.
Optimización del rendimiento
Gráficamente
Optimización de
la velocidad específica
El modelo matemático de regresión que muestra el comportamiento de la respuesta ( Ver) en función del pH, la temperatura y la Re/s es:
Los resultados del rendimiento oscilan entre 0.07
0.01 y 9.95
1.58 U/mg p
El valor óptimo , predicho por el modelo, es de 45.74% y los valores de pH, temperatura y Re/s son de 5, 48.62
C y 0.1804 ml/g respectivamente.
Optimización de
la velocidad específica
Gráficamente Solución tipo silla
Resumen de resultados
Valores de los parámetros donde se obtuvo una óptima respuesta
Los resultados óptimos, para una alta producción de azucares reductores, fueron ensayados en reactores de 0.5 L
Pruebas en reactores de 0.5 L
Pruebas en reactores de 0.5 L
Se realizaron tres ensayos Reactor marca Corning de 500 ml Parrilla de calentamiento con control de temperatura y agitación
Resultados obtenidos
Resultados obtenidos
La producción de azúcares reductores del sacarificador 1, 2 y 3 fueron 8.034
0.0142 mg / ml, 8.441
0.3956 mg / ml y 7.7670
0.1924 mg / ml respectivamente
El rendimiento Yp/s calculado con este producción de azúcares reductores es de 43.63 %. La velocidad específica de reacción (VER) promedio de los tres reactores fue de 0.2398
0.00532 U/mg.
Optimización del rendimiento
El modelo matemático de regresión que muestra el comportamiento de la respuesta en función del pH, la temperatura y la Re/s es:
Los resultados del rendimiento oscilan entre 4.08
0.57 y 47.58
3.92 % para los experimentos 7 y 2 respectivamente
El valor óptimo de Yp/s, predicho por el modelo, es de 45.74% y los valores de pH, temperatura y Re/s son de 4.55, 52.51
C y 2.34 ml/g respectivamente.
Optimización del rendimiento
Gráficamente
Optimización de
la velocidad específica
Gráficamente Solución tipo silla
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