1. Do que se trata a disciplina de Citologia, Histologia e Embriologia e o que estudaremos?

2. Qual a importância desse estudo e qual a relação com as outras ciências?

3. Como é preparado o material de estudo das aulas práticas?

4. Que tipo de equipamentos serão utilizados?

5. Como iremos interpretar as imagens visualizadas?

Citologia

“Cito” – “Kútos”(grego), cytos (latim) = cavidade, célulacélula

Morfologia, desenvolvimento e funções das células células e dos e dos componentes componentes celularescelulares

Histologia

HistologiaHistologia

• “histos” (grego) – tecido - “tissu” (francês) - tecido

Histologia

• Estudo da estrutura microscópica, da composição e das funções dos tecidos, tecidos, órgãos e órgãos e sistemassistemas.

História

• Bichat (1771-1802), pioneiro da histologia, pai da histologia moderna

• Sem o uso de microscópio, examinou mais de 600 corpos e identificou 21 tipos de tecidos humanos

• Com o uso do microscópio– 4 tecidos básicos

Embriologia

“Embrio” – émbruon (grego) – brotar, crescer com abundância;

Desenvolvimento do ser vivo desde a fecundação até o final do estado embrionário, que vai da 3a até a 8a

semana, no entanto a embriologia estuda o desenvolvimento do embrião e do feto.

Qual a importância desse estudo e qual a relação com as outras

ciências?

Como é preparado o material de estudo das

aulas práticas?

Procedimentos básicos em histologia

• Estudo das células– “in vivo”– “in vitro”– em cortes histológicos

• Preparação dos tecidosPreparação dos tecidos– Bloco de tecido– Fixação– Impregnação– Micrótomo – 5 a 10 µm– Montagem– Coloração

• Corantes básicos: Eosina• Corantes ácidos: Hematoxilina

• Preparação dos tecidos– Colheita do material - é a obtenção da peça, por biópsia ou necropsia.

– Fixação

– Tratamento que visa impedir a destruição das células por suas próprias enzimas (autólise), ou bactérias. A fixação visa ainda endurecer os tecidos, tornando-os mais resistentes e favoráveis às próximas etapas da técnica histológica.A fixação pode ser feita por processos físicos ou químicos. A fixação química, mais usada em Histologia é o formol e o líquido de Bouin (uma mistura de formol, ácido pícrico e ácido acético).

Fixador: Formol, líquido de Bouin, etc.

Água e etanol (50%) Água e etanol (75%) Água e etanol (100%)Água e etanol (80%)

– Desidratação

– Visa retirar a água dos tecidos, a fim de permitir a impregnação da peça com parafina. Para isto, a peça é submetida a banhos sucessivos em álcoois de teor crescente (ex.: álcool a 70%, 80%, 90% e 100%).

Etanol e xilol (75%) Etanol e xilol (100%)Etanol e xilol (80%)Etanol e xilol (50%)

– Diafanização

– Visa impregnar a peça com um solvente de parafina. O mais usado é o xilol.

Xilol e parafina/resina (75%)

Xilol e parafina/resina (100%)

Xilol e parafina/resina (80%)

Xilol e parafina/resina (50%)

– Impregnação

– Tem a finalidade de permitir a obtenção de cortes suficientemente finos para serem observados ao microscópio. Para isso os tecidos devem ser submetidos a banhos de parafina a 60°C, no interior da estufa. Em estado líquido, a parafina penetra nos tecidos, dando-lhes, depois de solidificada, certa dureza.

– Inclusão

– É a passagem da peça que estava na estufa para um recipiente retangular (forma) contendo parafina fundida que, depois de solidificada à temperatura ambiente, dá origem ao chamado “bloco de parafinabloco de parafina”.

– Microtomia

– É a etapa em que se obtém delgadas fatias de peças incluídas na parafina, através de um aparelho chamado micrótomo, que possui navalha de aço. A espessura dos cortes geralmente varia de 5 a 10 um (micrômetros). (1 um = 0,001 mm)

– Extensão - Montagem da lâmina

– Os cortes provenientes da microtomia são “enrugados”. Para desfazer estas rugas, são esticados num banho de água a 58°C, e “pescados” com uma lâmina. Leva-se então, à estufa a 37°C, por 2 horas, para que se dê a colagem do corte à lâmina, pela coagulação da gelatina contida na água quente.

- Coloração

- Tem a finalidade de dar contraste aos componentes dos tecidos, tornando-os visíveis e destacados uns dos outros.a) Eliminação da parafina - banhos sucessivos em xilol.b) Hidratação - é executada quando o corante utilizado é solúvel em água.c) Coloração - os corantes são compostos químicos com determinados radicais ácidos ou básicos que possuem cor, e apresentam afinidade com estruturas básicas ou ácidas dos tecidos. Usa-se hematoxilinahematoxilina, corante básico, que se liga aos radicais ácidos dos tecidos, e eosinaeosina, corante ácido que tem afinidade por radicais básicos dos tecidos.

Coloração

Os componentes que se combinam com corantes ácidoscombinam com corantes ácidos são chamados acidófilosacidófilos e os componentes que se combinam com combinam com corantes básicoscorantes básicos são chamados basófilosbasófilos.

Por exemplo, os núcleos das célulasnúcleos das células, onde predominam substâncias ácidasácidas (DNA), são basófilosbasófilos, ou seja, coram-se pela hematoxilinahematoxilina (corante básico de cor roxa); por sua vez, o citoplasma, onde predominam substâncias básicassubstâncias básicas (proteínas estruturais), é acidófiloacidófilo, corando-se pela eosinaeosina (corante ácido de cor rosa).

Corantes básicos: HematoxilinaCorantes ácidos: Eosina

Desidratação - visa retirar a água, quando os corantes utilizados forem soluções aquosas, a fim de permitir perfeita visualização dos tecidos, pois a água possui índice de refração diferente do vidro. Para isto usam-se banhos em álcoois de teor crescente.Diafanização - a diafanização é feita com xilol, a fim de tornar os cortes perfeitamente transparentes.Montagem - é a etapa final da técnica histológica, e consiste na colagem da lamínula sobre o corte, com bálsamo do Canadá, que é solúvel em xilol e insolúvel em água. A lamínula impede que haja hidratação do corte pela umidade do ar ambiente, permitindo então que estas lâminas se mantenham estáveis por tempo indefinido.

Fotomicrografia de cortes histológicos corados por HE – Hematoxilina-Eosina.

Lâminas de tecido ósseo

• Lâminas ósseas são confeccionadas de duas maneiras– Desgaste– polimento com lixa

Preparação por desgaste.

Osso em crescimento, disco de cartilagem.

Que tipo de equipamentos serão utilizados por nós?

Microscopia Óptico

Nos microscópios ópticos, as lentes focalizam a luz visível (feixe de fótons).

Microscopia Eletrônica

• Os microscópios eletrônicos utilizam um feixe de elétrons.

• A resolução é cerca de mil vezes maior do que a de um microscópio óptico, o que permite a visualização de vírus e macromoléculas como DNA.

Como iremos interpretar as imagens

visualizadas?

“Os cegos e o elefante”Poema de Sake

“Eram seis homens do Industão,ao saber muito inclinados,que o elefante foram ver,(apesar de todos cegos)a fim de que, através da observação,pudessem satisfazer suas mentes.

O primeiro acercou-se do elefanteE, acontecendo tocarO forte e vasto flanco,Logo começou a exclamar:“Abençoai-me! Mas o elefantea uma parede muito se parece.”

O segundo, sentindo a presa,Gritou: “Oh, o que temos cá tãoRedondo, liso e agudo?Para mim está claro,Esta maravilha de elefante É muito parecida com uma lança.”

Os demais versos narram a experiência dos outros quatro cegos e, como cada um tocasse diferente parte do corpo do animal, seu conceito de um elefante diferia muito do outro companheiro.

“Eles eram como jovens microscopistasque estudam cortes simplese imaginam o “todo” a partir de partes simplescom muitas falsas concepções.Especialmente se nunca aprenderamA raciocinar em três dimensões.”

Vertical

Fotomicrografia de pele corada pela Gomori.

Fotomicrografia de pele corada pelo HE – Hematoxilina – Eosina.

Existem outras técnicas e outras colorações?

Centrifugação Fracionada

Radioautografia de órgãos de ratos que foi injetado com H3-timidinaH3-timidina.

Radioautografia de órgãos de ratos que foi injetado com 3H-fucose3H-fucose.

Fotomicrografia de intestino delgado corado por imunohistoquímica.

Histologia

• Materiais para aula prática

– Avental branco– Apostila da aula prática– Lápis 2b– Lápis de cor– Borracha, apontador