Animales transgénicos como herramientas

Animales Transgénicos como herramientas de trabajo

Daniel Pérez-Witzke, M.Sc.

Laboratorio de Patología celular y molecular, Centro de Medicina Experimental, IVIC

Mecanismos de recombinación en Mamíferos

Técnicas para edición de genomas

Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs)

Modelos de enfermedad

Animales Knockout

Autoinmunidad TH2, Modelo

Lupus eritematoso sistémico

Kaveri y col. (2010). Basophils and Nephritis in Lupus. n engl j med 363;11

Sistema Cre-LoxP

Biología de la proteína HSP-70 en la fisiopatología de la hipertensión

arterial esencial

Daniel Perez-Witzke, MSc.

Próximo paso: Noquear HPS-70

Inhibición la expresión de los genes HSP70.1, HSP70.3

1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces (knockout)

Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes

[Rata Transgenica C]

Cre/Ksp-Cadherinpromotor renal

GFP (doble transgenico)[Rata transgenica A]

Células Renales5´ Ksp-

CadherinCre

Recombinasa

3´

3´ 5´

5´ LoxP

Promotor

LoxP

Exón 1HSP70.1 HSP70.3

3´

3´ 5´

EnzimaCre

Transcripción/Traducción

Recombinación

5´LoxP

Exón 1 HSP70.1 HSP70.3

3´

3´ 5´

Pro

mo

tor

LoxP

dsDNA

HSP70 -/-(knockout)

Ratas A-C homozigotos de la F3 (triple transgenico)

Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes

[Rata Transgenica C]

Cre-mER(mutant Estrogen Receptor)

(doble transgenico)[Rata transgenica B]

Células Somáticas

5´mER Cre Recombinasa

3´

3´ 5´

5´ LoxP

Promotor

LoxP

Exón 1HSP70.1 HSP70.3

3´

3´ 5´

EnzimaCre

Transcripción/Traducción

Recombinación

5´LoxP

Exón 1 HSP70.1 HSP70.3

3´

3´ 5´

Pro

mo

tor

LoxP

dsDNA

HSP70 -/-(knockout)

Tamoxifeno

Ratas B-C homozigotos de la F3

2. Sistema Cre-LoxP mediante infección con virus AAV-2-Cre

(knockout condicional)

Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes

[Rata Transgenica C]

Células Renales

3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´

5´ LoxP

Promotor

LoxP

Exón 1HSP70.1 HSP70.3

3´

3´ 5´

EnzimaCre

Recombinación

5´LoxP

Exón 1 HSP70.1 HSP70.3

3´

3´ 5´

Pro

mo

tor

LoxP

dsDNA

HSP70 -/-(knockout)

AAV-2/Cre

Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´

Traducción

Infección con virus con tropismo por células renales

ssDNA

Sobreexpresión de los genesHSP70.1, HSP70.3

1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces

Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes

[Rata Transgenica C]

Células Renales

3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´

5´ LoxP

PromotorWildtype

(Wt)

LoxP

Exón 1HSP70.1 HSP70.3

3´

3´ 5´

EnzimaCre

RecombinaciónHomologa

AAV-2/Cre

Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´

Traducción

ssDNA

Pro

mo

tor β

A

LoxP

dsDNA

LoxP

5´ LoxP

Promotorβ-Actina

LoxP

Exón 1HSP70.1 HSP70.3

3´

3´ 5´

PromotorβA

LoxP

dsD

NA

LoxP

Promotor Wt

LoxP

dsD

NA

LoxP

Gracias