MICROSCOPIO OPTICO MICROBIOLOGIA

Microscópio Óptico

CLUBE DE CIÊNCIAS

Prof.Teresa Condeixa 0809

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Discentes: Jessica Karoline Marianne Reis

Mauricio CorreiaRogério Zampieri

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MICROSCOPIA

Ciência que estuda os métodos e as aplicações em que se usa o Microscópio para observação de objetos, ou por menores com dimensões inferiores ao limite de resolução do olho humano (0,1 mm).

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Histórico

Robert Hooke (1635-1703)

Desenvolveu um tipo de microscópio composto (que possui duas lentes) para observações.

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Anton von Leeuwenhoek (1632-1723)

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Classificação dos MicroscópiosClassificação dos Microscópios Em função do Em função do número de sistemas de lentesnúmero de sistemas de lentes

•Microscópio simples ou Lupa;

•Microscópio composto.

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Classificação dos MicroscópiosClassificação dos Microscópios CompostosCompostos

Em função do Em função do principio de iluminaçãoprincipio de iluminação

•Fotónico

•Electrónico

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Ocular

Tubo ou Canhão

Revólver

Objectivas

Mesa ou Platina

Condensador

Componentes do Microscópio Óptico Composto

Diafragma

Espelho ou Fonte de luz

Pé ou base

Coluna ou Braço

Charriot ou Pinça

Parafuso macrométrico

Parafuso micrométrico

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http://www.slideshare.net/nunocorreia/microscpio

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http://www.slideshare.net/nunocorreia/microscpio

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Classificação dos MicroscópiosClassificação dos Microscópios CompostosCompostos

Os microscópios dividem-se em duas categorias:

Microscópio óptico: funciona com um conjunto de lentes que ampliam a imagem por um feixe de luz que pode ser: ▫Microscópio de fundo escuro.▫Microscópio de contraste de fase▫Microscópio de contraste

interferencial.▫Microscópio de fluorescência.

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TIPOS DE MICROSCOPIA

Microscopia de fundo escuro• Baseia-se no princípio de que a luz é

dispersa pela superfície dos materiais que possuem diferentes índices de refração. A luz dispersada entra na objetiva e o objeto aparece iluminado e brilhante sobre um fundo escuro.

• A luz atinge o material a ser analisado e somente os feixes desviados pelo objeto percorrem as objetivas e as oculares, formando a imagem (Taboga, 2001).(DAVIDSON E

ABRAMOWITZ,2005)

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Microscopia de contraste de fase• A luz que passa através de materiais

com densidades ligeiramente diferentes é refratada ou desviada do seu trajeto original. Variações mínimas de fase, devidas às diferenças de índice de refração dentro do objeto, são ampliadas e transformadas em mudanças de amplitude (intensidade) as quais são visualizadas como diferenças de contraste na imagem (Reis, 2003).

Aspecto de células vivas observadas com: microscópio óptico de campo luminoso (a); microscópio óptico de contraste de fase (b) (Reis, 2003).

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Microscopia de contraste interferêncial

• Trabalha com a defasagem dos comprimentos de ondas. Assim, a defasagem gera uma deformação na imagem, permitindo o contraste interferêncial, aumentando a superfície do material analisado.

• Esse tipo de microscopia utiliza-se de prismas ópticos posicionados na passagem da luz. Esses prismas modificam as fases luminosas que contrastarão com o meio em que se encontra o material a ser observado.

http:www.todosfauna.com

(DAVIDSON E ABRAMOWITZ,2005)

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Microscopia de fluorescência• Permite observar microorganismos

capazes de absorver a energia da radiação ultravioleta emitindo depois radiação dentro do espectro de luz visível. Microorganismos corados por um corante fluorescente aparecem como objetos luminosos

• Na microscopia de fluorescência pode-se detectar compostos naturalmente fluorescentes, como a clorofila, lignina de paredes celulares, elastina e colágeno (Taboga, 2001).

Cienciahoje.uol.com.br

(DAVIDSON E ABRAMOWITZ,2005)

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Classificação dos MicroscópiosClassificação dos Microscópios CompostosCompostos

Microscópio eletrônico: amplia a imagem por meio de feixes de electrões, estes dividem-se em duas categorias:

▫Microscópio de Transmissão▫Microscópio de Varredura.

Como é que se calcula o valor da ampliação?

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Como se calcula o valor da ampliação?

Ampliaçãototal

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ampliaçãoda ocular

ampliaçãoda

objectiva

= x

x 400x

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Ampliações utilizadas/ Área real observada.

Ao ampliar uma imagem reduz-se a área observada

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Visualização Óptica

P

PO microscópio nos dá imagens invertidas. As

lentes de aumento (lentes convergentes) são posicionadas nas extremidades de um

tubo cilíndrico. As lentes da parte superior

do tubo se chamam oculares e as do extremo inferior,

objetivas.

A IMAGEM É:• ampliada;• invertida da

esquerda para a direita:

• Invertida de baixo para cima

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As Oculares e Objetivas

•As oculares mais utilizadas são as de ampliação 10x, mas nos microscópios binoculares também existem oculares de 12,5x, 8x e 6x.

•As objetivas podem ser designadas em secas e de imersão. Existem objetivas de 10x, 40x, 50, 90x, 100x.

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As Objetivas Secas e de Imersão

•As objetivas de 10x, 40x e 50x são secas pois entre a preparação e a objetiva existe somente ar.

•As de 90x e 100x são as de imersão, uma vez que, para as utilizar, é necessário colocar uma gota de óleo de imersão entre elas e a preparação, a qual, por ter um índice de refração semelhante ao do vidro, evita o desvio do feixe luminoso para fora da objetiva.

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• Desce-se o condensador • Sobe-se o diafragma para que a

iluminação não seja muito intensa. • Escolhe-se a menor objetiva.• Seguidamente foca-se• Se ainda não é possivel uma boa

visualização, passe para uma outra objetiva de maior capacidade.

• Fazendo uma primeira aproximação da objetiva e só depois a focagem por afastamento usando o parafuso macrométrico e posteriormente o micrométrico para focagem final.

http://www.prof2000.pt/users/biologia/relacao.htm

Utilização correta do MOC para Objetivas Secas

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Utilização correta do MOC para Objetivas de Imersão

• Sobe-se o condensador• Abre-se o diafragma • Regula-se a iluminação da fonte luminosa no máximo,

de modo a conseguir-se uma iluminação intensa, apropriada à observação de lâmina coradas.

• Coloca-se na lâmina uma gota de óleo de imersão e procede-se à focagem.

• Primeiro aproximando a objetiva à lâmina, seguidamente a focagem propriamente dita com o parafuso macrométrico e finalmente o aperfeiçoamento da focagem com o parafuso micrométrico.

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Em quantas vezes um microscópio pode aumentar a

imagem?Os microscópios não podem

“ampliar”, indefinidamente, um objeto. Isto acontece por que há um limite de resolução da imagem.

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Cuidados com o Aparelho• a)      Observe se a voltagem é compativel com a do aparelho;• b)      As lentes da objetiva nunca devem tocar a lâmina;• c)      Não tocar as lentes. Se estiverem sujas, limpe-as com algodão

ou com pano;• d)      Limpar sempre a objetiva de imersão após o uso. Se o óleo

estiver endurecido, poderá ser aplicado um pouco de xilol sobre o algodão. Cuidado, pois o excesso de xilol pode dissolver  o cimento das lentes;

• e)      Não esquecer a lâmina no microscópio após o uso;• f)       Manter a platina sempre limpa e seca;• g)      Não inclinar o microscópio a maioria técnicas empregadas

exigem que a lâmina seja examinada sempre na posição horizontal;   • h)      Deverá ser guardado sempre coberto ou em sua caixa;• i)        Não deixe  a fonte de luz acesa  quando não estiver utilizando

o microscópio.

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Histórico

Em 1931, na Alemanha, Knoll e

Ruska desenvolveram o primeiro microscópio

eletrônico, com base no experimento de Bush

(1926) que provou que era possível focalizar

um feixe de elétrons utilizando uma lente

eletromagnética circular.

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Microscópios Eletrônicos

• Utilizam um feixe de elétrons para formação da imagem.

• Possuem maior poder de resolução do que os microscópios ópticos, sendo assim, é possível observar organelas muito pequenas.

• A ampliação máxima de um microscópio óptico pode chegar a 1500X, entretanto, o microscópio eletrônico pode gerar imagens com aumento de 300mil X ou mais!!

• Com este poder de resolução foi possível a descoberta de novas estruturas ou até mesmo, uma revisão daquelas já conhecidas.

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Microscópio Eletrônico de Varredura: Funciona como uma “super lente de aumento”, ou seja, não podemos olhar o interior das células mas é possível observar toda a sua superfície, além de outros objetos.

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Microscópio Eletrônico de Transmissão: Neste tipo aparelho é possível observar o

interior das células evidenciando núcleo, mitocôndrias, cloroplastos, lisossomos...

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MOC – Microscópio Óptico Composto

MET – Microscópio Electrónico de Transmissão

Imagens

Alga Colônia

Tubos Dentários

Imagens

Folha (capilar) Folha (capilar)

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Referências

ABRAMOWITZ, M.;, SPRING, K.R.; FLYNN, B.O.; LONG, J.C.;TCHOURIOUKANOV, K.I; DAVIDSON M.W. Disponível em:http://micro.magnet.fsu.edu/primer/photomicrography/index.html (Acesso em 10/04/2005).

DAVIDSON, M.W.; ABRAMOWITZ, M.Optical microscopy.http://microscopy.fsu.edu. (Acesso em 17/04/2005).

REIS, C.M.G.Microscopia– Disciplina de Biologia Celular.Escola SuperiorAgrária, Instituto Politécnico de Castelo Branco, Laboratório de BiologiaVegetal. 24p. Apostila. 2003.

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TABOGA, S.R. Micoscopia. In: RECCO-PIMENTEL, S.M.; CARVALHO,H.F.A célula 2001.cap. 2.. p. 06-14. 2001WEISS, D.G.; MAILE, W.; WICK, R.A. Video microscopy.

http: www.portalsaofrancisco.com.br

http://www.ufrgs.br/agrofitossan/agr04401vd/microscopia.htm

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Obrigado