Long-Term Culture of Murine Epidermal Keratinocytes

Preview:

Citation preview

6������ � � 3�������� +5 @ � !� �� &����� �& ���� �� �� 6��� ��/5� :��� H� + ��"���� ��� �� ������� �� �� �) !���� � � %������� 4 �4���"3 �� � ����" ,��!����� ��� ������� #�����* ������2>�)4G�);? '((>#

6������ � � C���" C D� J ��!�� �8��� ���� � :��� H� @ ���! �����"����% �� ��� ���� # �� > � � ��7��#3� � ��"���� ����! 8��� ������� �� ����� �� /��� �����! ��� ���* 4�' ����� G;�72)�7)) '((G

��� �# �� + 3���#�� H H���� � � �� ��� �� ���� �;<�> !��� . �� �!���" � ��� ��� ���� � ���� ����� � ��,� �� �� ��� ���� ! ��8#�� � ��� �#��� ��� ���* � ��� ��� '')�(?G�('G '(('

I���� 9 +# ���� � 3�������� +5 :��� H ����� H86 5 � ��""� @�5������� �� �� � � %� �� ��� ���� �> ��#���� �� ���!��� � /���,��!����� ��� ������� #����� /��� �����! ��� ���* ������ ���� '?�22(�2)> '((4

�� �:��� *������ �# 9�� � >�����!� '��!� ������

� �� ������

+ � ! �� H� ��� � #� ��� � �� �� � ��� � �� ���#����� �� %���8� �� ��� � �����!�� !����� � ����� � %�� �� ���� %34G<��; ��! ���� � �� �� '(((�* � ���� % �� � �����!�� � �!���� � I ��� �� �� % !������ � � ���� /��� �� !����������� !������� ���/ � �� .� ���� % �� !����� � �� ������� '(* 3 ��� ��� � ���� � �� �� !���!��� � ��%% � ����� ��� ��� ������ '? �/ $ �* & � ! ���� ��� ���#���� � ���8� ����� � �����!�� !����� � %�� ��! /��� �� ��� � � ��!#�!������ �� �� � �� �� ����� #� ��� � �� ��- � !��� �� !����� !������� �� �� ����� ��� ! ��� / � �������� � ����� ������ �;' � %�� � ������� �� �� �#����� � ��%% � ����� / /��� ��� �#���� ���� ��� �����$ ���!� � ��� ��� ����* 6������ ��� � �����!�� � / � ����� � ����� � ���0 � ���!� % ����� �!��# � %� �� ���#����� �� % ���8� �� !���� � �����!�� !����� � �&������� �� �� '(7G�* ��� K� �� ���� % � 'G*48�8�� �#�� /�� � �$ � ��� ��!�#�� � %� G � �� � 0� � � �����8!�� 8�95 �@�#!8��� S'?G>>�?'(� /��� 4 : � � �� ������ �'? �� � � �� � ����� � 5���� �� 5���� �� @ ������ ���

'?� ����#���!�<������!��!� �'??? : � � �� � ��!����� ' ��� � �� ��� ����!�� 2*4�� � � �� ����� ��!��1 @�#!<��� ����� �/��" ������ �� >�3* �� ��� ���� /�� �� � � ����� � %���� � ���� /��� �!��� � ��� %�! �� !�� ��� �� ! � ��� ��������" ��?*24M<?*'M �������8���+1 ��!�! �� +���!�/�� �/��" ������%� '? ���* 3 ��� / � � � � �� � � ����� % 4� '?> ! ��� � � !�2

� ��!�� � !����� K���� �� � 0� � � �����!�� 8�95 ����� 8� �� � /��� '? �� � � �� �@9 ��� '?�'? 5 !�� ���.��* ����!����� � ���� !������ ?*?G �5 !��!��� � !�! �������� ��� � � ������ ����% ����� % ��� ��� ����� � �����!�� !����� � �� ������ �� �� '(7?1 H �� � �� �� '((?�* +� !�K� �!� ! ��� / � ��#!����� � #� ��������"���� �?*'24M<?*?4M �������8���+� ��� � � � �� )� '?> ! ��� � � !�2 �� � / !����� K����*

5����!���� � ! �$ � =$ �# � 2> '(((1 �!! �� � %� ��#��!����9 #����� 27 2???*

� ����� � -� ��� �� ��* ����� 5�N�� � ������� %�N� �� �������� ��N������������ '22 3�8)?'2 � �� �/��" �����*

���� � *!��������� �� � �##��� �!�� �# �� ����� ��������!� ������ #��� $!���� �!��!�� ��� ����K�� �! �! ����� ������ �� ����8���8� ����� ����#�� ��6)> �+C�� � $ �� � �� ���#����8� �� % � / ��8�����" � � ����� � �/�� ��!����� � �� ������� �#��� /����� ; � �%� � � $���� % �� !��!��� !�! ������� �� �� � ���� � '*2 �5* �� ���#���"���� % ��� ��� ����!��� !��� ��� ��! ���! �� #��� �� ����!�� � %������ % !��� ���8� ���� � ��� �! ��������� ��� ����!��� � /����� �� ��� ��� %��� �� ��� �� � #� �8!��� ����������� ���35+ � ���� ��%� %�� �* C �� � 5�. 6���� ������� 9� �#��� @ ������ ��� � ���� �� ) ����)� �������� ��� ��#�����1����#�� � / � ���� � �� ��##��� ������� �� .���! ������ ����� %#�!��$����8 .�� �� � ����� ���) �+����� �� �� '((>��* � ��# � ���%�! 8 .�� � ��� ��� �� !�� � ! ��� / � ��!�#�� � /��� �� � �� !��$ ����#�� � ���� � 0.���� ��� � �� �#���"����* �.�� ���� % ��� ���!�� # !���� � � �� � ��-���������$ ���! �������� !������� ������������! .���� ��� / � � �� !������* ��� �$��!��� .�� ������ � �����!�� � !����� � ��� � �/ !��!��� � ���� !��!��� !������� %�) � /�� ��� �� � #� / �� �� #�� ��������* ����#��� % /�� ! �� ����� �/ � ��# � /��� ����8��$��!��� ����#�� ��J4 � ���� ��%� %�� 9* &��� �� ���� 3��! � � � ��!� 9��� ���� :*C*�* � ����! ��%% � ����8��� !��!��� !�! ������� /�� ���� � � '*2 �5 �� � 0� � � �����!�� 8�95 �C�95 � ���� C�95� � � '*7 �5 �� ����� � �� � &�������B5 ���� � �&5��* 6��� � ! ��� / � � �� � � %�� ��������� ��/��%�!��� ' � # %� !��!��� � $���� ����� C�95� � 0� � � �����!�� 8�95 !����� � ���� /����� ����� � ������ /��� �@9 � !�� ���.���*�� 6�! �� �8�������� % �� �����#�� /�� �� � � $����� ��������� �����% � % �� ��� ���*

���4 ������� �� ��� ����� ��� H�:�=+� �9 =I���@+�I� ���5+����@J

+%� � �� 0��� ������ � �����!�� � ����� � � ����% ��� /��� �!������ ��#���� ��� % 2 �* �� ��� ��! ��� /�� �� � � ���#���� ���8� �� � �����!�� !����� � %�� ��� �#��� /���� ��%% � �� � � ��! #�!������ �3��� ���� �� �� ����#���� � �����* ������ # � ���� � �� ������� ���� � �� !��� !����� ����������� !������� / � � -��� � !������ � �� 0������ %��� � �� �� �'(((�* =�� �� ����� ��� �� � / � ����� �� �� � ���%% � �! � / � #� �$ � /� � ������� ��������"���� /���� ���� !�������� � �/ � � ���� !��!��� !�! ������� ���! ��� / � !����� � ��� � ����� 3�2 !�� �� �4M�* & #� �$ � �/ $ � ���� � �����!�� ����% ����� /�� ����$ � /� �!����� � �� )>�3 ���� �� % )G�3*

� ��� �� �� ��%% � ������� �� ����� % �� ��� � �����!�� � / ������! � � !���� �� �� !��!���!�! ������� �� �� � ���� %�� ?*?G �5 � '*2 �5*�� $���� % �� !��!��� � $ � �� !����� ��� # � ��/� �����! ��%% � ������� % ��� ��� ����� � �����!�� ��� ������ �� �� '(7?1 H �� � �� �� '((?�* ��� � %��%% � ������� �� !����!� ��" � #� �� ���#����� �� % ! ���! ��!���!�� �� � ��� �#�� % ��� � �� ,��!���� %��/ � #�%������ % � ���� � �%� � $� / � @���� �� �� '((;1C/��!"�� �� �� '(((�* � �������� ��%% � ����� � ! ��� 0����� .�� �� ��$��!��� � ��,� ��� �� % �� !���0 � �$ �� /��!� /�� � 0� � �� ���� � %� � �����!�� � ��������%% � ������� �@���������� ��� &��� '((G1 Q�� ��� &��� '(((�* � �� ��� � �����!�� � !��!��� � $���� �� �� � ���� ����! � ������� ��%% � ��������� !���� � �� ������ 22 �� � ������ ;' �� � � #� �� %������ % � �������� � � � ����� � �/�� �� ���#���"���� % ��� ��� !��8� ��� �� �� ������ � �#��� /����� ; � �� ��� ��� �� .�� ���� % �� � ������ ��%% � ������� ���� � ��$��!��� �%� �) � �� � �* �� ����� % ��$��!��� .�� �� � /����� � �� �� % �� �� � �! � �#� �! % ��/�� %�!��� ���� !����� � ���� ���� � � $���� % �� !��!���!�! �������* �$��!��� .�� ���� /�� ��� ������� /� ������ � �� � &�������B 5 ���� � !�������� '*7 �5 !��!����&������� �� �� '(7G� /�� �� � ������ ��%% � �������*3�$ �� �� ! ��� !����$�� � �� �/ !��!��� � ���� ��/ ������ �� ��� �! ������ ���! � �� � � �� ���� !��������!��!�� ����� �� ��/�� ��� .��#�� � �/ .�� ���� %� ����� ��� ��� ��� �� !�� � �� ���* �$��!��� /�� ��

.�� �� � �� � � !��#� � $ �� �� ���� ���� * �� � �*� ������� / � ��� �� ���#����� �� % ���8� �� ���

� �����!�� !����� � /��!� / � ��/� �� � ������ ;'/����� ����� �� �� !���!��� � � ���� � �� � $���� % �� !��!��� !�! ������� �� �� � ���� #� � $ ��� �� % �/ ��8�����" � � ����� � �/�� ���#����� �� % ��� �! ��������� ��� ��� 0����� .�� ���� % �� � ������ ��%% � ����������� � ��$��!���*

7�� &��9 &�� ��������+ ', ��� %&�� ������ %���� 1��+��� "�-"8"#8-?"

� � 3��� ���� 5�,� 5* ��� � �����-� ������� +���� � ����� � ����� 5�N�� �

������� % +����� 6������ :��$ ����� % � �� � �� �/��" �����

�� ���� � �� % I � ������ ���!� �! � ��� ���� :��$ ����� 3���#�� ��� :*�*+*

��9���=3��

+����� 5 ������� � �����"� = =������/� �� +#������ % ����� ��!�������#�� � #� �� .���! ������ ����� % � ������� $������� ����� �����)� ����! � #� #�!��$����* � � ����� (>�4(�;G '((>

@���������� + &��� 95� !85�! ���� � ��%% � ������� % ����� ��� ���� �� �! ���* ���� ��� ''�27;(�2772 '((G

@���� � 3���� � 5 =��� +� � ���� �� ��%% � ������� � $ ��� �� ������!� ��� ��� �� * ��� �� ��� ��� 7�;G?�;G7 '((;

��� � � ��!� �#�!� H� 9� !���� 6� ���8� �� !����� % ����� ��� ����� �����!�� �* � ����� �������� ''2�(G'�(G; '(((

� ������ � 5�!�� � � 3� �� 3 �� �� �� 6 ��#�� C J���� ��� 3��!���� ������� % ��/�� ��� ��%% � ������� % ��� ��� ���� ! ��� �� !����� * ��� '(�2>4�24> '(7?

H �� � 6C+ =���T�� H�� C���� � 3 =� �� � I ����� �� �%% !�� % .���8 ��������! ������ !��!��� !�! ������� � �=+ � ���!���� ��� ��� ��/�� �����%% � ������� % ����� ��� ���� ! ��� �� !����� * @����&� ���� � 4(�'G�24 '((?

C/��!"�� +6 ������ � � �+ =�$ �� �5� � ���� �� ��� �! ������ ��� ��$ ,��!���� �� "����" � %� ����!�� �� % ��� �� ���� 0��� ���- �� 0�� ,���'74�2)G�)?2 '(((

&������� H� ����� 3 ��� � 5 � /�� �5� ��� � �� !����$���� % !���� � �����!�� �* � ����� �������� 77�2?2�2?; '(7G

Q�� +H &��� 95� # ��8!�� ��� ���������� ������ � ����% ����$ �� ����� % ����� ��� ���� � �����!�� � ��� � �� ���� % ��� �! ������ ��� ���* ����������'2;�2274�22(7 '(((

� (�$�� 3� � 9��!�� �# �"� ����� <� � ! =!�! ����!��� )�" �A�B�� ��!���� �� �����

� �� ������

�,N�� �������� ������ ����1 55S 2G?2??� �� �� �������� ! ���$ ����� � !����!� ��" � #� � ���� � �������� ��8 �� ����� ��� ��� !�� ����� �!������� ���"" '(()�* �� �!��������� ��� �� ������� �� � �� �� #���� #�� �� � ��$ # � � ���� % � ��!���� � �� � % �!������� �� �� �� % U ' � % �� * 5 ���� � �������� ��$����#� #�� �� � $ � �V U 4?� �� �#�� G?M % !�� �* +��������!����!�� % ���� � ��!��� ����� ���� /��� ��� � �� � ���� � �"�� � ���� ������ ��� �� !� � % !��* 6��� ��� /��� ��� ��$ � 0!� ���!��$��� % %���� ��� ��� � ����� ��� �9+���� �� �"�� ���� ��� ! ����� %� �� .������ % %���� ��!�� � %���� �!�� ��������� ��$�$ � ��� �� � !��� �� % �� %���� ��!���=+�L

.��� ��!��� �"�� !��� . ���"" ��� 3��%� '(('�*

�� 1�4�5 � � ��� # � ���� � � �� ��� �!�� � 'G�''*2��� �� �� �� '((4�* � �� ����.���� �� )' �# ��� !������ % '? .�� � ������� �� � !�=+ % '>44 #� /��!� �� �������� � ��� ���� �� /��� >74 ���� �!��� ��� �� �� �� '((G�* � � / � ��� ��$ � ���� ������� �� �� 1�4�5 � � �+�@ �����$ ���� ����!� ��� ''4G� � ������� �� �� !���� % ��������� � � ��� ������ �!�� )7; �* * =)7;� ��� ��/ �� ��!! ��%�� �=+�������� �� � %�����*

+ ' � �� ���� $���� � �� ���$ ����� !����! � H��� 'G '(((* �� �� � �� � /��� !�� ����� �!������� ��� ��/ � ������! � ����� ������ � ���� � ��������* �������! .�������� � $ �� � �����8� �� ������ �!������� ��� ������������ ��� �� �������� ! ����� � % �� ��� ���� /�� �������� ���!� � �* +�!�� � ����8� ��� �������� /�� � �%�� � � �� ���� % ���� ���� �� ��� ������ !���� �%� � %� "��� �� ����� � �� �� �3� !������!!����� � �� � ��� % H��� �� �� �'((?� ��� � $ �� � �� ��!��� �� ��!�� � ����� ��� �!��$��� ��� �� �� ���� ��B�����* � � ��� ��� / � �� � ����$ � ��� #�� % �� � / � � �����*

+%� � ��%�� � !�� �� #�� ����� � / � !�� !� � ���� ���! �=+ / � .���!� � %�� �� #�%%� !��� �V+@�= ���� � @ ������* @ ���! �=+ %�� ����� � ����� H���� �

5����!���� � ! �$ � H������ )' 2???1 �!! �� � %� ��#��!���� 9 #�����'; 2???*

� ����� � -� ��� �� ��* =����� +�� � ����� �� % � ������� =������ :��$ ����� �!�� % 5 ��!�� +������!��8��� =������ (4'�74'? H����*

I��* ''> =�* 4 5+J 2??? ������� �� ��� ����� ����

Recommended