IBASA control de HLB en Citricos

Ingeniería Biotecnológica Ambiental Sustentable

y Acuícola, Soc. Coop. de R. L. de C.V.

www.tratamientodeaguas.org.mx

CONTROL DE HLB

EN CÍTRICOS

Huanglongbing, huánglóngbìng, literalmente enfermedad del Dragón Amarillo, es una

enfermedad provocada por la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus y un vector

(Diaphorina citri) que afecta diversas especies de plantas del género Citrus entre los

más importantes están, limón, naranja y mandarina. Esta enfermedad se le conoce por

el acrónimo HLB, pero muchas otras especies de cítricos pueden manifestar síntomas

de la enfermedad con diferentes niveles de expresión.

DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA

HLB en el mundo

La enfermedad se reportó por primera vez en el continente asiático en China a finales

del siglo XIX (Zhao,1981), de ahí la nomenclatura de‘Ca.L.asiaticus’ (Candidatus

liberibacter, asiaticus). Posteriormente se reportó en 1920 en Taiwán y las islas Filipinas

(Otake, 1990). A finales de ese mismo año se detecta una nueva especie de Candidatus

en Sudáfrica (Van Der Merweand Andersen, 1937), la cual fue nombrada ‘Ca. L.

africanus’.

En el 2004 se detectó la especie asiaticus en la localidad de Araracuara, SaoPaulo, Brasil

(Coleta-Filhoetal.,2004). Posteriormente, se reportó una nueva especie de ‘Candidatus

Liberibacter’ en cítricos a la que se nombró ‘Ca. L. americanus’ (Teixeiraetal., 2005b).

En 2005, se reportó a ‘Ca. L. asiaticus’ en Florida, EUA.

HLB en México

El HLB de la especie ‘Ca. L. asiaticus’ se reportó por primera vez en México en

Julio de 2009 en la localidad de El Cuyo en el municipio de Tizimín, Yucatán,

posteriormente en agosto del mismo año se reporta la presencia de la enfermedad

en Quintana Roo (SENASICA, 2009 y 2010). En noviembre del mismo año, un nuevo

foco de la misma especie es reportado en los estados de Jalisco y Nayarit.

Actualmente el HLB se ha detectado en 391 municipios de 22 entidades de

México, de los cuales, 314 son considerados citrícolas, lo que representa

el 43% del total de los que cuentan con este cultivo en el país, el resto de los

municipios con detecciones solo cuentan con plantas de cítricos en áreas urbanas.


DESEMPLEO, POBREZA Y HAMBRE

Tecomán, del campo próspero al desempleo, pobreza y hambre

www.diarioavanzada.com.mx/

El número de desempleados en el municipio iguanero durante el último año aumentó

alrededor de un 60 por ciento, al pasar de más de 12 mil personas sin trabajo en 2013 a

alrededor de 20 mil que se cuentan actualmente. Ello ha traído el recrudecimiento de

la pobreza, coinciden dirigentes del campo.

Colima, México (19 de marzo de 2014).-Mientras hace exactamente un año se hablaba

de 12 mil desempleados en el municipio de Tecomán, actualmente la cifra se estima en

cerca de 20 mil, un aumento considerable en sólo doce meses en una población de 112

mil habitantes.

Por otro lado, la producción de limón en el municipio ha caído: En el año 2011 el

estado produjo 580 mil toneladas del cítrico, en 2012 la cifra disminuyó a 230 mil

toneladas y en 2013 se redujo hasta las 200 mil toneladas, lo que ha traído más hambre

a las familias del campo colimense.

Con la finalidad de resolver el grave problema que representa la enfermedad en

cítricos se realizaron experimentos de aplicación foliar y por inyección de nanoplata

de 3 nm(1.2%). Los resultados de esta aplicación se analizaron por qPCR tiempo real y

Microscopía Electrónica de Barrido. El principio es que si eliminamos la bacteria

(agente causal) dentro del árbol desaparece la enfermedad, desaparecen los síntomas

y el árbol restablece la producción.

Las observaciones por microscopía electrónica previas al tratamiento de nanoplata

muestran la gravedad en los síntomas y la calidad de árboles que fueron usados en los

experimentos.

En las siguientes figuras de Microscopía Electrónica de Barrido de árboles enfermos con

HLB. En (a) y (b) árbol antes de ser tratado con dilución 1:10,000; observe en este

corte longitudinal la presencia de bacterias vivas y masas irregulares, probablemente

bacterias muertas. En (c) corte longitudinal de un vaso del floema de árboles antes de

ser tratados con Quikjet dilución 1:5,000, donde se encuentra bloqueado por gránulos

de almidón en ambos lados de la placa cribosa. En (g) corte transversal de tallo (1.5

mm diámetro) después de ser tratado con Tree IV, dilución 1:500.

CONDICIONES DE LOS ARBOLES (LIMON MEXICANO Citrus aurantifolia Swingle)

ANTES DEL TRATAMIENTO

Candid

atu

sLib

eri

bacte

rss

p.

Distribución de las diferentes cepas de HLBCandidatus Liberibacter asiaticus

Candidatus Liberibacter africanus

Candidatus Liberibacter americanus


DISTRIBUCIÓN DE LOS INSECTOS VECTORES

Diaphorina citri

Trioza erytreae

En Colima se cultivan aproximadamente 21,643 has de limón

mexicano en los municipios de Tecomán, Armería,

Manzanillo, Coquimatlán y Colima (SIAP, 2009).

Existen 3,887 plantaciones comerciales donde se cultivan

cítricos, siendo beneficiados 3,216 productores y 20,000

familias con la producción, la comercialización y la industria

citrícola.

Eliminación de las primeras plantas enfermas

Buen control del vector

Zona compacta de cítricos

Huertas vecinas con HLB con mal manejo

Huerta “El Caracol”


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Plantas con HLB

Octubre 2010

1 planta enferma Octubre 2011

enfermas

Octubre 20123,69

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0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Huerta “El Caracol”

Huerta “Rincón de López”

Ninguna planta enferma eliminada

Control regular del vector

Zona compacta de cítricos

A orilla de caminos

Huerta “Rincón de López”

0 0

0 0 0 F0 0

0

0 0

Agosto 2012

619 plantas con síntomas

9 Replantes con síntomas

Enero 2011

7 plantas con síntomas


SITUACIÓN ACTUAL DEL HLB EN COLIMA (Octubre 2012)

De 1,600 huertas de cítricos

con HLB (41% de las huertas

de Colima)

Más de 316 mil plantas con

HLB en huertas comerciales

La superficie total de las huertas con una a

más de 7,000 plantas enfermas es de 13 mil

hectáreas (60% de la superficie citrícola de

Colima

DISEÑO EXPERIMENTAL: TRATAMIENTOSLUGAR DE INVESTIGACIÓN: Rancho Valle Viejo, Tecomán, Colima

DILUCIÓN # APL # ÁRBOLESVOLUMEN APLICADO/ÁRBOL (mL)

CANTIDAD DE NANOPLATA/

ÁRBOL

CONCENTRACIÓN NANOPLATA

ASPERSIÓN FOLIAR

1:2501 APL.

6

2000 96 mg 48 µg/ml2 APL. 4000 192 mg 48 µg/ml3 APL. 6000 288 mg 48 µg/ml

1:1,0001 APL. 2000 24 mg 12 µg/ml2 APL. 4000 48 mg 12 µg/ml3 APL. 6000 72 mg 12 µg/ml

1:5,0001 APL. 2000 4.8 mg 2.4 µg/ml2 APL. 4000 9.6 mg 2.4 µg/ml3 APL. 6000 14.4 mg 2.4 µg/ml

1:10,000 1 APL. 2000 2.4 mg 1.2 µg/ml

CONTROLES 12

QUIKJET (MICRO -

INYECCIÓN)

1:500

2 APL. 5 30

7.2 mg 24 µg/ml1:1000 3.6 mg 12 µg/ml1:5000 0.72 mg 2.4 µg/ml

1:10,000 0.36 1.2 µg/ml

XYLLAKILL 1:500

2 APL.5

8019.2 mg 24 µg/ml

1:5000 1.92 mg 2.4 µg/ml1:10,000 3 0.096 mg 1.2 µg/ml

TREE IV (MACRO-

INYECCIÓN)

1:500

2 APL. 1 1500

36 mg 2.4 µg/ml

1:10,000 1.8 mg 1.2 µg/ml

CONTROLES 15 0 0 0

APLICACIÓN CON NANOPLATA: Inyección en tronco y aspersión foliar a 15 árboles (Muestra)

de Limón Mexicano (Citrus aurantifolia) de 3-4 años de edad con Nanoplata, dilución

1:10,000 en inyección en tronco (eliminando el 95% de la bacteria) y 1:1,000 con aspersión

foliar (eliminando el 86% de la bacteria); por lo que haciendo las dos aplicaciones foliar e

inyección eliminamos el 100% de la bacteria y mantener libres de Candidatus liberibacter

asiaticus, americanus, en limón mexicano, naranjo y toronja, mantenemos .

Aplicación de nanoplata(inyección y foliar)

Rama 1 y 2: qPCR(bacterias vivas - EMA)

Rama 3: Microscopía Electrónica de Barrido

ANTES DESPUÉS

60 FOLIAR 35 INYECCIÓN 27 CONTROLES

7 – 14 días (qPCR 16S rDNA)

3 copias por bacteria

(3 – 4 meses)

METODOLOGÍA: ANÁLISIS

EMA = Bromuro de Etidio Monoazidawww.tratamientodeaguas.org.mx

0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

350000

400000

450000

500000

1 apl 2 apl 3 apl 1 apl 2 apl 3 apl 1 apl 2 apl 3 apl 1 apl

1 a 250 1 a 1000 1 a 5000 1 a10,000

CTRL

# b

acte

rias

viv

as (

16

S rD

NA

)

Dilución de nanoplata

ANTES

DESPUES

nanoplata trabaja a una dilución de 1:1000(12 µg/ml, 24 mg/árbol) 2 litros por árbol (1 aplicacion)

APLICACION FOLIAR DE NANOPLATA

DILUCION DE NANOPLATA

[ ] NANOPLATA (µg/ml)

CANTIDAD NANOPLATA (mg/árbol)

# BACTERIAS VIVAS ANTES (40 mg tejido)

# BACTERIAS VIVAS DESPUES (40 mg tejido)

% ELIMINACION

1 a 500 24 36 20832.27 8928.42 57.14

1 a 10,000 1.2 1.8 20516.38 867.03 95.77

CONTROLES 0 0 73430.14 72502.15 1.26

RESULTADOS

APLICACION DE NANOPLATA CON EL SISTEMA TREE IV

nanoplata trabaja a una dilución de 1:10,000

(1.2 µg/ml, 1.8 mg/árbol)

1.5 litros

0

10000

20000

30000

40000

50000

60000

70000

80000

1 a 500 1 a 10,000 CONTROLES

# b

acte

rias

viv

as (

16

S rD

NA

)

Dilución nanoplata

ANTES

DESPUES

El uso de nanoplata aplicada a la piel de humano está aprobada por la FDA, por lo

que a diferencia de los insecticidas, los operadores no están en riesgo con lo que

respecta a la nanoplata.

AP. FOLIAR1:10003 APLICACIONES 72 mg/arbol

ANTES 3 MESES DESPUES


CONDICIONES DE LOS ARBOLES (LIMON MEXICANO Citrus aurantifolia Swingle)

ANTES Y DESPUÉS DEL TRATAMIENTO

Candid

atu

sLib

eri

bacte

rss

p.

En las fotos anteriores de Microscopía Electrónica de Barrido se presentan cortes

longitudinales de tallos de 2.5 mm, en figuras (c) y (d). En figuras (h) e (i) Cortes

transversales de tallos de 1.5 mm de espesor. No se puede comparar directamente

el antes y el después en este árbol tratado con nanoplata(1:500; 36 mg/árbol; 2.4

µg/ml)porque son estructuras y aumentos diferentes aunque es la misma rama

muestreada antes y después. Sin embargo se puede observar antes del tratamiento

con nanoplata el bloqueo y la desorganización del floema y engrosamiento de las

paredes (ver flechas en c, d).En las figuras después del tratamiento con nanoplata

(h, i) se observa muchos vasos del floema libres que permiten suponer que la

nanoplata puede viajar con facilidad a través de estos conductos y alcanzar a las

bacterias. Sin embargo no se cuantificó el número de vasos bloqueados antes del

tratamiento. Observe antes del tratamiento con nanoplata gránulos de almidón, ver

flecha en figura d, Aunque no se ve un cambio radical después del tratamiento con

nanoplata, nos da una idea del daño presente y nos confirma que la recuperación

del árbol llevara tiempo aunque hayamos eliminado la mayoría de las bacterias.

¿La nanoplata trasloca al fruto?

No se detectó, mediante AbsorciónAtómica, que hubiera traslocación denanoplata en el fruto,

ANTES DESPUES

XyllaKill (19.2 mg/arbol ; 24µg/ml) 0.3 mg/L 0.1 mg/L

Tree IV (1.8 mg/arbol; 2.4 µg/ml) 0.4 mg/L 0.3 mg/L

El mecanismo de acción de la nanoplata es en múltiples sitios de acción en la

bacteria, impidiendo la replicación celular, la transcripción de enzimas clave y

disrupción de puentes di sulfuro, por lo que las bacterias difícilmente pueden

desarrollar una resistencia a la nanoplata. Como la nanoplata no es específica,

mata igualmente virus, bacterias y hongos; cuando se aplica foliarmente

también puede prevenir otras enfermedades de la superficie de la hoja, como

vimos, al utilizar nanoplata con aplicación foliar reduce la propagación de

fumagina. Potencialmente se puede utilizar en otras enfermedades bacterianas

como Xylella fastidiosa, en cítricos donde causa la enfermedad CVC (Clorosis

variegada de los cítricos). Los experimentos de laboratorio utilizando cajas Petri

en una dilución 1: 5000 mata al 100% de las bacterias en un lapso de 40 minutos.

Esto podría aplicarse a otros cultivos infectados C. Liberibacter.

Otra cosa que se pudo comprobaren árboles sintomáticos, es que después de

haber sido podados y tratados con nanoplata, son capaces de volver a generar

nuevos brotes y libre de HLB. Esto permitiría regenerar huertos enteros y

también ser de beneficio para los productores de cítricos.

BENEFICIOS DE LA INDUSTRIA CITRÍCOLA

• La Nanoplata puede eliminar cerca del 100% de la

bacteria del árbol, recuperando los árboles enfermos y

previniendo la propagación de la enfermedad

• La Nanoplata se puede aplicar en grandes extensiones

mediante inyección al tronco, por aspersión foliar o

ambas.

• La Nanoplata se puede usar certificando árboles libres de

HLB para viveros.

• Nuestras concentraciones de Nanoplata no son tóxicas

en plantas ni animales.

• Resultados preliminares muestran que la plata no se

transfiere al fruto

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Aviso La presente traducción ha sido generada por ordenador. No le podemos garantizar que sea

comprensible, precisa, completa, fiable ni adecuada para fines específicos. Las decisiones

cruciales, tales como las decisiones financieras o comercialmente relevantes, no se deberían

basar en los resultados de traducciones generadas por ordenador.

RESUMEN MX2012010408

El Huanglongbing de los cítricos es una enfermedad mortal que hasta el momento no tiene un

tratamiento directo de los árboles dañados.

La presente invención describe métodos y formulaciones químicas para la eliminación de la

bacteria que se sabe que es la causa de la enfermedad en la parte interior de un árbol en dos

semanas.

Ensayos, realizadas a diferentes concentraciones, incluyendo de uno a tres aplicaciones,

muestran que la aplicación foliar de 12 ml / m / ml o de inyección de 2,4 y 24 m de soluciones

acuosas de nanoplata elimina de 60 a 85% la presencia de la Candidatus Liberibacter spp

bacteria.

El dispositivo xyllakill descrito en la presente invención es más eficaz en el suministro de las

partículas de nanoplata que otros dispositivos comerciales, ya que puede suministrar un

volumen de una manera pasiva, siendo rellenable y muy práctico para ser fijado al árbol.

Este tratamiento puede eliminar el 100% de la bacteria mediante el aumento del número de

aplicaciones. www.tratamientodeaguas.org.mx

NUESTRO OBJETIVO• Que el producto llegue directamente al consumidor,

(productor de cítricos).

• El método y procedimiento descrito con el ingrediente

activo, Nanoplata, es efectivo para el tratamiento del

HLB

• Se recomienda Vacunar el árbol cada dos años como

prevención del HLB

• No requiere de otro medicamente para completar el

tratamiento

• El producto está listo para utilizarse inmediatamente

GRACIAS\


Technology

IBASA control de HLB en Citricos